Gryllus bimaculatus의 실험실 문화 유지, 곤충 농업 및 무척추 동물 생리학을위한 다목적 orthopteran 모델

이러한 기술은 동물 사료 및 인간 사료 및 점점 더 중요한 대체 모델 유기체를 위해 양식되는 주요 미니 가축 종 인 Gryllus bimaculatus를 기르기위한 실용적이고 입증 된 방법을 묘사합니다. Gryllus bimaculatus의 문화를위한 이러한 실험실 방법은 북미 크리켓 농업 산업 전반에 걸쳐 공통적 인 기술에서 파생되었으며 귀뚜라미 농업 운영의 실험실 규모의 팩시밀리를 나타냅니다. 시작하려면 깨끗한 용기를 저울에 꽂고 마른 코코넛 열매 덩어리를 인간의 주먹 크기로 측정하십시오.

그런 다음 coir를 밀봉 가능한 깨끗한 용기에 넣어 원래 부피의 최대 여섯 배까지 확장 할 수 있습니다. 깨끗한 손으로 더 큰 블록에서 제거 된 조각에서 coir 덩어리를 부드럽게 분해하십시오. 다음으로, 250 밀리리터 눈금 실린더를 사용하여, 탈이온수의 정확한 부피를 측정하여 한 부분 건조 코아에 5 부의 물의 질량 기준으로 다섯 대 일 비율을 달성하고, 측정 된 탈이온수를 천천히 첨가하여 모든 누아 입자를 고르게 수화시킵니다.

그 후, 수동으로 덩어리를 침지하여 수화를 보장하고 이전에 계량 된 용기를 다시 덮습니다. 젖은 coir의 75 그램의 무게를 측정하고 깨끗한 플라스틱 숟가락을 사용하여 100 밀리미터 x 15 밀리미터 페트리 접시에 옮겨 coir가 접시 바닥에 고르게 퍼지고 덩어리가 없는지 확인하십시오. 그런 다음 Petri 접시의 측면에 출생 식민지와 계란 수집 이벤트의 날짜를 나타내는 레이블이있는 실험실 테이프로 레이블을 붙입니다.

45 밀리리터의 탈이온수를 점진적 실린더에 넣고 페트리 접시에 포장 된 coir의 표면에 고르게 물을 첨가하여 수분 공급을 보장합니다. 페트리 접시가 포장되면 남은 젖은 열매를 밀폐 용기에 밀봉하여 영하 20도에서 보관하십시오. 수화 된 산란 기질을 가능한 한 사료에서 멀리 떨어진 귀뚜라미의 원하는 부모 주식을 담고있는 케이지에 넣고 날짜와 시간을 문서화하십시오.

그런 다음 작업 표면에 작고 오토클레이브 가능한 쓰레기 수거통을 놓습니다. 그런 다음 쓰레기 수거통 옆의 벤치에 깨끗하고 비어있는 29.3 리터의 플라스틱 케이지를 놓습니다. 부모 크리켓 주식과 산란 기질이 들어있는 또 다른 29.3 리터 케이지를 빈 케이지에서 쓰레기 용기의 반대편에 놓습니다.

24시간 후, 모 귀뚜라미 케이지로부터 산란 기질을 제거하고, 오토클레이브 가능한 폐기물 용기 위에 위치시킨다. 산란 기질의 꼭대기에서 귀뚜라미가 누룩의 표면에 걷어차 렸을 수도있는 frass 또는 사료 입자가 있는지 검사하십시오. 다음으로, 깨끗한 Scoopula 또는 플라스틱 숟가락으로 폐기물 용기에 coir 오염 물질을 제거하고 플라스틱 숟가락을 폐기물 용기에 넣으십시오.

그런 다음 청소 된 산란 기질을 깨끗한 29.3 리터 케이지에 넣으십시오. 그런 다음 케이지를 섭씨 27도에 놓고 상대 습도 60 %에서 12 시간 어둡고 12 시간의 가벼운 광주기로 두십시오. 번식 재고가 들어있는 케이지를 원래 위치로 되돌리고 작업 표면에서 모든 항목을 지우십시오.

그런 다음 폐기물 용기를 귀뚜라미 달걀로 잠재적으로 오염 된 물품을 보관하는 시설 내 냉동고에 넣으십시오. 그런 다음 10 % 표백제 용액으로 작업 표면을 소독하고 60 초 동안 그대로 두십시오. 깨끗한 종이 타월로 작업 표면을 닦으십시오.

냉동실을 연 후 종이 타월을 폐기물 용기에 버리십시오. 사용하지 않은 30.8 센티미터 x 30.8 센티미터 상업용 계란 카톤 플랫 두 개를 선택하십시오. 그리고 유틸리티 나이프 또는 강한 가위로 이것을 같은 크기의 여섯 개의 분리 된 10.1 센티미터 너비의 스트립으로 자릅니다.

그런 다음 손으로 잘린 가장자리를 닦아 매달려있는 판지 입자를 제거하십시오. 다음으로, 6 개의 개별 10.1 센티미터 x 30.8 센티미터 크기의 판지 조각을 케이지 바닥에 수직으로 놓고 카톤의 긴 축이 29.3 리터 케이지의 좁은 수평 축에 걸쳐 있습니다. 일곱 번째 판지 조각을 여섯 개의 직립 조각의 꼭대기에 평평하게 놓습니다.

약 25 센티미터 x 25 센티미터의 거친 갈색 종이 타월 세 조각을 선택한 후 각각 반으로 접으십시오. 그런 다음 카톤 구조의 근위 측면의 상단을 덮도록 두 개를 놓고 원위 측의 카톤 스택 위에 하나를 놓습니다. 산란 후 11 일째에 산란 기질을 케이지의 근위 오른쪽 모서리로 옮깁니다.

해치가 관찰되면 카톤 상단에 놓인 종이 타월을 젖을 때까지 안개를 낀 채로 물을 적극적으로 흘리지는 않습니다. 그런 다음 70 % 에탄올로 100 밀리미터 페트리 뚜껑의 양면을 철저히 닦아내고 말리십시오. 다음으로, 50 그램의 공급물을 60 와트의 단일 서빙 블렌더에 넣고 10, 000 rpm에서 1 분 동안 분쇄하십시오.

사료 한 그램을 측정 한 후 케이지의 Petri 접시 뚜껑에 흔들어 넣으십시오. 숟가락이나 스쿠풀라의 깨끗한 끝을 사용하여 가능한 한 균일하게 사료를 접시 바닥에 퍼뜨립니다. 그런 다음 이틀마다 사료를 교체하십시오.

오토클레이브 가능한 폐기물 용기에 오래된 사료를 버리십시오. 피드의 곰팡이 성장을 모니터링합니다. 그리고 사료가 흰색이나 녹색으로 보이기 시작하면 Petri 접시를 버리고 즉시 먹이십시오.

산란 후 14 일 동안 2.54 센티미터 페인트 브러시를 사용하여 페트리 접시의 누룩 표면과 측면에서 모든 귀뚜라미를 새장에 닦아 출생 치아 기질에 달라 붙는 귀뚜라미를 제거하십시오. 다음으로, 제거된 산란 기질을 오토클레이빙 가능한 폐기물 용기 내로 넣고, 오토클레이빙될 때까지 냉동실에 보관한다. 그런 다음 출생 기질을 수분 공급을 위해 신선한 coir 접시로 교체하십시오.

탈 이온수 세척 병을 사용하여 coir의 표면이 반짝 일 때까지 물을 넣지 만 풀링되지는 않습니다. 귀뚜라미는 평균 질량이 21 밀리그램 인 인구에서 비축되었습니다. 실험이 끝날 때, 모든 결합 된 청소년 및 성인 귀뚜라미의 평균 질량은 0.724 그램이었습니다.

생후 65일째에 실험이 끝났을 때 성인 남성 30명이 존재했고, 평균 질량은 0.721그램인 반면, 성인 여성 58명의 경우 평균 질량은 0.841그램이었다. 스타킹과 수확 사이의 생존률은 89 %였으며 매주 모든 케이지에있는 모든 개별 귀뚜라미의 총 수로 측정되었습니다. 65 일째에 모든 귀뚜라미의 약 68 %가 성인 인스타에 도달했습니다.

물을 주거나 놓칠 때 인클로저 바닥에 물방울이 생기지 않도록하십시오. refugia 위에 종이 타월을 놓으면 습도 구배가 가능하고 안개로부터 물방울을 흡수합니다. 이 절차는 많은 생명 과학 분야의 연구원들이 Gryllus bimaculatus를 모델 유기체로 뒷받침하는 템플릿 역할을합니다.

현재까지 Gryllus bimaculatus 또는 다른 paurometabolous model organism를 기르기위한 공식적인 프로토콜은 거의 발표되지 않았습니다. 곤충 농업에 사용되는 곤충에 대한 사육 방법을 성문화하고 표준화하면 연구 그룹 간의 결과 비교가 더 잘 가능합니다.