마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

이 방법은 다른 통증 조건에서 동물의 효과적 또는 동기 부여 상태에 대한 질문에 대답하는 데 도움이 될 수 있습니다. 그것은 전임상 연구의 번역을 개선하는 중요한 단계입니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 비교적 빠르고 쉽게 수행 할 수 있지만 통증 관련 행동에 영향을 미치는 복잡한 동기를 평가한다는 것입니다.

불투명 한 흰색 세 밀리미터 두께의 아크릴을 사용하여 챔버의 측벽, 바닥 및 천장을 구성하는 것으로 시작하십시오. 정면을 향한 벽의 경우 투명한 세 밀리미터 두께의 아크릴을 사용하십시오. 챔버의 뚜껑을 힌지로 부착하여 마우스를 챔버에 쉽게 넣고 챔버에서 회수 할 수 있도록하십시오.

그런 다음 자체 접착식 발광 다이오드 테이프를 뚜껑의 내부 표면에 부착하여 약 4, 800lux의 조명을 제공합니다. 불투명 아크릴 시트를 다른 MCA 장치로부터 챔버 하나를 닫을 수 있도록 위치 안팎으로 밀어 넣습니다. 다음으로, 270 밀리미터 길이의 조명이 켜지지 않은 챔버 2 개, MCA 테스트 챔버를 상단에 힌지 뚜껑이있는 사방에 반투명 진한 빨간색 아크릴을 사용하여 구성하십시오.

그런 다음 챔버 바닥에 두 밀리미터 구멍이있는 13 x 31 그리드를 배치하여 직경 0.5 밀리미터 팁의 무딘 프로브 배열이 돌출 될 수 있습니다. 프로브 베이스 플레이트 아래에 아크릴 시트를 추가로 배치하여 프로브의 높이를 조정합니다. 이 방법을 사용하여 프로브 높이가 0, 두 밀리미터 및 다섯 밀리미터로 장치를 구성합니다.

무딘 지도 핀 또는 유사한 재료에 대한 대안으로 3D 프린터 파일을 사용하여 나일론 12 플라스틱과 같은 세척 가능하고 생체 적합성 재료로 챔버 2 및 프로브 플레이트의 바닥을 인쇄하십시오. 마지막으로, 방과 비슷한 힌지 뚜껑이있는 모든면에 반투명 진한 빨간색 아크릴을 사용하여 어두운 챔버 세 개를 구성하십시오. 챔버 하나의 반대쪽 끝에 배치하여 챔버 두 개의 기계적 프로브에서 어두운 탈출 영역으로 사용하십시오.

기준선 테스트를 스케줄링하기 하루 전에, 전체 장치의 사회적 탐구를 용이하게하기 위해 케이지 메이트와 함께 5 내지 15 분 동안 마우스를 MCA 유닛에 적응시킨다. 챔버 하나의 LED가 꺼져 있는지, 챔버 하나와 두 개 사이의 장벽이 열린 상태로 유지되고 프로브가 챔버 두 개의 바닥을 통해 돌출되지 않았는지 확인하십시오. 다음으로, 전체 MCA 장치의 측면 뷰가 있는 삼각대에 1080픽셀 푸티지를 녹화할 수 있는 비디오 카메라를 설정합니다.

MCA가 녹화된 이미지를 채우도록 시야를 조정합니다. 녹화가 시작되면 카메라의 필드 뷰에 핸드헬드 드라이 지우기 보드를 잡고 동물의 테스트 실행에 대한 식별 정보와 함께 비디오의 시작 부분에 레이블을 지정합니다. 첫 번째 실행의 경우 프로브 높이를 0으로 설정하고 테스트 할 마우스를 홈 케이지에서 장벽 도어가 설치된 챔버로 옮깁니다.

녹화된 푸티지에 표시되는 타이머를 시작합니다. 10초 후 챔버에 LED 하나를 켭니다. 마우스가 20초 동안 점등된 챔버에 들어간 후, 챔버 하나와 두 개 사이의 장벽을 철회한다.

두 분 동안 동물을 관찰하고 테스트가 진행되는 동안 스톱워치로 대기 시간 또는 체류 시간을 측정하십시오. 챔버 두 개에 대한 첫 번째 진입까지의 대기 시간, 챔버 두 개를 가로 질러 절반 이상을 횡단하는 대기 시간, 챔버 두 개의 총 체류 시간, 챔버 세 개에 도달하는 대기 시간, 두 분 이내에 각 챔버의 총 체류 시간을 기록하고 비율로 변환하십시오. 테스트가 완료되면 마우스를 홈 케이지로 되돌립니다.

MCA 챔버를 70 % 에탄올로 청소하고 완전히 건조시킵니다. 프로브 높이가 0으로 설정된 코호트에서 모든 마우스를 실행한 후, 기계적 프로브 베이스 플레이트 아래에 세 밀리미터의 아크릴 시트를 삽입하고 두 밀리미터의 프로브 높이로 실행을 반복합니다. 프로브 높이가 두 밀리미터로 설정된 모든 마우스를 실행한 후, 프로브 베이스 플레이트 아래에 또 다른 세 밀리미터의 아크릴 시트를 삽입하고 프로브 높이가 다섯 밀리미터인 상태에서 실행을 반복합니다.

테스트 세션이 끝날 때 소독제로 최종 청소를 수행하십시오. 완전한 프로인트의 아주반트-유도된 염증성 통증 모델에서, 식염수 주사는 기준선에 비해 탈출 지연시간을 변화시키지 않는다. 애쥬번트를 주사한 마우스는 주사 후 나흘 동안 탈출 레이턴시의 현저한 증가를 나타냈지만, 프로브 높이가 다섯 밀리미터로 상승되었을 때만 나타났다.

이러한 증가된 잠복기는 시험 시작 90분 전에 카프로펜을 투여받은 마우스에서는 나타나지 않았다. 신경병증성 통증의 보존된 신경 손상 모델은 프로브 높이가 다섯 밀리미터로 설정되었을 때 기준선 대비 탈출 대기 시간을 상당히 증가시켰다. 이러한 증가는 시험 90분 전에 오피오이드 진통제 부프레노르핀의 투여에 의해 방지되었다.

증가된 탈출 잠복기는 또한 신경 손상 전에 MCA 시험의 기준선 라운드를 겪지 않은 마우스에서 관찰되었다. 다섯 밀리미터에서 절약된 신경 손상 마우스에서 증가된 탈출 잠복기는 시험 90분 전에 가바펜틴 투여에 의해 예방되었다. 파단 또는 주조 모델에서, 챔버로부터 탈출하기 위한 레이턴시는 손상 전에 프로브 높이에 비례하여 증가하였다.

부상 후 대기 시간은 0 밀리미터에서 변하지 않았지만 기준선과 비교할 때 남성의 경우 두 밀리미터 및 다섯 밀리미터 프로브 높이와 여성의 경우 다섯 밀리미터 프로브 높이에서 크게 증가했습니다. 이 절차를 시도 할 때 기억해야 할 가장 중요한 것은 모든 마우스가 MCA 장치에 습관화되어 있는지 확인하고 연구 전반에 걸쳐 적절한 무작위 배정 및 블라인드닝을 유지하는 것입니다. 이 방법은 폰 프레이 (von Frey) 또는 조건부 장소 선호도를 포함한 통증 민감성의 다른 측정과 함께 사용할 수 있습니다.