A Competent Hepatocyte Model Examining Hepatitis B Virus Entry through Sodium Taurocholate Cotransporting Polypeptide as a Therapeutic Target

Khanit Sa-ngiamsuntorn; Piyanoot Thongsri; Yongyut Pewkliang; Suparerk Borwornpinyo; Adisak Wongkajornsilp

doi:10.3791/63761

치료 표적으로 폴리펩티드를 공동 수송하는 나트륨 타우로 콜레이트를 통한 B 형 간염 바이러스 진입을 ...

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Biochemistry
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A Competent Hepatocyte Model Examining Hepatitis B Virus Entry through Sodium Taurocholate Cotransporting Polypeptide as a Therapeutic Target

치료 표적으로 폴리펩티드를 공동 수송하는 나트륨 타우로 콜레이트를 통한 B 형 간염 바이러스 진입을 조사하는 유능한 간세포 모델

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11:34 min

May 10, 2022

DOI: 10.3791/63761-v

Khanit Sa-ngiamsuntorn¹, Piyanoot Thongsri², Yongyut Pewkliang², Suparerk Borwornpinyo^3,4, Adisak Wongkajornsilp⁵

¹Department of Biochemistry, Faculty of Pharmacy,Mahidol University, ²Program in Translational Medicine, Faculty of Medicine Ramathibodi Hospital,Mahidol University, ³Excellent Center for Drug Discovery, Faculty of Science,Mahidol University, ⁴Department of Biotechnology, Faculty of Science,Mahidol University, ⁵Department of Pharmacology, Faculty of Medicine Siriraj Hospital,Mahidol University

Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

자사는 숙주 타우로콜레이트 나트륨 공동 수송 폴리펩티드와의 결합 친화도_(KD)를 측정하기 위해 등온 적정 열량계를 사용하여 바이러스 진입 전후 수명 주기 단계를 표적으로 하는 B형 간염 바이러스(HBV) 화합물을 스크리닝하는 프로토콜을 제시합니다. 항바이러스 효능은 바이러스 수명 주기 마커(cccDNA 형성, 전사 및 바이러스 어셈블리)의 억제를 통해 결정되었습니다.

이 프로토콜은 후보 항 HBV 화합물이 특히 NTCP 결합을 차단하여 바이러스 진입을 억제하는지 확인하도록 설계되었습니다. 이 기술은 HBV 진입 또는 감염의 초기 단계가 후보 화합물에 의해 중단 될 수 있는지 조사하기위한 것입니다. 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 PSP 학생 인 Piyanoot Thongsri가 될 것입니다.

나트륨 타우로콜레이트 공동수송 폴리펩티드 또는 NTCP의 측정을 시작하려면, 성숙한 간세포를 8밀 이상의 에틸렌디아민테트라아세트산 또는 EDTA와 함께 15분 동안 배양한다. 세포 펠릿을 수집하고 PBS에 3.7 % 파라 포름 알데히드 300 마이크로 리터를 15 분 동안 첨가하여 간세포를 고정합니다. 그런 다음 세포 현탁액을 1.5 밀리리터 마이크로 원심 분리 튜브에 옮겨 300G 및 섭씨 25도에서 10 분 동안 원심 분리합니다.

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