Name: 마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-02-07T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 45 s
Description: 학습하세요 수정된 커프 기술을 이용한 마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델로 심장 이식 거부 반응 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 기법은 수술 효율성을 높이고 이식편 생존율을 향상시킵니다.

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이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (81870304)이 Jun Li에게 지원했습니다.

모든 동물 실험은 Guide for the Care and Use of Laboratory Animals, Eight Edition, National Research Council (US) 2011에 따라 수행되었다. 동물 대상과 관련된 절차는 중국 충칭에 있는 충칭 대학 암 병원의 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 상업적 출처( 재료 표 참조)에서 얻은 체중 20-30g의 수컷 BALB/c 및 C57BL/6 마우스를 동종 심장 이식 연구에 사용했습니다. C57BL/6 마우스는 기증자 및 동종 수혜자로 사용되었고, BALB/c 마우스는 동종 수혜자로 사용되었습니다. 프로토콜의 개략도는 그림 1에 나와 있습니다. 알림: 수술 기구 및 용액을 포함하여 수술 중에 사용되는 모든 소모품은 멸균 상태입니다. 수술 절차는 무균 수술 기술의 원리를 준수합니다.
1. 수취 절차
<ol><li>후드와 연결된 15 x 10 x 10cm 유도 챔버를 통해 5% 이소플루란을 흡입 하여 전신 마취를 유도합니다( 재료 표 참조).</li>
	<li>가열 패드로 받는 사람 마우스를 수술대에 고정합니다. 코와 입에 안면 마스크를 통해 2% 이소플루란을 지속적으로 흡입하여 마취를 유지하십시오. 참고: 느린 호흡 속도와 리듬, 각막 반사의 소실, 발가락의 페달 반사 부재는 마취의 효과를 나타냅니다.</li>
	<li>머리카락을 면도한 후 포비돈-요오드 스크럽을 세 번 번갈아 가며 알코올로 수술 부위를 소독합니다. 그런 다음 오른쪽 하악 각도에서 꼬리 끝까지 자궁 경부 정중선과 평행 한 1.5-2cm 피부를 절개합니다.</li>
	<li>전기 응고기와 마이크로 집게를 사용하여 오른쪽 외부 경정맥의 ~1cm를 해부합니다. 비외상성 미세혈관 클램프로 근위부 끝의 정맥을 자르고 말단부에서 결찰합니다.</li>
	<li>정맥의 말단부를 경사 끝과 표면 홈이 있는 22G 폴리우레탄 가시 커프( 재료 표 참조)를 통해 통과시킵니다. 미세 혈관 클램프를 사용하여 커프의 손잡이로 정맥을 고정하십시오.</li>
	<li>8-0 제거 결찰 봉합사 말단부에서 표면 미늘에 의해 걸린 커프 위로 내강을 뒤집고 표면의 홈에 10-0 수술 봉합사로 고정합니다.</li>
	<li>오른쪽 설하선을 절제하여 심장 이식편을 이식하기 위한 포사를 형성하고 상악하악선의 오른쪽 엽과 오른쪽 흉쇄유돌근을 예약합니다.</li>
	<li>미세 집게를 사용하여 ~1cm 동안 오른쪽 총경동맥을 해부하고 근위 끝에 있는 비외상성 미세혈관 클램프로 동맥을 자릅니다. 말단부에서 결찰하고 동맥을 차단합니다.</li>
	<li>표면에 경사 끝과 홈이 있는 26G 폴리우레탄 가시 커프( 재료 표 참조)를 통해 동맥의 말단부를 통과시킵니다. 미세혈관 클램프를 사용하여 커프의 손잡이로 동맥을 고정합니다.</li>
	<li>말단부에서 결찰 봉합사를 제거하고 커프 위로 내강을 뒤집은 다음 10-0 수술 봉합사로 표면 미늘과 홈으로 고정합니다.</li>
	<li>수혜자의 혈관을 준비한 후 혈전증을 예방하기 위해 혈관에 100IU/mL의 헤파린 식염수를 떨어뜨립니다. 후속 이식을 위해 멸균 된 젖은 식염수 거즈로 자궁 경부 절개를 덮으십시오.</li>
</ol>2. 기증자 절차
<ol><li>기증자 마우스에 대해 동일한 마취 절차(1.1단계)를 사용합니다.</li>
	<li>전기 면도기를 사용하여 복부 털을 면도하고 포비돈-요오드 스크럽을 세 번 번갈아 가며 알코올로 수술 부위를 소독합니다.</li>
	<li>치골 결합에서 자궁하 흉골까지 정중선을 따라 가위로 복부(2-3cm)를 절개하고 견인기로 절개 부위를 확장합니다.</li>
	<li>전기응고제와 미세겸자를 이용하여 복부 대동맥과 하대정맥 1cm를 절개하고, 헤파린 250IU/mL가 보충된 생리식염수 1mL를 하대정맥을 통해 주입하여 헤파린을 시행합니다. 그 후, 복부 대동맥과 하대정맥을 절제하십시오.</li>
	<li>흉벽을 분리하기 위해 수술용 가위를 사용하여 양쪽의 전방 겨드랑이 라인을 따라 흉부를 절제합니다. 8-0으로 우수한 대정맥을 합치십시오. 외과 봉합사.</li>
	<li>간상부 하대정맥에 두피 바늘을 삽입합니다. 그런 다음 간상하 대정맥에서 두피 바늘을 통해 100IU/mL의 헤파린이 보충된 얼음처럼 차가운 생리 식염수를 주입하여 혈액색이 바래질 때까지 기증자의 심장을 관류합니다.</li>
	<li>기증자 심근을 보호하기 위해 대동맥궁의 두피 바늘을 사용하여 2-3mL의 얼음처럼 차가운 히스티딘-트립토판-케토글루타레이트(HTK) 용액( 재료 표 참조)으로 기증자 심장을 다시 관류합니다. 평균 온난 허혈 시간은 5분입니다.</li>
	<li>상대정맥과 하대정맥을 5-0 수술 봉합사로 유자합니다. 기증자 대동맥과 폐동맥을 분지하기 전에 해부하고 잘라냅니다. 그 후, 상대정맥과 하대정맥과 폐정맥을 나누어 기증자의 심장을 제거합니다.</li>
</ol>3. 이식
<ol><li>기증자 심장을 거꾸로 된 위치에서 수혜자 마우스의 자궁 경부 주머니에 이식합니다.</li>
	<li>전향된 수혜자 경정맥이 있는 커프를 기증자 폐동맥의 내강으로 당겨 수혜자 외부 경정맥에 대한 기증자 폐동맥의 종단 간 문합을 수행합니다. 문합을 고정하기 위해 10-0 수술 봉합사를 통해 표면의 홈을 사용하여 커프를 결속시킵니다.</li>
	<li>수혜자 경동맥에 대한 기증자 대동맥의 종단 간 문합을 위해 유사한 절차를 사용합니다.</li>
	<li>경정맥의 비외상성 미세혈관 클램프를 풀고 경동맥을 풀어 기증자의 심장을 다시 관류합니다. 평균 한랭 허혈 시간은 15분입니다.</li>
	<li>심장 이식편을 고정하고 이식편이 비틀어지지 않도록 적절하게 봉합하십시오.</li>
	<li>5-0 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 연속 봉합사로 자궁경부 절개를 봉합합니다( 재료 표 참조). 알림: 상처가 완전히 치유된 후 봉합사를 제거합니다.</li>
	<li>수용자 마우스를 마취에서 회복될 때까지 따뜻하고 건조하며 깨끗한 케이지 안에 보관하십시오. 알림: 복구하는 데 5-10분이 걸립니다.</li>
	<li>부프레노르핀(0.05 mg/kg)을 수술 후 진통을 위해 48시간 동안 6시간마다 수용자 마우스에 피하 주사합니다. 참고: 진통 용량은 이 연구에 최적화되었습니다. 그러나 진통 요법은 기관 동물 사용 지침에 따라 통증의 징후가 있는 경우 연장/수정될 수 있습니다.</li>
</ol>

<ol><li>Khush, K. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+International+thoracic+organ+transplant+registry+of+the+international+society+for+heart+and+lung+transplantation%3A+Thirty-sixth+adult+heart+transplantation+report+-+2019%3B+focus+theme%3A+Donor+and+recipient+size+match%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The International thoracic organ transplant registry of the international society for heart and lung transplantation: Thirty-sixth adult heart transplantation report - 2019; focus theme: Donor and recipient size match.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 38 (10), 1056-1066 (2019).</li>
<li>Stehlik, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+registry+of+the+international+society+for+heart+and+lung+transplantation%3A+29th+official+adult+heart+transplant+report--2012%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The registry of the international society for heart and lung transplantation: 29th official adult heart transplant report--2012.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 31 (10), 1052-1064 (2012).</li>
<li>Huang, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Combined+intrathymic+and+intravenous+injection+of+mesenchymal+stem+cells+can+prolong+the+survival+of+rat+cardiac+allograft+associated+with+decrease+in+miR-155+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Surgical+Research%22%5BJournal%5D)">Combined intrathymic and intravenous injection of mesenchymal stem cells can prolong the survival of rat cardiac allograft associated with decrease in miR-155 expression.</a> Journal of Surgical Research. 185 (2), 896-903 (2013).</li>
<li>Eggenhofer, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Features+of+synergism+between+mesenchymal+stem+cells+and+immunosuppressive+drugs+in+a+murine+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transplant+Immunology%22%5BJournal%5D)">Features of synergism between mesenchymal stem cells and immunosuppressive drugs in a murine heart transplantation model.</a> Transplant Immunology. 25 (2-3), 141-147 (2011).</li>
<li>Sula Karreci, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brief+treatment+with+a+highly+selective+immunoproteasome+inhibitor+promotes+long-term+cardiac+allograft+acceptance+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">Brief treatment with a highly selective immunoproteasome inhibitor promotes long-term cardiac allograft acceptance in mice.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 113 (52), 8425-8432 (2016).</li>
<li>Liu, F., Kang, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+heart+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Heterotopic heart transplantation in mice.</a> Journal of Visualized Experiments. 6, 238(2007).</li>
<li>Lin, C. M., Gill, R. G., Mehrad, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+natural+killer+cell+activating+receptor%2C+NKG2D%2C+is+critical+to+antibody-dependent+chronic+rejection+in+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The natural killer cell activating receptor, NKG2D, is critical to antibody-dependent chronic rejection in heart transplantation.</a> American Journal of Transplantation. 21 (11), 3550-3560 (2021).</li>
<li>Ito, H., Hamano, K., Fukumoto, T., Wood, K. J., Esato, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bidirectional+blockade+of+CD4+and+major+histocompatibility+complex+class+II+molecules%3A+An+effective+immunosuppressive+treatment+in+the+mouse+heart+transplantation+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">Bidirectional blockade of CD4 and major histocompatibility complex class II molecules: An effective immunosuppressive treatment in the mouse heart transplantation model.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 17 (5), 460-469 (1998).</li>
<li>Zhou, Y. X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+rejection+correlates+with+expression+of+major+histocompatibility+complex+class+I+antigens+on+peripheral+blood+CD3%28%2B%29CD8%28%2B%29+T-lymphocytes+following+skin+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+International+Medical+Research%22%5BJournal%5D)">Acute rejection correlates with expression of major histocompatibility complex class I antigens on peripheral blood CD3(+)CD8(+) T-lymphocytes following skin transplantation in mice.</a> Journal of International Medical Research. 39 (2), 480-487 (2011).</li>
<li>Oberhuber, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Murine+cervical+heart+transplantation+model+using+a+modified+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Murine cervical heart transplantation model using a modified cuff technique.</a> Journal of Visualized Experiments. (92), e50753(2014).</li>
<li>Cui, D., Tan, C., Liu, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+alternative+technique+of+arterial+anastomosis+in+mouse+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Transplantation%22%5BJournal%5D)">An alternative technique of arterial anastomosis in mouse heart transplantation.</a> Clinical Transplantation. 32 (6), 13264(2018).</li>
<li>Plenter, R. J., Zamora, M. R., Grazia, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Four+decades+of+vascularized+heterotopic+cardiac+transplantation+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Investigative+Surgery%22%5BJournal%5D)">Four decades of vascularized heterotopic cardiac transplantation in the mouse.</a> Journal of Investigative Surgery. 26 (4), 223-228 (2013).</li>
<li>Fang, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+two-stitch+sleeve+technique+for+arterial+anastomosis+of+cervical+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Translational+Research%22%5BJournal%5D)">A simplified two-stitch sleeve technique for arterial anastomosis of cervical heterotopic cardiac transplantation in mice.</a> American Journal of Translational Research. 5 (5), 521-529 (2013).</li>
<li>Matsuura, A., Abe, T., Yasuura, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Simplified+mouse+cervical+heart+transplantation+using+a+cuff+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Simplified mouse cervical heart transplantation using a cuff technique.</a> Transplantation. 51 (4), 896-898 (1991).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Fensterer, T. F., Miller, C. J., Perez-Abadia, G., Maldonado, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+cuff+design+to+facilitate+anastomosis+of+small+vessels+during+cervical+heterotopic+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Comparative+Medicine%22%5BJournal%5D)">Novel cuff design to facilitate anastomosis of small vessels during cervical heterotopic heart transplantation in rats.</a> Comparative Medicine. 64 (4), 293-299 (2014).</li>
</ol>

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마우스 심장 이식 모델은 심장 이식 후 거부 메커니즘 조사에 기여하여 심장 동종 이식 수혜자의 장기 생존을 개선하기 위한 독특한 접근 방식의 개발에 기여합니다. 그러나, 생쥐에서의 심장 이식은 복잡하고 도전적인 작업이며, 특히 혈관 문합에서 높은 수준의 미세 수술 기술을 필요로 한다11,12,13. 마우스 복부 이종 심장 이식 모델은 수혜자 대동맥 및 하대정맥에 대한 기증자 대동맥 및 폐동맥의 문합에 의한 스티치를 사용하여 수행됩니다. 이 수술에서 수혜자의 대동맥과 하대정맥을 차단해야 합니다. 따라서 하체의 허혈과 하대정맥의 혈전증은 수용자 마우스의 장애와 사망을 증가시킬 수 있습니다. 이식 중 혈관 문합의 어려움을 줄이기 위해 Matsuura et al. 1991년에 커프 기술을 사용하여 생쥐에 자궁경부 심장 이식 모델을 처음 도입했습니다<sup class="x...

심장 이식은 말기 심부전의 표준 치료법이 되었습니다. 국제 심장 및 폐 이식 학회(International Society for Heart and Lung Transplantation)에 등록된 조직에서 연간 5,500건 이상의 심장 이식이 수행됩니다. 동종 심장 이식 수혜자 중 1년 거부율은 여전히 >10%인 반면 3년 거부율은 36%로 증가했습니다1,2. 그러나 심장 동종이식 거부 반응이 있는 환자에 대한 효과적인 예방적 치료법은 부족합니다. 따라서 심장 동종이식편의 면역학적 및 병리학적 거부의 기초가 되는 생리학적 메커니즘을 밝히는 동물 모델 연구가 보증됩니다. 이러한 연구는 심장 동종이식 거부를 예방하고 해당 환자 집단의 생존율을 향상시키는 데 도움이 되는 효과적인 약물을 개발하는 데 필요한 새로운 표적의 조사에 기여할 것입니다.
심장 동종이식 거부반응의 일부 잠재적인 면역학적 및 병태생리학적 기전이 최근 이종성 심장 이식의 마우스 모델 연구에서 제안되었다 3,4,5. 결과적으로, 마우스 이종 심장 이식은 인간 유전자와의 높은 상동성으로 인해 심장 이식 후 심장 동종 이식편에서 발생하는 면역 거부 및 병리학적 손상의 메커니즘을 조사하기 위한 이상적인 전임상 모델이 되었습니다. 널리 퍼진 개념은 정상적인 인체 해부학과 유사하게 바늘을 사용하여 수혜자 대동맥과 하대정맥의 복부 종단 간 문합에 의해 마우스 모델에서 이종 이식을 수행하는 것입니다. 그러나, 이 시술은 수혜자의 혈액 공급과 하체의 정맥 역류를 방해할 수 있다6. 따라서, 마우스 모델에서 변형된 이질성 심장 이식 절차가 여기에서 제안된다.
기증자의 심장은 수정된 커프 기술을 사용하여 종단 간 자궁 경부 문합에 의해 수혜자의 경동맥과 경정맥에 이식됩니다. 이 수정된 절차는 수술 타당성을 촉진하고 하체의 혈액 공급 및 정맥 역류를 방해하지 않으면서 심장 이식편의 생존을 보장했습니다.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 5-0 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>C3090954</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; 8-0 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>C2090880</tr><tr><td>10-0 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td></td><td></td>G0090781</tr><tr><td>22G 폴리우레탄 커프</td><td>B.Braun Medical Inc.</td><td>4251628-02</td><td></td></tr><tr><td>26 G 폴리우레탄 커프</td><td>Suzhou Linhua Medical Instrument Co., LTD</td><td>REF383713</td><td></td></tr><tr><td>마취 유도 챔버</td><td>RWD Life Science Co., LTD</td><td>V100</td><td></td></tr><tr><td>비외상성 미세혈관 클램프</td><td>Beyotime</td><td>FS500</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c 및 C57BL/6 마우스 (20&ndash; 30 g)</td><td>Centre of Experimental Animals (Army Medical University, Chongqing, China)</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine</td><td>US Biological life Sciences</td><td>352004</td><td></td></tr><tr><td>Electrocoagulator</td><td>Guangzhou Runman Medical Instrument Co., LTD</td><td>ZJ1099</td><td></td></tr><tr><td>Gauze</td><td>Henan piaoan group Co., LTD</td><td>10210402</td><td></td></tr><tr><td>Heating pad</td><td>Guangzhou Dewei Biological Technology Co., Ltd, LTD</td><td>DK0032</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>North China Pharmaceutical Co., LTD</td><td>2101131-2</td><td></td></tr><tr><td>HTK 솔루션</td><td>Shenzhen Changyi Pharmaceutical Co., LTD</td><td>YZB/Min8263-2013</td><td></td></tr><tr><td>주입 주사기(10mL)</td><td>Shandong weigao group medical polymer Co., LTD</td><td>20211001</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>RWD Life Science Co., LTD</td><td>21070201</td><td></td></tr><tr><td>생리식염수</td><td>Southwest pharmaceutical Co., LTD</td><td>H50021610</td><td></td></tr><tr><td>두피 바늘</td><td>Hongyu Medical Group</td><td>20183150210</td><td></td></tr><tr><td>면도기</td><td>Beyotime</td><td>FS600</td><td></td></tr><tr><td>소동물 마취기</td><td>RWD Life Science Co., LTD</td><td>R500</td><td></td></tr><tr><td>외과 수술 현미경</td><td>Tiannuoxiang Scientific Instrument Co., Ltd, Beijing, China</td><td>SZX-6745</td><td></td></tr><tr><td>면봉</td><td>Yubei Medical Materials Co., LTD</td><td>21080274</td><td></td></tr></tbody></table>

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

A Modified Cuff Technique for Mouse Cervical Heterotopic Heart Transplantation Model

심장 동종이식 거부반응은 심장 이식 후 환자의 장기 생존을 제한합니다. 마우스 심장 이식 모델은 인간 유전자와의 높은 상동성 때문에 전임상 연구에서 심장 동종이식 거부 메커니즘을 조사하는 데 이상적입니다. 이러한 이해는 심장 동종이식편으로 치료받은 환자의 장기 생존을 개선하기 위한 독특한 접근 방식을 개발하는 데 도움이 될 것입니다. 마우스 모델에서 복부 기증자 심장 이식은 일반적으로 바늘을 사용하여 수혜자의 대동맥과 하대정맥에 대한 종단 간 문합으로 수행됩니다. 이 모델에서 기증자의 심장은 수정된 커프 기술에 의해 수혜자의 경동맥과 경정맥에 종단 간 문합에 의해 이식됩니다. 이식 수술은 바느질없이 시행되므로 하체의 혈액 공급 및 정맥 역류에 방해가되지 않기 때문에 수혜자의 생존율을 높일 수 있습니다. 이 마우스 모델은 심장 동종이식편의 면역학적 및 병리학적(급성/만성) 거부의 기본 메커니즘을 조사하는 데 도움이 될 것입니다.

이 마우스 자궁 경부 이종 심장 이식 모델에서, 수용 마우스의 생존율은 대략 95.2%였다 (21마리의 마우스 중 20마리가 생존하였다). 주요 사망 원인은 수술 후 출혈이었다. 규칙적인 리듬의 빠른 심장 박동은 이식 된 기증자 심장의 생존을 나타내는 지표 역할을합니다.
C57BL/6 및 BALB/c 마우스는 이 모델에서 각각 MHC(H-2b) 및 MHC(H-2d) 유형이었습니다 7,8. 이 두 균주는 급성 T-세포 매개 거부반응을 일으키는 H-2에 의해 차이가 난다9. 모든 심장 동종 이식편 중 62.5 %는 심장 박동을 촉진하여 평가 한 바와 같이 이식 후 7 일 이내에 손실되었습니다. 모든 심장 동종이식편은 이식 후 8일 이내에 소실되었습니다. 대조적으로, 모든 동종 심장 이식은 4주 이상 생존했습니다(<strong class=...

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

Cardiac allograft rejection limits the long-term survival of patients after heart transplantation. A mouse heart transplantation model is ideal for ...

마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식편, 면역학적 및 시상주위 거부 메커니즘을 조사하는 데 도움이 됩니다. 이러한 이해는 환자의 장기 생존을 개선하기 위한 독특한 접근 방식을 개발하는 데 도움이 될 것입니다. 이 자궁 경부 이식 수술은 커프 방법을 사용하여 바느질없이 수행됩니다.따라서 혈관 문합의 복잡성을 줄이고 하체의 혈액 공급 및 정맥 역류에 대한 간섭을 방지합니다. 이 절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 외과 의사 인 Dr.Xin Mao가 될 것입니다. 시작하려면 수혜자 마우스를 수술대의 가열 패드에 놓고 수술 부위의 머리카락을 면도합니다.수술 부위를 소독 한 후 오른쪽 하악 각도에서 꼬리 끝까지 자궁 경부 정중선과 평행 한 1.5-2 센티미터 절개를합니다. 전기 응고제와 마이크로 집게를 사용하여 오른쪽 외부 경정맥의 약 1cm를 해부합니다. atruamatic microvascular clamp로 근위 끝에서 정맥을 자르고 말단부에서 결찰합니다.정맥의 말단부를 경사 끝과 표면 홈이 있는 22게이지 폴리우레탄 가시 커프를 통해 통과시킵니다. 미세 혈관 클램프를 사용하여 커프의 손잡이로 정맥을 고정하십시오. 8-0 제거 말단부에서 결찰 봉합사를 하고 표면 미늘에 의해 걸린 커프 위로 내강을 뒤집고 표면의 홈에 10-0 수술 봉합사로 고정합니다.오른쪽 설하선을 절제하여 심장 이식편을 이식하기 위한 포사를 형성하고 상악하악선의 우엽과 우측 흉쇄유돌근을 보존합니다. 마이크로 집게를 사용하여 약 1cm 동안 오른쪽 총 경동맥을 해부하고 근위 끝에 비 외상성 미세 혈관 클램프로 동맥을 자릅니다. 동맥을 합자하고 잘라냅니다.표면에 경사 끝과 홈이 있는 26게이지 폴리우레탄 가시 커프를 통해 동맥의 말단부를 통과시킵니다. 미세혈관 클램프를 사용하여 커프의 손잡이로 동맥을 고정합니다. 말단부에서 결찰 봉합사를 제거하고 커프 위로 내강을 뒤집은 다음 10-0 수술 봉합사로 표면 미늘과 홈으로 고정합니다.수혜자의 혈관을 준비한 후 혈전증을 예방하기 위해 혈관에 밀리리터 헤파린 식염수 당 100 국제 단위를 떨어 뜨립니다. 후속 이식을 위해 젖은 식염수 거즈로 자궁 경부 절개를 덮으십시오. 전기 면도기를 사용하여 복부 털을 면도하십시오.수술 부위를 소독한 후 치골 결합에서 하시포진까지 정중선을 따라 복부를 절개하고 견인기로 절개 부위를 확장합니다. 전기 응고제와 미세 겸자를 사용하여 복부 대동맥과 하대정맥 1cm를 해부하고 하대정맥을 통해 헤파린 밀리리터당 250국제 단위가 보충된 생리식염수 1밀리리터를 주입하여 헤파린을 시행합니다. 복부 대동맥과 하대정맥을 절제하십시오.수술용 가위를 사용하여 양쪽의 전방 겨드랑이 라인을 따라 흉부를 절제하여 흉벽을 분리한 다음 8-0으로 상대정맥을 결찰합니다 외과 봉합사. 간상부 하대정맥에 두피 바늘을 삽입합니다. 그런 다음 밀리리터 헤파린당 100단위의 헤파린이 보충된 얼음처럼 차가운 생리 식염수를 간상 하대정맥에서 두피 바늘을 통해 주입하여 혈액색이 바래질 때까지 기증자의 심장을 풍부하게 합니다.기증자 심근을 보호하기 위해 대동맥궁에서 2-3밀리리터의 얼음처럼 차가운 히스티딘-트립토판-케토글루타레이트 용액으로 기증자 심장을 관류합니다. 상부 및 하부 정맥과 폐정맥을 5-0 수술 봉합사로 유인합니다. 분기하기 전에 기증자 대동맥과 폐동맥을 해부하고 절단하십시오.그런 다음 상부 및 하부 정맥과 폐정맥을 나누어 기증자의 심장을 제거합니다. 기증자 심장을 거꾸로 된 위치에서 수혜자 마우스의 자궁 경부 주머니에 이식합니다. 전향된 수혜자 경정맥이 있는 커프를 기증자 폐동맥의 내강으로 당겨 종단 간 문합을 수행합니다.문합을 고정하기 위해 10-0 수술 봉합사를 통해 표면의 홈을 사용하여 커프를 결속시킵니다. 수혜자 경동맥에 대한 기증자 대동맥의 종단 간 문합을 위해 유사한 절차를 사용합니다. 경정맥의 비외상성 미세혈관 클램프를 풀고 경동맥을 풀어 기증자의 심장을 재관류합니다.심장 이식편을 고정하고 이식편이 비틀어지지 않도록 적절하게 봉합하십시오. 5-0 폴리아미드 모노필라멘트 봉합사를 사용하여 연속 봉합사로 경추 절개를 봉합합니다. 이 마우스 자궁 경부 이종 심장 이식 모델을 이용하여, 수용자 마우스의 생존율은 약 95.2%이었고, 이식 후 8일 이내에 모든 심장 동종이식편이 소실되었다.대조적으로, 모든 동종 심장 이식은 4 주 이상 생존했습니다. 회전된 혈관의 더 나은 고정을 위한 홈과 커프, 선박의 반복적인 작동을 방지합니다. 이 수술에서 혈관 문합을 위한 수정된 커프 방법은 다른 장기 이식 동물 모델의 다른 문합에도 적용할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

여기서, 우리는 자궁 경부 뮤린 모델에서 비 봉합술 커프 기술을 사용하여 마우스에서 이종성 대동맥 이식의 프로토콜을 제시한다. 이 모형은 만성 동종 이식 혈관병증 (CAV)의 근본적인 병리를 공부하기 위하여 이용될 수 있고 그것의 대형을 방지하기 위하여 새로운 치료에이전트를 평가하는 것을 도울 수 있습니다.

수정된 비봉합사 커프 기술을 사용한 뮤린 자궁 경부 대동맥 이식 모델

마우스 자궁 경부 이성애 심장 이식을 위한 커프 기술에 대한 내부 튜브 접근법을 도입하여 커프스 위에 혈관을 상회합니다. 우리는 두 경험이 풍부한 외과 의사 사이의 협력이 수술 시간을 현저하게 단축한다는 것을 발견했습니다.

뮤린 심장 이식을 위한 커프 기술의 최적화

이성애 복부 마우스 심장 이식 모델에서 혈액 회로 재건을 위한 새로운 기술이 입증된다.

복부 마우스 심혼 이식 모형에 있는 혈액 회로 재건

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 프로토콜은 마우스에서 커프가 없고 봉합 기반인 경추 이종성 심장 이식 기법을 제시하여, 이물질 간섭이 최소화된 생리학적 조건에서 기증자 특이적 면역 관용을 평가하기 위해 두 번째 이종성 심장 이식편을 신뢰성 있게 배치할 수 있도록 설계되었습니다.

마우스의 기증자 특이적 면역 내성을 평가하기 위한 2차 이종성 심장 이식을 위한 커프스 없는 봉합선 기반 자궁경부 모델

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

학습하세요 수정된 커프 기술을 이용한 마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델로 심장 이식 거부 반응 메커니즘을 연구하는 방법을. 이 기법은 수술 효율성을 높이고 이식편 생존율을 향상시킵니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

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