Name: 만성 요통의 기계론적 조사를 위한 쥐의 등 기계적 민감도 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-30T13:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 10 s
Description: 배우세요 쥐 등 기계적 민감도 평가 방법으로 만성 요통 모델에서 치료 개입 효과를 검증하세요. Von Frey 테스트 기반의 이 표준화된 BMS 테스트는 재현 가능한 결과를 제공합니다.

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이 연구는 Fondation Chiropratique du Québec과 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(MP: 보조금 #06659)의 보조금으로 지원되었습니다. 홍콩의 기여는 Université du Québec à Trois-Rivières (PAIR 프로그램)의 지원을 받았습니다. BP의 기여는 Fonds de recherche du Québec en Santé (FRQS)와 Fondation Chiropratique du Québec의 지원을 받았습니다. TP의 기여는 캐나다 자연 과학 및 공학 연구 위원회(Natural Sciences and Engineering Research Council of Canada)의 지원을 받았습니다. NE와 EK의 기여는 Fondation Chiropratique du Québec의 지원을 받았습니다. MP의 기여는 FRQS에 의해 지원되었습니다.

실험 프로토콜은 Université du Québec à Trois-Rivières의 동물 관리위원회의 승인을 받았으며 캐나다 동물 관리위원회의 지침과 국제 통증 연구 협회 (IASP)의 연구 및 윤리 문제위원회의 지침을 준수했습니다. 본 연구에서는 6마리의 수컷 Wistar 쥐(체중: 320-450g, 연령: 18-22주)를 사용했습니다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조). 이 쥐의 데이터는 이전 연구30의 더 큰 샘플에서 나온 것입니다.
1. 실험 준비
<ol><li>음식과 물을 임의 로 이용할 수 있고 14시간에서 10시간의 명암 주기가 있는 표준 동물 시설의 온도 조절실에 동물을 수용합니다. 실험 당일 모든 동물의 건강 상태가 양호한지 확인하십시오.</li>
	<li>아래 단계에 따라 만성 요통 동물 모델을 생성합니다.<ol><li>만성 요통을 유발하기 위해, 이전 보고에 따라 등 근육에 완전 프로인트 보조제(CFA)를 근육내 주사한다 14,30,31.</li>
		<li>이소플루란(유도 4%, 유지 관리 2%-2.5%)을 사용하여 동물을 마취합니다.</li>
		<li>27G 바늘을 사용하여 프로토콜 요구 사항에 따라 즉시 사용할 수 있는 CFA의 유중수 에멀젼 150μL( 재료 표 참조)를 척추주위 근육에 일방적으로 또는 양측으로 주입합니다.</li>
		<li>주사 완료 후 최소 3분 동안 주사 바늘을 제자리에 두십시오. 대조군의 동물에 대해서는 동일한 과정을 사용하되 30, CFA 대신 멸균 생리식염수 용액(150 μL, 0.9%)을 주입한다.</li>
	</ol></li>
	<li>테스트 케이지를 제작합니다.<ol><li>각 동물에 대해 하나의 챔버로 구성된 두 동물에 대한 테스트 케이지를 만듭니다. 참고: 본 연구의 경우 각 챔버의 치수는 길이 x 너비 x 높이: 50 x 20 x 7cm입니다( 재료 표 참조).</li>
		<li>33cm 길이의 플렉시 유리 다리 4개에 인접한 두 개의 챔버를 장착합니다. 챔버 벽에는 투명한 플렉시 유리를 사용하되 검은색 플렉시 유리를 사용하여 챔버를 분리하여 동물이 서로 못하도록 합니다.</li>
		<li>와이어 간 거리가 8mm인 1mm 와이어로 만든 스테인리스 스틸 메쉬를 사용하여 테스트 케이지의 바닥과 천장을 만듭니다(그림 1).</li>
	</ol></li>
</ol>2. 뒤 기계적인 감도 (BMS) 시험
<ol><li>첫 번째 테스트 전에 연속 5-7일 동안 하루 30분 동안 테스트 케이지에 동물을 익숙하게 하십시오. 필요에 따라 테스트를 반복합니다.</li>
	<li>2% 이소플루란31 을 사용하여 동물을 마취시킨다( 재료 표 참조).</li>
	<li>이소플루란 마취 하에 엎드린 자세에서 동물의 모발 트리머를 사용하여 관심 부위(T6에서 L6 척추 수준까지)의 뒷머리를 면도합니다( 재료 표 참조). 반복 측정의 경우 행동 평가 없이 하루에 3일마다 뒷머리를 면도하여 자극이 항상 피부에 직접 적용되도록 합니다. 영구 마커로 피부에 블랙 마크를 그려 다른 날에 테스트를 반복 할 때 필라멘트가 항상 같은 부위에 적용되도록합니다.</li>
	<li>시험 당일, 동물이 진정될 때까지 시험 전 15-30분 동안 동물을 시험 케이지에 넣습니다.</li>
	<li>테스트하는 동안 Von Frey 필라멘트(0.07, 0.16, 0.4, 0.6, 1, 2, 4, 6, 10, 15 및 26g)를 뒤쪽에 수직으로 도포하고 항상 2g 필라멘트로 시작하여 상하 방법15 를 사용합니다( 재료 표 참조). 동물 뒤에서 필라멘트로 동물의 뒤쪽에 천천히 접근하십시오.<ol><li>동물이 깨어 있고 네 발에 서서 움직이지 않을 때만 필라멘트를 바르십시오. 15-30초마다 가시돌기(그림 2)에서 10mm 떨어진 관심 영역에 양측으로 2초 동안 필라멘트를 적용합니다. 참고: 동물이 필라멘트를 바르는 동안 또는 그 직후에 다음 행동 중 하나 이상을 나타내면 반응이 양성으로 간주됩니다: (1) 근육 경련, (2) 아치형(등 신전), (3) 등을 보기 위해 목을 돌리기, (4) 등을 긁거나 핥기, (5) 탈출.</li>
	</ol></li>
	<li>앞서도 15에서 설명한 바와 같이, 필라멘트의 적용으로 반응이 관찰되지 않으면, 직렬에서 더 높은 힘으로 다음 필라멘트를 인가한다. 응답이 관찰되면 계열에서 더 낮은 힘의 다음 필라멘트를 사용하십시오. 첫 번째 행동 변화 후 4개의 판독값을 얻을 때까지 이 절차를 계속합니다(일련의 "응답 없음" 후 응답 또는 일련의 "응답" 후 응답 없음).</li>
	<li>데이터 수집이 완료되면 다음 공식을 사용하여 Chaplan et al.15에 설명된 대로 기계적 임계값의 50%를 나타내는 값을 계산합니다. 50% 임계값(g) = 10(Xf+kδ)/10,000 알림: 이 공식에서 "Xf"는 마지막으로 사용된 폰 프레이 필라멘트의 핸들 마크입니다. "k"는 동물의 반응 패턴15에 기초한 표 형식 값이고, "δ"는 폰 프레이 필라멘트 사이의 핸들 마크 증분의 평균이다. 실험 설계 및 실험 요구에 따라 척추의 한쪽만 평가하여 하나의 임계값을 보고하거나 두 측면을 평가하고 임계값을 별도로 또는 평균으로 보고할 수 있습니다. 계산 템플릿32에 대해서는 보충 표 1을 참조하십시오.</li>
</ol>3. 동물 회복
<ol><li>근육 주사가 완료된 후 마취를 중단하고 회복을 위해 동물을 표준 하우징 케이지에 단독으로 두십시오.</li>
	<li>회복 기간 동안 동물의 행동을 검사하고 방치하지 마십시오.</li>
	<li>동물이 마취에서 회복되고 5 분 이내에 정상적으로 움직이는지 확인하십시오. 그런 다음 동물을 다른 동물과 함께 일반적인 하우징 케이지로 되돌립니다. 참고: 실험이 끝나면 동물은 깊은 이소플루란 마취(5%) 하에 10% 포르말린 용액으로 심장을 통해 관류됩니다. 그런 다음 주입된 부위의 등 근육을 추출하여 조직학 및 염증 변화 확인을 수행합니다.</li>
</ol>

<ol><li>Hartvigsen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What+low+back+pain+is+and+why+we+need+to+pay+attention%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">What low back pain is and why we need to pay attention.</a> Lancet. 391 (10137), 2356-2367 (2018).</li>
<li>Manchikanti, L., Singh, V., Falco, F. J., Benyamin, R. M., Hirsch, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+low+back+pain+in+adults%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromodulation%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of low back pain in adults.</a> Neuromodulation. 17, Suppl 2 3-10 (2014).</li>
<li>Urits, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Low+back+pain%2C+a+comprehensive+review%3A+Pathophysiology%2C+diagnosis%2C+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pain+and+Headache+Reports%22%5BJournal%5D)">Low back pain, a comprehensive review: Pathophysiology, diagnosis, and treatment.</a> Current Pain and Headache Reports. 23 (3), 23(2019).</li>
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<li>Shi, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+studying+the+etiology+and+treatment+of+low+back+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Orthopaedic+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models for studying the etiology and treatment of low back pain.</a> Journal of Orthopaedic Research. 36 (5), 1305-1312 (2018).</li>
<li>Olmarker, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Puncture+of+a+lumbar+intervertebral+disc+induces+changes+in+spontaneous+pain+behavior%3A+An+experimental+study+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Puncture of a lumbar intervertebral disc induces changes in spontaneous pain behavior: An experimental study in rats.</a> Spine. 33 (8), 850-855 (2008).</li>
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<li>Hu, S. -J., Xing, J. -L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+experimental+model+for+chronic+compression+of+dorsal+root+ganglion+produced+by+intervertebral+foramen+stenosis+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">An experimental model for chronic compression of dorsal root ganglion produced by intervertebral foramen stenosis in the rat.</a> Pain. 77 (1), 15-23 (1998).</li>
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<li>Kobayashi, Y., Sekiguchi, M., Konno, S. -I., Kikuchi, S. -I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+intramuscular+pressure+in+lumbar+paraspinal+muscles+and+low+back+pain%3A+Model+development+and+expression+of+substance+P+in+the+dorsal+root+ganglion%5BTitle%5D)+AND+%22Spine%22%5BJournal%5D)">Increased intramuscular pressure in lumbar paraspinal muscles and low back pain: Model development and expression of substance P in the dorsal root ganglion.</a> Spine. 35 (15), 1423-1428 (2010).</li>
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<li>Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+assessment+of+tactile+allodynia+in+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw.</a> Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).</li>
<li>Deuis, J. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Analgesic+effects+of+clinically+used+compounds+in+novel+mouse+models+of+polyneuropathy+induced+by+oxaliplatin+and+cisplatin%5BTitle%5D)+AND+%22Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">Analgesic effects of clinically used compounds in novel mouse models of polyneuropathy induced by oxaliplatin and cisplatin.</a> Neuro-Oncology. 16 (10), 1324-1332 (2014).</li>
<li>Randall, L. O., Selitto, J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+measurement+of+analgesic+activity+on+inflamed+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+Internationales+de+Pharmacodynamie+et+de+Therapie%22%5BJournal%5D)">A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissue.</a> Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 111 (4), 409-419 (1957).</li>
<li>D'Amour, F. E., Smith, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+determining+loss+of+pain+sensation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">A method for determining loss of pain sensation.</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 72 (1), 74-79 (1941).</li>
<li>Woolfe, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+evaluation+of+the+analgesic+actions+of+pethidine+hydrochlodide+%28Demerol%29%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacology+and+Experimental+Therapeutics%22%5BJournal%5D)">The evaluation of the analgesic actions of pethidine hydrochlodide (Demerol).</a> Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 80 (3), 300-307 (1944).</li>
<li>Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+and+sensitive+method+for+measuring+thermal+nociception+in+cutaneous+hyperalgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia.</a> Pain. 32 (1), 77-88 (1988).</li>
<li>Deuis, J. R., Vetter, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+thermal+probe+test%3A+A+novel+behavioral+assay+to+quantify+thermal+paw+withdrawal+thresholds+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Temperature%22%5BJournal%5D)">The thermal probe test: A novel behavioral assay to quantify thermal paw withdrawal thresholds in mice.</a> Temperature. 3 (2), 199-207 (2016).</li>
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<li>Griffioen, M. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evaluation+of+dynamic+weight+bearing+for+measuring+nonevoked+inflammatory+hyperalgesia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Nursing+Research%22%5BJournal%5D)">Evaluation of dynamic weight bearing for measuring nonevoked inflammatory hyperalgesia in mice.</a> Nursing Research. 64 (2), 81-87 (2015).</li>
<li>Brodkin, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+and+implementation+of+a+novel+high-throughput+behavioral+phenotyping+instrument+for+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">Validation and implementation of a novel high-throughput behavioral phenotyping instrument for mice.</a> Journal of Neuroscience Methods. 224, 48-57 (2014).</li>
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</ol>

저자는 이해 상충으로 이어질 수 있는 경쟁적인 이해 관계나 관계를 선언하지 않습니다.

중요 단계 BMS 테스트는 변화가 발생할 것으로 예상되는 시점 (통증 모델) 또는 약리학 적 또는 비 약리학 적 개입 후에 한 시점 또는 며칠 또는 몇 주에 걸쳐 반복적으로 쥐의 등에서 기계적 민감도를 평가하는 간단한 방법입니다. 이 방법의 중요한 문제에는 테스트 케이지가 포함되며, 그 치수는 쥐가 편안하지만 너무 많이 움직이지 않도록 보장해야 합니다. 동물의 등은 재현 가능한 기계적 자극을 위해 메쉬 천장을 통해 접근할 수 있어야 합니다. 역치 평가의 변동성을 제한하려면 기계적 자극이 피부에 직접 적용되도록 조사 중인 등 부위를 면도해야 합니다. 또한 동일한 부위에 기계적 자극을 가하기 위해 피부를 표시해야 합니다. 마지막으로, 실험자는 동물에게 보이지 않도록 동물 뒤에서 피부에 필라멘트에 접근해야 합니다.
뒷발15,16에서 기계적 감도를...

요통(low back pain, LBP)은 전 세계적으로 장애의 주요 원인이며, 이는 개인적, 경제적, 사회적으로 극적인 결과를 초래한다 1,2,3,4. 매년 인구의 약 37%가 요통의 영향을 받습니다5. 요통은 보통 몇 주 이내에 해결되지만 개인의 24%-33%에서 재발하고 사례의 5%-10%에서 만성화된다2. 요통의 메커니즘과 영향 및 다양한 치료적 중재의 효과를 이해하기 위해 요통의 여러 동물 모델을 사용하여 요통의 임상 상태 또는 요통의 일부 구성 요소를 모방했습니다6. 이들 마우스 및 래트 모델은 다음 범주 중 하나 이상으로 분류될 수 있다: (1) 추간판 요통 7,8,, (2) 신경근성 요통 8,9,10,11, (3) 후관절 골관절염 12, 및 (4) 근육-유도성 요통 13,14 . 인간이 아닌 종에서는 통증을 직접 측정할 수 없기 때문에, 이러한 모델에서 통증과 유사한 행동을 정량화하기 위한 수많은 실험이 개발되었다8. 이 테스트는 유해한 자극 (기계적 힘 15,16,17, 열 자극18,19,20,21,22,23,24,25)에 의해 유발되거나 자발적으로 생성 된 행동 26,27,28,29를 평가합니다.
기계적 자극을 사용하는 방법에는 Von Frey 테스트 15,16 및 Randall-Selitto 테스트17이 포함됩니다. 열 자극을 사용하는 방법에는 테일 플릭 테스트(18), 핫 플레이트 테스트(19), 하그리브스 테스트(20) 및 열 프로브 테스트(21)가 있습니다. 저온 자극을 사용하는 방법에는 냉판 시험(cold plate test)22, 아세톤 증발 시험(acetone evaporation test) 23 및 저온 발바닥 분석(cold plantar assay)24가 포함된다. 자발적인 행동을 위한 방법으로는 찡그린 얼굴 척도(grimace scales)26, 굴을 파는 방법(burrowing)27, 체중부하 및 보행 분석(weight-bearing and a-pathit analysis)28, 자동화된 행동 분석(automated behavioral analysis)29 등이 있다. 이러한 수많은 테스트에도 불구하고 그 중 어느 것도 허리 통증 모델을 위해 특별히 설계되지 않았습니다.
이 연구의 목적은 쥐 등의 기계적 민감도를 평가하기 위한 간단하고 접근 가능한 테스트를 마련하는 것입니다. 이 기술은 주로 뒷발15,16의 발바닥 표면에 적용된 Von Frey 테스트를 기반으로합니다. Von Frey 테스트의 기본 원리는 관심 영역에 일련의 모노필라멘트를 사용하여 미리 결정된 일정한 힘을 전달하는 것입니다. 쥐가 통각 행동을 보이는 경우 반응은 양성으로 간주됩니다. 그런 다음 반응을 유발한 필라멘트를 기반으로 기계적 임계값을 계산할 수 있습니다. 본 연구에서는 쥐 등의 기계적 민감도를 결정하기 위해 Von Frey 테스트에서 채택한 간단하고 접근 가능한 방법이 제공됩니다.

<table><tbody><tr><td>Aerrane(이소플루란, USP) - 수의학 전용</td><td>Baxter</td><td>NDC 10019-773-60</td><td>흡입 마취제 ; 마취 유도용</td></tr><tr><td>DIN 02225875 Complete Freund Adjuvant (CFA)</td><td>Fisher Scientific</td><td>#77140</td><td>Mycobacterium butyricum의 사멸 세포를 가진 Complete Freund Adjuvant (CFA)의 유중수 에멀젼.</td></tr><tr><td>수컷 Wistar Rats</td><td>Charles River Laboratories</td><td></td><td>체중: 320&ndash; 450 g; 나이 : 18-22 주.</td></tr><tr><td>Penlon Sigma Delta 기화기</td><td>Penlon</td><td>990-VI5K-SVEEK</td><td>Penlon Sigma Delta 기화기 마취에 사용</td></tr><tr><td>Sharpie 영구 마커</td><td>Sharpie</td><td>BC23636</td><td>영구 마커, 파인 포인트, 블랙</td></tr><tr><td>테스트 케이지</td><td>맞춤형</td><td></td><td>너비 : 20cm;&nbsp; 길이 : 50cm; 바닥에서 상단까지의 높이: 40cm; 하단 메쉬에서 케이지 상단까지의 높이 : 7cm; 벽 두께: 5mm; 메시: 1mm 와이어와 8mm 인터-와이어 거리&nbsp; &nbsp; &nbsp;</td></tr><tr><td>폰 프레이 필라멘트</td><td>에스테시오, 정확한 촉각 감각 평가기</td><td>514000-20C</td><td>필라멘트 0.07 g에서 26 g까지의</td></tr><tr><td>Wahl 전문 동물, ARCO 무선 애완 동물 클리퍼, 트리머 그루밍&nbsp;</td><td>Wahl</td><td>Kit #8786-1201</td><td>동물 털 트리머, 면도용, 제로 블레이드&nbsp;</td></tr></tbody></table>

만성 요통의 기계론적 조사를 위한 쥐의 등 기계적 민감도 평가

Back Mechanical Sensitivity Assessment in the Rat for Mechanistic Investigation of Chronic Back Pain

요통은 전 세계적으로 장애의 주요 원인이며 극적인 개인적, 경제적, 사회적 결과를 초래합니다. 새로운 치료법을 개발하기 위해서는 번역 관점에서 새로운 치료법의 메커니즘과 효과를 조사하기 위한 동물 모델이 필요합니다. 허리 통증의 여러 설치류 모델이 현재 조사에 사용됩니다. 그러나 놀랍게도 요통 모델에서 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 행동 테스트는 검증되지 않았습니다. 이는 요통이 추정되는 동물이 통각 수용 자극에 국소 과민증을 나타내는지 확인하고 요통을 완화하기 위해 고안된 중재 중 민감도를 모니터링하는 데 중요합니다. 이 연구의 목적은 쥐 등의 기계적 민감도를 평가하기 위한 간단하고 접근 가능한 테스트를 마련하는 것입니다. 이 방법을 위해 특별히 테스트 케이지를 제작했습니다. 세로 x 너비 x 높이: 50 x 20 x 7cm, 상단에 스테인레스 스틸 메쉬가 있습니다. 이 테스트 케이지를 사용하면 등에 기계적 자극을 가할 수 있습니다. 테스트를 수행하기 위해 관심 영역에서 동물의 등을 면도하고 필요에 따라 다른 날에 테스트를 반복하도록 테스트 영역을 표시합니다. 기계적 역치는 앞에서 설명한 상하 방법을 사용하여 척수주위 근육에 적용된 Von Frey 필라멘트로 결정됩니다. 긍정적인 반응에는 (1) 근육 경련, (2) 아치형(등 신전), (3) 목 회전, (4) 등을 긁거나 핥기, (5) 탈출이 포함됩니다. 이 행동 테스트(BMS(Back Mechanical Sensitivity) 테스트)는 요통의 예방 및 관리를 위한 치료적 개입 개발을 위한 요통의 설치류 모델을 사용한 기계론적 연구에 유용합니다.

이 방법은 CFA와 대조군 쥐 사이의 기계적 민감도를 비교하기 위해 전체 데이터와 통계가 제시된 이전 연구에서 사용되었습니다30. 이전 연구에 포함된 6마리의 래트로부터의 대표적인 개별 데이터(좌측 및 우측 역치의 평균)가 도 3 및 표 1에 제시되어 있다. 기준선에서 기계적 민감도는 그룹 간에 유사했습니다. 요추 근육에 CFA를 근육 주사하면 CFA 주사 후 7일에서 28일까지 기계적 민감도(역치 감소)가 현저히 증가했습니다. 대조적으로, 대조군(CTL) 쥐는 이러한 변화를 나타내지 않았습니다. 그림 3에서 볼 수 있듯이 이러한 유형의 행동 평가에서 예상한 대로 동물 내 및 동물 간의 변동성이 관찰되었습니다. 그러나 과민성 CFA 쥐는 변동성이 감소한 것으로 나타났습니다. 이전 연구 30에 기초하여, 16마리의 동물 (8 CFA 및 8 CTL)은 5...

요통의 예방 및 관리를 위한 새로운 치료적 개입을 개발하기 위해 동물 모델은 번역 관점에서 이러한 치료법의 메커니즘과 효과를 조사해야 합니다. 현재 프로토콜은 쥐의 기계적 민감도를 평가하기 위한 표준화된 방법인 BMS 테스트를 설명합니다.

Low back pain is the leading cause of disability worldwide, with dramatic personal, economic, and social consequences. To develop novel therapeutics, ...

이 프로토콜은 후면의 기계적 감도를 테스트하는 데 유용합니다. 만성 요통의 쥐 모델에서 종단 설계에 특히 흥미로운데, 그 목표는 유해한 자극에 대한 등 민감도를 감소시키기 위한 중재의 효과를 조사하는 것입니다. 이 방법은 간단하고 접근하기 쉬우며 훈련된 실험자에 의해 재현 가능한 결과를 얻을 수 있습니다.이것은 주로 뒷발의 기계적 민감도를 평가하는 데 일반적으로 사용되는 Von Frey 테스트를 기반으로 합니다. 다른 행동 테스트와 마찬가지로 실험자는 필라멘트의 적용을 표준화하는 연습을 해야 하며 기계적 자극에 의해 생성된 행동이 다른 행동과 쉽게 구별될 때까지 연습해야 합니다. 테스트는 간단하고, 그렇지 않으면 사용하는데 큰 어려움이 없어야 합니다.이 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 박사 과정 학생 인 Nasim Eskandari가 될 것입니다. 쥐에게 만성 요통을 유발하려면 등 근육에 Complete Freund's Adjuvant(CFA)를 근육 주사합니다. 27 게이지 바늘을 사용하여 즉시 사용 가능한 CFA의 유중수 에멀젼 150마이크로리터를 척수주위 근육에 일방적으로 또는 양측으로 주입합니다.바늘을 최소 3분 동안 제자리에 두십시오. 다음으로, 4 개의 33 센티미터 길이의 플렉시 유리 다리에 2 개의 인접한 챔버를 장착하여 각 동물에 대해 하나의 챔버를 포함하는 2 마리의 동물을위한 테스트 케이지를 제작합니다. 챔버 벽에는 투명한 플렉시 유리를 사용하고 검은 플렉시 유리를 사용하여 챔버를 분리하여 동물이 서로 못하게합니다.그런 다음 와이어 간 거리가 8mm인 1mm 와이어로 만든 스테인리스 스틸 메쉬를 사용하여 테스트 케이지의 바닥과 천장을 만듭니다. 첫 번째 테스트 전에 연속 5-7 일 동안 하루에 30 분 동안 테스트 케이지에 쥐를 익숙하게하십시오. 이소플루란 마취 하에 엎드린 자세에서 동물의 모발 트리머를 사용하여 관심 부위의 뒷털을 약 10개의 척추 수준 이상으로 면도합니다.반복적인 조치의 경우 행동 평가 없이 3일마다 뒷머리를 면도하여 자극이 항상 피부에 직접 적용되도록 합니다. 영구 마커로 피부에 표시를 그려 다른 날에 테스트를 반복 할 때 필라멘트가 항상 같은 부위에 적용되도록합니다. 시험 당일에는 쥐가 진정될 때까지 시험 전 15-30분 동안 쥐를 시험 케이지에 넣습니다.그런 다음 Von Frey 필라멘트를 뒤쪽에 수직으로 바르고 항상 2g 필라멘트로 시작하여 위/아래 방법을 사용합니다. 척추로부터 10 밀리미터 떨어진 관심 영역에 양측으로 2초 동안 필라멘트를 도포하고, 쥐가 깨어 있을 때, 그의 네 발로 서서, 움직이지 않을 때 매 15 내지 30초마다 처리한다. 필라멘트를 도포해도 반응이 관찰되지 않으면 직렬에서 더 높은 힘으로 다음 필라멘트를 적용합니다.등을 아치형으로 만들거나, 핥거나, 근육을 비틀거나, 필라멘트에서 멀어지거나, 회전하는 것과 같은 긍정적인 반응이 관찰되면 시리즈에서 더 낮은 힘으로 다음 필라멘트를 사용하십시오. 첫 번째 행동 변화 후 4개의 판독값을 얻을 때까지 절차를 계속합니다. 이 연구에서는 CFA와 대조군 쥐 사이의 기계적 민감도를 조사했습니다.기준선에서 기계적 민감도는 그룹 간에 유사했습니다. 요추 근육에 CFA를 근육 주사하면 기계적 민감도가 7 일에서 28 일로 현저히 증가했습니다. 대조적으로, 대조군 쥐는 어떤 유의한 변화도 나타내지 않았다.또한, 조직학적 검사를 통해 명확한 백혈구 침윤과 함께 CFA를 주사한 근육에서 만성 염증 변화의 존재를 확인했습니다. 식염수를 근육주사한 후 통제된 쥐의 건강한 등 근육이 참조로 표시됩니다. 기계적 과민증은 등 근육 외에도 표준 Von Frey 테스트로 뒷발에서 관찰되었습니다.필라멘트가 항상 뒤쪽에 수직으로 같은 방식으로 적용되고 적용 할 때 동물이 움직이지 않도록하는 것이 매우 중요합니다. 실험자는 또한 현대 운동에 대한 행동 반응을 구별하는 데 자신감을 가져야합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Behavior

행동

우리는 쥐의 척수 손상의 급성 또는 만성 기간을위한 두 촉각 감각 테스트 방법을 설명합니다. 이러한 확인 절차는 allodynia 같은 감각의 개발과 유지 보수를 검색할 수 있습니다.

쥐의 척수를 다친 후에 급성 및 만성 촉각 감각 테스트

수술의 단순하고 강력한 행동 결과로 인해 좌골 신경의 만성적인 수축이 neuropathic 고통의 사전 저명한 동물 모델 중 하나입니다. 수술에 따라 24 시간 내에 통증 과민성 설립되고 양적 폰 프라이 aesthesiometer (기계적 시험)과 발바닥 진통제 측정기 (온도 시험)를 사용하여 측정할 수있다.

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

Electronic von Frey 측정은 염증 사건 전후에 지속적으로 가해지는 압력 자극에 대한 설치류의 기계적 인출 임계값의 변화를 빠르고 정확하게 측정할 수 있기 때문에 고전적인 von Frey 필라멘트에 대한 효과적이고 개선된 대안입니다.

전자 폰 프레이 장치를 사용하여 생쥐의 뒷발에서 촉각 감도의 변화를 측정합니다.

Neuropathic 동물 모델에서 고통 응답의 정확한 평가 통증 질환의 병 태 생리학을 조사 하 고 새로운 진통제 개발에 중요 한. 우리는 뒷 다리 발 자동된 보 행 분석 시스템에 의해 설치류의 감각 기능을 결정 하는 과민 하 고 객관적인 방법을 제시.

만성 수축 부상으로 쥐에 있는 자동화 된 걸음 걸이 분석

우리 관절염 통증의 갖는 측정을 개발 하 고 화학적으로 유발 된 관절염의 다른 murine 모델에 자발적인 통증을 측정 하기 위한 표준화 된 방법으로 그것을 결합. 이러한 측정값은 민감하고 관절 통증의 종류에 대 한 재현입니다.

Murine 모델 Monoarticular 무릎 통증의 통증의 자연과 갖는 측정

여기에 제공된 프로토콜은 만성 허혈 후 통증(CPIP)의 동물 모델을 확립하는 단계를 상세히 설명합니다. 이것은 인간 복잡한 지역 고통 증후군 유형-I를 모방하는 잘 인식된 모형입니다. 기계적 및 열적 과민성은 CPIP 래트 모델에서 관찰된 캡사이신 유도 노시펜스 거동뿐만 아니라 추가로 평가된다.

쥐에 있는 복잡한 지역 고통 증후군 타입-I를 위한 만성 포스트 허혈 고통 모형

기계적 충돌-회피 분석은 다양한 마우스 통증 모델에서 정서적-동기 부여 반응을 더 잘 이해하기 위해 사용될 수 있는 마우스에서 통증 감수성의 비반사적 판독으로서 사용된다.

마우스의 통증 행동을 측정하기위한 기계적 충돌 회피 분석

마우스에서 요통 모델의 간단하고 신속한 유도를 위한 방법은 요로 플라스미노겐 활성제의 인대 내 주입을 사용하여 여기에서 제공됩니다.

우로키나아제(Urokinase)형 플라스미노겐 활성제(Plasminogen Activator)에 의한 생쥐 요통 모델

이 연구는 요통(LBP) 환자의 생체 역학적 변화를 평가하고 치료하기 위한 혁신적인 도구의 역할을 보여줍니다. 3명의 요통 환자는 평가 후 통증 강도와 기능 독립성이 개선된 것으로 나타났습니다. 이 기술은 맞춤형 재활 전략을 지원하여 맞춤형 중재를 위한 요통 생체 역학에 대한 통찰력을 제공합니다.

요통과 관련된 생체역학적 변화: 재활에서 운동 패턴 평가 및 치료 평가를 위한 혁신적인 도구

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Pressure Application Measurement를 사용한 마우스의 무릎 통각 과민 평가

배우세요 쥐 등 기계적 민감도 평가 방법으로 만성 요통 모델에서 치료 개입 효과를 검증하세요. Von Frey 테스트 기반의 이 표준화된 BMS 테스트는 재현 가능한 결과를 제공합니다.

만성 요통의 기계론적 조사를 위한 쥐의 등 기계적 민감도 평가

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