2022년 2월 15일
여기에서는 색상 반응을 기반으로 박테리아 운동성을 감지하는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법의 주요 장점은 평가하기 쉽고 정확하며 특수 장비가 필요하지 않다는 것입니다.
세균 운동성의 검출은 운동성이 병원성에 매우 중요하기 때문에 중요합니다. 여기에 설명된 프로토콜은 살아있는 박테리아의 세포 내 탈수소효소와 TTC의 색 반응을 기반으로 하기 때문에 박테리아 운동성을 검출하기 위한 신뢰할 수 있는 방법입니다. 박테리아 운동성을 감지하기 위한 TTC 반고체 한천 방법은 간단하고 작동하기 쉬우며 크고 값비싼 기기를 포함하지 않습니다.
이 방법은 임상 미생물학자 또는 연구자가 병원성 박테리아를 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 이 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 선임 실험가인 Xiyi Zhuang이 맡을 것입니다. 시작하려면 적절한 양의 증류수에 트립토스 10g, 염화나트륨 15g, 한천 4g을 추가하여 전통적인 반고체 매체를 준비합니다.
pH를 7.2로 조정하고 최종 부피를 1, 000 밀리리터로 구성합니다. 섭씨 121도에서 20분 동안 매체를 오토클레이브하고 배지를 3cm 높이의 10ml 테스트 튜브에 분배합니다. TTC 배지를 준비하려면 오토클레이브 처리된 기존 배지를 섭씨 50도로 냉각한 다음 100밀리리터의 배지에 5ml의 멸균 1% TTC 용액을 추가합니다.
배지를 혼합하여 10ml 테스트 튜브에 3cm 높이로 분배합니다. 한천 플레이트에서 박테리아의 단일 군체를 선택하고 접종 바늘을 사용하여 구멍을 뚫어 반고체 매체 모두에 접종합니다. Non-modal 변형률을 negative control로 포함하고 modal strain을 positive control로 포함하는 것을 잊지 마십시오.
한천 농도가 박테리아 운동성에 미치는 영향을 관찰하려면 다른 한천 농도를 포함하는 반고체 매체를 준비하고 천자로 접종하십시오. 튜브를 섭씨 37도에서 배양하고 배양 24-48시간 후에 결과를 관찰합니다. 펑크 선만 빨간색이면 박테리아를 비-모달(non-modal)로 특성화합니다.
붉은 색이 펑크 라인을 따라 바깥쪽으로 퍼지면 박테리아를 모달로 특성화하십시오. 기존 및 TTC 반고체 배지의 다양한 균주에 대한 박테리아 운동성을 비교하고 이 표에 요약했습니다. TTC 반고체 배지에서 24시간 배양 후, 황색포도상구균은 접종 라인을 따라 성장을 보였다.
반면, 대장균은 접종된 라인 주변의 모든 방향에서 성장을 보였습니다. 대장균에 대한 가장 높은 운동성은 0.3% 한천으로 제조된 TTC 반고체 배지에서 관찰되었으며, 배지는 거의 완전히 빨간색으로 변했습니다. 이에 반해, 0.5%한천에서는 적색 확산 면적이 감소하고 한천 농도가 0.8%로 증가하면서 확산이 연장되었다.바늘을 이용하여 접종하기 전에 pH를 7.2로 조정하고 오토클레이브 매체를 섭씨 50도로 냉각하는 것이 중요하다.
박테리아는 TTC를 포함하는 반고체 매체에 구멍을 뚫어 접종해야 합니다. 세균의 운동성을 감지하는 직접적인 방법입니다. 또한 전자 현미경에 의해 간접적으로 운동성을 검출하는 것도 가능하며
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본 연구는 병원성 이해에 필수적인 세균의 운동성을 검출하기 위한 신뢰할 수 있는 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 살아있는 세균의 세포 내 탈수소효소와 TTC의 발색 반응을 기반으로 하며, 최소한의 장비만으로 가능하며 간단하고 정확한 접근 방식을 제공합니다.
박테리아 운동성의 신뢰성 있는 검출은 초기 단계의 항감염제 발굴 과정에서 병원성 기전, 바이오필름 형성 및 약물 내성을 이해하는 데 필수적입니다. TTC 기반의 비색법은 운동성 표현형의 표준화된 정량적 평가를 가능하게 하여, 타겟 검증 및 기전적 리스크 제거에 있어 예측 신뢰도를 높여줍니다. 이 방법은 포트폴리오 선별 및 감염병 R&D의 리스크 조정 기반 추진 방향을 결정하는 데 유용한, 접근 가능하고 재현성 있는 결과물을 제공합니다.
이 TTC 기반 운동성 분석법은 초기 발견에서 리드 물질 확인으로 이어지는 연속 과정에 적합하며, 항감염제 포트폴리오를 위한 강력한 표현형 스크리닝 및 타겟 검증을 가능하게 합니다.