후각 파기 작업을 통한 마우스 판단 편향 평가

이것은 정서적 상태, 즉 기분 또는 감정의 변화에 민감한 것으로 검증 된 최초의 마우스 판단 편향 작업입니다. 마우스 영향에 대한 모든 변수의 효과를 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 윤리 학적 디자인을 사용하여 생쥐가 쉽게 배울 수 있도록하며, 처벌이나 부정적인 강화의 사용을 피하기 때문에 복지 친화적이기도합니다.

이 작업은 축산 또는 실험 절차가 마우스 정서 상태에 미치는 영향을 평가할 수 있으므로 동물 복지 연구 또는 인간 정서 장애 모델링과 같은 다양한 분야에서 가치가 있습니다. 연구원들이 이미 혐오스럽지 않은 취급 방법에 익숙하다고 가정하면, 우리의 주요 조언은 적절한 냄새 혼합물, 즉 마우스가 모호한 것으로 취급하는 냄새를 확인하기 위해 훈련 전에 조종사를 사용하는 것입니다. 이 행동 테스트는 마우스가 높거나 낮은 가치의 음식 보상을 위해 파헤쳐야하는 향기 기반 go-go 파기 작업입니다.

실험 장치는 두 팔을 가진 직사각형 경기장을 포함한다. 한쪽 팔은 항상 중앙에 위치하며 긍정적 또는 부정적 차별적 자극 냄새로 표시되고, 다른 팔은 항상 무취입니다. 굴착 냄비에는 구멍이 뚫린 플라스틱 장벽으로 분리 된 접근 가능한 구획과 접근 할 수없는 구획이 포함됩니다.

장치의 두 냄비 모두 항상 고가의 음식과 낮은 가치의 음식을 포함하고 있지만 팔과 시험 유형에 따라 간식을 이용할 수 있습니다. 긍정적 인 훈련 시험 중에 마우스는 긍정적 인 차별적 인 자극 냄새와 묻혀있는 고부가가치 음식 보상으로 표시된 냄비가 들어있는 향기로운 팔을 탐험하고 파헤 칠 수 있습니다. 마우스는 또한 증류수로 표시되어 있고 가치가 낮은 음식 보상이 들어있는 무향 팔을 파고 들도록 선택할 수 있습니다.

부정적인 훈련 시험 동안, 마우스는 이제 부정적인 차별적 인 자극 냄새와 접근 가능한 음식 보상이없는 냄비가 들어있는 향기로운 팔 또는 다시 증류수로 표시되고 낮은 가치의 음식 보상이 포함 된 무향 팔 중에서 다시 선택할 수 있습니다. 그런 다음 생쥐는 식품 보상이 제공되지 않는 긍정적이고 부정적인 강화되지 않은 시험에서 테스트되며, 그 과제를 배운 사람들은 강화되지 않은 모호한 시험을 겪을 것입니다. 모호한 시험에서 향기로운 팔에는 긍정적 인 자극과 부정적인 차별적 인 냄새 단서가 혼합 된 냄비가 들어있어 모호한 냄새를 풍기는 반면, 무향 팔은 언제나처럼 증류수 만 표시되어 있습니다.

마우스는이 모호한 재판에서 판단 편향을 드러냅니다. 실험 준비를 위해, 한 밀리리터 주사기 또는 마이크로피펫을 사용하여, 박하와 바닐라 추출물을 표지된 원심분리 튜브에 첨가한다. 추출물을 증류수로 1:4로 희석하고 여러 번 뒤집어 섞는다.

혼합물이 신선하고 일관성이 있는지 확인하기 위해 사용하기 전에 매일 반복적으로 뒤집으십시오. 모호한 냄새 혼합물의 경우, 민트와 바닐라 에센스를 희석 한 후 원심 분리기 튜브에 동일한 부피를 첨가하여 희석 된 에센스를 1:1 혼합하십시오. 다음으로, 강화 된 시험 중에 긍정적 인 차별적 인 자극 냄새 냄비를 위해 접근 할 수없는 구획에 차우 한 조각을 놓고 냄비의 접근 가능한 영역에 바나나 칩 한 조각을 묻으십시오.

부정적인 차별적 인 자극 냄새 냄비의 경우, 접근 할 수없는 구획에 차우 한 조각과 바나나 칩 한 조각을 놓습니다. 그런 다음 냄비에 세 센티미터의 옥수수 속구 침구를 채 웁니다. 이 냄비의 접근 가능한 영역에서는 음식 보상이 제공되지 않습니다.

향이 없는 냄비의 경우, 접근하기 어려운 구획에 바나나 칩 한 조각을 놓고 냄비의 접근 가능한 영역에 차우 한 조각을 묻으십시오. 모든 강화되지 않은 시험 테스트 중에 차우 한 조각과 바나나 칩 한 조각을 접근 할 수없는 구획에 넣으십시오. 그런 다음 냄비에 세 센티미터의 옥수수 속구 침구를 채 웁니다.

이 냄비의 접근 가능한 영역에서는 음식 보상이 제공되지 않습니다. 냄비를 채운 후 주사기 또는 마이크로 피펫을 사용하여 적절한 냄새 혼합물 또는 증류수 100 마이크로 리터를 뽑아 원형 운동으로 옥수수 속대 위에 직접 주입하십시오. 다음으로, 향기 디스펜서를 준비하려면 티슈 카세트의 바닥에 면봉 조각 하나를 놓습니다.

그런 다음 1 밀리리터 주사기 또는 마이크로 피펫을 사용하여 적절한 냄새 혼합물 또는 증류수 100 마이크로 리터를 뽑아 면화 조각에 주입하십시오. 티슈 카세트를 뚜껑으로 덮어 향이 나는 면화를 감싸고 향기 디스펜서를 만듭니다. 경기장의 팔 끝에 파는 냄비를 놓고 각 팔의 시작 부분에 향기 디스펜서를 놓습니다.

탈착식 도어를 카세트 슬롯 바로 앞에 삽입하여 경기장 암으로의 진입을 차단하고 시작 구획을 만듭니다. 마우스의 어둡고 활동적인 단계에서 붉은 빛 아래에서 모든 훈련 및 테스트 세션을 수행하십시오. 호퍼에서 음식을 제거하여 각 훈련 또는 테스트 세션 전에 새장에서 한 시간 동안 마우스를 금식하십시오.

파기 훈련 첫날, 음식 보상을 세 센티미터의 옥수수 속대 침구 위에 올려 놓으십시오. 다음 나흘 동안 옥수수 속대 아래에 보상을 점진적으로 묻어 다섯 번째 날까지 세 센티미터 침구의 바닥에 위치하게하십시오. 훈련 시험을 시작하려면 마우스를 수송 케이지에서 경기장의 시작 구획으로 옮깁니다.

시작 도어를 제거하고 플렉시 글라스 뚜껑을 경기장 위로 즉시 내리고 다섯 분 시험 타이머를 시작하십시오. 그런 다음 파기의 첫 번째 발생이 관찰되는 시간으로 파고 대기 시간을 기록하고 식사의 첫 번째 발생이 관찰 된 시간으로 먹을 대기 시간을 기록하십시오. 차별 훈련의 경우, 긍정적 인 강화 된 재판을 한 번 실시하고 한 일에서 다섯 일까지 부정적인 강화 재판을 실시하십시오.

6일에서 10일까지, 의사 무작위 실험의 순서를 결정하여 각 마우스가 하루에 두 번의 양성 및 두 번의 음성 시험을 받도록 합니다. 테스트 단계에서는 학습 기준이 충족 될 때까지 매일 각 마우스에 대해 하나의 양성 또는 음성 강화되지 않은 테스트 시험을 실시하십시오. 매일 비디오 녹화 시험 전에 무작위 순서로 하나의 양성 및 음성 강화 시험을 수행하고 시험 시험 후에 또 다른 긍정적 및 부정적 강화 시험을 수행하십시오.

양성 및 음성 테스트 시험이 며칠에 걸쳐 번갈아 가며 수행되는지 확인하십시오. 비디오로 녹화된 강화되지 않은 테스트 시험을 수행하려면 마우스를 운반 케이지에서 경기장의 시작 구획으로 옮깁니다. 그런 다음 삼각대에 비디오 카메라를 설치하여 팔 끝에있는 두 냄비가 모두 볼 수 있도록하고 녹화를 시작하십시오.

비디오 채점 중에 마우스 블라인드 코드와 평가판 유형으로 큐 카드를 기록하십시오. 시작 도어를 제거하고 플렉시 글라스 뚜껑을 경기장 위로 즉시 내리고 두 분 동안 시험 타이머를 시작하십시오. 테스트 후 마우스를 운반 케이지로 되돌립니다.

시험 당일에 양성 및 음성 시험 비디오를 채점하여 마우스가 학습 기준을 충족했는지 여부를 평가합니다. 학습 기준을 충족하는 동물은 다음날 모호한 테스트를 거치기 때문에 당일 비디오 채점을 보장하십시오. 이벤트 기록 소프트웨어 또는 스톱워치를 사용하여 치료에 눈이 먼 연구원이 양성 및 음성 테스트 시험의 첫 번째 분 동안 각 냄비에서 파고 파는 지속 시간을 각 마우스의 대기 시간을 기록하게하십시오.

파기의 첫 번째 발생이 관찰되는 시간으로 파고들기 위한 대기 시간을 기록하고, 파는 지속 시간을 마우스가 파는 데 소비하는 총 시간으로 기록합니다. 향기로운 냄비의 파기 기간을 긍정적 인 시험과 부정적인 시험 사이에서 비교하여 쥐가 작업을 차별 할 수 있는지 여부를 결정하십시오. 학습 기준은 긍정적인 차별적 자극 냄새 냄비에서의 파기 지속 시간이 시험의 첫 번째 분 동안 부정적인 차별적 자극 냄새 냄비에 대한 것보다 적어도 두 배가 되는 경우에 충족된다.

학습 기준을 충족 한 마우스의 경우 모호한 냄새 혼합물에 대한 반응을 테스트하십시오. 하나의 긍정적 인 강화 시험과 하나의 부정적인 강화 시험을 무작위 순서로 수행하십시오. 그런 다음 모호한 냄새 혼합물을 사용하여 하나의 비디오 녹화 테스트 시험을 수행하십시오.

데이터 분석의 경우 각 시험 유형에서 최소 제곱 대기 시간 평균을 플롯하여 제시된 모호한 큐가 중간으로 해석되었는지 확인합니다. 시험의 한 분과 두 분 모두에서 판단 편향을 평가하는 동안, 긍정적 인 차별적 자극 - 냄새 상호 작용에 의한 시험 유형은 중요했습니다. 이것은 민트를 긍정적 인 차별적 자극으로 가진 마우스가 예기치 않게 모호한 냄새 혼합물을 긍정적으로 해석 한 반면, 바닐라를 긍정적 인 차별적 자극으로 사용한 마우스는 중간체와 동일한 모호한 냄새 혼합물을 처리했음을 보여줍니다.

이 발견은 바닐라를 긍정적 인 차별적 자극으로 가진 쥐 만이 향기 혼합물을 긍정적 인 자극과 부정적인 차별적 자극 사이의 중간으로 취급하기위한 기술적 요구 사항을 충족 시켰음을 나타냅니다. 따라서, 박하를 그들의 긍정적인 차별적 자극으로 사용한 마우스는 후속 판단 편향 분석으로부터 배제되었다. 바닐라를 긍정적 인 차별적 자극으로 사용하는 쥐 내에서 주택은 파기 대기 시간에 영향을 미쳤으며, 전통적으로 수용 된 동물은 환경적으로 농축 된 마우스보다 모호한 시험에서 파는 것이 느리지 만 긍정적 또는 부정적 시험에서는 그렇지 않았습니다.

전통적으로 수용된 마우스에 의한 모호한 단서에 대한 이러한 비관적 해석은 부정적인 영향을 나타내는 부정적인 판단 편향을 반영합니다. 이 프로토콜을 수행하는 동안 기술적 기준을 충족하는 것이 중요합니다. 마우스는 단서를 구별 할 수 있음을 보여주는 학습 기준을 충족해야하며 모호한 신호를 중간으로 해석해야합니다.

이 새로운 판단 편향 과제의 개발은 동물 복지와 임상 적 함의를 모두 가진 마우스 정서적 상태에 대한 중요한 가설을 테스트 할 수있는 문을 열어줍니다.