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DOI: 10.3791/63729-v
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This protocol highlights the role of sodium as a second messenger and demonstrates the existence of partially differentiated ubiquinol pools. It provides a simple approach for studying ubiquinol pools, which typically require specific cell models.
이 프로토콜은 Na+의 존재 또는 부재 하에 미토콘드리아 복합 활성 CI+CIII 및 CII+CIII를 사용하여 부분적으로 분할된 기능적 CoQ 풀의 존재를 연구하는 비교 분석을 기술한다.
이 프로토콜은 두 번째 메신저로서의 나트륨의 역할을 강조하고 부분적으로 분화 된 유비 퀴놀 풀의 존재를 보여줍니다. 이 기술은 유비퀴놀 풀의 연구를위한 매우 간단한 접근법을 보여 주며, 그렇지 않으면 매우 구체적인 세포 모델을 필요로합니다. 이러한 접근법은 다른 막, 특히 지질 방울 내의 효소에서의 전자 전달의 연구에 사용될 수 있다.
샘플을 각각 20마이크로그램의 네 개의 하위 샘플로 분할하고 샘플 A와 B를 각각 10마이크로그램의 두 개의 하위 샘플로 분할하고 A1, A2, B1 및 B2로 레이블을 지정합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 C1/C2 버퍼를 준비하고 섭씨 37도까지 예열합니다. 1 밀리리터 큐벳에서 각 하위 샘플을 30 마이크로 리터의 시토크롬 c 및 10 마이크로 리터의 말로네이트에 첨가하십시오. C1 / C2 버퍼를 추가하여 큐벳 A1 및 B1의 부피를 980 마이크로 리터로, A2 및 B2에서 979 마이크로 리터로 볼륨을 높입니다. 큐벳 A1 및 A2에 1 몰 염화칼륨 10 마이크로 리터를 넣고 B1 및 B2에 1 몰 염화나트륨 10 마이크로 리터를 넣으십시오. 큐벳 A2와 B2에 한 마이크로리터의 밀리몰 로테논을 넣으십시오. 측정 직전에 10 마이크로 리터의 10 밀리몰 NADH를 모든 큐벳에 넣으십시오.
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