Minipigs의 캐리어에 RPE의 망막하 이식: 수술 전 준비, 수술 기술 및 수술 후 관리에 대한 지침

연령 관련 황반변성은 중심 시력 상실의 주요 원인 중 하나로 간주됩니다. RPE 층의 점진적인 퇴화 및 기능 장애는 초기 형태의 AMD의 특징입니다. 망막 질환 치료의 발전에도 불구하고 효과적인 치료 방식의 개발은 여전히 어려운 과제입니다.

가장 유망한 치료 개념 중 하나는 RPE를 다른 기원의 시험관 내 배양 RPE 세포로 대체하는 것입니다. RPE는 일반적으로 세포 현탁액, 자립형 세포 시트 또는 인공 담체에 의해 지지되는 세포 단층의 형태로 망막하 공간으로 전달되었습니다. 두 가지 후기 방법의 주요 이점은 이식 후 세포가 망막 하 공간에서 분화 된 단층 상태로 발견된다는 것입니다.

생체 내에서 수행된 전임상 동물 연구는 인간에게 유용하고 잠재적으로 적용할 수 있는 데이터를 얻기 위해 큰 눈 동물 모델에서 재현 가능하고 안전한 수술 절차를 확립하는 것을 목표로 합니다. 이 프로토콜을 통해 우리는 다양한 유형의 세포 및 세포 운반체를 이식하는 생체 내 실험 연구에 사용할 수 있는 대형 동물 모델에서 세포 운반체의 생체 내 망막하 이식에 사용되는 망막하 수술 기술의 원리를 보고하는 것을 목표로 합니다. 이 비디오를 통해 우리는 Libechov minipig의 눈에 세포 운반체의 망막 하 이식 수술 절차에 대한 단계별 프로토콜을 제시하고자합니다.

뚜껑 검경을 삽입합니다. 경화술을 위해 공막을 노출시키기 위해 윤부에서 2-3mm 떨어진 비강 쪽의 결막을 엽니다. 3 개의 25 게이지 투관침을 윤부에서 3 밀리미터 떨어진 pars plana 영역에 삽입하십시오.

삼투성 각막 부종을 예방하기 위해 전체 수술 중에 각막을 젖게 유지하거나 메틸 셀룰로오스로 코팅하십시오. 표준 3포트 편평 유리체 절제술 접근법으로 유리체의 중간 부분을 제거합니다. 미래의 큰 경화술 부위에서 렌즈 뒤의 유리체를 조심스럽게 제거하십시오.

유리체강내 트리암시놀론 아세토나이드 주사를 사용하여 제어된 후유리체 박리를 수행하기 위해 일반적으로 망막에 부착된 상태로 남아 있는 후유리체를 염색합니다. 그 후, 41 게이지 캐뉼라로 BSS의 망막 하 주사를 더 중앙에 천천히 수행하여 주변으로 블랩이 형성되는 것을 방지합니다. 일시적인 망막 혈관 폐색을 방지하기 위해 망막하 주사 동안 관개 시스템의 안압 설정을 15mm의 수은으로 줄입니다.

비강 기저부 근처의 27게이지 내투석 요법 프로브로 망막의 선형 대형 내투석 요법을 수행합니다. 그 후, 25 게이지 MVR 블레이드 또는 관개 시스템의 안압 설정을 최대 60mm의 수은으로 3-5 분 동안 상승시킨 수직 가위를 사용하여 3mm 대형 망막 절개술을합니다. 그런 다음 2.75mm phaco knife를 사용하여 윤부에서 3mm 떨어진 곳에 3mm 큰 경화술을 만듭니다.

큰 경화술 내부의 공막 혈관과 섬모체의 출혈 가능성에 대한 외투 요법에주의하십시오. 유리체로 큰 경화술 측면에서 탈출 된 유리체를 제거하십시오. 그런 다음 큰 경화술을 통해 유리체에 지배적 인 손으로 주입기를 부드럽게 삽입하십시오.

망막 절개술을 통해 세포 운반체를 망막하 공간에 이식합니다. 눈에서 인젝터를 빼내고 8-0으로 큰 경화술을 닫습니다. 안구 내 hypotony와 관련된 합병증을 피하기 위해 Vicryl 봉합사. 실리콘 팁 캐뉼라로 완전한 유체-공기 교환을 수행하십시오.

그런 다음 안압이 정상이 될 때까지 실리콘 오일을 유리체강에 주입합니다. 수술이 끝나면 투관침을 제거하고 3 개의 경화술과 결막을 8-0으로 닫습니다. Vicryl 봉합사. 자세한 내용은 수술 절차 섹션을 참조하십시오.

안구 주위를 청소하십시오. 집게와 가위를 사용하여 위 눈꺼풀과 아래 눈꺼풀을 제거합니다. 세 번째 눈꺼풀을 제거하십시오.

결막을 잘라냅니다. 가위로 눈 근육을 자릅니다. 표면에서 깊이까지 원형으로 절단을 진행합니다.

시신경을 자르십시오. 궤도에서 눈을 제거하십시오. 실리콘 오일로 채워진 유리체의 선명도는 수술 후 기간의 어느 시점에서든 망막하 세포 운반체로 망막의 상태를 시각화할 수 있게 해줍니다.

적색이 없는 이미지는 세포 운반체 프레임 내에서 배양된 인간 RPE 세포의 반사율이 토착 돼지 RPE 층의 반사율과 다르지 않음을 보여줍니다. 생체 내 OCT 이미징은 망막하 공간에 이식된 세포 운반체가 전체 망막 두께를 크게 증가시키지 않는다는 것을 보여줍니다. 브루흐의 막도 손상되지 않은 것으로 보입니다.

셀 캐리어의 프레임은 OCT 신호의 약간의 섀도잉만 유발합니다. 망막의 사후 냉동 절편에 대한 조직학적 연구는 이식된 일차 인간 RPE 영역에서 연속적이고 불규칙한 색소 세포층의 형성을 입증하며, 이는 세포 운반체 세포에서 배양된 세포의 생존을 증명합니다. 조직 절편의 면역조직화학적 분석은 이식 부위에 존재하고, 토착 미니피그 RPE 세포와 유사한 전형적인 RPE 마커를 발현하는 인간 RPE 세포를 보여준다.

그럼에도 불구하고 이식된 RPE 세포는 세포 단층으로 나타나지 않습니다. 그럼에도 불구하고 이러한 세포는 정의된 망막하 공간 내에 있습니다. minipigs의 큰 눈 동물 모델, 이 경우 Libechov minipigs는 인간의 눈 해부학 및 생리학과 유사하기 때문에 퇴행성 망막 질환 치료를 위한 새로운 개념의 향후 적용에 가장 적합한 모델 중 하나로 간주됩니다.

이러한 유사성은 세포 운반체의 망막하 이식을 위한 수술 기술 및 기구를 개발할 수 있게 하며, 이 기술은 인간의 눈 질환 치료에 쉽게 적용될 수 있습니다. 미니피그에 대한 수술은 인간 수술에도 활용될 수 있는 이식 전달 도구를 포함하여 동일한 기구로 수행되므로 얻은 경험과 노하우를 어려움 없이 인간에게 적용할 수 있도록 하는 것이 중요합니다. 수술 전 수술 및 수술 후 관리 절차에 대한 자세한 설명은 효율적이고 표준화된 데이터 생성을 증가시켜 향후 연구에 도움이 될 수 있습니다.