Name: Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 증후군 치료를위한 질 성형술 중 복강경 난 모세포 검색 및 냉동 보존 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-10T15:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 53 s
Description: 배우세요 복강경 질 성형술 중 난모세포 검색 및 냉동 보존 방법을 MRKH 증후군 환자에게 적용하여 미래 생식력을 보존하는 최소침습 수술 기법을 익히세요.

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이 작업에 대한 구체적인 자금은 접수되지 않았습니다.

MRKHS (IRCCS San Raffaele University Hospital, Milan, Italy)의 3 차 위탁 센터의 지역 윤리위원회는 2017 년 7 월에 시행되기 전에 프로토콜을 통보하고 승인했습니다. 모든 환자 또는 보호자는 질 성형술 중 복강경 난모세포 검색 및 냉동 보존과 과학적 목적을 위한 익명화된 임상/실험실 데이터 사용에 대해 사전 동의서에 서명했습니다.
1. 팀 구성
<ol><li>경험이 풍부한 복강경 외과 의사, 숙련 된 질 외과 의사, 불임 전문가, 헌신적 인 심리학자 및 헌신적 인 간호사로 구성된 전담 팀을 지정하십시오.</li>
	<li>절차의 전체 설정 및 수행 중에 환자를 팀으로 지원하십시오.</li>
</ol>2. 진단 정밀 검사 및 상담
<ol><li>난소의 시각화 및 Antral Follicle Count (AFC)의 추정을 위해 환자에게 경복부 골반 및 복부 초음파 검사를 수행합니다. 항뮐러 호르몬(AMH)의 혈중 농도를 평가하여 조절된 난소 자극을 위한 성선 자극 호르몬 시작 용량을 최적화합니다. 조직/배우자의 동결보존을 위한 국가/지역 프로토콜에 따라 감염성 질환(HIV-AB, HV-AB, HV-AB, RPR-TPHA)에 대한 혈청학적 검사를 수행합니다.</li>
	<li>비수술 및 외과적 질 성형술을 포함한 MRKHS의 성적 및 생식 측면, 대리모와 관련된 비용 및 법률, 실험 프로그램의 맥락에서 자궁 이식의 관점, 난모세포 검색에 사용할 수 있는 다양한 접근 방식 및 출생률 측면에서 난모세포 동결보존의 성능에 대해 환자에게 상담합니다.</li>
	<li>시술을 통해 그녀를 지원하고 정서적 안정과 헌신 및 미래의 모성에 대한 욕구를 평가하기 위해 환자 심리 평가를 제공합니다. 수반되는 복강경 난모세포 회수, 배우자 동결 보존 및 복강경 질 성형술에 대한 서명되고 정보에 입각한 동의를 얻습니다. 미성년자 환자의 경우, 상대적 정보에 입각 한 동의서에 서명 한 부모의 면전에서 임상 평가를 수행하십시오.</li>
</ol>3. 수술 절차 및 조절 된 난소 자극 일정
<ol><li>임상 팀(위 참조)의 가용성과 난모세포 유리화를 수행하는 실험실 직원의 가용성을 고려하여 수반되는 복강경 난모세포 회수, 배우자 동결 보존 및 복강경 질 성형술의 절차를 예약합니다.</li>
	<li>n = 12일의 계획된 COS 기간과 배란 유발과 난모세포 회수 및 유리화 사이에 필요한 36시간을 고려하여 수술 당일로부터 -14일에 조절된 난소 자극(COS)을 시작합니다.</li>
	<li>COS가 예상과 다른 기간을 요구하는 경우 그에 따라 수술 일정을 조정하십시오.</li>
</ol>4. 조절된 난소 자극: 시작 용량, 용량 조정 및 모니터링, 최종 난모세포 성숙 유발
<ol><li>생식력 보존을 위한 "무작위 시작" 프로토콜의 맥락에서 일반적으로 수행되는 것처럼 난소 주기의 모든 단계에서 COS를 시작합니다.</li>
	<li>환자의 AFC 및 AMH에 따라 난포 자극 호르몬 (FSH) / 인간 갱년기 성선 자극 호르몬 (hMG)의 시작 용량을 선택하고 환자에게 매일자가 투여 피하 주사를 계속하도록 지시하십시오. 이후에 난소 반응에 따라 개별화된 용량 조정을 수행합니다.</li>
	<li>연속 복부 초음파와 E2 및 P의 수반되는 측정으로 난소 반응을 모니터링합니다 (1 일, 6 일, 8 일, 10 일 및 12 일).</li>
	<li>0.2 mL의 Gn-RH 유사체 (트립토렐린)의 피하 투여에 의해 최종 난모세포 성숙을 촉발한다.</li>
</ol>5. 임상 절차 (복강경 검사) : 난 모세포 회수
<ol><li>환자를 수정 된 등쪽 쇄석술 위치에 배치하면 복부와 회음부에 동시에 쉽게 접근 할 수 있습니다. 전신 마취를 유도하고 일상적인 수술 중 항생제 예방에 따라 2g의 Cefazolin을 정맥 내 투여합니다. 방광 내 폴리 카테터를 배치합니다.</li>
	<li>배꼽 주위 Veress 바늘로 기복막을 설정하고 복강경 삽입을 위해 10mm 배꼽 투관침 1 개와 오른쪽 및 왼쪽 위 사분면에 5mm 투관침 2 개를 배치합니다. 복강경 시력에서 질식 검색에 일반적으로 사용되는 흡인 펌프에 연결된 17G 단일 루멘 바늘을 사용하여 오른쪽 및 왼쪽 난소의 천자를 위해 오른쪽 및 왼쪽 투관침을 각각 사용합니다.</li>
	<li>모낭의 노출을 용이하게하기 위해 복강경 집게로 난소를 들어 올리고 잡습니다. 서로 가까운 여러 난포를 흡인 할 때 난소에 바늘 끝을 유지하여 난소 피질이 고정되는 횟수와 출혈의 고유 한 위험을 줄입니다.</li>
</ol>6. 임상 절차 (복강경 검사) : 질 성형술
참고 : 질 성형술 단계는 Davydov의 복강경 수정 기술12와 비교하여 변경되지 않습니다.
<ol><li>두 개의 기초적인 자궁 뿔 사이에서 복막 가닥을 들어 올려 횡단시킨 다음 절개를 전방, 측면 및 후방으로 확장하여 복막을 해부합니다.</li>
	<li>방광 위의 동원 된 복막에서 각 반골반의 폴리 디 옥사 논 합성 흡수성 (PDS) 2-0 모노 필라멘트에서 지갑 끈 봉합을 시작하여 둥근 인대, 난관 협부, 자궁 인대 및 측면 복막 잎의 연속 전이를 시작합니다. 그런 다음 두 봉합사에 직장 상 결부 접합부 바로 아래에있는 중직장의 측면과 직장 장막의 앞쪽 측면을 포함시킵니다.</li>
	<li>회음부에 질 보조개를 노출시키고 H자형 절개를 시행하고, 방광직장 공간을 날카롭고 무딘 해부로 신질 공간을 만든다. 그런 다음 해부 된 복막 가장자리를 질 전정의 가장자리로 당깁니다. 복막 전정 문합에 대한 PDS 3-0의 위치 중단 봉합사. 마지막으로 복막으로 코팅된 신생아에 파라핀 코팅 거즈를 놓습니다.</li>
</ol>7. IVF 실험실: 난모세포 회수 전날
<ol><li>예상되는 모낭 수에 따라 Hepes(5% 인간 혈청 알부민[HSA] 보충)가 있는 Quinn's Advantage 배지 9mL가 있는 2-5개의 둥근 바닥 튜브를 준비하고 37°C에서 밤새 배양합니다.</li>
	<li>배아 배양을 위해 0.5mL의 미네랄 오일로 덮인 0.5mL/웰의 수정 배지(5% HSA 보충)로 하나 또는 두 개의 4웰 접시를 준비하고 제어된 분위기(6% CO2, 5%O2)에서 37°C에서 밤새 배양합니다.</li>
	<li>6mL의 미네랄 오일로 덮인 연속 단일 배양(CSCM) 배지(10% 혈청 대체 보충제[SSS] 보충)의 9(30μL) 방울이 포함된 접시 한 접시를 준비합니다. 이를 조절된 분위기(6% CO2, 5%O2)에서 37°C에서 밤새 배양한다.</li>
</ol>8. IVF 실험실: 난모세포 회수 절차
<ol><li>모낭 흡인물이 수집 될 최종 농도 10IU / mL의 헤파린이 함유 된 hepes (5 % HSA 보충)가있는 Quinn의 어드밴티지 배지 용액을 준비하십시오.</li>
	<li>일상적인 질식 난모세포 회수 13과 유사하게, 10mL 둥근 바닥 튜브에서 난포 흡인물을 수집하고, 휴대용 인큐베이터에서 따뜻하게(37°C) 유지하고, 약10분의 수송 시간으로 즉시 발생학 실험실로 이송한다.</li>
	<li>예열 된 멸균 90mm 페트리 접시에서 난포액을 검사하여 적운-난 모세포 복합체 (COC)를 확인하십시오. COC가 감지되면 예열된 Quinn's 어드밴티지 배지 1mL와 HEPES(5% HSA 보충)로 채워진 중앙 웰 접시에 헹굽니다.</li>
	<li>모든 COC가 수집되면 수정 배지가 들어있는 4 웰 접시에 넣고 뚜껑과 바닥에 환자의 신원과 관련된 데이터를 표시합니다.</li>
	<li>이들을 37°C에서 조절된 분위기(6% CO2, 5%O2)에서 배양한다.</li>
	<li>실험실 직원의 두 번째 구성원이 절차를 다시 확인하는지 확인하십시오.</li>
</ol>9. 난모세포 탈질
<ol><li>배란 유발 후 38시간 이내에 적운/코로나 세포 제거를 수행합니다.</li>
	<li>최종 농도 10IU/mL의 히알루로니다아제가 포함된 HEPES(5% HSA 보충)가 포함된 Quinn's Advantage 배지 용액을 준비합니다.</li>
	<li>히알루로니다아제가 함유된 HEPES(5% HSA 보충)가 포함된 예열된 Quinn's Advantage 배지 1mL와 예열된 HEPES 완충 배지(5% HSA 보충) 1mL가 포함된 중앙 웰 접시를 준비합니다.</li>
	<li>난모세포 탈질 접시에 환자 식별 데이터를 표시합니다.</li>
	<li>효소가 포함된 중앙 웰에 COC를 배치하여 유리 파스퇴르 피펫으로 적운 세포를 분산시키고 COC가 포함된 용액을 최대 30초 동안 위아래로 부드럽게 피펫팅합니다.</li>
	<li>난모세포를 hepes 완충 배지만 포함된 두 번째 중앙 웰 접시로 옮기고 최소량의 효소를 대체해야 합니다.</li>
	<li>내경이 감소하는 탈질 피펫(170-140 μm)을 사용하여 나머지 코로나 세포를 제거합니다.</li>
	<li>제 1 극성체의 압출을 특징으로하는 중기 II (MII) 난 모세포를 중기 I 난 모세포 (MI) 및 배아 소포 (GV)로부터 분리하여 난 모세포 성숙 단계를 평가한다.</li>
	<li>MII 난 모세포를 60mL의 미네랄 오일로 덮인 연속 단일 배양 (CSCM) 배지 (10 % 혈청 대체 보충제 [SSS]로 보충)의 9 (30μL) 방울이 들어있는 IVF 배양 60mm 페트리 접시에 옮깁니다.</li>
	<li>이들을 37°C에서 조절된 분위기(6% CO2, 5%O2)에서 배양한다.</li>
</ol>10. 난모세포 유리화
<ol><li>유리화 키트 제조업체에서 제공한 프로토콜에 따라 난모세포 탈질 직후 MII 난모세포의 유리화를 수행합니다.</li>
	<li>평형 용액 (ES), 유리화 용액 (VS) 및 세척 용액 (WS)을 시술 거의 30 분 전에 실온 (25-27 ° C)으로 가져옵니다. 참고 : 제조업체가보고 한 바와 같이, ES는 M-7.5 헤페스 완충 배지에 7.5 % DMSO, 7.5 % 에틸렌 글리콜, 20 % 덱스 트란 혈청 보충제 (DSS), 겐타 마이신을 함유하고 있습니다. VS는 M-199 hepes 완충 배지에 15 % DMSO, 15 % 에틸렌 글리콜, 0.5 M 자당, 20 % DSS, 겐타 마이신을 함유하고 WS는 M-199 hepes 완충 배지에 20 % DSS, 겐타 마이신을 함유합니다.</li>
	<li>냉동 장치의 경우 플라스틱 손잡이에 부착 된 미세한 투명 필름 스트립으로 구성된 Cryotop을 사용하십시오.</li>
	<li>냉동 장치에 환자의 이름, 생년월일, ID, 냉동 보존 날짜 및 단일 장치에 로드된 난모세포 수를 표시합니다.</li>
	<li>유리화 접시에 환자의 이름과 ID를 표시하십시오.</li>
	<li>증인 운영자가 냉동 장치 및 접시에서 올바른 환자 데이터를 확인하는지 확인하십시오.</li>
	<li>냉각 상자를 상단까지 신선한 액체 질소로 채우고 분산과 증발을 최소화하기 위해 사용할 때까지 덮으십시오.</li>
	<li>조작 중 난모세포 손상을 방지하기 위해 내경이 170μm인 스트리퍼 피펫을 사용하십시오.</li>
	<li>사용하기 전에 ES, VS 및 WS의 각 바이알을 부드럽게 흔들어 내용물을 혼합하십시오.</li>
	<li>50μL의 WS1 한 방울로 60mm 페트리 접시의 뚜껑을 준비합니다(그림 1A).</li>
	<li>배지 증발을 제한하기 위해 사용 직전에 방울을 떨어 뜨립니다.</li>
	<li>인큐베이터에서 난 모세포 접시를 가져 와서 배양 접시에서 최소 부피의 배지로 MII 난 모세포 (한 번에 최대 3 개)를 50μL의 WS로 옮깁니다.</li>
	<li>50μL 방울의 WS2, ES1 및 ES2를 가까운 곳에 분주하고 난모세포를 방울 WS1에서 방울 WS2로 옮깁니다(그림 1B).</li>
	<li>ES1의 방울을 WS2에 병합하고 두 용액이 자발적으로 혼합 될 때까지 2 분 동안 기다립니다.</li>
	<li>그런 다음 ES2 방울을 이전에 병합된 방울에 병합하고 2분 더 그대로 둡니다.</li>
	<li>마지막으로, 새로운 100 μL 방울의 ES3를 이전에 병합 된 방울에 병합하고 1 분 동안 추가로 두십시오.</li>
	<li>난모세포를 ES4 100μL 방울에 10분 동안 넣습니다(그림 1C).</li>
	<li>50μL VS 방울 2개와 VS 100μL 1개를 분주합니다(그림 1D).</li>
	<li>난 모세포가 ~ 20 초 동안 각 방울에 남아 있도록 난 모세포를 60 초 동안 VS의 세 방울로 순차적으로 이동합니다.</li>
	<li>배양 60 초가 끝나기 전에 약 10 초가 남았을 때 냉동 장치를 현미경 아래에 놓습니다.</li>
	<li>피펫 끝에서 난 모세포를 운반하고 최소량의 VS로 냉동 장치에 놓습니다.</li>
	<li>과잉의 VS를 흡인하여 난 모세포가 VS의 얇은 층으로 덮여 있습니다.</li>
	<li>냉동 장치를 액체 질소에 직접 넣고 빠르게 움직입니다. 장치를 액체 질소에 보관하고 보호 뚜껑으로 덮으십시오.</li>
	<li>냉동 장치를 저장 시스템(예: visiotube)에 보관하고 극저온 탱크에 넣습니다. 실험실 데이터베이스 및 시트에 냉동 보존 데이터를 기록합니다.</li>
</ol>11. 입원 환자 수술 후 관리
<ol><li>수술 후 48 시간 후에 요도 카테터와 질 파라핀 코팅 거즈를 제거하십시오.</li>
	<li>제거 후 환자의 신생질을 디지털 방식으로 탐색하고 환자에게 디지털 탐색을 수행하는 방법을 지시합니다. 그런 다음 질 곰팡이 (길이 9cm, 직경 2cm)에 에스트로겐 젤 (상피화를 용이하게하기 위해)을 코팅하고 환자에게 곰팡이를 삽입하고 유지하는 방법을 지시합니다.</li>
	<li>수술 후 3일차부터 다음 날부터 환자에게 곰팡이를 배치하고 매일 최소 2시간 동안 제자리에 유지하는 방법을 지시합니다.</li>
	<li>합병증이 발생하지 않으면 수술 후 5-6 일에 환자를 퇴원합니다.</li>
</ol>12. 외래 수술 후 관리
<ol><li>입원 중에 사용 된 것과 동일한 곰팡이 (길이 9cm, 직경 2cm)로 2 개월 동안 신질 확장을 수행 한 다음 더 큰 곰팡이 (길이 11cm, 직경 2.5cm)로 환자에게 지시하십시오.</li>
	<li>3 개월의 방문 후 환자가 성행위를 시작하도록하고 성교가없는 날에도 곰팡이를 계속 사용하도록 알립니다.</li>
</ol>13. 후속 조치
<ol><li>시술 후 1, 3, 6 및 12 개월에 후속 방문을 예약하십시오.</li>
	<li>각 후속 방문에서 확장 운동의 준수 여부를 평가하고 환자에게 일상 생활 활동, 통증, 비뇨기 증상 또는 성기능 장애에 제한을 경험했는지 물어보십시오 (수술 후 3 개월 후 방문 기준). 각 후속 방문에서 부인과 검사를 수행하여 부속기의 질 너비, 길이, 서스펜션 및 이동성을 측정합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.

이 프로토콜은 질 성형술과 난 모세포 회수 절차를 결합하여 MRKHS 치료의 침습성을 감소시킵니다. 이를 위해서는 COS 타이밍, 수술 절차 및 난모세포 유리화 일정을 효율적으로 잡을 수 있도록 전담팀을 지정하는 것이 중요합니다.
이 결합 된 복강경 방법이 가장 유익 할 것으로 예상되는 MRKHS 환자는 골반 벽(14)을 따라 측면으로 위치한 골반 외 난소 또는 간 및 담낭9과 같은 기관의 근접성 또는 골반 신장의 존재로 인해 질식 검색이 기술적으로 어렵거나 실현 불가능한 것으로 간주되는 환자입니다. 이 환자들에서 경복부 접근법이 가설을 세울 수 있고 문헌에 보고되었다: 그럼에도 불구하고, 1.7개의 난모세포가 수집된15개± 평균 수는 4.92개였으며, 이는 기술적 한계로 인해 차선책의 회수를 시사한다. 또한, 복벽 두께가 현저하거나<sup class=...

4-10,000 명의 여성 중 약 1 명의 발병률로 MRKHS는 원발성 무월경 사례의 15 %의 원인입니다. MRKHS는 질과 자궁의 상부 부분이 선천적으로 부재 한 반면, 요로 및 골격 이상은 다양하게 연관되어 있습니다. 보다 구체적으로, 깊이 1-2cm의 질 금고가 일반적으로 존재하며, 두 개의 기초적인 자궁 뿔이 발견 될 수 있습니다1.
과거에 MRKHS의 주요 의학적 관심은 정상적인 성교를 가능하게하는 것이었으며, 일반적으로 비 외과 적 또는 외과 적 접근법2에 의한 신생 질의 구성이 필요합니다. 그러나 생식 의학의 발전은 현재 대리모 3,4 또는 최근에는 자궁 이식5에 의해 MRKHS 환자에서 유전 적 모성을 허용합니다. 자궁 이식은 여전히 실험적인 절차이지만, 대리모는 전 세계 많은 국가에서 이용 가능하며6, 보고된 산과 및 심리사회적 결과는 표준 체외 수정 및 난모세포 기증7과유사합니다.
대리모와 자궁 이식 모두 난 모세포 채취와 체외 수정이 필요하지만 MRKHS 환자에서 난자 수집을 수행하는 방법에 대한 합의는 없습니다. 질식 접근법은 질 성형술 후에도 불충분 한 질 탄력8, 난소의 비정형 위치9 또는 난소와 질 커프(4,10) 사이의 과도한 거리로 인해 실행 불가능할 수 있습니다. 이러한 경우 복강경 난 모세포 검색은 외과 적 접근 측면에서 최적의 접근 방식을 나타냅니다. 그러나 현재 대부분의 MRKHS 환자가 복강경 신생 성형술을 받고 있으므로 질 성형술11 수술시 복강경 난 모세포 회수를 수행 한 후 향후 사용을 위해 난 모세포 동결 보존을 수행하여 MRKHS 환자의 성 및 생식 기능 치료를 병행하면서 침습성을 최소화 할 것을 제안합니다.
환자의 인구 통계 학적 데이터 지금까지 23 명의 MRKH 환자가이 프로토콜로 치료를 받았습니다. 환자의 기억 상실, 도구 및 실험실 소견은 표 1에 요약되어 있습니다. 표 1에 명시되지 않는 한, 연관된 선천성 기형은 발견되지 않았다.

<table><tbody><tr><td>난자 회수 절차</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Equipment</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CO2 O2 인큐베이터</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>층류 후드</td><td>쿠퍼 수술</td><td></td><td></td></tr><tr><td>휴대용 인큐베이터</td><td>Cooper Surgical</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stereomicroscope</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Consumables</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>14 mL 폴리스티렌 둥근 바닥 튜브</td><td>Falcon</td><td>352057</td><td></td></tr><tr><td>4-well dish</td><td>Nunc</td><td>144444</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 페트리 디쉬</td><td>Nunc</td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>90 mm Petri 접시</td><td>Nunc</td><td>FA9150360</td><td></td></tr><tr><td>인간 혈청 알부민 100 mg/ml 일반 식염수(5%)Origio</td><td></td> <td>3001</td><td></td></tr><tr><td>배아 배양 미네랄 오일</td><td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>One Well Dish</td><td>Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' s 어드밴티지 비료 매체 SAGE</td><td>Origio</td><td>1020</td><td></td></tr><tr><td>Quinn' HEPES</td><td>Origio</td><td>1024</td><td></td></tr><tr><td>멸균 유리 파스퇴르 피펫</td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>< 강> 난소 세포 탈< / 강></td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td> 장비 </td><td></td><td></td><td></td></tr> <tr><td>CO2 O2 인큐베이터</td><td>Sanyo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet 조절 식 핸들 </td><td>세트 쿡</td><td>G18674</td><td></td></tr><tr><td>인큐베이터</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>층류 후드</td><td>쿠퍼 외과</td><td></td><td></td></tr><tr><td>실체 현미경</td><td>니콘</td><td></td><td></td></tr><tr><td>소모품</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4웰 디쉬</td><td>Nunc</td><td>144444</td><td></td></tr><tr><td>CSCM(Continuos 단일 배양) 배지</td><td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>90165</td><td></td></tr><tr><td>인간 알부민 100mg/mL, 생리식염수(5%)Origio</td><td></td> <td>3001</td><td></td></tr>, <tr><td>히알루로니다아제</td><td>, Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90101</td><td></td></tr>, <tr><td>IVF 배양 60mm 페트리 접시</td>, <td>Nunc</td><td>FA9150270</td><td></td></tr><tr><td>배아 배양을 위한 미네랄 오일</td>, <td>Origio</td><td>4008</td><td></td></tr><tr><td>One Well</td><td>Dish Oosafe</td><td>OOPW-CW05</td><td></td></tr><tr><td>퀸 s Advantage 매체 with HEPES</td><td>Origio</td><td>1024</td><td></td></tr><tr><td>Serum Substitute Supplement</td><td>Fujifilm irvine Scientific</td><td>99193</td><td></td></tr><tr><td>멸균 유리 파스퇴르 피</td><td></td><td></td><td></td></tr>펫 <tr><td>스트리핑 피펫 팁 (140 &mu; m)</td><td>Cook</td><td>K-FPIP-1140-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td>스트리핑 피펫 팁(170 &mu; m)</td> <td>쿡</td><td>K-FPIP-1170-10BS-5</td><td></td></tr><tr><td>난자 유리화</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>35 mm 페트리 접시</td><td>NUNC</td><td>150255</td><td></td></tr><tr><td>60 mm 페트리 접시</td><td>NUNC</td><td>150270</td><td></td></tr><tr><td>90 mm 페트리 접시</td><td>NUNC</td><td>150360</td><td></td></tr><tr><td>냉각 랙</td><td>Kitazato</td><td></td><td></td></tr><tr><td>용 용기Cryodevice/cryotop</td><td>Kitazato</td><td>81111</td><td></td></tr><tr><td>전자 타이머</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Flexipet</td><td>COOK</td><td>K- 1000</td><td></td></tr><tr><td>Gilson Pipetman</td><td>Gilson</td><td>F123601</td><td></td></tr><tr><td>Lab 프린터 LabXpert</td><td>Brady</td><td>XSL-86-461</td><td></td></tr><tr><td>팁 20-200 &마이크로; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2160G</td><td></td></tr><tr><td>팁 2-20 &마이크로; L</td><td>Thermo Scientific</td><td>2139-HR</td><td></td></tr><tr><td>Visotubes</td><td>Cryo Bio System</td><td>20</td><td></td></tr><tr><td>유리화 동결 키트</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90133-SO</td><td></td></tr><tr><td>유리화 해동 키트</td><td>Fujifilm Irvine Scientific</td><td>90137-SO</td><td></td></tr></tbody></table>

mayer-rokitansky-kuster-hauser 증후군 치료를위한 질 성형술 중 복강경 난 모세포 검색 및 냉동 보존

Laparoscopic Oocyte Retrieval and Cryopreservation during Vaginoplasty for Treatment of Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome

복강경 질 성형술이 예정되어 있고 생물학적 모성에 대한 욕구가있는 Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 증후군 (MRKHS) 환자에서 냉동 보존을위한 복강경 난 모세포 회수를 병행할 것을 제안합니다. 난 모세포 검색은 복강경 검사 초기에 추구됩니다. 오른쪽 및 왼쪽 5mm 트로 카가 위치하며,이를 통해 17G 난자 흡인 바늘이 각각 오른쪽 및 왼쪽 난소의 천자에 사용됩니다. 모낭의 노출을 용이하게하기 위해, 난소는 동원되어 복강경 겸자로 유지됩니다.
서로 가까이있는 여러 개의 난포를 흡인 할 때 바늘 끝이 난소에 유지되어 난소 피질이 고정되는 횟수를 줄이고 출혈의 고유 한 위험으로 인해 발생합니다. 후속 단계는 질 성형술을위한 Davydov 복강경 수정 기술과 비교하여 변경되지 않습니다. 수술 전에 성선 자극 호르몬 방출 호르몬 (Gn-RH) 길항제 프로토콜로 조절 된 난소 자극을 수행하고, 난 모세포 회수 및 질 성형술의 수반되는 절차는 최종 난포 성숙 유발 인자 후 36 시간 후에 예정되어 있습니다. 난포액은 질식 난모세포 회수 중에 사용되는 것과 동일한 10mL 멸균 튜브에 수집되고 온난화 블록(37°C)에서 보조 생식 실험실로 옮겨져 성숙(중기 II) 난모세포가 유리화됩니다.
이 경우 MRKH, 난 모세포를 가진 일련의 23 명의 여성이 모든 환자에서 성공적으로 회수되고 동결 보존되었습니다. 이후 질성형술은 수정 없이 시행되었으며 입원 환자 및 외래 수술 후 치료(요도 카테터 제거 당일, 퇴원 당일, 확장기 사용 및 후속 조치 시 편안함)는 영향을 받지 않았습니다. 한 환자에서 수술 후 합병증 1건이 발생했고(수술 후 5일째에 발열이 발생하고 복부 초음파에서 복강 내 유체 검출) 보존적 치료 후 해결되었습니다. MRKH 환자에서 외과적 질 성형술을 수행하고 난모세포 회수를 지연시키는 대신 이 접근법은 단일 복강경 검사에서 두 절차를 결합하여 외과적 침습성과 마취 위험을 최소화합니다.

표 2는 환자의 난소 자극 데이터를 포함하는 반면, 주요 수술 및 기능적 결과는 표 3에 설명되어 있습니다. 난 모세포 회수 및 질 성형술의 수반되는 복강경 절차는 모든 환자에서 성공적으로 결합되었습니다. 평균 11.4 ± 5.4 (평균 ± SD) 난 모세포가 회수되었고, 9.6 ± 4.3 MII 난 모세포가 동결 보존되었다 (표 3). ART를받는 환자에서 난 모세포 동결 보존에 대한 우리의 경험에서, 세포질 내 정자 주입시 형태 학적으로 손상되지 않은 난 모세포의 비율로 정의 된이 유리화 프로토콜에 따른 온난화 후 난 모세포 생존율은 84.5 ± 19.3이었다. 총 평균 수술 시간은 114 ± 17 분이었고, 모든 환자에서 수술 중 출혈은 미미했으며 (&lt;50mL), 수술 중 부작용은 관찰되지 않았다. 요도 카테터와 질 거즈는 모든 환자에서 수술 후 2일째에 제거되었습니다. 수술 후 3일째에 환자들은 매일 확장기를 사용하기 시작했고...

전담 팀은 Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 환자에게 복강경 질 성형술시 제어 된 난소 자극 및 난 모세포 동결 보존을 수행 할 수있는 옵션을 제공 할 수 있습니다.

Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 증후군 치료를위한 질 성형술 중 복강경 난 모세포 검색 및 냉동 보존

In Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser Syndrome (MRKHS) patients who are scheduled for laparoscopic vaginoplasty and have a desire for biological motherhood, ...

우리의 접근 방식은 미래의 불임 치료를 위해 복강경 질 성형술과 난 모세포 검색을 결합하여 Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 증후군 치료에서 침습성 질병을 최소화 할 수 있습니다. 우리의 접근법의 주요 장점은 단일 마취에 대한 요구 사항과 젊은 Rokitansky 환자에서 질식 난 모세포 검색의 불가능 성을 극복하는 것입니다. 이 절차는 불임 병동의 선임 산부인과 의사 인 Diana Delprato와 보조 생식 실험실의 두 명의 수석 임상 발생학자 인 Alessandra Alteri와 Greta Cermisoni가 시연 할 것입니다.수술 당일부터 14 일째에 조절 된 난소 자극을 시작하십시오. 연속적인 복부 초음파와 에스트라 디올과 프로게스테론의 수반되는 측정에 의한 난소 반응을 모니터링하십시오. 개방형 기술로 폐복막을 설치하십시오.복강경 삽입을 위해 10mm 배꼽 투관침 1개와 중앙, 오른쪽 및 왼쪽 하단 사분면에 5mm 투관침 3개를 배치합니다. 복강경 시력에서 흡인 펌프에 연결된 17 게이지 단일 루멘 바늘을 사용하며, 일반적으로 오른쪽 및 왼쪽 난소의 천자를 위해 중앙 및 왼쪽 투관침을 통한 질식 검색에 사용됩니다. 모낭의 노출을 용이하게하기 위해 복강경 집게로 난소를 들어 올리고 잡습니다.서로 가까운 여러 난포를 흡인 할 때 난소에 바늘 끝을 유지하여 난소 피질이 고정되는 횟수와 출혈의 고유 한 위험을 줄입니다. 두 개의 기초적인 자궁 뿔 사이에서 복막 가닥을 들어 올려 횡단으로 절개한 다음 절개를 측면, 전방 및 후방으로 확장하여 복막을 해부합니다. 회음부 접근에 질 보조개를 노출시키고 H 자형 절개를 수행하고 방광 직장 공간을 날카 롭고 무딘 해부로 신 질 공간을 만듭니다.그런 다음 해부 된 복막 가장자리를 질 전정의 가장자리로 당깁니다. 복막 전정 문합에 대한 폴리 디 옥사 논 합성 흡수성 3-0에서 봉합사를 중단시켰다. 둥근 인대, 난관 협부, 자궁 난소 인대 및 측면 복막 잎의 결합 고정으로 방광 위의 동원 된 복막에서 각 반골반의 폴리 디 옥사 논 합성 흡수성 2-0 모노 필라멘트의 지갑 끈 봉합을 시작하십시오.그런 다음 두 봉합사에 중직근의 측면과 직장 상 장막의 앞쪽 측면을 직장 S 자 접합부 바로 아래에 포함시킵니다. 마지막으로 복막으로 코팅된 신생질에 파라핀 코팅 거즈를 놓습니다. 휴대용 인큐베이터에서 따뜻하게 유지 된 10mm 둥근 바닥 튜브에 모낭 흡인물을 수집하고 약 10 분의 운송 시간으로 즉시 발생학 실험실로 운반하십시오.모든 적운 난 모세포 복합체가 수집되면 수정 배지가 들어있는 4 웰 접시에 넣고 뚜껑과 바닥에 환자의 신원과 관련된 데이터를 표시합니다. 6 % 이산화탄소와 5 % 산소를 포함하는 통제 된 분위기에서 섭씨 37도에서 배양하십시오. 실험실 직원의 두 번째 구성원이 절차를 다시 확인하는지 확인하십시오.배란 후 38시간 이내에 적운 코로나 세포 제거를 수행합니다. 효소가 들어 있는 중앙 웰에 적운 난모세포 복합체를 배치하여 유리 파스퇴르 피펫으로 적운 세포를 분산시키고, 적운 난모세포 복합체가 포함된 용액을 최대 30초 동안 위아래로 부드럽게 피펫팅합니다. 난모세포를 hepes 완충 배지만 포함된 두 번째 중앙 웰 접시로 옮기고 최소량의 효소를 대체해야 합니다.내경이 감소하는 탈질 피펫을 사용하여 나머지 코로나 세포를 제거합니다. 난 모세포 성숙 단계를 평가하여 중기 II 난 모세포를 분리합니다. 중기 II 난 모세포를 6 밀리미터의 미네랄 오일로 덮인 연속 단일 배양 배지 9 방울을 함유하는 IVF 배양 60 밀리미터 페트리 접시에 옮깁니다.6 % 이산화탄소와 5 % 산소를 포함하는 통제 된 분위기에서 섭씨 37도에서 배양하십시오. 냉각 상자를 상단까지 신선한 액체 질소로 채우고 분산 및 증발을 최소화하기 위해 사용될 때까지 덮습니다. 조작 중에 난 모세포 손상을 피하기 위해 내경이 170 마이크로 미터 인 스트리퍼 피펫을 사용하십시오.평형 용액, 유리화 용액 및 세척 용액의 각 바이알을 부드럽게 흔들어 내용물을 혼합한 후 사용합니다. 60 밀리리터 페트리 접시의 뚜껑을 50 마이크로 리터의 세척액 한 방울로 준비하십시오. 배지 증발을 제한하기 위해 사용 직전에 방울을 떨어 뜨립니다.인큐베이터에서 난 모세포 접시를 가져 와서 배양 접시에서 최소 부피의 배지로 중기 II 난 모세포를 50 마이크로 리터의 세척 용액으로 옮깁니다. 세척액 2, 평형화 용액 1, 평형화 용액 2를 50마이크로리터 방울에 가깝게 분배하고 난모세포를 드롭 세척액 1에서 드롭 세척액 2로 옮깁니다. 평형 용액 1을 세척 용액 2에 병합하고 두 용액이 자발적으로 혼합 될 때까지 2 분 동안 기다립니다.그런 다음 평형 용액 2 방울을 이전에 병합 된 방울에 병합하고 2 분 동안 그대로 두십시오. 마지막으로, 새로운 100 마이크로 리터 방울의 평형 용액 3을 이전에 병합 된 방울에 병합하고 1 분 동안 추가로 두십시오. 난모세포를 100-마이크로리터 한 방울의 평형 용액 4방울에 넣고 10분 동안 떨어뜨린다.50마이크로리터 유리화 용액 2방울과 100마이크로리터의 유리화 용액 1개를 분배합니다. 난모세포를 유리화 용액 3방울에 순차적으로 넣고 60초 동안 움직여 난모세포가 약 20초 동안 각 방울에 남아 있도록 합니다. 60 초의 배양이 끝나기 전에 약 10 초가 남았을 때 냉동 장치를 현미경 아래에 놓습니다.피펫 끝에서 난 모세포를 운반하고 최소량의 유리화 용액으로 냉동 장치에 놓습니다. 과도한 유리화 용액을 흡인하여 난 모세포를 유리화 용액의 얇은 층으로 덮습니다. 냉동 장치를 액체 질소에 직접 넣고 빠르게 움직입니다.장치를 액체 질소에 보관하고 보호 뚜껑으로 덮으십시오. 난 모세포 회수 및 질 성형술의 수반되는 복강경 절차는 모든 환자에서 성공적으로 결합되었습니다. 평균 11.4 5.4 개의 난 모세포가 회수되었고 9.6 개의 4.3 M2 난 모세포가 냉동 보존되었습니다.총 평균 수술 시간은 114 17 분이었다. 수술 중 출혈은 모든 환자에서 유의하지 않았으며 수술 중 부작용은 관찰되지 않았습니다. 수술 후 3일째에, 환자들은 매일 확장기 사용을 시작하였고, 6.0 1.0일째에 퇴원하였다.난소 내 난포의 신중한 흡인이 권장되며, 최적의 접근과 회수를 보장하기 위해 난소의 자동 동원에주의를 기울입니다.

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연구

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Medicine

의학

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Mayer-Rokitansky-Kuster-Hauser 증후군 치료를위한 질 성형술 중 복강경 난 모세포 검색 및 냉동 보존

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