Name: HIV-1에 감염된 인간화 마우스에서 경구 조합 항레트로바이러스 치료 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-06T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: 학습하세요 HIV-1 감염 인간화 마우스에서 경구 조합 항레트로바이러스 치료법으로 바이러스 RNA 복제를 효과적으로 억제하는 방법을. 이 기술은 동물 스트레스를 줄이고 임상 전 연구의 안전성을 높입니다.

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우리는 이 연구에 사용된 항레트로바이러스 약물을 제공해 주신 로마스 겔레지우나스 박사와 제프 머리 박사 그리고 길르앗 사람들에게 감사드리고 싶습니다. 이 연구는 NCI 1R01CA239261-01 (Kitchen), NIH Grants P30AI28697 (UCLA CFAR Virology Core, Gene and Cell Therapy Core, and Humanized Mouse Core), U19AI149504 (PIs : Kitchen & Chen), CIRM DISC2-10748, NIDA R01DA-52841 (Zhen에게), NIAID R2120200174 (PIs : Xie & Zhen), IRACDA K12 GM106996 (Carrillo). 이 작업은 UCLA AIDS Institute, James B. Pendleton Charitable Trust 및 McCarthy Family Foundation의 지원도 받았습니다.

익명화된 인간 태아 조직은 상업적으로 획득되었다. 동물 연구는 모든 연방, 주 및 지역 지침에 따라 캘리포니아 대학교 로스앤젤레스 및 (UCLA) 동물 연구 위원회(ARC)에서 승인한 프로토콜에 따라 수행되었습니다. 구체적으로, 모든 실험은 UCLA ARC 프로토콜 번호 2010-038-02B에 따라 국립 보건원 (NIH) 및 국제 실험실 동물 관리 평가 및 인증 협회 (AALAC) 국제 실험실 동물의 주거 및 관리에 대한 권장 사항 및 지침에 따라 수행되었습니다. 모든 수술은 케타민 (100 mg / kg) / 자일 라진 (5 mg / kg) 및 이소 플루 란 마취 (2-3 부피 %)하에 수행되었으며 동물의 통증과 불편 함을 최소화하기 위해 모든 노력을 기울였습니다.
1. HIV-1에 감염된 인간화 마우스
참고: 인간화 마우스는 이전에30,31,49에 기재된 바와 같이 구축하였다. 프로토콜은 아래에 간략하게 설명되어 있습니다.
<ol><li>제조업체의 프로토콜에 따라 항-CD34 마이크로비드 를 통해 인간 태아 간에서 CD34+ 조혈 전구 세포를 정제합니다.</li>
	<li>수술 전에 6-8 주 된 NOD / SCID / IL2Rγ-/- (NSG) 수컷 및 암컷 마우스를 마취시키고 아 치사 조사 (2.7 Gy)하십시오.</li>
	<li>태아 간과 동일한 기증자로부터 유래 된 흉선을 간과 함께 신장 캡슐 아래에 이식하십시오.</li>
	<li>이식 후, 마우스에 0.5백만에서 100만 CD34+ 세포를 정맥주사한다.</li>
	<li>8-10주 후, 역궤도 블리드50을 통해 마우스 혈액 100μL를 EDTA 5μL가 포함된 미세 원심분리 튜브에 수집하고 350 x g에서 3분 동안 원심분리합니다.</li>
	<li>마우스가 HIV-1에 감염된 후 바이러스 부하를 모니터링하기 위해 혈장을 -80 ° C에 보관하십시오. 2mL의 83% NH4C 용액을 넣고 실온에서 5분 동안 배양하여 적혈구를 용해시킵니다.</li>
	<li>용해를 중지하기 위해 10% 태아 소 혈청(FBS)과 함께 RPMI 10mL를 추가합니다. 300 x g 에서 5분 동안 돌립니다.</li>
	<li>상청액을 흡인하십시오. 항체 패널( 재료 표 참조)로 세포를 염색하고 유세포 분석으로 분석하여 인간 면역 세포 생착을 확인합니다.</li>
	<li>순환하는 CD45+ 세포의 50% 이상을 나타내는 마우스를 인슐린 주사기를 사용하여 HIV-1 균주의 p24 200ng 이상(즉, NFNSXSL9 30,53,54)으로 역안와 정맥 주사 51,52로 감염시킵니다. 유세포 분석 분석을 위해 격주로 혈액을 수집하고 바이러스 부하를 측정합니다.</li>
</ol>2. ART 약물의 제조
<ol><li>개별 약물의 무게를 측정하십시오. 예를 들어, cART로 식품 컵 10개를 만들려면 멸균 세포 스크레이퍼를 사용하여 250mg의 FTC(엠트리시타빈), 375mg의 TDF, 500mg의 RAL 또는 ELV를 생물안전 캐비닛의 개별 멸균 15mL 원심분리 튜브에 넣습니다.</li>
	<li>250 mg FTC 튜브(최종 농도 250 mg/mL)에 1 mL의 DMSO를 추가하고, 375 mg TDF 튜브(최종 농도 250 mg/mL)에 1 mL의 DMSO를 추가하고, 500 mg RAL 또는 ELV 튜브(최종 농도 500 mg/mL)에 DMSO 1mL를 추가합니다. 완전히 용해되고 투명한 용액이 얻어 질 때까지 약물 혼합물을 교반하거나 피펫하십시오.</li>
	<li>0.22μM 공극 크기 친수성 PVDF 멤브레인 필터를 사용하여 멸균 주사기로 용액을 멸균합니다. 개별 약물 용액은 -20°C에서 12주 동안 보관할 수 있습니다.</li>
	<li>사용할 준비가 되면 용액이 투명해질 때까지 37°C에서 각 약물 용액의 분취량 하나를 새로 해동합니다. 피펫을 사용하여 잘 섞는다.</li>
	<li>약물을 결합하고 잘 혼합하여 마스터 믹스를 구성합니다 : DMSO에서 1mL의 FTC, DMSO에서 1.5mL의 TDF, DMSO에서 1mL의 ELV 또는 RAL. 알림: 이 양은 10개의 음식 컵을 만들 것입니다.</li>
	<li>350 μL의 cART 마스터 믹스 용액을 한 컵에 넣어 하나의 다이어트젤 부스트 cART 컵을 만듭니다.</li>
	<li>0.75mL의 트리메토프림-설파메톡사졸(최종 농도 0.48mg/mL)을 컵에 넣습니다.</li>
	<li>1mL 멸균 피펫 팁을 사용하여 완전히 저어줍니다.</li>
	<li>필요에 따라 마이크로 주걱으로 원래 컵의 cART가 들어 있는 식품 컵을 60mm 페트리 접시에 분배합니다. 쥐의 수에 따라 각 케이지에 대한 cART가 들어 있는 음식 컵의 양을 계산하기 위해 저울로 음식을 칭량한다.</li>
</ol>3. HIV-1 감염 마우스에 대한 ART 약물 투여
<ol><li>케이지에서 일반 차우를 제거하고 cART가 들어있는 식품 컵으로 교체하십시오. 알림: 평균적으로 마우스는 하루에 최대 5g의 음식을 섭취합니다. 약 1 개의 음식 컵을 2 일 동안 5 마리의 마우스에게 투여 할 수 있습니다.</li>
	<li>일주일에 세 번 cART 음식을 새로 고칩니다.</li>
	<li>섭취량을 모니터링하기 위해 사용한 컵의 무게를 측정합니다. 소비량을 확인하기 위해 매주 쥐의 무게를 측정하십시오.</li>
</ol>4. 실시간 PCR로 바이러스 부하 모니터링
<ol><li>인간 면역 세포 (CD4 및 CD8 T 세포 수준)와 BLT 마우스에서 2 주마다 역궤도 출혈로 HIV-1 복제를 평가합니다. 1.5-1.8단계의 지침에 따라 혈장을 수확합니다.</li>
	<li>8주 동안 경구 cART 투여 전과 도중에 HIV-1에 감염된 마우스의 혈장 바이러스 부하를 모니터링합니다. 바이러스 RNA 추출 키트를 이용하여 혈장으로부터 혈장 바이러스 RNA를 추출하고, 앞서 기술한 바와 같이 프라이머 및 프로브(물질 표 참조)를 이용한 실시간 PCR로 정량한다(문헌 표 참조). 다음 사이클링 프로토콜을 사용하십시오 : 48 ° C (15 분), 95 ° C (10 분), 95 ° C (15 초), 60 ° C (1 분) 동안 45 사이클.</li>
</ol>5. 유세포분석에 의한 CD4/CD8 비율 평가
<ol><li>1.5-1.8단계에 따라 격주 출혈의 말초 혈액에서 단일 세포 현탁액을 준비합니다.</li>
	<li>표면 마커로 세포를 염색하고 유세포 분석으로 분석합니다. 유세포분석에서 다음의 표면 마커 항체 27,30,43,49를 사용한다: CD45 (클론 HI30), CD8 (클론 SK1), CD3 (클론 OKT3), CD4 (클론 RPA-T4)27,30,42,49.</li>
</ol>

SK는 CDR3 Inc.의 설립자입니다. 나머지 저자는 잠재적 인 이해 상충으로 해석 될 수있는 상업적 또는 재정적 관계가없는 상태에서 연구가 수행되었다고 선언합니다.

경구 cART 투여 방법은 HIV-1에 감염된 인간화 마우스를 위해 고 영양 식품 내에 3 가지 항 레트로 바이러스 약물을 결합하여 개발되었습니다. 매일 주사에 의한 투여에 비해 경구 전달은 사용하기 쉽고, 투여 빈도를 제한하고, 동물 취급을 줄이고, 스트레스를 최소화하고, 안전성을 향상시킵니다55. 이 시점까지, 인간화 마우스 24,37,41에 대한 소수의 연구만이 마우스를 치료하기 위해 분쇄된 ART 약물을 함유한 식품 펠릿을 사용했습니다. 그러나 이 방법은 특수 식품 펠릿 제조에 대한 접근이 제한되어 있기 때문에 널리 적용하기가 어렵습니다. 다른 연구42,43,44,45,46<sup class...

만성 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)에 감염된 개인의 기대 수명은 조합 항레트로바이러스 치료(cART)로 크게 향상되었습니다1,2. cART는 HIV-1 복제를 성공적으로 감소시키고 대부분의 HIV-1 만성감염 참가자3에서 CD4+ T 세포 수를 정상으로 증가시켜 전반적인 건강을 개선하고 질병진행을 극적으로 감소시킵니다4. 그러나 잠복 HIV-1 저장소는 급성 감염 5,6,7 동안 ART가 시작된 경우에도 설정됩니다. 저장소는 ART 동안 수년에 걸쳐 지속되며 ART 중단 후 빠른 바이러스 반동은 잘 문서화되어 있습니다 8,9. ART에서 HIV에 감염된 사람들은 또한 심혈관 질환, 암 및 신경 장애와 같은 동반 질환의 위험이 더 높기 쉽습니다10,11,12. 따라서 HIV에 대한 기능적 치료가 필요합니다. HIV-1 감염에 대한 동물 모델은 새로운 HIV 치료 전략13,14,15를 개발하고 검증하는 데 명백한 이점을 제공합니다. 인간화 마우스는 작은 동물 모델로서 다른 조직에서 다계통 인간 면역 세포 재구성을 제공할 수 있으며, 이는 HIV 감염16,17,18,19에 대한 면밀한 연구를 가능하게 합니다. 인간화 모델 중에서, 인간화 골수-간-흉선 (BLT) 모델은 HIV-1 감염에 대한 기능적 인간 면역 반응뿐만 아니라 만성 HIV-1 감염을 성공적으로 요약한다 20,21,22,23,24. 따라서, 인간화 BLT 마우스 모델은 HIV 연구 분야에서 다양한 측면을 조사하는데 널리 이용되고 있다. 인간화 BLT 마우스는 지속적인 HIV-1 감염 및 병인의 요약을 위한 잘 확립된 모델일 뿐만 아니라 세포 치료 기반 개입 전략의 평가를 위한 결과적 도구이기도 합니다. 현재의 저자 및 다른 사람들은 인간화 BLT 마우스 모델이 지속적인 HIV-1 감염 및 병인25,26,27을 요약하고 세포 치료 기반 중재 전략 28,29,30,31,32,33을 평가하는 도구를 제공한다는 것을 입증했습니다.
매일 복용하는 항 레트로 바이러스 약물의 조합으로 구성된 cART 요법은 성공적으로 치료 된 개인의 바이러스 부하가 장기간 동안 검출 할 수없는 지점까지 HIV-1 복제를 억제합니다34. 임상적으로 관련된 cART 요법으로 HIV-감염된 인간화 마우스를 치료하는 결과는 HIV-1에 감염된 ART-치료된 개체에서 관찰된 것과 유사하다22: HIV-1 수준은 검출의 한계 이하로 억제되고, cART의 중단은 잠복 저장소(35)로부터 HIV 복제의 반동을 초래한다. 피하 (SC) 27,36,37 또는 복강 내 (IP) 37,38,39 주사는 인간화 마우스에서 cART 치료에 일반적으로 사용되는 경로입니다. 그러나, 집중적인 일일 주사는 신체적 구속에 의해 동물에게 스트레스를 유도한다(40). 또한 노동 집약적이며 날카로운 물건을 사용하는 동안 HIV에 대한 노출이 증가하기 때문에 연구자에게 잠재적으로 안전하지 않습니다. 경구 투여는 HIV-1에 감염된 개인이 복용하는 cART 약물의 흡수, 분포 및 배설을 모방하는 데 이상적입니다. 경구 투여는 일반적으로 항 레트로 바이러스 약물을 멸균 된 (마우스의 면역 결핍으로 인해 필요함) 음식 24,37,41 또는 물42,43,44,45,46에 넣는 맞춤형 및 종종 힘든 절차를 포함합니다. , 이는 많은 항 레트로 바이러스 약물과 화학적으로 양립 할 수도 있고 그렇지 않을 수도 있고, 마우스가 쉽게 먹거나 마시지 않는 것을 초래할 수도 있습니다 (신체의 복용량 및 약물 수준에 영향을 미칠 수 있음). 여기에 제안된 새로운 peroral cART 투여 방법은 다양한 유형의 항레트로바이러스 약물과의 호환성, 안전성 및 준비 및 투여 용이성, 매일 주사로 인한 동물 스트레스 및 불안 감소로 인해 이전 전달 시도를 능가합니다.
Tenofovir disoproxil fumarate (TDF), Elvitegravir (ELV) 및 Raltegravir (RAL)는 수용성이 낮은 약물입니다. 흥미롭게도, TDF의 증가된 생체이용률은 지방 식품에서 관찰되며, 이는 지방이 많은 음식에 의한 리파아제의 경쟁적 억제가 TDF47에 대한 특정 보호를 제공할 수 있음을 시사한다. 따라서 DietGel Boost 컵은 일반 설치류 차우(100g당 10g) 및 일반적인 마우스 고지방 식단(100g당 40-60g)48과 비교하여 적당한 지방 함량(100g당 20.3g)을 기반으로 전달 방법으로 일반 설치류 차우를 대체하기 위해 선택되었습니다. 한 컵의 총 무게는 75g입니다. 따라서 각 컵에는 3 일 동안 5 마리의 마우스에 충분한 양의 음식과 약물이 들어 있습니다.

<table><tbody><tr><td>60mm 페트리 접시</td><td>Thermo Scientific Nunc</td><td>150288</td><td>ART 식품</td></tr><tr><td>APC 항-휴먼 CD8 항체</td><td>Biolegend</td><td>344722</td><td>유세포 분석용</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa,</td><td>BD biosciences</td><td></td><td>유세포 수집용</td></tr><tr><td>CD34 마이크로비드</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-046-702</td><td>NSG-BLT 마우스 생성용</td></tr><tr><td>원심분리기 튜브</td><td>Falcon</td><td>14-432-22</td><td>ART</td></tr><tr><td>DietGel Boost</td><td>ClearH2O</td><td>72-04-5022</td><td>ART 식품 제조용</td></tr><tr><td>Elvitegravir</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gilead</td></tr><tr><td>Emtricitabine</td><td>Gilead</td><td></td><td>Gilead Gifted from Gilead</td></tr><tr><td>FITC anti-human CD3 Antibody</td><td>Biolegend</td><td>317306</td><td>flow cytometry</td></tr><tr><td>Flowjo software</td><td>FlowJo</td><td></td><td>유세포 분석 데이터 분석의</td></tr><tr><td>경우 HIV-1 전방 프라이머: 5&prime;-CAATGGCAGCAATTTCACCA-3&prime;;</td><td>바이러스 부하 RT-PCR</td>HIV-1 프로브에 대한 <td>사용자 정의</td> <td>IDT</td></tr><tr><td>: 5 &prime; -[6-FAM] CCCACCAACAGGCGGCCT TAACTG [Tamra-Q] -3 &prime;;</td><td>바이러스</td><td>부하 RT-PCR</td><td></td></tr><tr><td>HIV-1 리버스 프라이머에 대한 IDT 사용자 정의 : 5&prime;-GAATGCCAAATTCCTGCTTGA-3&prime;;</td><td>바이러스</td><td>부하 RT-PCR</td>인간 태아 조직 Advanced Bioscience Resources, Inc <td></td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마우스, 균주 NOD에 대한 IDT 사용자 정의. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>인간화 마우스를 건설하기 위해</td></tr><tr><td>Pacific Blue anti-human CD45</td><td>Biolegend</td><td>304022</td><td>플로우 사이토메트리</td></tr><tr><td>PerCP 안티-휴먼 CD4 항체</td><td>Biolegend</td><td>300528</td><td>플로우 사이토메트리를 위해</td></tr><tr><td>QIAamp Viral RNA Kits</td><td>Qiagen</td><td>&nbsp; 52904</td><td>바이러스 부하 측정용</td></tr><tr><td>Raltegravir</td><td>Merck</td><td></td><td>Gifted from Merck</td></tr><tr><td>멸균 세포 스크레이퍼</td><td>Thermo Scientific</td><td>179693</td><td>ART 식품 분량용</td></tr><tr><td>TaqMan RNA-To-Ct 1-Step Kit</td><td>Applied Biosystems</td><td>4392653</td><td>혈장 바이러스 부하 검출용</td></tr><tr><td>Tenofovir disoproxil fumarate</td><td>Gilead</td><td>Gifted from Gilead</td><td></td></tr><tr><td>Trimethoprim-Sulfamethoxazole</td><td>Pharmaceutical Associates</td><td>NDC 0121-0854-16</td><td>ART 식품을 멸균 상태로 유지하기 위해. 각 5mL 티스푼에는 다음이 포함되어 있습니다 200mg 설파메톡사졸, USP 40mg 트리메토프림, USP NMT 0.5% 알코올</td></tr></tbody></table>

hiv-1에 감염된 인간화 마우스에서 경구 조합 항레트로바이러스 치료

Oral Combinational Antiretroviral Treatment in HIV-1 Infected Humanized Mice

인간 면역 결핍 바이러스(HIV-1) 대유행은 전 세계적으로 계속 확산되고 있으며 현재 HIV에 대한 백신은 없습니다. 조합 항 레트로 바이러스 요법 (cART)이 바이러스 복제를 억제하는 데 성공했지만 HIV에 감염된 개체로부터 저장소를 완전히 근절 할 수는 없습니다. HIV 감염에 대한 안전하고 효과적인 치료 전략에는 다각적 인 방법이 필요하므로 HIV-1 감염에 대한 동물 모델의 발전은 HIV 치료 연구의 발전에 중추적입니다. 인간화 마우스는 HIV-1 감염의 주요 특징을 요약합니다. 인간화 마우스 모델은 HIV-1에 의해 감염 될 수 있고 바이러스 복제는 cART 요법으로 제어 될 수있다. 더욱이, cART 중단은 인간화 마우스에서 즉각적인 바이러스 반동을 초래한다. 그러나, 동물에 대한 cART의 투여는 비효과적이거나, 어렵거나, 또는 독성일 수 있고, 많은 임상적으로 관련된 cART 요법이 최적으로 활용될 수 없다. 연구자에게 잠재적으로 안전하지 않은 것과 함께 일반적으로 사용되는 집중적 인 일일 주사 절차에 의한 cART의 투여는 동물의 신체적 구속에 의한 스트레스를 유도합니다. 이 기사에 설명된 HIV-1에 감염된 인간화 마우스를 치료하는 새로운 경구 cART 방법은 HIV-1에 감염된 인간화 마우스에서 검출 수준 미만의 바이러스혈증 억제, CD4+ 회복 속도 증가 및 전반적인 건강 개선을 가져왔습니다.

체중이 25g인 평균 마우스가 하루에 4g의 음식을 섭취한다고 가정하면 경구 섭취를 통한 일일 약물 용량은 2.88mg/kg TFV, 83mg/kg FTC 및 768mg/kg RAL에 해당합니다. 최적화된 식품 요법이 독성이 있고 cART의 일일 주사와 비교하여 전반적인 건강에 영향을 미치는지 여부를 테스트하기 위해, 마우스 체중을 경구 또는 피하 주사를 통해 cART 전과 도중에 매주 모니터링하였다. 각 군에서 cART 투여 전에 유의한 체중 차이는 없었다(도 1). 그러나, 마우스 체중은 매일 cART SC 주사 동안 지속적으로 감소하였다. 대조적으로, 다이어트젤의 FTC/TDF/ELV 또는 FTC/TDF/RAL은 경구 cART 투여 5주 후 마우스 체중을 ART 이전 개시 수준으로 회복시켰다. 또한, 랄테그라비르 또는 엘비테그라비르 그룹 간에 유의한 체중 변화는 관찰되지 않았다.
경구 cART 투여가 매일 주사만큼 효과적...

이 프로토콜은 인간화 마우스에서 HIV-1 RNA 복제를 성공적으로 억제하는 경구 조합 항레트로바이러스 약물을 전달하는 새로운 방법을 설명합니다.

HIV-1에 감염된 인간화 마우스에서 경구 조합 항레트로바이러스 치료

The human immunodeficiency virus (HIV-1) pandemic continues to spread unabated worldwide, and currently, there is no vaccine available against HIV. ...

이 프로토콜은 인간화 마우스에서 HIV RNA 복제를 성공적으로 억제하는 경구 조합 항레트로바이러스 약물 또는 ART를 전달하는 새로운 방법을 설명합니다. 새로운 경구 ART 방법은 안전성, 준비 및 투여의 용이성, 일일 주사로 인한 동물 스트레스 감소로 인해 이전 전달 시도를 능가합니다. 인간화 마우스에서 HIV RNA 복제를 억제하기 위해 제안된 경구 전달 방법은 만성 HIV 감염 개인의 약물 전달을 밀접하게 모방하는 새로운 치료 치료법을 개발하기 위한 전임상 개념 증명 연구에 매우 유용할 것입니다.절차를 시연하는 것은 우리 실험실의 실험실 관리자이자 기술자 인 Valerie Rezak입니다. 개별 약물의 무게를 측정하는 것으로 시작하십시오. 멸균 세포 스크레이퍼를 사용하여 cART로 식품 컵 10개를 만들어 FTC 250mg, TDF 375mg, RAL 또는 ELV 500mg을 바이오 안전 캐비닛의 개별 멸균 50밀리리터 원심분리 튜브에 넣습니다.DMSO를 FTC 및 TDF 튜브에 추가하여 밀리리터당 250밀리그램의 최종 농도를 구성하고 RAL 또는 ELV 튜브에 밀리리터당 500밀리그램의 최종 농도를 구성합니다. 투명한 용액이 얻어질 때까지 교반하고 피펫팅하여 약물 용액을 혼합합니다. 멸균 주사기가있는 0.22 마이크로 미터 친수성 PVDF 멤브레인 필터를 사용하여 용액을 멸균하십시오.개별 약물 용액은 섭씨 영하 20도에서 12 주 동안 보관할 수 있습니다. 용액이 투명해질 때까지 섭씨 37도에서 사용하기 전에 각 약물 용액의 분취량 하나를 갓 해동하십시오. 피펫을 사용하여 잘 섞는다.DMSO에 용해 된 약물을 결합하고 잘 혼합하여 1 밀리리터의 FTC, 1.5 밀리리터의 TDF 및 1 밀리리터의 ELV 또는 RAL을 포함하는 마스터 믹스를 구성합니다. 350 마이크로 리터의 cART 마스터 믹스 용액을 컵에 넣고 하나의 다이어트 젤 부스트 cART 컵을 준비합니다. 컵에 0.75 밀리리터의 트리 메토 프림 설파 메 톡사 솔을 첨가하십시오.1 밀리리터 멸균 피펫 팁을 사용하여 철저히 저어줍니다. 피펫 팁을 사용하여 cART가 들어있는 식품 컵을 60mm 페트리 접시에 분취합니다. 마우스의 수에 따라 각 케이지에 대한 음식의 무게를 측정하여 음식 컵의 cART의 양을 계산하십시오.케이지에서 일반 차우를 제거하고 cART가 들어있는 식품 컵으로 교체하십시오. 일주일에 세 번 cART 음식을 새로 고칩니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

인간화 마우스를 사용하여 종양 특정 T 세포의 생성 및 특성이 여기에 설명되어 있습니다. 인간 thymic 조직 및 유전자 변형 인간의 조혈 줄기 세포는 면역 저하 된 쥐에 이식되어 있습니다. 안티 종양 면역 반응의 생체 시험에서 허용하는 엔지니어링 인간의 면역 시스템의 reconstitution에이 발생합니다.

줄기 세포 기반 유전자 치료 종양 모델로 BLT 인간화 마우스를 사용하여

이 비디오는 인간 면역결핍 바이러스-1(HIV-1)에 감염된 인간화 마우스 모델에서 경구용 복합 항레트로바이러스 요법(구강 cART)의 효과를 평가하기 위한 분석을 보여줍니다. 뉴클레오시드 역전사효소 억제제(nucleoside reverse transcriptase inhibitors) 및 인테그라제 가닥 전달 억제제(integrase strand transfer inhibitors)를 포함하여 HIV-1을 표적으로 하는 약물을 영양 보충제 및 항생제와 함께 투여합니다. HIV-1에 감염된 인간화 마우스가 이 혼합물을 섭취한 후, 마우스에 대한 주기적인 검사를 통해 바이러스 복제의 효과적인 억제를 평가합니다.

인간화 마우스 모델에서 HIV-1 감염을 치료하기 위한 경구용 복합 항레트로바이러스 요법

이 비디오는 인간 면역 결핍 바이러스(HIV)에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 마우스 모델을 생성하는 기술을 보여줍니다. 인간 태아 흉선 조직과 조작된 조혈모세포(HSC)는 면역이 심하게 저하된 쥐의 신장 캡슐에 이식됩니다. HIV에 대항하여 키메라 항원 수용체(CAR)를 발현하는 HSC는 흉선 조직과의 공동 국소화를 촉진하는 젤라틴 단백질 혼합물에 혼합되어 있습니다. 시술 후 HSC는 다양한 인간 면역 세포로 분화되어 HIV에 대한 기능적 인간 면역 체계를 가진 인간화 마우스 모델을 개발합니다.

HIV에 대한 공학적 면역을 가진 인간화 마우스 모델 구축

이 프로토콜은 HIV 감염에 대한 줄기 세포 기반 엔지니어링 면역을 가진 인간화 된 골수/간/흉선 마우스 모델을 구성하는 방법을 설명합니다.

인간화 된 마우스 모델에 HIV 감염에 대 한 줄기 세포를 기반으로 설계된 내성

이 프로토콜 신생아 NSG 쥐 방사선 조절로 인간 조 혈 줄기 세포의 intrahepatic 주입을 통해 humanized 쥐 (hu-NSG)를 설정 하는 방법을 제공 합니다. Hu NSG 마우스 HIV 감염 및 조합 항 레트로 바이러스 치료 (장바구니)에 취약 하 고 HIV 복제 및 대기 시간 조사에 대 한 적합 한 병 태 생리 모델 역할.

HIV 복제 및 대기 연구를 위한 인간 답게 끄 덕/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) 마우스 모델

이 프로토콜은 인간 면역 계통 및 간 세포 둘 다로 인간화한 마우스를 설치하는 믿을 수 있는 방법을 제공합니다. 인간 간세포 및 CD34+ 조혈 줄기 세포의 경내 주사를 통해 달성된 이중 재구성 면역 결핍 마우스는 인간 면역 결핍 바이러스-1 감염에 취약하고 관찰된 바와 같이 간 손상을 재현합니다. HIV에 감염된 환자.

HIV 관련 간 병인을 위한 이중 인간화 TK-NOG 마우스 모델 구축

여기에 기술된 것은 인간화된 마우스에 있는 HIV 감염의 역학을 공부하기 위한 3개의 실험적인 접근입니다. 첫 번째는 만성 감염 사건의 연구를 허용하는 반면, 두 후자는 1 차감염 또는 바이러스 재활성화 후 급성 사건의 연구를 허용합니다.

인간화 면역 결핍 마우스 모델에서 만성, 급성 및 재활성화 HIV 감염

우리는 줄기 세포 이식, 질 내 인간 면역 결핍 바이러스 노출 및 액적 디지털 PCR RNA를 기반으로 인간화 및 인간 면역 결핍 바이러스 감염 NOG 마우스 모델의 생성 및 평가를위한 프로토콜을 개발했습니다. 정량화.

질 내 HIV 노출 및 HIV 감염 치료를 위한 인간화된 NOG 마우스

HIV tropism는 바이러스 봉투의 V3 지역에서 유추하실 수 있습니다. V3는 PCR은 RT - PCR 중첩, 합성을 사용하여 세중의에 증폭하고, bioinformatic 소프트웨어를 사용하여 해석됩니다. 낮은 g2P 점수 1 개 이상의 시퀀스 (S)와 함께 샘플이 아닌 R5 바이러스로 분류됩니다.

V3의 HIV - 1 Tropism의 Genotypic 추론 사용 인구를 기반 시퀀싱

HIV에 감염된 세포 자연 킬러 세포 lytic 응답을 측정하기 위해 세포 독성의 assays는 대상 세포의 순도에 의해 제한됩니다. 우리는 여기서 CD4 아래로 조절하는 HIV - 1의 능력을 활용하여 HIV - 1 감염 기본 T - 세포 폭발의 고도 정화 인구의 절연을 보여줍니다.

준비 및 사용 HIV - 1 차 감염된 CD4 + 대상 세포로 T 세포 자연 킬러 세포 세포 독성 Assays에서

학습하세요 HIV-1 감염 인간화 마우스에서 경구 조합 항레트로바이러스 치료법으로 바이러스 RNA 복제를 효과적으로 억제하는 방법을. 이 기술은 동물 스트레스를 줄이고 임상 전 연구의 안전성을 높입니다.

HIV-1에 감염된 인간화 마우스에서 경구 조합 항레트로바이러스 치료

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