마우스 모델에서 유방암의 예방 및 지역 치료를 위한 에탄올 기반 담약 솔루션의 내배송 및 X선 시각화

유방암은 미국에 있는 여자를 위한 암 관련 죽음의 가장 널리 퍼진 암 그리고 두 번째 주요한 원인입니다. 현재 예방 접근 방식은 제한적이며 다양한 부작용이 있습니다. 1 차 예방을 위한 새로운 내정간섭이 필요합니다. 우리는 유방암 예방을 위한 마우스 유방 상피증에 에탄올 기지를 둔 절제용액의 자궁 내 전달을 위한 방법을 개발했습니다.

젖꼭지 개구부에 직접 주입하면 최소 부수적 인 조직 손상으로 덕트 트리를 안감하는 상피 세포를 대상으로 할 수 있습니다. 이 방법은 탄탈륨 산화물 나노 입자를 고해상도 조영제로 사용하여 동시에 생체 내 이미징을 가능하게 합니다. 이 방법은 다른 엑스레이 조영제 및 다른 화학 적 또는 열 절제 용액을 가진 다양한 예방 치료와 함께 사용하기 위해 적응 될 수있다.

이러한 이미지 유도 유방암 예방 방법과 관련된 첫 번째 단계는 실험실에서 제조된 수크랄로스 젤 컵을 활용한 카프로펜의 경구 투약을 통해 확장된 항염증제 치료를 유도하는 것이다. 분모 크림을 사용하여 주입할 젖꼭지 주변 의 영역에서 털을 제거하여 동물을 준비합니다. 그런 다음 자궁 내 주사는 바늘 삽입을위한 젖꼭지의 개구부를 가장 잘 찾고 시각화하기 위해 입체 코프의 도움으로 수행됩니다.

용액의 납품 후에, 동물은 주사가 얼마나 성공적이었는지 결정하기 위하여 마이크로 CT 또는 형광소법에 의해 심상입니다. 마이크로 CT 검사는 성공적인 충진 및 기타 메트릭의 추가 분석을 위해 주입된 유방 덕트 트리의 3D 재구성을 생성하도록 처리될 수 있습니다. 첫째, 필요한 농도에서 카프로펜을 준비합니다.

우리는 0.5 mL을 주입하고 컵 당 하나의 mg의 최종 복용량을 달성하기 위해 mL 당 두 mg의 작업 솔루션을 합니다. 혼합물에 멸균 식품 염료를 첨가하여 약물의 전체 혼합을 컵의 수크랄로스로 의 전체 혼합을 더 잘 확인할 수 있습니다. 다음으로 컵을 섭씨 60도에서 15분간 수조에 넣습니다.

컵을 제거하고 오염의 가능성을 최소화하기 위해 그들을 건조. 70% 에탄올 또는 에탄올 물티슈를 사용하여 컵 뚜껑의 표면을 청소하고 건조시키십시오. 주사기를 사용하여 뚜껑을 통해 필요한 양의 카프로펜 용액을 주입하십시오.

이 경우 원하는 결과를 위해 500 마이크로 리터를 주입해야합니다. 바늘의 구멍 위에 스티커를 놓고 컵을 15초 동안 흔들어 15초 더 가립니다. 진한 파란색 덩어리를 찾아 컵의 균일 한 혼합을 확인하십시오.

컵은 최대 한 달 동안 냉장 보관할 수 있습니다. 동물의 준비는 인트라덕트 절차 전에 2 ~3 일 후에 발생해야합니다. 이소플루란을 사용하여 동물을 마취하는 것으로 시작합니다.

마취 된 마우스를 코 콘으로 옮기면 이소플루란을 계속 전달합니다. 코 콘에있는 동안 마우스에 눈 윤활유를 적용한 다음 뒷면에 마우스를 배치합니다. 면 팁 어플리케이터를 사용하여 주입할 계획인 유방 땀샘 부위에 증필 크림을 바르습니다.

퍼클리케이터를 원하는 부위에 동물의 피부를 위아래로 문지르면 털이 더 빨리 느슨해지는 데 도움을 줍니다. 피부를 태우지 않도록 가능한 한 적은 시간 동안 크림을 마우스에 두는 것이 중요합니다. 10~30초 동안 바르면 거즈에 따뜻한 물을 사용하여 크림을 완전히 제거합니다.

깨끗한 거즈로 피부를 건조하기 전에 2~4개의 헹구기를 사용하여 완전한 제거를 보장합니다. 모피 제거 영역을 확인하여 좋은 가시성과 젖꼭지에 대한 액세스를 확인하십시오. 필요한 경우 증분 절차를 반복합니다.

마취에서 회복하기 위해 따뜻한 패드에 깨끗한 복구 케이지에 마우스를 놓습니다. 회복 후 홈 케이지에서 쥐를 준비하기 위해 한 개의 카프로펜 컵을 줍니다. 이소플루란 마취를 사용하여 동물을 마취하고 마우스를 완전히 유도한 후에 다시 코 콘으로 이동합니다.

주사를 위해 동물을 등에 배치하기 전에 눈 윤활유가 적용됩니다. 주입될 유방 땀샘 근처의 다리를 테이프로 쓰러뜨리는 것이 유용할 수 있지만 필요하지는 않습니다. 주사 용액의 원하는 부피와 바늘 제거 후 일부 유출 의 경우 1 마이크로 리터로 주사기를 준비합니다.

주입 직전에 용액의 자유로운 흐름을 위해 바늘을 테스트하기 위해 추가 부피를 채우는 것이 유용할 수 있다. 하나 이상의 유방 동맥을 주입하는 경우, 가능한 경우 여러 주사기를 미리 채우는 시간을 절약 할 수 있습니다. 좌측으로 앉아 있을 때 솔루션이 막히는 경향이 있는 경우에는 너무 일찍 사용하지 않도록 주의하십시오.

가능하면 미세 한 팁 포셉을 사용하여 눈에 보이는 죽은 피부를 제거하여 젖꼭지를 준비하십시오. 젖꼭지 개구부를 막지 않고 잡아 당기는 것이 내성이 있는 경우 모든 죽은 피부를 제거할 필요는 없습니다. 이것은 때때로 죽은 피부가 너무 단단히 살아있는 피부에 붙어 있는 경우에 젖꼭지에 상해 그리고 팽윤을 일으키는 원인이 될 수 있습니다.

바늘의 벨이 보이면 미세 한 기울어진 집게의 안내 도움으로 젖꼭지의 개구부에 바늘을 삽입하십시오. 젖꼭지의 길이와 탄력에 따라 바늘을 안내하는 동안 젖꼭지를 항상 잡을 수는 없을 수도 있습니다. 바늘을 젖꼭지로 안내하는 대신 바늘위로 젖꼭지를 당길 수 있도록 바늘로 젖꼭지를 기동할 필요가 있습니다.

바늘 벨이 젖꼭지와 주 덕트에 완전히 둘러싸여 나면 천천히 용액을 주입하기 시작합니다. 원하는 속도는 분당 약 40 마이크로리터입니다. 덕트 트리에 손상을 방지하기 위해이보다 더 빨리 주입하지 마십시오.

완전한 주입 후, 30 초 동안 기다렸다가 집게의 도움으로 젖꼭지에서 바늘을 제거하십시오. 이렇게 하면 젖꼭지의 누출이 최소화됩니다. 실패한 주입의 흔적에 대한 영역을 평가.

돔형 외관은 지방 패드 주입 또는 외상을 나타낼 수 있습니다. 용액에 염료가 포함되어 있거나 주사 부위에서 도밍을 위해 주의 깊게 찾고 있는 경우 지방 패드에 주입이 발생하는 것을 볼 수 있습니다. 유사한 방식으로 실험에 필요한 나머지 유방 땀샘을 주입진행, 주사 볼륨 및 누설의 발생률을 지적.

마우스의 일부 영역은 어색한 손 배치 또는 호흡 간섭과 같은 문제로 인해 주입하기가 더 어려울 수 있습니다. 예를 들어, 오른손잡이 인젝터는 여기에서 볼 수있는 마우스의 오른쪽 상단에 땀샘을 주입하는 데 가장 어려운 시간을 가질 것입니다. 이들은 폐에 근접하기 때문에 더 이동하고 표면에 손목을 쉬는 방법으로 동물의 몸과 좋은 손 배치를 찾기 어려울 수 있습니다.

일부는 코 콘이 허용하는 경우 마우스를 재배치하는 것이 더 쉬울 수 있습니다. 에탄올 함유 용액을 주입할 때는 전신 알코올 중독을 피하기 위해 주의를 기울여야 합니다. 이를 위해서는 한 세션에서 얼마나 많은 에탄올을 주입할 수 있는지 알고 그 효과를 중화하기 위한 절차 중에 자당 함유 솔루션 IP를 투여해야 합니다.

자궁 내 시술 후, 동물은 가열 패드에 깨끗한 케이지에서 복구하거나 채워진 덕트 나무의 이미징을위한 마이크로 CT 시스템으로 이동 할 수있다. 마우스는 또한 모든 이미징 세션 다음에 복구해야 합니다. 주입된 동물을 마이크로 CT 시스템으로 이동한 후, 이미징 중에 마취를 유지하기 위해 이소플루란을 계속 투여합니다.

이미지할 사이트 근처의 다리를 테이핑하여 이미징 위치를 표준화하는 것이 유용할 수 있습니다. 예를 들어 뒷다리를 확장 된 위치에 테이핑하면 다리뼈가 주입 된 땀샘의 시야를 방해하지 못하게 할 수 있습니다. 위쪽으로 다리의 앞다리를 상향 확장 된 위치에 테이핑하면 상부 땀샘을 보는 데 도움이 될 수 있습니다.

우리는 또한 마우스의 복부를 가로 질러 테이핑이 낮은 땀샘에 대한 호흡 유물의 감소를 도울 수 있다는 것을 발견했습니다. 덕트 트리의 시각화를 위한 허용 가능한 검색 매개 변수가 많이 있습니다. 이러한 검사에서 발생하는 방사선 량이 주어진 쥐균에 대한 방사선 제한을 초과하지 않도록 주의해야합니다.

방사선 투약은 노출 시간이 긴 이미지를 획득하는 대신 형광시경을 보고 전달 성공을 주목함으로써 크게 감소될 수 있습니다. 우리의 표준 스캔 매개 변수는 짧은 2 분 표준 스캔을 획득하는 경우에만 반복 이미징에 허용됩니다. 최대 14분 간 더 높은 해상도의 검사는 안락사 전에 단말기 절차로 허용됩니다.

이 더 긴 검사는 동물에 있는 방사선 질병을 일으키는 원인이 될 수 있기 때문에 종방향 연구 결과를 위해 허용되지 않습니다. 이 동물은 땀샘 4및 9에서 100 밀리머 탄탈륨 산화물 대비를 포함하는 에탄올 용액을 주입했습니다. 현재 인수는 주입 된 하부 땀샘의 14 분 고해상도 스캔입니다.

동물의 불소 검사는 우리가 주입 솔루션 내에서 대조에 의해 강조되는 덕트 트리 아키텍처를 볼 수 있습니다. 우리가 사용하는 마이크로 CT 시스템에는 공식적인 분석없이 주입의 성공을 평가하기 위해 빠른 변환을 만들 수있는 소프트웨어가 내장되어 있습니다. 이 기능에는 합리적인 신호 대 노이즈 감소를 허용하는 간단한 콘트라스트 슬라이더가 있습니다.

이러한 변환의 제한은 동일한 신호 임계값이 전체 이미지에 적용된다는 것입니다. 이것은 명확하게 덕트 트리의 일부가 아닌 밝은 신호를 허용, 다이어트에 철등, 변환에 남아. 더 나은 형식 변환은 관심 영역의 세분화를 허용하는 보다 정교한 분석 소프트웨어를 사용하여 만들 수 있습니다.

단독 덕트 트리의 최상의 렌더링을 얻으려면 추가 이미지 처리를 위해 매머 지방 패드를 세분화하는 것이 좋습니다. 이 과정은 동물의 전체 두께에 걸쳐 지방 패드의 경계를 추적 라인을 필요로한다. 세 번째 슬라이스를 모두 추적하고 개체를 전파하는 것만으로도 덕트 전체를 캡처할 수 있습니다.

이는 검사를 분석하는 모든 개인의 유사한 출력을 보장하기 위해 추적을 위한 실험실 표준을 준수해야 하는 주관적인 프로세스일 수 있습니다. 해부학에 익숙해지면 어떤 영역을 포함해야 할지 에 대한 판단 호출에 도움이 될 수 있습니다. 추적을 전파한 후 특정 범위 내에서 변환을 임계값으로 임계값을 표시하여 유방 선 내에 포함된 콘트라스트만 표시할 수 있습니다.

이것은 덕트 트리 내의 솔루션뿐만 아니라 바로 근처에있는 누출이어야합니다. 300 ~ 3, 000 HU의 범위는 탄탈륨 산화물 함유 용액의 경우 잘 작동하는 경향이 있다. 완전히 처리된 변환의 예는 여러 측면에서 여기에서 확인할 수 있습니다.

동물이 마이크로 CT에서 어떻게 지향되는지에 따라 분석 소프트웨어의 DICOM 파일을 방향을 조정하여 이미지 상단에 있는 동물의 머리와 함께 직관적인 해부학적 위치를 나타낼 필요가 있을 수 있습니다. 매번 비슷한 방식으로 이미지를 회전하지 않으면 어떤 선이 표시되는지 결정하기어려울 수도 있습니다. 덕트 트리의 재구성을 만든 후에는 부피 나 길이와 같은 추가 측정을 할 수 있습니다.

이 절차를 통해 성공적인 전달에 대한 검증은 여기에 설명된 바와 같이 3D 마이크로 CT 변환뿐만 아니라 발광 명반으로 강조 표시된 전체 덕트 트리를 주입 한 이중 얼룩 전체 마운트를 통해 입증 될 수 있습니다. 3D 공초점 현미경 검사는 전자 캐더린으로 얼룩진 지워진 선에서 덕트 트리의 아키텍처를 강조 할 수 있습니다. 스트레인-투-스트레인 및 마우스 간 가변성 및 젖꼭지 해부학은 땀샘을 주입하기가 더 어렵거나 적게 만들 수 있습니다.

이것은 그립의 용이성을 위해 높은 프로필과 주입에 대한 이상적인 젖꼭지의 예입니다. 이와 같이 낮은 프로파일을 가진 젖꼭지는 성공적으로 캐너레이하는 것이 더 어려울 수 있습니다. 이러한 차이 더 많은 외상 또는 doming 이 지방 패드 주입의 돔 모양에 의해 표시 되 면 실패 할 가능성이 더 외상 또는 도밍 성공적인 주입을 달성 하기 위해 만들 수 있습니다.

유방암 예방에 관해서, 현재 두 가지 주요 전술이 사용 되 고 있다. 첫 번째, 조심 대기, 진정한 개입을 포함 하지 않습니다. 이 경로를 추구하는 개인은 정기적으로 암 형성이 발생하고 있음을 나타내는 자신의 유방 조직에있는 어떤 덩어리에 대한 모니터링.

질병 검출은 그 때 처리를 자극할 것입니다. 예방 유방 절제술은 유방암이 주변 기질과 함께 발생할 수있는 모든 상피 세포를 제거하는 더 침습적 인 절차입니다. 이 수술은 심각한 부작용을 가질 수 있으며 질병의 낮은 또는 중간 위험을 가진 개인에 대 한 예방 옵션으로 거의 선택 되지 않습니다.

우리의 접근 은 유방 덕트 나무에 직접 절제 용액의 주입을 통해 국부 적 절제를 포함한다. 이 방법은 부수적 인 손상을 감소시키고 질병의 심각한 위험이없는 개인에게 더 매력적인 옵션이 될 것입니다. 즉각적인 화상 진찰 후 주입을 위한 대조의 추가는 또한 이것을 진료소에 쉽게 번역합니다.