Name: 종에 구애받지 않는 단일 조직 응용 분야를 위한 레이저 미세 해부 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-03-31T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 57 s
Description: 배우세요 레이저 미세 해부와 CEL-Seq2를 결합한 단일 조직 전사체 분석 방법을. Caenorhabditis elegans 꼬리 끝에서 유전자 발현을 연구하고 비모델 종에도 적용할 수 있는 이 기술은 조직 특이적 RNA 분석에 탁월합니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

이 작업은 NIH (R01GM141395) 및 NSF (1656736) 보조금으로 DF 및 NIH 펠로우십 (F32GM136170)을 AW에 지원했습니다. 그림 1은 BioRender.com 의 도움으로 만들어졌습니다.

<ol><li>Haag, E. S., Fitch, D. H. A., Delattre, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((From+%26%2334%3Bthe+worm%26%2334%3B+to+%26%2334%3Bthe+worms%26%2334%3B+and+back+again%3A+the+evolutionary+developmental+biology+of+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">From &#34;the worm&#34; to &#34;the worms&#34; and back again: the evolutionary developmental biology of nematodes.</a> Genetics. 210 (2), 397-433 (2018).</li>
<li>Sommer, R. J., Bumbarger, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nematode+model+systems+in+evolution+and+development%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews%3A+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Nematode model systems in evolution and development.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Developmental Biology. 1 (3), 389-400 (2012).</li>
<li>WormBase. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://wormbase.org/#012-3-6">https://wormbase.org/#012-3-6</a> (2022).</li>
<li>WormAtlas. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://wormatlas.org">https://wormatlas.org</a> (2022).</li>
<li>WormBook. , Available from: 
 <a target="_blank" href="http://wormbook.org">http://wormbook.org</a> (2022).</li>
<li>WormBook in Genetics. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://academic.oup.com/genetics/pages/wormbook">https://academic.oup.com/genetics/pages/wormbook</a> (2022).</li>
<li>Cao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comprehensive+single-cell+transcriptional+profiling+of+a+multicellular+organism%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Comprehensive single-cell transcriptional profiling of a multicellular organism.</a> Science. 357 (6352), 661-667 (2017).</li>
<li>Kaletsky, R., Murphy, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+profiling+of+C.+elegans+adult+cells+and+tissues+with+age%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Transcriptional profiling of C. elegans adult cells and tissues with age.</a> Methods in Molecular Biology. 2144, 177-186 (2020).</li>
<li>Kaletsky, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptome+analysis+of+adult+Caenorhabditis+elegans+cells+reveals+tissue-specific+gene+and+isoform+expression%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Transcriptome analysis of adult Caenorhabditis elegans cells reveals tissue-specific gene and isoform expression.</a> PLoS Genetics. 14 (8), 1007559(2018).</li>
<li>Packer, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+lineage-resolved+molecular+atlas+of+C.+elegans+embryogenesis+at+single-cell+resolution%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A lineage-resolved molecular atlas of C. elegans embryogenesis at single-cell resolution.</a> Science. 365 (6459), 1971(2019).</li>
<li>Kulkarni, A., Anderson, A. G., Merullo, D. P., Konopka, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+bulk%3A+a+review+of+single+cell+transcriptomics+methodologies+and+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Beyond bulk: a review of single cell transcriptomics methodologies and applications.</a> Current Opinion in Biotechnology. 58, 129-136 (2019).</li>
<li>Von Stetina, S. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell-specific+microarray+profiling+experiments+reveal+a+comprehensive+picture+of+gene+expression+in+the+C.+elegans+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell-specific microarray profiling experiments reveal a comprehensive picture of gene expression in the C. elegans nervous system.</a> Genome Biology. 8 (7), 135(2007).</li>
<li>Baugh, L. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+homeodomain+protein+PAL-1+specifies+a+lineage-specific+regulatory+network+in+the+C.+elegans+embryo%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">The homeodomain protein PAL-1 specifies a lineage-specific regulatory network in the C. elegans embryo.</a> Development. 132 (8), 1843-1854 (2005).</li>
<li>Haenni, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analysis+of+C.+elegans+intestinal+gene+expression+and+polyadenylation+by+fluorescence-activated+nuclei+sorting+and+3%27-end-seq%5BTitle%5D)+AND+%22Nucleic+Acids+Research%22%5BJournal%5D)">Analysis of C. elegans intestinal gene expression and polyadenylation by fluorescence-activated nuclei sorting and 3'-end-seq.</a> Nucleic Acids Research. 40 (13), 6304-6318 (2012).</li>
<li>Zhang, S., Banerjee, D., Kuhn, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+larval+cells+from+C.+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of larval cells from C. elegans.</a> PLoS One. 6 (4), 19505(2011).</li>
<li>Emmert-Buck, M. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Laser+capture+microdissection%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Laser capture microdissection.</a> Science. 274 (5289), 998-1001 (1996).</li>
<li>Hashimshony, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CEL-Seq2%3A+sensitive+highly-multiplexed+single-cell+RNA-Seq%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biology%22%5BJournal%5D)">CEL-Seq2: sensitive highly-multiplexed single-cell RNA-Seq.</a> Genome Biology. 17, 77(2016).</li>
<li>Yanai, I., Hashimshony, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((CEL-Seq2-single-cell+RNA+sequencing+by+multiplexed+linear+amplification%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">CEL-Seq2-single-cell RNA sequencing by multiplexed linear amplification.</a> Methods in Molecular Biology. 1979, 45-56 (2019).</li>
<li>Porta-de-la-Riva, M., Fontrodona, L., Villanueva, A., Ceron, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+Caenorhabditis+elegans+methods%3A+synchronization+and+observation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Basic Caenorhabditis elegans methods: synchronization and observation.</a> Journal of Visualized Experiments: JoVE. (64), e4019(2012).</li>
<li>Baugh, L. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((To+grow+or+not+to+grow%3A+nutritional+control+of+development+during+Caenorhabditis+elegans+L1+arrest%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">To grow or not to grow: nutritional control of development during Caenorhabditis elegans L1 arrest.</a> Genetics. 194 (3), 539-555 (2013).</li>
<li>Baugh, L. R., Hu, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Starvation+responses+throughout+the+Caenorhabditis+elegans+life+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Starvation responses throughout the Caenorhabditis elegans life cycle.</a> Genetics. 216 (4), 837-878 (2020).</li>
<li>Pepper, A. S., Killian, D. J., Hubbard, E. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genetic+analysis+of+Caenorhabditis+elegans+glp-1+mutants+suggests+receptor+interaction+or+competition%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Genetic analysis of Caenorhabditis elegans glp-1 mutants suggests receptor interaction or competition.</a> Genetics. 163 (1), 115-132 (2003).</li>
<li>Mok, D. Z., Sternberg, P. W., Inoue, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphologically+defined+sub-stages+of+C.+elegans+vulval+development+in+the+fourth+larval+stage%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Developmental+Biology%22%5BJournal%5D)">Morphologically defined sub-stages of C. elegans vulval development in the fourth larval stage.</a> BMC Developmental Biology. 15, 26(2015).</li>
<li>Lytal, N., Ran, D., An, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Normalization+methods+on+single-cell+RNA-seq+data%3A+an+empirical+survey%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Genetics%22%5BJournal%5D)">Normalization methods on single-cell RNA-seq data: an empirical survey.</a> Frontiers in Genetics. 11, 41(2020).</li>
<li>Vieth, B., Ziegenhain, C., Parekh, S., Enard, W., Hellmann, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((powsimR%3A+power+analysis+for+bulk+and+single+cell+RNA-seq+experiments%5BTitle%5D)+AND+%22Bioinformatics%22%5BJournal%5D)">powsimR: power analysis for bulk and single cell RNA-seq experiments.</a> Bioinformatics. 33 (21), 3486-3488 (2017).</li>
<li>Bolkova, J., Lanctot, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+gene+expression+analysis+in+Caenorhabditis+elegans+using+single+molecule+RNA+FISH%5BTitle%5D)+AND+%22Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative gene expression analysis in Caenorhabditis elegans using single molecule RNA FISH.</a> Methods. 98, 42-49 (2016).</li>
<li>Ji, N., van Oudenaarden, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single+molecule+fluorescent+in+situ+hybridization+%28smFISH%29+of+C.+elegans+worms+and+embryos%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Single molecule fluorescent in situ hybridization (smFISH) of C. elegans worms and embryos.</a> WormBook. , 1-16 (2012).</li>
<li>Lee, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Single-molecule+RNA+fluorescence+in+situ+hybridization+%28smFISH%29+in+Caenorhabditis+elegans%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-Protocol%22%5BJournal%5D)">Single-molecule RNA fluorescence in situ hybridization (smFISH) in Caenorhabditis elegans.</a> Bio-Protocol. 7 (12), 2357(2017).</li>
<li>Baird, S. E., Chamberlin, H. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Caenorhabditis+briggsae+methods%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Caenorhabditis briggsae methods.</a> WormBook. , 1-9 (2006).</li>
<li>Felix, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oscheius+tipulae%5BTitle%5D)+AND+%22WormBook%22%5BJournal%5D)">Oscheius tipulae.</a> WormBook. , 1-8 (2006).</li>
<li>Han, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improving+transgenesis+efficiency+and+CRISPR-associated+tools+through+codon+optimization+and+native+intron+addition+in+Pristionchus+nematodes%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">Improving transgenesis efficiency and CRISPR-associated tools through codon optimization and native intron addition in Pristionchus nematodes.</a> Genetics. 216 (4), 947-956 (2020).</li>
<li>Fernandes Povoa, E. E., Ebbing, A. L. P., Betist, M. C., vander Veen, C., Korswagen, H. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+dissociation+protocol+for+FACS-based+isolation+of+rare+cell+types+from+Caenorhabditis+elegans+L1+larvae%5BTitle%5D)+AND+%22MethodsX%22%5BJournal%5D)">An optimized dissociation protocol for FACS-based isolation of rare cell types from Caenorhabditis elegans L1 larvae.</a> MethodsX. 7, 100922(2020).</li>
<li>Han, M., Wei, G., McManus, C. E., Hillier, L. W., Reinke, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolated+C.+elegans+germ+nuclei+exhibit+distinct+genomic+profiles+of+histone+modification+and+gene+expression%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Genomics%22%5BJournal%5D)">Isolated C. elegans germ nuclei exhibit distinct genomic profiles of histone modification and gene expression.</a> BMC Genomics. 20 (1), 500(2019).</li>
<li>Steiner, F. A., Henikoff, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+type-specific+affinity+purification+of+nuclei+for+chromatin+profiling+in+whole+animals%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+in+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">Cell type-specific affinity purification of nuclei for chromatin profiling in whole animals.</a> Methods in Molecular Biology. 1228, 3-14 (2015).</li>
<li>Ebbing, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+transcriptomics+of+C.+elegans+males+and+hermaphrodites+identifies+sex-specific+differences+in+gene+expression+patterns%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Cell%22%5BJournal%5D)">Spatial transcriptomics of C. elegans males and hermaphrodites identifies sex-specific differences in gene expression patterns.</a> Developmental Cell. 47 (6), 801-813 (2018).</li>
<li>Rödelsperger, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spatial+transcriptomics+of+nematodes+identifies+sperm+cells+as+a+source+of+genomic+novelty+and+rapid+evolution%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Biology+and+Evolution%22%5BJournal%5D)">Spatial transcriptomics of nematodes identifies sperm cells as a source of genomic novelty and rapid evolution.</a> Molecular Biology and Evolution. 38 (1), 229-243 (2021).</li>
<li>Amini, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimised+protocol+for+isolation+of+RNA+from+small+sections+of+laser-capture+microdissected+FFPE+tissue+amenable+for+next-generation+sequencing%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Molecular+Biology%22%5BJournal%5D)">An optimised protocol for isolation of RNA from small sections of laser-capture microdissected FFPE tissue amenable for next-generation sequencing.</a> BMC Molecular Biology. 18 (1), 22(2017).</li>
</ol>

모든 저자는 이해 상충이 없다고 선언합니다.

방법의 중요한 단계 올바르게 수행되면, 여기에 설명된 방법은 상대적으로 적은 수의 레이저 해부된 샘플(이 예에서는 70개의 꼬리 팁)으로 강력한 RNA 프로파일을 얻을 수 있습니다. 그러나 개발 중인 동물의 샘플의 경우 시료 간의 변동성을 줄이기 위해 긴밀한 동기화가 중요합니다. 이러한 이유로 프로토콜은 웜 동기화를 위해 해치오프 방법을 권장합니다. 여기서 연구원은 개인 간의 연령 차이를 결정하고 정확하게 제어 할 수 있습니다 (현재 프로토콜의 1 시간). 또한, 해치-오프 방법은 배아가 표백제에 민감하더라도, L1이 정지되지 않거나, L1 정지로부터의 회복이 가변적이더라도 모든 종에 적용 가능하다. 해치 오프에 의한 성공적인 동기화를 위해서는 세척 단계가 중요합니다 : 부화 기간이 시작될 때 모든 성인과 애벌레를 제거해야하며 부화 기간이 끝날 때 새로 부화 한 L1과 함께 배아를 씻어 내서는 안됩니다. 이것은 플레이트의 한천 표면이 균열, 구멍 또는 거품에 의해 손상되지 않은 경우에만 성공하...

선충류, 특히 모델 시스템 Caenorhabditis elegans와 관련된 횡문근 선충류는 여러 가지 이유로 진화 발달 생물학 (EDB)을위한 훌륭한 동물 그룹입니다 1,2. 장점은 적은 수의 세포, 정의되고 일관된 세포 계보, 투명성 및 배양 및 축산업의 용이성을 포함합니다. 또한 여러 종에 대한 고품질 게놈과 C. elegans, 광범위한 분자 유전 도구 및 개발, 유전학, 해부학 및 생리학에 대한 지식 3,4,5,6을 포함하여 많은 자원을 사용할 수 있습니다.
다른 많은 유기체와 마찬가지로, 단일 조직 또는 단일 세포에서 전사체 역학 을 특성화하는 능력은 C. elegans 7,8,9,10의 발달 분석에 혁명을 일으켰습니다. 선충류에 걸친 단일 세포 전사체를 비교할 수 있다는 것은 이러한 유기체를 사용하여 EDB를 유사하게 변형시킬 것입니다. 예를 들어, 이러한 비교는 유전자 조절 네트워크가 보존 된 캐릭터 (특성), 발산 된 캐릭터 또는 독립적으로 진화 한 캐릭터에 대해 어떻게 진화했는지에 대한 통찰력을 제공 할 것입니다.

그러나 선충류로부터 특정 조직이나 세포를 분리하는 것은 큰 도전 중 하나입니다. 많은 유기체에 대해, 단일 세포는 조직으로부터 해리되고 편향되지 않은 방식으로 수확될 수 있거나, 형광 단백질의 조직 특이적 발현으로 표지될 수 있고, 형광-활성화된 세포 분류(FACS)11에 의해 분류될 수 있다. C. elegans에서, 세포의 고처리량 (HTP) 분리는 거친 외부 표피 (및 수압 골격)가 유충 및 성인으로부터의 세포 분리를 방해했기 때문에 주로 배아로 제한되었습니다. 이러한 도전을 해결하기 위해, 일부 방법들은 조직 특이적 mRNA-태깅12와 같은 전체 C. elegans 웜에서 유전 도구를 사용하고, 야생형과 세포 유형13에 영향을 미치는 돌연변이체 사이의 차등 발현 비교를 이용하였다. 보다 최근의 방법들은 핵(14) 또는 전체 세포(8,9,15)를 분리하기 위해 큐티클을 용해시킴으로써 도전을 극복하였다. 그러나 세포 분리 및 세포 배양은 세포가 그들의 자연적 발달 또는 해부학적 맥락으로부터 제거된다는 명백한 단점을 갖는다 - 예를 들어, 세포-세포 신호전달로부터 멀어지고 세포외 매트릭스와의 접촉 - 이는 유전자 발현 프로필(15)에 영향을 미칠 것으로 예상된다. 더욱이, 유전 도구 및 조직-특이적 마커는 종-특이적이다(즉, 이들은 C. elegans에서만 사용될 수 있다).
LMD는 세포의 자연적인 맥락을 방해하지 않고 조직을 분리하는 대안적인 방법을 제공합니다. EDB의 경우, LMD는 또한 이들 종의 게놈 또는 전체 전사체 서열이 이용 가능한 경우 종 특이적 유전자 툴킷을 필요로 하지 않고 상이한 종의 상동성 조직으로부터의 전사체를 비교할 수 있게 한다. LMD는 직접적인 현미경 관찰에 의해 조직을 표적화하고 현미경의 광학에 통합 된 레이저 마이크로 빔을 사용하여 관심있는 조직을 잘라내어 수확 (캡처)하는 것을 포함합니다16. LMD의 한계는 매우 HTP 접근법에 도움이되지 않는다는 것입니다 (이 프로토콜에 설명 된 바와 같이 꼬리 팁에 대한 전사 프로파일은 ~ 70 개의 샘플로 견고 함), 특정 샘플은 해부하기가 어려울 수 있으며 절단은 레이저의 정밀도와 현미경에서 시각화 할 수있는 것으로 제한됩니다.
본 프로토콜의 목적은 LMD가 단일 조직 RNA-Seq에 이어 선충류로부터 단계- 및 조직 특이적 전사체 데이터를 수득하는데 어떻게 사용될 수 있는지를 기술하는 것이다. 구체적으로, 그것은 C. elegans의 4 단계 유충 (L4)에서 꼬리 끝을 분리하기위한 LMD를 보여줍니다. 그러나, 이 방법은 다른 조직 및 물론, 상이한 종에 적응될 수 있다.
C. elegans에는 남성과 hermaphrodites 모두에서 꼬리 끝을 만드는 4 개의 세포가 있습니다. 남성의 L4 단계 동안 - 헤르마프로디트에서는 그렇지 않지만 꼬리 끝 세포는 모양을 바꾸고 전방 및 내측으로 이동합니다. 이 과정은 또한 일부 다른 횡문근 선충류 종에서 발생하지만 전부는 아닙니다. 따라서 꼬리 끝은 성적 이형 형태 형성의 진화를위한 좋은 모델입니다. 위치 때문에 꼬리 끝은 LMD에 의해 쉽게 분리 될 수 있습니다.
꼬리 팁으로부터 전사체 프로파일을 얻기 위해, 본 프로토콜은 단일 세포17,18을 위해 개발된 RNA-seq 방법인 CEL-Seq2를 사용한다. 이 방법은 LMD 유래 조직에 대해 몇 가지 장점이 있습니다. CEL-Seq2는 mRNA 판독의 간단한 정량화, 선형 증폭을 보장하기 위한 시험관내 전사, 개별 조직 샘플의 멀티플렉싱을 허용하는 바코딩을 허용하는 고유한 분자 식별자(UMI)를 사용하여 매우 민감하고 효율적입니다. CEL-Seq2의 유일한 한계는 회수된 판독이 mRNA의 3' 말단에 편향되어 있고, 따라서 대부분의 이소형은 구별될 수 없다는 것이다.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 0.5 & 마이크로; M PEN 멤브레인 유리 슬라이드 RNase free</td><td>Leica</td><td>11600288</td><td>LMD</td></tr><tr><td>500 &micro; L PCR 튜브 (뉴클레아제 없음)</td> <td>Axygen</td><td>732-0675</td><td>꼬리 끝을</td></tr><tr><td>40x 대물렌즈 및 DIC</td><td></td><td></td>가 있는 복합 현미경으로 절단하여 <td>웜의 나이를 확인하기 위한</td></tr><tr><td>모든 데스크탑 가습기</td><td></td>, 투과광 베이스가 있는 모든 <td></td><td></td></tr><tr><td>해부 현미경</td><td></td>, <td>모든 웜 작업</td>, 유리 파스퇴르 피펫, 웜 픽의 모든 핸들 <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>유리 슬라이드 및 커버슬립</td><td>웜의 나이를 확인하기 위한</td><td>모든</td><td></td></tr><tr><td>LMD6 미세해부 시스템</td><td>Leica</td><td>다중</td><td>절단 꼬리 팁</td></tr><tr><td>LoBind 튜브 0.5 mL</td><td>Eppendorf</td><td>22431005</td><td></td></tr><tr><td>M9 WormBook</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>메탄올 99.8%</td><td>Sigma</td><td>322415</td><td>벌레 수정</td></tr><tr><td>Simulator, NGM 성장 매체</td><td>US 생물학적</td><td>N1000</td><td>완충액 및 염 추가 필요: WormBook</td></tr><tr><td>P10 피펫 가변 부피</td><td>레시피(예: Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P1000 피펫 가변 용량</td>) <td>예: Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>P2 피펫 가변 용량</td>(<td>예: Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 1,000 &마이크로); L</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>피펫 팁 1-10 &micro; L은</td><td>모든</td><td></td><td></td></tr><tr><td>백금 이리듐 와이어</td><td>Tritech</td><td>PT-9010</td><td>을 필터링하여 웜 픽</td></tr>, <tr><td>멸균 및 뉴클레아제가 없는 1mL 원심분리기 튜브</td><td>를</td><td></td><td></td></tr> 만듭니다. 모든 <tr><td>Tween 20</td><td>Sigma</td><td>P9416</td><td>M9 버퍼에 매우 소량을 추가하여 웜이 피펫 팁에 달라붙는 것을 방지하고</td></tr><tr><td>6mm 플라스틱 페트리 접시</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>를 통기합니다.고</td>감도 RNA 및 DNA 검출을 위한 시약이 있는 CEL-Seq2<td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>4200 TapeStation 시스템</td>용 <td>Aligent</td><td></td><td>자동 전기영동 시스템</td></tr><tr><td>AMPure XP 비드</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63880</td><td>DNA 클린업 비드</td></tr><tr><td>비드 결합 완충액&nbsp; 20% PEG8000, 2.5 M NaCl</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>CEL-Seq2 프라이머 (표 S1 참조)</td><td>Sigma Genosys Mastercycler Nexus GX2 Eppendorf</td><td>6335000020</td><td>프로그래밍 가능한 뚜껑과 블록이 있는 열 순환기; l 튜브.</td></tr><tr><td>DNA 중합효소 I (E. coli)</td><td>Invitrogen</td><td>18052-025</td><td></td></tr><tr><td>dNTP mix 10 mM</td><td>any</td><td></td><td></td></tr><tr><td>E. coli DNA</td><td>ligase Invitrogen</td><td>18052-019</td><td></td></tr> PCR 제품 세척용 <tr><td>에탄올</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>ExoSAP-IT</td><td>Affymetrix</td><td>78200</td><td>엑소뉴클레아제 용액</td></tr><tr><td>MEGAscript T7 전사 키트</td><td>Ambion</td><td>AM1334</td><td>단계 4.6.1</td></tr><tr><td>뉴클레아제가 없는 물</td> HF 완충액이 있는 <td>Phusion</td><td></td><td></td></tr><tr><td>High-Fidelity PCR 마스터 믹스</td><td>NEB</td><td>M0531</td><td>PCR 믹스 단계 4.9.7</td></tr><tr><td>무작위 헥사머 RT 프라이머 GCCTTGGCACCCGAGAATTCCA NNNNNN</td><td>IDT</td><td></td> 무작위 RNA 단편화 완충액 NEB<td>인 6개의 뉴클레오티드가 있는 프라이머</td></tr><tr><td></td><td></td><td>E6150S</td><td></td></tr><tr><td>RNA 단편화 정지 버퍼</td><td>NEB</td><td>E6150S</td><td></td></tr><tr><td>RNA PCR 인덱스 프라이머 (RPI1&ndash; RPI48)</td><td>프로토콜 단계 4.9.7의</td> <td>Illumina, NEB 또는 IDT</td><td></td> RPIX, Illumina</tr><tr><td>RNAClean XP 비드</td><td>Beckman Coulter</td><td>A63987</td><td></td></tr><tr><td>RNase AWAY Surface Decontaminant</td><td>Thermo Scientific</td><td>7000TS1</td><td>또는 기타 유사한 제품</td></tr><tr><td>RNaseH (E. coli)</td><td>Invitrogen</td><td>18021-071</td><td></td></tr><tr><td>RNaseOUT 재조합 리보뉴클레아제 억제제</td><td>인비트로겐</td><td>10777-019</td><td></td></tr><tr><td>두 번째 가닥 완충제</td><td>인비트로겐</td><td>10812-014</td><td></td></tr><tr><td>슈퍼스크립핏 II</td><td>인비트로겐</td><td>18064-014</td><td>역전사효소</td></tr></tbody></table>

종에 구애받지 않는 단일 조직 응용 분야를 위한 레이저 미세 해부

Laser Microdissection for Species-Agnostic Single-Tissue Applications

단일 세포 방법론은 특정 세포 유형의 전사체 분석에 혁명을 일으켰습니다. 그러나, 그들은 종종 형광 단백질의 조직 특이적 발현을 유도하는 프로모터와 같은 종 특이적 유전 적 "툴킷"을 필요로합니다. 또한, 개별 세포를 분리하기 위해 조직을 교란시키는 프로토콜은 그들의 천연 환경으로부터 세포를 제거하고(예를 들어, 이웃으로부터의 신호전달), 스트레스 반응 또는 천연 유전자 발현 상태로부터의 다른 차이를 초래할 수 있다. 본 프로토콜에서, 레이저 미세해부(LMD)는 수컷 꼬리 팁 형태형성 동안 유전자 발현의 연구를 위해 개별 선충류 꼬리 팁을 분리하도록 최적화된다.
LMD는 세포 파괴 또는 종별 툴킷이 필요없이 동물의 일부를 분리 할 수 있으므로 모든 종에 적용 할 수 있습니다. 이어서, CEL-Seq2와 같은 단세포 RNA-seq 라이브러리 준비 프로토콜은 LMD 단리된 단일 조직에 적용될 수 있고, 종에 대해 잘 주석이 달린 게놈 또는 전사체가 이용가능하다는 점을 감안할 때, 표준 파이프라인을 사용하여 분석될 수 있다. 이러한 데이터는 전사체가 상이한 종에서 그 조직의 발달의 기초가 되는 얼마나 보존되거나 상이한지를 확립하는데 사용될 수 있다.
한계에는 관심있는 조직 및 샘플 크기를 절단하는 능력이 포함됩니다. 전력 분석에 따르면 조건당 70개의 테일 팁이 80%의 전력에 필요한 것으로 나타났습니다. 동일한 발달 단계에서이 수의 동물을 얻기 위해서는 개발의 긴밀한 동기화가 필요합니다. 따라서, 1 h 간격으로 동물을 동기화하는 방법이 또한 설명된다.

레이저 캡처 미세 해부 후, 4 시간 지점에서 수컷과 헤르마프로디트의 개별 꼬리 끝 (부화 후 L3 22 시간; L4 24, 26, 및 28 h 해치 후)를 CEL-Seq2 프로토콜을 사용하여 RNA 시퀀싱을 위해 제조하였다. CEL-Seq2 프라이머는 특정 샘플(이 경우 개별 꼬리 팁)으로부터의 시퀀싱 판독이 생물정보적으로 확인될 수 있게 하는 독특한 바코드를 함유한다. 시퀀싱 데이터는 총 557 개의 꼬리 팁 (4 개의 발달 시점에 걸쳐 266 개의 헤르마프로디테와 291 마리의 남성, 성별 및 시점 당 59-78 개의 꼬리)에 대해이 방법으로 생성되었습니다. CEL-Seq2 바코드는 이들 꼬리 팁의 97%(즉, 543)에 대해 회수되었다(보충 표 S2). 대부분의 라이브러리에서 복구 속도는 99-100 %였습니다. 그러나 한 남성 시간대의 경우 88 %였습니다. 22, 24 및 28 시간 시점의 남성 꼬리 팁의 약 절반이 COVID-19 관련 지연으로 인해 ~ 4 개월 동안 -80 °C에서 저...

RNA 시퀀싱을 위해 개별 선충류 조직을 분리하기 위해 레이저 미세 해부를 사용하는 프로토콜이 기술되어 있습니다. 이 프로토콜은 종 특이적 유전자 툴킷을 필요로하지 않으므로 단일 조직 샘플 수준에서 다른 종간에 유전자 발현 프로필을 비교할 수 있습니다.

Single-cell methodologies have revolutionized the analysis of the transcriptomes of specific cell types. However, they often require species-specific ...

우리는 레이저 캡처 미세 해부와 CEL-Seq2라는 단일 세포 RNA 탐색 프로토콜을 결합하여 작은 개별 조직 샘플에 대한 전사체 데이터 세트를 생성합니다. 이 기술을 통해 우리는 전통적인 세포 분류 방법을 사용하여 연구 할 수없는 조직이나 종에서 유전자 발현을 연구 할 수 있습니다. 추가적으로, 벌크 RNA-seq 접근법보다 더 특이성을 제공한다.여기서 우리는 C.elegans 네 번째 애벌레 단계 수컷과 hermaphrodites의 네 개의 세포 꼬리 팁에 대해이 기술을 시연했습니다. 그러나이 접근법의 아름다움은 모델이 아닌 종에도 적용 할 수 있다는 것입니다. 이 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 박사 과정 학생 인 Raya Jallad와 현재 테네시 주 채터누가에있는 베일러 학교의 생물 의학 과학자 인 Antonio Herrera 박사입니다.먼저 분출하지 않고 플레이트 벽에 대해 하나 ~ 두 밀리리터의 M9 버퍼를 부드럽게 피펫팅하십시오. 웜을 제거하기 위해 접시를 소용돌이 치십시오. 구멍이 뚫리지 않도록 한천 가장자리의 플레이트 벽에 피펫 팁을 배치하여 모든 액체와 웜을 제거하고 버립니다.이 비디오는 어머니와 애벌레가 제거되기 전에 접시를 보여줍니다. 산모와 애벌레가 제거 된 후에 배아 만 남겨 두어야합니다. L1 유충은 1 시간 정도 배양 한 후에 나타나기 시작합니다.그런 다음 접시를 섭씨 25도에 놓습니다. 한 시간 후, 플레이트를 인큐베이터에서 제거한다. 조심스럽게 1 밀리리터의 M9 버퍼를 한천에 떨어 뜨리고 플레이트를 소용돌이 치며 배아가 아닌 L1을 제거합니다.튜브를 원심분리하고 L1s를 피펫팅하여 시드된 플레이트의 박테리아 잔디밭 상에 직접 피펫한다. 웜을 섭씨 25도에서 유지하십시오. 30 ~ 50 X 배율의 해부 현미경으로 동기화 플레이트에서 수컷과 헤르마프로디트를 별도의 비장착 플레이트로 채취하기 시작하십시오.수컷은 헤르마프로디테 꼬리의 뾰족한 모양과 어두운 색에 비해 수컷 꼬리의 부풀어 오른 모양과 밝은 색으로 hermaphrodite와 구별됩니다. 0.01 % 세제를 함유 한 M9 버퍼로 미리 세척 된 피펫 팁을 사용하여 1 ~ 2 밀리리터의 M9 버퍼로 플레이트에서 웜을 씻어냅니다. 웜을 1 밀리리터 원심 분리 튜브로 옮기고 1 분 동안 회전시키고 M9 버퍼 1 밀리리터를 추가하십시오.다시 한 분 동안 회전하십시오. 얼음처럼 차가운 70 % 메탄올 한 밀리리터를 넣고 잘 섞으십시오. 한 밀리리터 메탄올로 세척을 반복하고 잘 섞으십시오.그것을 한 분 동안 회전시키고 70 % 메탄올 500 마이크로 리터를 첨가하십시오. 그것을 섞어서 섭씨 네 도에서 한 시간에서 하룻밤 사이에 보관하십시오. 20 마이크로리터의 웜을 폴리에틸렌 나프탈레이트 또는 PEN-멤브레인 유리 슬라이드의 코팅된 측면 상에 고정된 피펫.메탄올이 증발 할 때까지 기다리십시오. 스테이지 위의 플라스틱 실드를 제거하고 위쪽 화살표가 있는 언로드 버튼을 클릭하여 멤브레인 슬라이드를 로드합니다. 슬라이드가 완전히 건조되었는지 확인하고 멤브레인이 아래를 향하도록 뒤집고 슬라이드를 삽입하십시오.변경 표본 창에서 계속을 클릭합니다. 슬라이드 홀더가 이동합니다. 그런 다음 화면 하단의 플라스틱 실드를 교체하고 슬라이드가 포함 된 슬라이드 홀더를 선택하고 아래쪽 화살표가있는 언로드 버튼을 클릭하여 튜브를로드하십시오.트레이를 당겨 튜브 블록을 분리합니다. 네 개의 500 마이크로리터 PCR 튜브의 튜브 캡을 홀더에 넣고 튜브를 아래로 접습니다. 블록을 트레이로 되돌리고 트레이를 현미경 스테이지로 다시 밀어 넣습니다.변경 수집기 장치 팝업 창에서 PCR 튜브를 선택하고 확인을 클릭합니다. 콜렉터 장치 튜브 캡 아래의 화면 왼쪽 하단의 빈 튜브 위치를 클릭하고 현미경 제어판에서 투과 된 밝은 필드 조명을 위해 TLBF를 선택하십시오. 2.5X 렌즈를 사용하여 웜과 PEN-멤브레인의 표면 구조가 보일 때까지 초점을 조정합니다.20X 렌즈로 전환하고 스테이지를 웜이 없는 영역으로 이동합니다. 멤브레인의 기포와 같은 구조가 노란색을 띠도록 초점을 조정하여 레이저를 올바른 초점면에 초점을 맞춘 다음 레이저 매개 변수를 설정하십시오. 꼬리 팁의 경우 속도 20에서 전원 45 조리개 30으로 시작하십시오.레이저 컨트롤 패널에서 보정을 선택하고 지침을 따릅니다. 다음으로, 컬렉터 장치 튜브 캡에서 화면 하단에서 위치 A를 클릭하고 화면의 오른쪽에서 단일 모양을 선택한 다음 그리기 및 잘라냅니다. 그런 다음 점할 점을 선택하고 선을 그립니다.시작 컷을 클릭하여 레이저가 멤브레인을 통과하도록 합니다. 웜을 찾아 이동하고 자르십시오. 마우스를 사용하여 꼬리를 자릅니다.샘플을 수집하려면 점 간 기능을 사용하여 그리기 및 잘라내기 설정으로 전환하고 모양 그리기를 수행하여 멤브레인 섹션의 절단을 완료합니다. 화면 하단의 컬렉터 장치 튜브 캡에서 다음 튜브를 선택하고 다음 꼬리 팁을 자릅니다. 네 개의 꼬리가 잘리면 아래쪽 화살표로 언로드를 클릭하여 튜브 랙을 언로드합니다.해부 현미경 아래에서 막 섹션을 찾고 다운스트림 샘플 처리를 계속하십시오. 여기서 CEL-Seq2로 RNA 시퀀싱. 1.2 마이크로리터의 CEL-Seq2 프라이머 마스터 믹스를 피펫 샘플 위에 직접 놓고 튜브를 닫는다.프라이머 번호로 라벨링하고 즉시 튜브 캡을 드라이 아이스 조각에 직접 올려 놓고 샘플을 플래시하여 RNA 분해를 방지합니다. 모든 샘플이 수집될 때까지 반복합니다. 마지막으로 튜브를 영하 70도에 보관하십시오.부화 후 21 ~ 23 시간에 C.elegans L3 hermaphrodite와 수컷은 꼬리의 형태학에 의해 해부 현미경으로 구별 될 수 있습니다. hermaphrodite의 이야기는 좁고 남성의 이야기는 부어 오르고 분명하게 보입니다. PEN-멤브레인 슬라이드 구조와 웜 테일의 외관이 이러한 이미지에 표시됩니다.여기서 초점은 현미경의 20X 및 40X 렌즈에 맞습니다. PEN-멤브레인을 공평하게 잘라낸 해부된 꼬리가 여기에서 볼 수 있다. 컷의 틈새를 닫은 후, 멤브레인 조각은 슬라이드 아래의 튜브 캡으로 떨어집니다.해부된 테일 팁을 포함하는 PEN-멤브레인 섹션이 있는 튜브 캡이 여기에 표시됩니다. 그래픽 이미지는 서로 다른 시점 및 성별에 대한 개별 꼬리 팁당 자연 로그 변환된 고유 분자 식별자 또는 UMI 카운트를 나타냅니다. powsimR 소프트웨어는 다양한 발현 수준에서 차등 발현 또는 DE 유전자를 검출하기 위해 얼마나 많은 독립적인 샘플이 필요한지를 결정하는 데 사용됩니다.여기의 그래픽 이미지는 조건별로 서로 다른 샘플 크기를 통합하는 네 가지 시뮬레이션에 대해 두 조건 사이의 DE 유전자를 검출하는 진정한 양성률을 나타냅니다. 파선은 80%참 양수율을 나타냅니다. 잘못된 발견률과 동일한 네 가지 시뮬레이션이 여기에 표시됩니다.파선은 10%거짓 검색률을 나타냅니다. 그래프는 조건당 70개의 꼬리 팁의 샘플 크기가 매우 낮은 발현 수준을 갖는 유전자를 제외하고는 DE 유전자를 검출하기에 충분하다는 것을 보여주었다. 적절한 동기화를 위해서는 배아 만 플레이트에 있는지 확인하십시오.샘플 손실을 방지하기 위해 프라이머를 피펫으로 캡의 PEN-멤브레인 섹션에 직접 혼합하고 캡을 닫을 때 매우 부드럽습니다. 종에 구애받지 않기 때문에이 프로토콜을 사용하여 다른 종의 상동 구조에 대해 유전자 조절 네트워크가 어떻게 진화했는지 탐구 할 수 있습니다.

laser-microdissection-for-species-agnostic-single-tissue-applications

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

포유 동물 조직의 레이저 캡처 Microdissection

이 비디오는 미크론 수준의 정밀도로 3D 유기형 공동 배양 모델의 레이저 해부를 설명합니다. 3D 유기형 모델에서는 섬유아세포와 같은 기질 성분이 암 상피 세포와 3차원으로 공동 배양됩니다. 3D 모델은 생리학적 조건에 가까운 조건에서 침입 및 암-기질 상호 작용을 연구할 수 있는 실험 도구 역할을 합니다.

레이저 미세해부: 3D 유기형 배양 모델에서 침입하는 대장암 세포를 분리하는 기술

이 비디오는 레이저 캡처 현미해부를 사용하여 이질적인 세포 집단에서 단일 세포를 얻는 기술을 설명합니다. 단일 분리 세포는 추가 게놈 연구 또는 암 연구에 사용할 수 있습니다.

레이저 캡처 미세해부를 사용한 단일 세포 샘플링: 이질적인 세포 집단에서 표적 세포를 수확하는 기술

SIVQ-LCM은 레이저 캡처의 microdissection (LCM) 프로세스를 구동하는, 컴퓨터 알고리즘 공간적 불변 벡터 양자화 (SIVQ)를 마구 혁신적인 접근법이다. SIVQ-LCM의 흐름은 크게 연구와 임상 모두에서 응용 프로그램과 함께, 미세 절제의 속도와 정확성을 향상시킵니다.

ArcturusXT 악기 SIVQ-LCM 프로토콜

미세 절제가 광범위하게 조직 내에서 DNA, RNA, 단백질의 시험을 위해 사용되어왔다. 레이저 캡처 현미경 (LCM)는 가장 일반적으로 사용되는 방법이지만 새로운 밀링 기술 mesodissection는 최근 유효하다. 우리는 mesodissected 포르말린 고정 파라핀 결핵균 육아종의 내장 조직 슬라이드에서 RNA 추출을 보여줍니다.

복구하는 새로운 미세 절제 접근<em&gt; 결핵균</em폐 육아종 임베디드 포르말린 고정 파라핀에서&gt; 특정 성적 증명서

개별 도파민 뉴런의 단리 또는 직접 또는 간접 면역과 복측 피개 영역은 레이저 미세 절제를 캡처하여 설명된다. 적외선 레이저를 이용하여 유리 슬라이드 조직으로부터 단리 및 적외선 및 자외선 레이저의 조합을 이용하여 막 slide에서 파라미터 논의된다.

레이저 캡처 이외에 Microdissection - 개별 도파민 신경 세포의 분리 및 전체 복부 피개 영역의 데모

여기에서는 전사 프로파일링을 위한 특정 식물 세포 유형의 레이저 보조 미미해부에 대한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 다양한 종과 세포 유형에 적합하지만, 십자화과 속 Boechera에서 유성 생식 및 종말 생식에 중요한 암컷 생식세포의 접근하기 어려운 세포에 초점을 맞추고 있습니다.

개별 세포 유형의 전사 프로파일 링을위한 도구로 레이저를 이용한 이외에 Microdissection (LAM)

레이저 미세 해부 (LMD)는 신경교종 이질성과 침략을 중재하는 통로를 밝히기 위하여 이용될 수 있는 민감하고 높게 재현가능한 기술입니다. 여기에서, 우리는 전사성 분석에 선행된 레이저 LMD를 사용하여 신경교종 조직에서 이산 지역을 격리하기 위하여 최적화된 프로토콜을 기술합니다.

종양 내 이질성, 온코스트림 및 침략의 공간 및 분자 특성화를 위한 신경교종 소구역의 레이저 캡처 미세 분해

이 프로토콜은 레이저 미세 해부를 사용하여 조직학적으로 해결된 세포 집단의 농축을 위해 염색된 얇은 조직 섹션 이미지로부터 병리학적으로 확인된 관심 영역의 인공 지능 기반 세분화를 위한 고처리량 워크플로우를 설명합니다. 이 전략에는 관심 있는 세포 집단을 나타내는 경계선을 레이저 현미경으로 직접 전송할 수 있는 새로운 알고리즘이 포함되어 있습니다.

종양 미세환경의 미세스케일 프로테오믹 분석을 위한 산업화된 인공 지능 유도 레이저 미세 해부

구강 점막하 섬유증 조직의 레이저 캡처 미세해부를 통해 형태학적 및 공간 정보가 포함된 다중 오믹스 데이터를 분석하기 위해 조직학적 관심 영역에서 세포를 정밀하게 추출할 수 있습니다.

Laser Capture Microdissection에 의한 구강 점막하 섬유증 샘플에서 형태학적 및 공간적 정보가 있는 세포 분리

이 프로토콜은 레이저 캡처 미세해부를 사용하여 파라포름알데히드 고정 및 최적 절단 온도 화합물이 포함된 마우스 간 조직의 조직학적 영역에서 RNA를 분리하는 방법을 설명하며, 이를 통해 표적 하류 유전자 발현 분석을 가능하게 합니다.

RNA 분석을 위한 파라포름알데히드 고정 마우스 간 조직의 레이저 캡처 미세 해부

배우세요 레이저 미세 해부와 CEL-Seq2를 결합한 단일 조직 전사체 분석 방법을. Caenorhabditis elegans 꼬리 끝에서 유전자 발현을 연구하고 비모델 종에도 적용할 수 있는 이 기술은 조직 특이적 RNA 분석에 탁월합니다.

종에 구애받지 않는 단일 조직 응용 분야를 위한 레이저 미세 해부

더 많은 동영상 탐색