크론병에서 기계적 스트레스의 병원성 역할을 연구하는 TNBS 유도 설치류 모델

따라서 우리의 프로토콜에서 TNBS의 결장 내 점안은 점안 부위의 경막 염증과 염증에 근접한 세그먼트의 기계적 팽창을 유발합니다. 그래서 이것은 협착 크론 병을 모방합니다. 근위 세그먼트는 기계적으로 분산되어 있지만 눈에 보이는 염증을 나타내지 않기 때문에 근위 세그먼트와 염증 부위에 대한 비교 연구는 기계적 스트레스가 크론의 대장염에 중요한 역할을하는지 여부를 결정하는 데 도움이됩니다.

이전 연구는 염증 부위에만 초점을 맞 춥니 다. 모델의 다른 사이트에서 작업하는 우리의 프로토콜은 크론 병, 특히 협착성 크론 병에서 기계적 스트레스의 중요한 역할을 강조합니다. 시작하려면 쥐를 마취 테이블에 수핀 위치에 놓습니다.

대장염을 유도하기 위해, 항문 말단으로부터 약 일곱 내지 여덟 센티미터 동안 항문을 통해 의료용 등급의 개방형 폴리우레탄 카테터를 삽입하고, TNBS를 결장에 부드럽게 주입시킨다. 가짜 대조군 쥐를 250 마이크로 리터의 식염수로 투여하십시오. TNBS 또는 식염수의 분포를 돕고 유출을 피하려면 항문을 두 분 동안 닫은 상태에서 머리를 약 30도 각도로 아래쪽을 향하게하는 수핀 위치에 쥐를 유지하십시오.

외과 용 가위와 집게를 사용하여 쥐 복부를 엽니 다. 항문 운하 위의 전체 결장을 조심스럽게 제거하고 즉시 결장을 얼음처럼 차가운 1x HBSS 버퍼로 옮깁니다. 버퍼에서 콜론을 곧게 펴고 눈금자를 사용하여 콜론 길이를 측정합니다.

나일론 실을 취하고, 그것을 결장 주위에 동그라미로 돌려 대조군 및 TNBS 처리된 래트에서 결장 세그먼트의 외부 둘레를 측정한다. 조직학을 위해 전체 두께 조직을 가져 가라. 장간막 보드를 따라 결장을 열고 HBSS 버퍼로 결장을 철저히 청소하십시오.

최소한의 수정으로 미리 정의된 기준에 기초하여 거시적 염증 점수에 대한 결장을 평가한다. TNBS 처리된 래트로부터 결장 조직 샘플을 수집하여 부위 P, I 및 D.Site P는 염증 부위의 경구 마진 전에 두세 센티미터 지점이다. 부위 I은 TNBS가 주입되는 염증 부위이며, 일반적으로 결장 끝에서 네 내지 여섯 센티미터이다.

마지막으로, 부위 D는 염증 부위의 복부 마진에 원위 하나 내지 두 센티미터 부분이다. 래트에서 TNBS의 결장 내 점안은 원위 결장에 점적 부위의 두꺼운 장 벽과 좁아진 내강으로 약 두 센티미터 길이의 국소 경막 염증을 유도하였다. TNBS 점적의 부위는 경교 염증 및 협착의 결과 I.As 부위로 지칭되었고, 염증 및 기계적 스트레스 모두 부위 I에 존재하였다.부위의 협착은 부위 P로 지칭되는 TNBS 점안 부위에 근접한 세그먼트에서 현저한 내강 팽윤을 초래하였다.결장 둘레는 가짜 대조군 결장에 비해 부위 P 및 I에서 유의하게 증가하였다.

기계적으로 흩어져있는 동안, 부위 P는 눈에 보이는 염증을 나타내지 않았다. 반대로, 부위 D로 지칭되는 TNBS 점적에 원위 결장 세그먼트는 염증이나 기계적 팽만감을 나타내지 않았다. TNBS 처리된 래트에서 염증 부위 I에서의 거시적 스코어는 대장염 래트의 부위 P 및 D에서의 가짜 대조군에 비해 극적으로 증가하였다.

부위 P 및 D에서의 염증 점수는 sham에 비해 유의하게 증가하지 않았다. 따라서 사이트 I뿐만 아니라 모델에서 사이트 P 및 D를 연구하는 것이 중요하며, 이는 크론 병에서 기계적 스트레스의 병원성 중요성을 인식하는 데 도움이되기 때문입니다. 기계적 스트레스가 장 염증의 병원성 요인인지 여부를 더 결정하기 위해 동물에게 독점적으로 액체 식단을 공급하여 기계적 팽창을 풀어주고 이것이 염증과 장 기능에 도움이되는지 확인할 수도 있습니다.