Name: Tensometric Small Volume Chamber Myography 를 이용한 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-12T13:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 47 s
Description: 배우세요 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완을 측정하는 텐소미트릭 소용량 챔버 근측정법을. 이 기법은 혈관 생물학 연구에서 내피 기능을 정밀하게 평가하여 혈관 건강과 질병 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

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이 연구는 국립 보건원 (R15HL145646)과 미드 웨스턴 대학교 대학원 연구 대학의 자금 지원으로 지원되었습니다.

<ol><li>Wenceslau, C. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+the+measurement+of+vascular+function+and+structure+in+isolated+arteries+and+veins%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Guidelines for the measurement of vascular function and structure in isolated arteries and veins.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 321 (1), 77-111 (2021).</li>
<li>Deanfield, J. E., Halcox, J. P., Rabelink, T. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+function+and+dysfunction%3A+Testing+and+clinical+relevance%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Endothelial function and dysfunction: Testing and clinical relevance.</a> Circulation. 115 (10), 1285-1295 (2007).</li>
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<li>Mikolajczyk, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+important+role+of+endothelium+and+extracellular+vesicles+in+the+cellular+mechanism+of+aortic+aneurysm+formation%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">The important role of endothelium and extracellular vesicles in the cellular mechanism of aortic aneurysm formation.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (23), 13157(2021).</li>
<li>Vallance, P., Hingorani, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+nitric+oxide+in+humans+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Endothelial nitric oxide in humans in health and disease.</a> International Journal of Experimental Pathology. 80 (6), 291-303 (1999).</li>
<li>Tousoulis, D., Kampoli, A. M., Tentolouris, C., Papageorgiou, N., Stefanadis, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+nitric+oxide+on+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Vascular+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">The role of nitric oxide on endothelial function.</a> Current Vascular Pharmacology. 10 (1), 4-18 (2012).</li>
<li>Gibson, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mild+aerobic+exercise+blocks+elastin+fiber+fragmentation+and+aortic+dilatation+in+a+mouse+model+of+Marfan+syndrome+associated+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Applied+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mild aerobic exercise blocks elastin fiber fragmentation and aortic dilatation in a mouse model of Marfan syndrome associated aortic aneurysm.</a> Journal of Applied Physiology. 123 (1), 147-160 (2017).</li>
<li>Xiao, X., Ping, N. N., Li, S., Cao, L., Cao, Y. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimal+initial+tension+for+rat+basilar+artery+in+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Microvascular+Research%22%5BJournal%5D)">An optimal initial tension for rat basilar artery in wire myography.</a> Microvascular Research. 97, 156-158 (2015).</li>
<li>Chung, A. W., Yang, H. H., Yeung, K. A., van Breemen, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+and+pharmacological+approaches+to+investigate+the+pathogenesis+of+Marfan+syndrome+in+the+abdominal+aorta%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Vascular+Research%22%5BJournal%5D)">Mechanical and pharmacological approaches to investigate the pathogenesis of Marfan syndrome in the abdominal aorta.</a> Journal of Vascular Research. 45 (4), 314-322 (2008).</li>
<li>Zhong, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Age+impairs+soluble+guanylyl+cyclase+function+in+mouse+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Age impairs soluble guanylyl cyclase function in mouse mesenteric arteries.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (21), 11412(2021).</li>
</ol>

저자는 경쟁하는 재정적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

혈관 생물학 분야는 연구자가 혈관벽의 기능적 및 구조적 무결성을 평가하는 데 도움이되는 도구에 크게 의존합니다. 또한 혈관의 세 층, 즉 내막, 매체 및 외막 사이의 직간접 상호 작용에 특별한주의를 기울여야합니다. 이 세 가지 층 중 내막은 내피 세포의 단층에 의해 형성되며 혈관 건강과 지혈을 조절하는 데 매우 중요한 기능을 합니다.
내피 층의 손상은 죽상 동맥 경화증, 동맥류 및 혈관염과 같은 다양한 혈관 장애에서 관찰되는 혈관 기능의 조절 장애를 유도하여 NO 및 기타 혈관 확장 인자를 방출하는 능력에 부정적인 영향을 미칠 수 있다는 것이 잘 알려져 있습니다10,11,12. 정상적인 내피 기능을 제어하는 기본 메커니즘을 이해하고 혈관벽 내 내피의 혈관 확장 기능과 무결성을 평가하려면 생체 내 생...

지난 수십 년 동안 소형 챔버 근조영술 시스템은 생체 외 실시간 환경에서 다양한 약리학적 제제 및 신경 전달 물질에 반응하여 혈관벽의 여러 층의 반응성을 측정하는 데 사용되었습니다. 혈관 반응성은 건강한 기능성 혈관의 주요 구성 요소이며 말초 및 뇌 혈관계의 혈류 및 관류 조절에 중요합니다1. 혈관벽 내에서 내피층과 평활근 층 사이의 상호 작용은 혈관 색조의 주요 결정 요인이며, 이는 또한 혈관벽을 둘러싼 결합 조직층의 구조적 변화(외막)에 의해 지속적으로 영향을 받습니다.
내피층은 산화질소(NO), 프로스타사이클린(PGI2) 및 내피 유래 과분극 인자(EDHF)를 포함한 몇 가지 혈관 확장 인자를 방출하거나 엔도텔린-1(ET-1) 및 트롬복산(TXA2)2,3,4와 같은 혈관 수축제를 생성하여 혈관 운동을 제어합니다. 이러한 요인 중 NO는 광범위하게 연구되었으며 염증, 이동, 생존 및 증식과 같은 다른 중요한 세포 기능에서 중요한 조절 역할은 과학 문헌 2,5에서 많이 인용되었습니다.
혈관 생물학 분야에서 챔버 근조영술은 혈관 생리학자와 약리학자에게 엄격하게 제어된 반생리학적 시스템에서 내피 기능을 측정할 수 있는 가치 있고 신뢰할 수 있는 도구를 제공했습니다1. 현재 과학자들이 사용할 수있는 두 가지 근전도 시스템이 있습니다 : 와이어 (또는 핀) 텐소 메트릭 (등척영) 근전도와 압력 근선 조영술. 와이어 근전도 시스템에서 혈관은 두 개의 와이어 또는 핀 사이에 뻗어 혈관 벽의 힘 또는 장력 발달의 등척성 측정을 허용하는 반면, 압력 근전도는 혈압의 변화가 혈관 색조 및 혈관 운동의 변화에 대한 주요 자극으로 간주되는 작은 저항 동맥에서 혈관 반응성 측정에 바람직한 플랫폼입니다. 장간막 및 대뇌 동맥과 같은 작은 저항 동맥의 경우 압력 근전도가 인체의 생리적 조건에 더 가까운 상태를 생성한다는 일반적인 동의가 있습니다. 작은 챔버 근전도는 대동맥과 같은 매우 작은 직경(200-500μm)의 혈관에서 훨씬 더 큰 혈관에 활용할 수 있습니다.
와이어 근전도는 등척성 조건에서 혈관 장력을 기록하는 강력한 시스템인 반면, 압력 근압계는 등압 조건의 변화에 대한 혈관 직경의 변화를 측정하는 데 더 적합한 시스템입니다. 압력이나 흐름의 변화에 반응하는 혈관의 직경 변화는 대동맥과 같은 큰 탄성 동맥에 비해 작은 근육 동맥 (세동맥)에서 훨씬 큽니다. 이러한 이유로 압력 근압계는 상당한혈관 1을 가진 작은 혈관에 더 나은 도구로 간주됩니다. 다중 챔버 소부피 챔버 텐소메트릭 근조영술의 또 다른 실용적인 강점 중 하나는 동일한 동맥의 여러 부분(최대 4개)과 동일한 동물을 연구하여 가변성을 줄이고 강력하고 결정적인 데이터를 생성함으로써 혈관 반응성에 대한 다양한 메커니즘의 기여를 식별할 수 있다는 것입니다. 또한 기술적으로 설정 및 유지 관리가 비교적 쉽습니다. 거의 모든 크기의 혈관은 와이어 근전도로 연구 할 수 있습니다. 이는 혈관 기능을 평가하기 위한 보다 비용 효율적인 솔루션이며 해부된 혈관의 길이가 압력 근전도 프로토콜에 비해 너무 짧은 실험에서 압력 근조영술에 대한 좋은 대안입니다.
이 보고서는 DMT-620 다중 챔버 근전도 시스템(DMT-USA)을 사용하는 소체적 챔버 텐소메트릭 근전도 기술에 장착 핀을 사용하여 분리된 마우스 흉부 대동맥 링의 내피 기능 평가를 위한 자세한 프로토콜을 제공합니다. 이 프로토콜은 평균 체중이 25-35g 인 6 개월 된 수컷 C57BL6 마우스를 사용합니다. 다행히도이 프로토콜은이 프로토콜을 사용할 수있는 광범위한 용기 유형과 직경을 고려하여 다양한 동물 유형 및 무게에 적용될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>아세틸콜린</td><td>SigmaAldrich</td><td>A6625-100G</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901-1KG</td><td></td></tr><tr><td>카보겐 가스</td><td>Matheson</td><td>H103847</td><td></td></tr><tr><td>해부 가위</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>DMT 620 다중 챔버 근그래프 시스템</td><td>DMT</td><td>DMT 620</td><td>다중 챔버 근그래프 시스템</td></tr><tr><td>듀몬트 겸</td>자 <td>FST</td><td>91150-20</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>시그마알드리치</td><td>E5134-10G</td><td></td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>시그마알드리치</td><td>G8270-1KG</td><td></td></tr><tr><td>헤페스</td><td>시그마알드리치</td><td>H7006-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>시그마알드리치</td><td>P9541-1KG</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5655-1KG</td><td></td></tr><tr><td>LabChart</td><td>ADI 기기</td><td></td><td>데이터 수집 소프트웨어</td></tr><tr><td>광원</td><td>Volpi</td><td>14363</td><td></td></tr><tr><td>L-Name</td><td>Fischer Scientific</td><td>50-200-7725</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2643-500G</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Leica</td><td>S6D</td><td>스테레오 줌 현미경</td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886-5KG</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5761-500G</td><td></td></tr><tr><td>오르간 목욕 시스템</td><td>DMT</td><td>720MO</td><td></td></tr><tr><td>페닐에프린</td><td>SigmaAldrich</td><td>P6126-10G</td><td></td></tr><tr><td>펌프</td><td>Welch</td><td>2546B-01</td><td></td></tr><tr><td>소프트웨어</td><td>ADI 기기</td><td>LabChart 8.1.20</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위</td>, <td>FST</td><td>15003-08</td><td></td></tr>, <tr><td>Sylgard 184 키트</td><td>, 전자 현미경 서비스</td>, <td>24236-10</td>, <td>실리콘 엘라스토머 키트</td></tr>, <tr><td>탱크 레귤레이터</td>, <td>Fischer Scientific</td><td>10575147</td><td></td></tr><tr><td>수조 시스템</td>, <td>Fischer Scientific 15-462-10</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

tensometric small volume chamber myography 를 이용한 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완 측정

Measurement of Endothelium-Dependent Vasorelaxation in the Mouse Thoracic Aorta Using Tensometric Small Volume Chamber Myography

소체실 텐소메트릭 근조영술은 실험실 동물 및 인체 조직에서 분리된 소동맥에서 크고 작은 혈관의 혈관 수축성을 평가하는 데 일반적으로 사용되는 기술입니다. 이 기술을 통해 연구자들은 다양한 환경 요인에 적응할 수있는 옵션을 통해 엄격하게 통제되고 표준화 된 (거의 생리적) 환경에서 격리 된 혈관을 유지하면서 혈관 수축 또는 혈관 확장을 유도 할 수있는 다양한 약리학 적 약제로 격리 된 혈관에 도전 할 수 있습니다. 근압 챔버는 또한 평활근 및 내피층의 기능에 개별적으로 또는 동시에 영향을 미칠 수 있는 다양한 호르몬, 억제제 및 작용제에 대한 반응성 혈관 반응성을 측정하는 플랫폼을 제공합니다. 혈관벽은 내막 (내피 층), 매체 (평활근 및 엘라스틴 섬유) 및 외막 (콜라겐 및 기타 결합 조직)의 세 가지 층으로 구성된 복잡한 구조입니다. 각 레이어의 기능적 특성을 명확하게 이해하려면 세 레이어를 동시에 연구하는 조합 접근 방식을 허용하는 실험 플랫폼과 시스템에 액세스하는 것이 중요합니다. 이러한 접근 방식은 생체 외 환경에서 생체 내 환경을 모방하는 반 생리 학적 조건에 대한 액세스를 요구합니다. 소부피 챔버 텐소메트릭 근조영술은 환경 단서, 실험 변수 또는 약리학적 작용제 및 길항제가 혈관 특성에 미치는 영향을 평가하기에 이상적인 환경을 제공했습니다. 수년 동안 과학자들은 텐소 메트릭 근전도 기술을 사용하여 다양한 약제에 대한 반응으로 내피 기능과 평활근 수축력을 측정했습니다. 이 보고서에서는 분리된 마우스 대동맥에서 내피 기능을 측정하기 위해 작은 부피 챔버 텐소메트릭 근압계 시스템을 사용합니다. 이 보고서는 흉부 대동맥과 같은 큰 동맥의 작은 부분에서 내피의 기능적 완전성을 평가하기 위해 작은 부피 챔버 텐소 메트릭 근조영술을 사용하는 방법에 중점을 둡니다.

여기에 설명된 십측영 소실 근조영술 프로토콜은 소동맥 및 대동맥의 혈관 반응성을 측정하는 표준 방법이며 동일한 실험용 소형 실험실 동물에서 최대 4개의 혈관 세그먼트에서 혈관 반응성을 동시에 측정할 수 있습니다. 이 보고서에서는 특히 분리된 마우스 대동맥의 내피 기능을 측정하기 위해 시스템을 사용합니다(그림 1). 이 프로토콜에서 격리된 대동맥 세그먼트는 두 개의 작은 스테인리스 스틸 핀(그림 3) 사이의 작은 장기 챔버(그림 2)에 장착됩니다. 근압계 챔버는 최대 8mL의 완충액을 담을 수 있으며 실험 기간 동안 격리된 혈관에 반생리학적 환경을 제공할 수 있습니다. 각 실험 전에 각 분리 된 세그먼트의 생존력을 테스트하고 검증하는 것이 매우 중요합니다. 각 분리된 혈관 세그먼트의 완전성 및 생존성을 확립하기 위한 표준 프로토콜은 평활근 막 탈분극을 유도하기 위해 고농도...

본 프로토콜은 마우스 대동맥 내피 기능의 실험적 생체외 평가에서 다중 챔버 근초음파 시스템을 사용하는 텐소메트릭 근초음파 기술의 개념 및 기술적 적용을 기술한다.

Tensometric Small Volume Chamber Myography 를 이용한 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완 측정

Small volume chamber tensometric myography is a commonly used technique to evaluate the vascular contractility of small and large blood vessels in ...

우리는 잘 통제 된 생리적 조건에서 작은 저항 또는 큰 도관 혈관의 반응성을 측정하기위한 황금 표준 프로토콜로서 등척성 또는 tensometric 근조영술을 입증합니다. 측정은 재현성이 높고 신뢰할 수 있습니다. 이 기술은 연구자가 혈관의 다른 층을 개별적으로 연구하거나 혈관벽의 다른 층 간의 상호 작용을 동시에 조사 할 수있게하는 데 매우 유용합니다.절차를 시연하는 것은 내 실험실의 연구실 전문가 인 Robert Folk가 될 것입니다. 수조를 켜고 섭씨 37도로 설정하여 시작하십시오. 적절하게 표시된 두 개의 비커를 수조에 넣는데, 하나는 600 밀리리터의 HEPES-PSS 용액이 들어 있고 다른 하나는 150 밀리리터의 고 칼륨 용액이 들어 있습니다.300ml의 HEPES-PSS 용액이 들어있는 비커에 카보 겐 가스를 10 분 이상 폭기시킵니다. 폭기 된 HEPES-PSS 용액 30 밀리리터를 50 밀리리터 원심 분리기 튜브에 넣고 적절하게 라벨을 붙인 다음 얼음 위에 놓습니다. 대동맥 박리 과정에서 사용할 얼음 위에 남은 폭기 된 HEPES-PSS 용액을 보관하십시오.각 근위계 챔버에 5 밀리리터의 HEPES-PSS 용액으로 4 챔버 근압계 장치를 켜고 열을 섭씨 37 도로 설정하십시오. 각 챔버의 용액을 30분 동안 통기시키고 챔버가 원하는 섭씨 37도에 도달했는지 확인하십시오. 근초음파 데이터 수집 하드웨어와 컴퓨터를 켭니다.안락사 된 마우스에서 절제 된 흉곽을 얼음처럼 차가운 폭기 된 HEPES-PSS 버퍼로 채워진 투명한 실리콘 엘라스토머 코팅 페트리 접시에 옮기고 양쪽에 고정시킵니다. 현미경으로 흉곽에서 심장과 부착 된 대동맥을 부드럽게 자르고 제거하고 깨끗한 실리콘 엘라스토머 코팅 접시로 옮긴 다음 대동맥에서 지방 결합 조직과 응고 된 혈액을 부드럽게 제거합니다. 날카로운 작은 가위를 사용하여 아치 영역에서 시작하여 하행 대동맥의 바닥까지 전체 대동맥을 해부하고 분리하십시오.해부 된 대동맥을 각각 2 밀리미터의 4 개의 세그먼트로 자릅니다. 접시 안의 미니 자를 참조로 사용하십시오. 이미 5 밀리리터의 따뜻하고 폭기 된 HEPES-PSS 버퍼가 들어있는 챔버에서 집게를 사용하여 2 밀리미터 대동맥 세그먼트 각각을 두 개의 장착 핀에 조심스럽게 밀어 넣습니다.챔버를 근전도 장치에 다시 놓을 때 대동맥 세그먼트가 핀에서 미끄러지지 않도록 마이크로미터를 시계 반대 방향으로 돌려 핀을 천천히 벌립니다. 각 근초음파 챔버를 장치로 되돌리고 섭씨 37도에서 20분 동안 챔버 통기를 시작합니다. 챔버를 배수하고 5 밀리리터의 신선하고 따뜻하며 폭기 된 HEPES-PSS 용액을 각 챔버에 첨가하십시오.필요한 경우 힘 측정값을 다시 조정하여 6밀리뉴턴의 최적 장력을 읽습니다. 조직을 15-20 분 더 쉬십시오. 데이터 수집 소프트웨어를 엽니다.추적 번호를 50에서 1, 500에서 1로 변경하고 시작을 누릅니다. 새로운 실험을 시작하기 전에 데이터 수집 소프트웨어에 적절한 라벨을 추가해야 합니다. 각 챔버에 5 밀리리터의 고 칼륨 용액을 추가하기 전에 챔버를 한 번 더 배수하십시오.고 칼륨 용액에 대한 수축 반응이 힘 생성을 위해 고원에 도달하자마자 챔버를 다시 배수하십시오. HEPES-PSS 용액으로 조직을 세 번 씻으십시오. 각 챔버에 5 밀리리터의 고 칼륨 용액을 첨가하십시오.고 칼륨 용액에 대한 수축 반응이 힘 생성을 위해 고원에 도달하자마자 챔버를 배수하고 HEPES-PSS로 조직을 세 번 씻은 다음 15-20 분 동안 조직을 휴지시킵니다. 대동맥 분절을 혈관 수축 제제 PE와 최대 이하 용량으로 사전 계약합니다. PE로 인한 수축 곡선이 장력 발달을 위해 고원에 도달하도록 합니다.텍스트 원고에 설명 된대로 근위압계 챔버에서 50 피코몰에서 10 마이크로 몰까지 아세틸 콜린의 최종 농도를 설정하기 위해 3 분 간격으로 5 마이크로 리터의 증가하는 용량의 아세틸 콜린 작업 스톡 용액에서 PE에 장력 발달 고원을 추가합니다. 용량 반응 실험을 완료 한 후, 챔버를 배수하고, 대동맥 세그먼트를 따뜻하고 폭기 된 HEPES-PSS 용액으로 세 번 씻고 30 분 동안 조직을 휴지시킨다. 대동맥 분절을 30 분 동안 휴식 한 후 챔버를 배수하고 신선하고 따뜻한 고 칼륨 용액을 각 챔버에 추가 한 다음 챔버를 배수하고 HEPES-PSS 용액으로 조직을 씻습니다 높은 칼륨 용액에 대한 수축 반응이 앞에서 설명한 것처럼 F 고원에 도달합니다.관찰된 아세틸콜린 유도 혈관 이완에 대한 산화질소 생성의 기여도를 평가하기 위해 준비된 100밀리몰 작업 스톡 용액 100마이크로리터를 추가하여 대동맥 세그먼트를 L-NAME으로 사전 배양합니다. L 이름을 제거하지 않고 대동맥 수축을 유도하기 위해 PE의 최대 부하 미만을 챔버에 추가하십시오. PE 유도 수축 곡선이 장력 발달을 위해 고원에 도달 할 때까지 기다린 다음 근도계 챔버에 아세틸 콜린을 추가하여 최종 농도 500 나노 몰을 달성합니다.형성된 고원이 안정 될 때까지 힘 개발의 가능한 변화를 등록하기 위해 몇 분 동안 기다리십시오. 챔버를 배수하고 따뜻한 폭기 된 HEPES-PSS 용액으로 조직을 세 번 씻으십시오. 현미경 아래에 근전도 챔버를 놓고 대동맥의 내강을 통해 작은 와이어를 부드럽게 통과시킵니다.짧은 시간 동안 루멘을 통해 와이어를 부드럽게 움직입니다. 대동맥을 2mm 대동맥 고리로 자르고 그 고리를 근전도 챔버에 장착하십시오. 최적의 장력을 6 밀리 뉴턴으로 설정하고 폭기 된 따뜻한 hepes-PSS 버퍼에서 조직을 30 분 동안 휴식 한 다음 챔버를 배수하고 5 밀리리터의 신선한 따뜻한 폭기 HEPES-PSS 용액을 각 챔버에 첨가하십시오.모든 근전도 챔버에 대한 힘을 0으로 만들고 마이크로미터를 시계 반대 방향으로 천천히 돌려 등록된 힘이 마우스 대동맥에 대해 원하는 최적 장력에 도달할 때까지 핀 사이의 거리를 늘립니다. 최적의 장력으로 15-20 분 동안 조직을 누른 다음 각 챔버에 5ml의 고 칼륨 용액을 추가하기 전에 챔버를 한 번 더 배출하십시오. 챔버를 다시 배수하고 고 칼륨 이온 용액에 대한 수축 반응이 고원에 도달하면 HEPES-PSS 용액으로 조직을 세 번 씻습니다.조직을 15-20 분 동안 휴식 한 다음 혈관 수 축제 물질 인 PE로 대동맥 부분을 사전 수축시킵니다. PE 유도력이 고원에 도달하면 아세틸 콜린의 하위 최대 농도를 근압계 챔버에 추가하여 최종 농도 500 나노 몰을 달성합니다. 실험을 종료하기 전에 PE 유도력 발생을 위해 등록된 고원이 변경되지 않도록 3분 정도 기다리십시오.각 격리 된 용기의 무결성과 생존력은 수축력 생성을 기록하여 평가되었습니다. 기록된 힘의 피크는 나중에 작용제에 반응하여 동일한 세그먼트에 대한 힘 생성을 정상화하는 데 사용되었습니다. 내피 매개 혈관 이완 측정은 평활근 매개 수축 및 힘 생성을 묘사했습니다.PE 유도 수축이 고원에 도달했을 때, 아세틸 콜린의 복용량을 늘리면 분리 된 세그먼트에서 최대 혈관 이완이 달성되었습니다. 산화 질소 억제제 L-NAME은 사전 수축 된 대동맥에서 아세틸 콜린 유도 혈관 이완을 완전히 차단하여 아세틸 콜린이 산화 질소 생성 증가를 통해 대동맥 혈관 이완을 유도한다는 것을 나타냅니다. 또한, 대동맥 분절에서 내피 층을 제거하면 아세틸 콜린 유도 혈관 이완이 차단되어 혈관 이완에서 내피의 역할을 강조합니다.혈관을 취급, 청소 및 해부하는 동안 부드럽게 유지하십시오. 약리학적 작용제와 억제제를 근전도 챔버에 장착된 혈관 고리를 방해하지 않도록 주의해서 추가하는 것이 중요합니다. 이 정보는 특정 혈관 층의 기능 장애를 해결하기위한 잠재적 인 치료 접근법을 탐구하기위한 실험을 설계하는 데 도움이 될 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

절연 mesenteric의 동맥에 힘 측정을위한 자동 myography 방법이 설명되어 있습니다. 그것은 phenylephrine 및 세포외 칼슘에 대한 답변을 결정하기 위해 510A Mulvany - Halpern 자동 듀얼 와이어 Myograph을 사용합니다. 300 μm의, 독립적으로 - 방법은 60 직경의 작은 선박에 agonists에 사시 응답 일관성있는 결정 수 있습니다.

자동 와이어 Myography를 사용 Mesenteric 동맥 수축과 휴식 연구

압력 myography에서 혈관의 손상 작은 세그먼트는 두 개의 작은 캐 뉼러에 장착하고 적절한 내강 압력으로 가압. 여기, 우리는 마우스 3의 혈관 이완 반응을 측정하는 방법을...

압력 Myography를 사용 쥐과 저항 동맥의 기능을 평가

압력 myography는 가압 할 때 지속적인 수축을 개발하는 작은 동맥의 vasoactivity을 평가하는 데 사용됩니다. 이 원고는 쥐, vasoactivity 혈관 직경에 관내 압력의 영향에서 작은 장간막 동맥의 고립 된 세그먼트에서 평가하기위한 세부 프로토콜을 제공합니다.

압력 Myography를 사용하여 저항 장간막 동맥에서 근육 조직 대응 및 Vasoactivity 평가

내피 기능 장애는 수많은 질병 상태와 관련된 인간의 심혈관 사건의 예측이다. 흐름 매개 혈관 확장 (FMD)는 내피 세포 기능을 평가 비 침습적 초음파 방법이다. 방법 론적 선택과 작업자의 경험은 결과에 영향을 미칠 수 있습니다. 인간 연구에서 FMD에 대한 체계적인 접근 방법은 여기에서 논의된다.

임상 연구에서 상완 동맥의 초음파 평가 내피 의존 흐름 매개 혈관 확장

우리는 생쥐에서 생체 내에서 압력-직경 관계에서 대동맥 강성을 측정하는 기술을 설명합니다. 대동맥 직경은 초음파로 기록되고 대동맥 압력은 고체 압력 카테터로 침습적으로 측정됩니다. 혈압은 점진적으로 변경되고 결과 직경이 측정됩니다.

오름차순 대동맥 강성 측정 생체 초음파를 사용하여 마우스의

Videomicroscopy 시스템은 고립 된 지방 조직 arterioles 생리 및 약리 자극에 대 한 응답에서의 기능 속성을 검사 하는 데 사용 됩니다. 이 기술은 비만 인 간에 있는 다른 지방 조직 도메인에 microvascular 고기 검사를 사용할 수 있습니다.

인간 지방 조직 Microvascular 함수 Videomicroscopy를 사용 하 여 평가

이 원고는 쥐 대뇌 저항 동맥 혈관 기능을 평가 하기 위한 비디오 현미경 검사 법 프로토콜을 체 외에 설명 합니다. 원고는 또한 레이저 도플러 Flowmetry를 사용 하 여 붙일 레이블된 lectin과 조직 관류와 microvessel 밀도 평가 하기 위한 기법을 설명 합니다.

쥐의 고립 된 저항 동맥의 비디오 현미경을 이용 하 여 혈관 제어 메커니즘의 평가

선법 myograph 혈관 부드러운 근육 기능과 화면 새로운 약물을 조사 하는 데 사용 됩니다. 우리 보고 마우스 mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정 및 혈관 평활 근의 새로운 relaxants 심사에 대 한 자세한 프로토콜.

Myography 와이어를 사용 하 여 마우스 Mesenteric 동맥의 isometric 수축 측정

Hypoxia에서 고 강도 훈련 프로토콜 입증 된 일부 환자에서 잠재적으로 유리한 혈관 적응을 유도 하 고 선수를 개선 하기 위해 반복 스 프린트 능력 이다. 여기, 우리는 프로토콜을 식별 비보 관 기능 평가 전을 사용 하 여 이러한 혈관 적응 훈련 마우스 사용 하 여의 타당성을 테스트 합니다.

Supramaximal 강도 Hypoxic 운동과 쥐에 혈관 기능 평가

이 프로토콜은 마우스에서 분리 된 장 간 막 동맥의 경 벽 등각 장력을 평가 하는 와이어 묘 조 그래피의 사용을 설명 하며, 내 피 세포 및 혈관 주위 지방 조직에서 방출 되는 요인에의 한 변조를 특별히 고려 합니다.

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배우세요 마우스 흉부 대동맥의 내피 의존성 혈관 이완을 측정하는 텐소미트릭 소용량 챔버 근측정법을. 이 기법은 혈관 생물학 연구에서 내피 기능을 정밀하게 평가하여 혈관 건강과 질병 메커니즘을 이해하는 데 활용됩니다.

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