Name: 설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-15T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 10 s
Description: 학습하세요 설치류 녹내장 모델에서 360° 림발 혈관 소작을 통한 안압 상승 유도법을. 이 비침습적 방법은 망막 신경절세포 손실과 시신경 퇴행을 연구하여 신경퇴행성 질환의 병태생리를 규명하는 데 활용됩니다.

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우리는 실험실 기술자 José를 인정합니다. 닐손 도스 산토스, 다이안느 만다리노 토레스, 호세 프란시스코 티부르시오, 질도 브리토 데 수자, 루치아노 카발칸테 페레이라. 이 연구는 FAPERJ, CNPq 및 CAPES의 자금 지원을 받았습니다.

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Limbal plexus cauterization(LPC)은 결막 또는 장부 절제가 필요하지 않은 쉽게 접근할 수 있는 혈관 구조를 표적으로 한다는 장점이 있는 새로운 섬유주 후 모델입니다17,28. 맥락막 정맥 배액에 대한 외과적 장애를 기반으로 하는 유명한 OHT 모델인 와류 정맥 소작 모델과 달리 LPC 모델에서는 변부 정맥이 수액 유출의 상류에 위치하기 때문에 정맥 울혈이 IOP 상승에 영향을 미치지 않을 것으로 예상됩니다. 또한 기술적으로 배우기 쉽고 비용이 저렴하여 대부분 저온 열 소작이 필요합니다. 또한, OHT 유도 및 완전한 임상 회복(이전에 보고된 바와 같이 > 90%)23의 고유한 비율과 관련이 있으며, 이는 실험에 필요한 동물의 수를 줄이고 전기 생리학적 및 행동 분석을 모두 가능하게 합니다. 마지막으로, 녹내장 변성은 수술 후 비교적 짧은 시간 내에 망막 신경...

의학 문헌에서는 녹내장을 망막 신경절 세포(RGC), 수상돌기, 소마, 축삭돌기의 점진적인 변성을 특징으로 하는 이질적인 시신경병증 그룹으로 이해하며, 이로 인해 시신경의 구조적 부항(굴착)과 시신경의 기능적 저하가 발생하여 눈에서 뇌로의 시각 정보 전달을 방해하여 조절되지 않는 경우 무뇨증을 유발합니다1. 녹내장은 현재 전 세계적으로 돌이킬 수 없는 실명의 가장 흔한 원인으로, 2040년에는 약 1억 1,180만 명이 이를 것으로 예상됩니다2 따라서 환자의 삶의 질(QoL)에 큰 영향을 미치고 심각한 사회경제적 문제를 야기합니다3.
안압 상승(IOP)은 녹내장의 발병과 진행에 있어 가장 중요하고 유일하게 수정할 수 있는 위험 요인 중 하나입니다. 여러 유형의 녹내장 중에서 정상 긴장성 녹내장(NTG)을 제외한 모든 녹내장은 질병의 임상 병력에서 어느 시점에 상승된 안압과 관련이 있습니다. IOP를 표적으로 삼고 질병 진행을 늦추거나 멈추기 위한 임상 및 수술의 놀라운 발전에도 불구하고 환자들은 여전히 녹내장으로 인해 시력을 잃습니다 4,5. 따라서 이 질환의 복잡하고 다인자적인 병태생리학에 대한 철저한 이해는 보다 효과적인 치료법의 개발, 특히 망막 신경절 세포에 대한 신경 보호를 제공하는 데 필수적입니다.
질병 메커니즘을 이해하기 위한 다양한 실험적 접근 방식 중에서 안구 고혈압(OHT)을 기반으로 하는 동물 모델은 인간 녹내장과 가장 유사합니다. 설치류 모델은 비용이 저렴하고, 다루기 쉽고, 유전자 조작이 가능하고, 수명이 짧고, 수액 생성 및 배액과 같은 인간과 유사한 안구 해부학적 및 생리학적 특징을 나타내기 때문에 특히 유용합니다 6,7,8,9,10,11,12,13 . 현재 사용되는 모델로는 상피 정맥에 고긴장성 식염수를 주입한 후 섬유주 그물망의 경화증(14), 마이크로비드(15) 또는 점탄성 물질(16)의 카메라 내 주입, 와류 정맥(17)의 소작, 아르곤 레이저(18)를 이용한 섬유주 그물망의 광응고(18), 주위 봉합사(19), 연령 관련 OHT(DBA/2J 마우스)의 형질전환 모델 사용8. 그러나 침습성, 수술 후 각막의 혼탁, 전방 분절 파괴, 광범위한 학습 곡선, 고가의 장비 및 매우 가변적인 수술 후 IOP는 현재 모델과 관련된 보고된 함정 중 몇 가지에 속하므로 이러한 문제를 극복하기 위해 OHT의 대체 모델 개발이 필요합니다20,21,22.
본 프로토콜은 설치류의 변연신경총 소작(LPC)에 기초하여 녹내장의 대용물로서 OHT를 유도하기 위한 새로운 수술 절차를 공식화한다23. 이는 쉽고, 재현 가능하고, 접근 가능하고, 비침습적인 모델로, IOP 상승의 높은 효율성과 낮은 변동성을 제공하며, 유일하게 높은 전체 임상 회복률과 관련되어 있어 각 실험에 사용되는 동물의 수를 줄여 생체 내 기능 평가를 제공합니다. 이 수술 기법은 며칠 내에 점진적으로 기준선 수준으로 복귀하여 아급성 OHT를 유도하며, 이는 급성 폐쇄각 녹내장에서 볼 수 있는 고혈압 발작을 모델링합니다. 또한, 모델에서 IOP 회복 후에는 지속적인 녹내장 신경퇴행이 뒤따르며, 이는 IOP의 적절한 조절에도 불구하고 인간 녹내장의 여러 사례에서 발생하는 망막 신경절 세포의 이차 변성에 대한 향후 기계론적 연구에 유용합니다.

<table><tbody><tr><td>Acetone</td><td>Isofar</td><td>201</td><td>전자 현미경 조직 준비에 사용됩니다 (단계 5)</td></tr> <tr><td>전기 레티노그래피를 위한 활성 전극</td><td>Hansol Medical</td> <td>Co-Stainless</td> <td>스틸 바늘 0.25 mm &times; 15 mm</td></tr><tr><td>Anestalcon</td><td>Novartis Bioci&ecirc; ncias S/A</td><td>MS-1.0068.1087</td><td>Proxymetacaine hydrochloride 0.5%</td></tr><tr><td>Calcium chloride</td><td>Vetec</td><td>560</td><td>전자 현미경 조직 준비에 사용(5단계)</td></tr><tr><td>Cautery Low Temp Fine Tip 10/bx</td><td>Bovie Medical Corporation</td><td>AA00</td><td>저온 안과 소작</td></tr><tr><td>Cetamin</td><td>Syntec do Brasil Ltda</td><td>000200-3-000003</td><td>케타민 염산염 10%</td></tr><tr><td>DAKO</td><td>Dako North America</td><td>S3023</td><td>안티페이드 마운팅 매체</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>28718-90-3</td><td>디아미디노-2-페닐린돌; 청색 형광 핵 대조염색; 452&plusmn에서 방출; 3nm</td></tr><tr><td>에코필름</td><td>크리스트&아큐트; lia Produtos Qu&iacute; micos farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0298.0487</td><td>카멜로스 나트륨 0.5%</td></tr><tr><td>EPON 수지</td><td>Polysciences, Inc.</td><td>-</td><td>전자 현미경에 사용되는 에폭시 수지, 4가지 시약의 혼합물로 구성됨: Poly/Bed 812 수지(CAT#08791); DDSA - 도데세닐숙신산 무수물(CAT#00563); NMA - 나딕 메틸 무수물 (CAT # 00886); DMP-30 - 2,4,6-tris(dimethylaminomethyl)phenol (CAT#00553)</td></tr><tr><td>Glutaraldehyde</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>16110</td><td>전자 현미경 조직 준비에 사용(5단계)</td></tr><tr><td>Hyabak</td><td>Uni&atilde; o Qu&iacute; 운모 Farmac&ecirc; utica Nacional S/A</td><td>MS-8042140002</td><td>히알루론산나트륨 0.15%</td></tr><tr><td>Icare Tonolab</td><td>Icare Finland</td><td>Oy TV02 (모델 번호)</td><td>리바운드 휴대용 안압계</td></tr><tr><td>IgG 당나귀 마우스 항체 + Alexa Fluor 555</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A31570</td><td>2차 항체 솔루션</td></tr><tr><td>LCD 모니터 23인치</td><td>Samsung Electronics Co., Ltd.</td><td>S23B550</td><td>모델 LS23B550, 망막 전기 그래프 기록용</td></tr><tr><td>LSM 510 Meta</td><td>Carl</td> <td>Zeiss-Confocal</td> <td>epifluorescence microscope</td></tr><tr><td>Maxiflox</td><td>Crist&aacute; lia Produtos Qu&iacute; micos farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0298.0489</td><td>Ciprofloxacin 3.5 mg/g</td></tr><tr><td>MEB-9400K</td><td>Nihon Kohden</td> <td>Corporation-System</td> <td>for electroretinogram recording</td></tr><tr><td>monoclonal IgG1 mouse anti-Brn3a</td><td>MilliporeSigma</td><td>MAB-1585</td><td>Brn3a primary antibody solution</td></tr><tr><td>Neuropack Manager v08.33</td><td>Nihon Kohden</td><td></td> <td>Corporation-electroretinogram signal processing</td></tr><tr><td>광</td><td>운동 반응 분석을 위한</td>검안 <td>CerebralMechanics-System</td><td></td></tr> <tr><td>Osmium tetroxide</td><td>Electron Microscopy Sciences</td><td>19100</td><td>전자 현미경 조직 준비에 사용(5단계)</td></tr>칼<tr><td>륨 페로시안나이</td>드 <td>전자 현미경 Sciences</td><td>20150</td><td>전자 현미경 조직 준비에 사용(5단계)</td></tr><tr><td>전기 망막 검사용 참조 및 접지 전극</td><td>Chalgren Enterprises</td><td>110-63</td><td>스테인레스 스틸 바늘 0.4 mm &times; 37 mm</td></tr><tr><td>나트륨 카코딜레이트 버퍼</td><td>전자 현미경 과학</td><td>12300</td><td>전자 현미경 조직 준비 (단계 5)</td></tr><tr><td>에 사용됨 Ster MD</td><td>Uni&atilde; o Qu&iacute; 운모 Farmac&ecirc; utica Nacional S/A</td><td>MS-1.0497.1287</td><td>프레드니솔론 아세테이트 0.12%</td></tr><tr><td>Terolac</td><td>Crist&aacute; lia Produtos Qu&iacute; micos farmac&ecirc; uticos Ltda</td><td>MS-1.0497.1286</td><td>Ketorolac trometamol 0.5%</td></tr><tr><td>Terramicina</td><td>Laborat&oacute; rios Pfizer Ltda</td><td>MS-1.0216.0024</td><td>Oxytetracycline hydrochloride 30 mg/g + polymyxin B 10,000 U/g</td></tr><tr><td>Tono-Pen XL</td><td>Reichert Technologies</td><td>230635</td><td>디지털 압평 휴대용 안압계</td></tr><tr><td>TO-PRO-3</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>T3605</td><td>원적색 형광 핵 대조염색; 661 nm에서 방출</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td>비이온 계면활성제</td></tr><tr><td>Uranyl acetate</td><td>전자 현미경 과학</td><td>22400</td><td>전자 현미경 조직 준비에 사용 (5 단계)</td></tr> <tr><td>Xilazin</td><td>Syntec do Brasil Ltda</td><td>7899</td><td>Xylazine hydrochloride 2 %</td></tr> <tr><td></td><td>Carl</td> <td>Zeiss-Stereo</td> <td>microscope for a surgery and retinal dissection</td></tr></tbody></table>

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 limbal vascular plexus의 전체 원형 소작

Full-Circle Cauterization of Limbal Vascular Plexus for Surgically Induced Glaucoma in Rodents

전 세계적으로 실명의 두 번째 주요 원인인 녹내장은 시신경 및 망막 신경절 세포(RGC) 변성의 구조적 손상을 특징으로 하는 이질적인 안구 질환군으로, 눈에서 뇌로의 시각 정보 전달을 방해하여 시각 기능 장애를 초래합니다. 안압 상승은 가장 중요한 위험 요소입니다. 따라서 안구 고혈압의 여러 모델은 질병의 원인과 효과를 조사하기 위해 유전적 또는 실험적 접근 방식으로 설치류에서 개발되었습니다. 그 중 외과적 침습성, 부적절한 기능 평가, 광범위한 교육의 필요성, 망막 손상의 매우 다양한 확장과 같은 몇 가지 제한 사항이 보고되었습니다. 본 연구는 수액 배출의 주요 구성 요소인 윤부 혈관 신경총의 저온, 전원형 소작을 기반으로 설치류에서 안구 고혈압을 유도하는 간단하고 저렴하며 효율적인 방법을 특성화합니다. 새로운 모델은 진행성 망막 신경절 암 및 시신경 변성과 관련된 기술적으로 쉽고 비침습적이며 재현 가능한 아급성 안구 고혈압과 전기 생리학적 및 행동적 방법 모두에 의한 생체 내 기능 연구를 가능하게 하는 독특한 수술 후 임상 회복률을 제공합니다.

정량적 변수는 평균의 평균 ± 표준 오차(SEM)로 표현됩니다. OHT와 대조군 간의 IOP 역학 비교(그림 1F)를 제외하고, 통계 분석은 양원 분산 분석(two-way ANOVA)을 사용한 후 Sidak의 다중 비교 테스트를 사용하여 수행되었습니다. p-값 &lt; 0.05는 통계적으로 유의한 것으로 간주되었습니다.
그림 1 은 360° 열에 의한 윤부 혈관의 소실과 수술 종료 시 수술된 눈의 경증에서 중등도의 근육증과 같은 중요한 이정표와 함께 전원 변측신경총 소작(LPC) 모델의 수술 단계를 보여줍니다.
131마리의 쥐를 대상으로 한 이번 연구에서 전원형 변연신경총 소작술(LPC)은 수술 직후 기준선에서 13.0 ± 0.2mmHg에서 22.7 ± 0.4mmHg로 IOP 상승을 유도했습니다. 수술 후 첫날(25.3 ± ...

이 프로토콜의 목표는 아급성 안구 고혈압을 유발하는 변연 혈관 신경총의 360° 열 소작을 기반으로 하는 녹내장 신경 퇴행의 새로운 모델을 특성화하는 것입니다.

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

Glaucoma, the second leading cause of blindness worldwide, is a heterogeneous group of ocular disorders characterized by structural damage to the optic ...

우리는 일시적인 안압 상승을 기반으로 강력하고 진행적인 녹내장 변성을 유도하는 간단한 방법을 개발했습니다. 이것은 녹내장 병태생리학의 핵심을 연구할 수 있는 독특한 기회입니다. 이는 학습이 쉽고, 비침습적이며, 비용이 저렴하고, 재현성이 높은 모델로, 각 실험에 대해 감소된 수의 동물을 사용하여 생체 내 기능 분석 및 단기 실험 설계를 가능하게 합니다.망막과 시신경은 중추 신경계의 평가 가능한 부분이므로 이러한 구조의 점진적 손상을 모델링하면 다른 신경 퇴행성 질환에 대한 귀중한 통찰력을 얻을 수 있습니다. 실험용 눈과 반대쪽 대조군 눈의 기준선 안압(IOP)을 측정하려면 마취된 쥐를 벤치 탑의 복부 욕창 위치에 놓아 각막 표면이 안압계 끝에 쉽게 접근할 수 있도록 합니다. 안압계 팁이 중앙 각막 영역에 수직으로 약간 닿도록 배치합니다.그런 다음 측정 버튼을 눌러 측정값을 획득합니다. 다음으로, 실체 현미경 아래에서 쥐를 약간 측면 욕창 위치에 놓고 실험 눈을 40배 배율로 검사합니다. 시술 중에는 카멜로스 나트륨 또는 히알루론산 나트륨 한 방울을 주입하여 반대쪽 대조 눈을 윤활하십시오.다음으로, 구부러진 집게를 사용하여 실험용 안구를 부드럽게 앞으로 밀어 림버스의 360도 주변 혈관을 노출시킵니다. 그런 다음 다른 손으로 저온 안과 소작기를 사용하여 각막 주변의 혈관을 부드럽게 소작합니다. 각막 주변부를 소작하지 않도록 주의하십시오.수술한 눈에서 공막 변연에 작은 원형 소작 자국이 나타나고, 변연 혈관이 소멸되고, 동공이 확장되는 것을 관찰하여 수술 절차의 성공을 확인합니다. 수술 후 앞서 설명한 대로 양쪽 눈의 수술 직후 IOP를 확인합니다. 그런 다음 안과용 프레드니솔론 아세테이트를 실험 눈의 앞쪽 표면에 한 방울 떨어뜨립니다.40초 후 안과 항생제 연고로 교체한다. 비스테로이드성 항염증제와 항생제 연고로 구성된 국소 약물로 실험 눈의 임상 추적 관찰을 매일 적용합니다. 광운동 반응 분석을 위해 습관화를 위해 쥐를 사각형으로 4개의 컴퓨터 모니터가 있는 플랫폼에 놓습니다.자유롭게 움직이는 쥐의 눈 사이의 비디오 프레임에 빨간색 십자선 커서를 유지하면 가상 실린더의 중심을 나타냅니다. 회전하는 등급에 의해 유도된 쥐의 머리와 목의 반사적 추적으로 구성된 광운동 반응을 관찰합니다. 처음에는 공간 주파수가 낮은 자극을 도입한 다음 움직임 추적이 눈에 띄지 않을 때까지 주파수를 점진적으로 늘립니다.패턴 망막 전전도를 기록하려면 쥐를 마취한 후 각막의 측두엽에 활성 전극을 조심스럽게 삽입합니다. 또한 기준 전극을 동측 측두안각의 피하 조직에 삽입하고 접지 전극을 뒷다리 중 하나에 삽입합니다. 그런 다음 쥐를 자극 화면에서 20cm 떨어진 곳에 배치하고, 신호 기준선을 모니터링하고, 수집 시스템의 분석 버튼을 눌러 수집을 시작합니다.망막을 분리한 후 1밀리리터 PBS가 포함된 24웰 배양 플레이트에 넣어 내부 망막이 위를 향하도록 합니다. PBS에서 묽게 된 0.5%non-ionic 계면활성제로 세척해서 조직을 투과시키십시오. 그런 다음 조직과 차단 용액을 실온에서 1시간 동안 부드럽게 흔들어 배양합니다.배양 중에 Brn-3a 1차 항체 용액을 준비하고 섭씨 4도에서 보관합니다. 조직 차단 후 섭씨 4도에서 200마이크로리터의 1차 항체 용액에 망막을 72시간 동안 부드럽게 흔들어 배양합니다. 그런 다음 PBS로 티슈를 씻습니다.2차 항체 용액 200마이크로리터에 조직을 실온에서 2시간 동안 배양한 다음 형광 핵 염색을 위해 핵 카운터 염색 용액으로 10분 동안 배양합니다. PBS를 세 번 세척한 후 유리체 면을 위로 유지하면서 두 개의 작은 브러시를 사용하여 망막을 유리 현미경 슬라이드로 옮깁니다. 등쪽 망막 사분면을 현미경 슬라이드에 놓습니다.마지막으로 유리 커버 슬립에 200마이크로리터의 안티페이드 장착 매체를 바르고 현미경 분석을 위해 평평하게 장착된 망막에 놓습니다. 컨포칼 에피형광 현미경에서 40배 확대 대물렌즈를 사용하여 플랫 마운트를 검사하여 망막 신경절 세포를 추정합니다. 안구 적출 후 안구 부분의 일부를 포함하여 시신경의 안와 내 부분의 근위 부분을 제거합니다.그런 다음 즉시 샘플을 200-300 마이크로리터의 냉고정액이 들어 있는 바이알 또는 튜브에 넣습니다. 2시간 후 차가운 100마이크로몰 나트륨 카코딜레이트 완충액으로 조직을 세척합니다. 그런 다음 섭씨 4도에서 1 % 오스뮴 테트라 옥사이드와 5 나노 몰 염화 칼슘에 1 시간 동안 조직을 부드럽게 흔들어 고정시킵니다.차가운 카코딜산나트륨 완충액으로 3회 세척한 후 시신경 절편을 차가운 증류수로 세척한 후 밤새 배양하고 섭씨 4도에서 1% 소변기 아세테이트를 세척합니다. 다음 날, 물로 세 번 씻은 후 아세톤 농도를 증가시켜 조직을 점진적으로 탈수시킵니다. 그런 다음 조직을 순수 에폭시 수지에 24시간 동안 매립하기 전에 매립 및 에폭시 수지 아세톤 용액을 3회 수행합니다.다음날 시편 캐리어에서 샘플을 꺼내 섭씨 60도에서 48시간 동안 매립 금형으로 옮깁니다. 중합 후 울트라 마이크로톰을 사용하여 시신경 조각의 횡단 반박형 절편을 절단합니다. 그런 다음 섹션을 수집하여 현미경 유리 슬라이드로 옮깁니다.톨루이딘 블루로 절편을 염색하고 광학 현미경을 사용하여 100배 배율로 이미지를 촬영합니다. 초구조 해석의 경우 초박형 단면을 수행하고 구리 그리드에 수집합니다. 그런 다음 투과 전자 현미경 검사를 위해 소변기 아세테이트와 구연산납으로 섹션을 염색합니다.전체 원형 소작술은 대조군에 비해 수술 직후 IOP 상승을 유도했습니다. 수술 후 IOP의 피크는 1일차에 관찰되었으며 6일째에 기준선 수준으로 점진적으로 감소했습니다. 또한, 망막 기능은 각각 광운동 반사 및 패턴 망막 전기 조영술을 사용하여 행동 및 전기 생리학적으로 평가되었습니다.수술 후, 두 매개 변수 모두 3일째에 안구 고혈압 급성기와 30일째에 2차 변성 단계의 두 가지 뚜렷한 장애 단계를 보여주었습니다. 대조군 시신경과 비교했을 때, 축삭돌기 수와 반얇은 횡방향 시신경 절편은 수술 후 점진적으로 감소했다. 대조군의 눈에서 시신경의 투과 전자 현미경 사진은 얇은 신경교세포 돌기와 명백한 축삭 미세소관 및 신경 필라멘트로 분리된 조밀하게 포장된 수초화 섬유를 보여주었습니다.대조적으로, 안구 고혈압 3일 후, 몇 가지 퇴화된 섬유, 신경교세포 과정에서의 세포질 액포, 신경교세포핵의 응축된 염색질이 관찰되었습니다. 7일 후, 퇴행성 축삭 섬유와 고긴장성 신경교세포 과정이 증가했습니다. 그리고 14일 후, 축삭돌기 사이의 신경교세포 돌기의 침범과 관련된 시신경 섬유의 더 많은 불균형이 관찰되었습니다.또한, 망막 신경절 세포의 밀도는 주로 등쪽 및 측두엽 망막 사분면에서 시간이 지남에 따라 감소했습니다. 이 절차를 수행하는 동안 소작 팁으로 변부 혈관을 부드럽게 만지고 탯줄 주변을 절약하고 공막 연부 주변에서 지속적인 소작 자국이 관찰되도록 합니다. 이 절차에 따라 안구 구조의 기능적 생화학적 및 면역조직화학적 평가 및 녹내장 생리병리학에 인정할 수 있는 기타 방법과 같은 다양한 방법을 적용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

녹내장은 세계에서 실명의 주요 원인 중 하나입니다. 고가 intraocular 압력은 큰 위험 요소입니다. 레이저 photocoagulation 유도 안구 고혈압은 물론 기존 동물 모델 중 하나입니다. 이 동영상은 쥐에서 아르곤 레이저 photocoagulation에 의해 안구 고혈압을 유발하는 방법을 보여줍니다.

SD 쥐에서 레이저 유도 만성 안구 고혈압 모델

출처: Lani-Louzada, R., et al., 설치류의 외과적 유도 녹내장에 대한 변지 혈관신경총의 전원형 소작. J. Vis. Exp. (2022)이 비디오는 쥐 모델에서 상승된 안압(IOP)의 유도 및 모니터링을 보여줍니다. 이 과정에는 변부 혈관을 소작하는 것이 포함되며, 그 결과 혈관 폐색과 안압 상승이 발생합니다. 그런 다음 쥐가 회복되도록 하고 IOP는 비교를 위해 실험 눈과 대조 눈 모두에서 정기적으로 모니터링됩니다.

 쥐 모델에서 상승된 안압 유도

출처: Lani-Louzada, R., et al. 설치류에서 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 변지 혈관 신경총의 전원형 소작. J. Vis. 특급 (2022). 이 비디오는 윤부 혈관 신경총의 완전한 원형 소작술을 받은 화학적으로 고정된 쥐 망막에서 망막 신경절 세포의 정량화를 보여줍니다. 이 과정에는 투과화(pereabilization), 항체 염색(antibody staining), 핵 대조염색(nuclear counterstaining)이 포함되며, 이어서 상형(epifluorescence) 현미경으로 시각화하여 안압 상승이 망막 신경절 세포 생존력에 미치는 영향을 평가합니다.

Quantification of Retinal ganglion cell somas following cauterization-induced ocular hypertension(소작 유발 안구 고혈압에 따른 망막 신경절 세포 소마의 정량화) 

만성 안구 고혈압 쥐의 눈 섬유주 레이저 광응고술을 사용하여 유도된다. 안압 (IOP)는 레이저 치료 후 몇 개월 동안 상승합니다. 시력 실험 동물의 대비 감도의 감소는 optomotor 테스트를 사용하여 모니터링 할 수 있습니다.

비주얼 결함의 특성을 만성 안구 고혈압의 레이저 유도 마우스 모델

녹내장은 망막 신경절 세포의 손상이 특징입니다. 동물 모델에서 녹내장을 유도하면 이 질병에 대한 연구에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 여기에서는 생체 내 쥐 모델에서 망막 신경절 세포의 소실을 유도하고 분석을 위한 전체 마운트 망막의 준비를 보여주는 절차를 간략하게 설명합니다.

녹내장 유도 절차<em&gt; 생체</em&gt; 쥐 모델 및 전체 마운트 망막 준비

다음 문서에서는 효과적으로 윤부 줄기 세포 결핍 (LSCD)의 지속 가능한 마우스 모델을 만들 수있는 쉬운, 재생 가능한 기술을 제공한다. 이 동물 모델 시험 및 윤부 줄기 세포 질환에 대한 치료 효능을 비교하기에 유용하다.

간단한 기계 절차 마우스에서 윤부 줄기 세포 결핍을 만드는 방법

만성 안구 고혈압 쥐와 쥐, 일치 녹 내장 망막 신경 절 세포의 기능 및 구조 저하로 이어지는 circumlimbal 봉합을 적용 하 여 유도 된다.

쥐와 쥐에 Circumlimbal 봉합에 의해 유도 된 녹 내장의 모델

여기에서는 장미 벵골을 사용한 망막 정맥 폐색에 최적화된 프로토콜과 유전자 변형 균주에서 재현성을 극대화하기 위한 권장 사항과 함께 레이저 유도 망막 영상 현미경 시스템에 대해 설명합니다.

가변성을 제한하기 위한 망막 정맥 폐색 마우스 모델의 최적화

이 프로토콜은 마우스 모델에서 정확하고 재현 가능한 각막 및 윤부 알칼리 손상을 유도하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 고도로 구부러진 쥐의 각막과 변두리에 고르게 분포된 손상을 허용하기 때문에 유리합니다.

마우스 모델에서 펀치-트레핀 기술을 사용한 각막 및 변막 알칼리 손상 유도

이 프로토콜은 트라베큘로톰 터널링 트라베큘로플라스티(3T)를 설명하는데, 이는 트라베큘라 절개, 슐렘관(SC) 확장, 인장 봉합 이식을 포함하는 최소 침습 녹내장 수술로, 생리적 수류 배출을 복원하는 데 포함됩니다.

트라베큘로톰 터널링 트라베큘로플라스티(3T): 원발성 개방각 녹내장에 대한 단계별 수술 프로토콜

학습하세요 설치류 녹내장 모델에서 360° 림발 혈관 소작을 통한 안압 상승 유도법을. 이 비침습적 방법은 망막 신경절세포 손실과 시신경 퇴행을 연구하여 신경퇴행성 질환의 병태생리를 규명하는 데 활용됩니다.

설치류의 외과적으로 유도된 녹내장에 대한 Limbal Vascular Plexus의 전체 원형 소작

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