Name: COVID-19 관련 중이 병리학 평가를위한 고속 인간 측두골 절편 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-05-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 3 min 42 s
Description: 학습하세요 고속 측두골 절편 기법으로 COVID-19 관련 중이 병리학을 신속히 평가하는 방법입니다. 이 기술은 처리 시간을 9~10개월에서 10~14일로 단축하여 긴급한 이과 연구에 활용할 수 있습니다.

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이 프로젝트에 도움을 주신 모하메드 리하르에게 감사드립니다. 이 연구는 부분적으로 국립 보건원 (T32DC000027, NSA)에 의해 지원되었습니다.

이 프로토콜은 IRB (IRB00250002) 승인과 인간 조직 및 감염성 물질의 사용에 대한 제도적 정책에 따라 개발되었습니다. 각 측두골 기증자는 사망 전에 서면 동의를 제공했거나 기증자의 가족으로부터 사후 동의를 얻었습니다. 이 프로토콜에 사용되는 모든 재료, 장비 및 소프트웨어에 대한 자세한 내용은 재료 표를 참조하십시오.
1. 측두골 수확
<ol><li>이 프로토콜을 활용하기 전에 지역 기관 검토 위원회 (IRB) 이사회 승인을 받고, 인간 및 전염성 물질 사용에 대한 제도적 정책을 검토하고, 조직 기증에 대한 동의를 얻으십시오.</li>
	<li>COVID-19 양성 측두골 기증자의 조직으로 작업하기 전에 적절한 개인 보호 장비 (PPE)를 착용하십시오. PPE가 N-95 인공 호흡기와 안면 보호막(또는 양압 공기 정화 시스템), 가운 및 두 쌍의 장갑으로 구성되어 있는지 확인하십시오. 이 프로토콜10을 시작하기 전에 PPE를 적절하게 기부하고 도핑하는 기술을 검토하십시오.</li>
	<li>기증자 사망 후 12-24 시간 이내에 측두골 조직을 수확하십시오. 시체가 냉장 보관되지 않은 경우 사망 후 8 시간 이내에 수확이 이루어 지도록하십시오.<ol>
<li>네 절개를 사용하여 부검 중에 측두골을 수확, 골골에 의한 차단 방법7.<ol>
<li>두개골 절제술 후 뇌를 제거하고 두개골 신경을 내부 청각 운하로 급격하게 나눕니다.</li>
			<li>첫 번째 뼈 절개를 골골과 평행하게하고 측두골의 편평한 부분에 내측으로 만듭니다.</li>
			<li>두 번째 뼈 절개를 측두골의 내측 경계에서 첫 번째 뼈와 평행하게 수행하십시오.</li>
			<li>그런 다음 세 번째 절개를 3-4cm 앞쪽으로 만들고 페트로우스 능선과 평행하게하십시오.</li>
			<li>네 번째 절개를 세 번째 절개와 대략 평행하게, 페트로우스 능선에 2cm 후방으로 만듭니다. 참고: 모든 절개가 두개골 기저부를 통해 확장되는지 확인하십시오.</li>
			<li>그런 다음 날카로운 해부를 사용하여 측두골을 제거하여 시편의 열등한 가장자리를 따라 연조직 부착을 해제하십시오. 측두골 수확 후 방부 처리를 수행해야하는 경우 경동맥의 그루터기를 묶으십시오.</li>
		</ol>
</li>
	</ol>
</li>
</ol>2. 조직 고정, 탈석회화 및 단면화
<ol><li>즉시 조직을 200-300 mL의 10% 완충된 포르말린(formaldehyde)에 넣어 조직이 완전히 침수되도록 한다. 실온에서 최소 72 시간 동안 조직을 포름 알데히드에 넣고 매일 용액을 바꿉니다. 조직을 밀폐 용기에 보관하고 흄 후드 아래에서 용액 변경을 수행하면서 바이러스 확산을 방지하기 위해 적절한 PPE를 착용하십시오. 참고 : 72 시간 고정 기간이 지나면 표본은 더 이상 전염성이있는 것으로 간주 될 필요가 없습니다.</li>
	<li>트윈 다이아몬드 블레이드가 달린 정밀 마이크로 톱을 사용하여 각 시편을 세 개의 "두꺼운"섹션으로 절단하여보다 빠른 조직 탈석회화를 가능하게하십시오. 트윈 다이아몬드 블레이드를 5mm 거리로 설정하여 측두골의 중앙 부분이 5mm 두께가 되도록 합니다. 양쪽 끝에있는 조직 부분이 3-5mm 두께인지 확인하십시오.</li>
	<li>두꺼운 절편을 23% w/w 포름산 탈석회화 용액 200-300mL에 넣고 조직이 파라핀 임베딩을 위해 충분히 부드러워질 때까지 실온에서 7-10일 동안 놓습니다. 매일 솔루션을 변경하십시오. 부드럽게 느껴질 수있는 표본을 촉지하여 적절한 조직 탈석회화를 확인하십시오. 참고: 탈석회화는 엑스레이로 확인할 수도 있습니다.</li>
	<li>흐르는 수도꼭지 아래의 큰 비커에 넣어 24 시간 동안 수돗물을 헹구십시오.</li>
	<li>증가 농도의 일련의 알코올에서 조직을 탈수7. 조직을 1.5 시간 동안 70% 에탄올 100-200 mL에 담그고, 각각 1.5 h 동안 95% 및 100% 에탄올로 세 번 세척하였다. 다음에, 조직을 자일렌으로 3 x 1.5 h 세척한다.</li>
	<li>두꺼운 부분을 파라핀에 넣고 각각 45 분의 네 가지 치료법을 사용합니다.</li>
	<li>냉동 장치를 사용하여 얇은 (10 μm) 섹션을 절단하십시오. 조직이 축 평면에서 절단되도록 조직을 배치합니다. 원하는 경우 더 두껍게(20μm) 섹션을 잘라냅니다.</li>
</ol>3. 면역조직화학 및 영상화
<ol><li>전통적인 헤마톡실린 및 에오신 염색이 바람직한 경우(여기에 기재되지 않음), 절편을 유리 슬라이드(7)에 장착하기 전에 염색을 수행한다.</li>
	<li>양전하를 띤 유리 슬라이드에 섹션을 장착합니다.</li>
	<li>슬라이드를 60°C에서 20분 동안 핫플레이트 상에 굽는다.</li>
	<li>슬라이드를 홀더에 넣고 유기 용매 (이 경우 디에탄올 아민)와 에탄올을 함유 한 상업용 전처리 용액에 담그고 파라핀화, 재 수화 및 조직 마스크를 해제하십시오. 참고: 이 단계는 포르말린 고정 및 파라핀 포매 조직에 대한 면역조직화학으로 만족스러운 결과를 얻기 위해 필요합니다.</li>
	<li>고압의 압력 밥솥에서 슬라이드를 20 분 동안 가열하십시오.</li>
	<li>슬라이드를 가습 챔버에 놓고 상업용 차단 용액으로 조직을 차단하십시오.</li>
	<li>조직 절편을 안지오텐신 전환 효소 2 (ACE2; 1:50), 막횡단 프로테아제 세린 2 (TMPRSS2, 1:1,000), 및 퓨린 프로테아제 (1:250)에 대한 1차 항체로 조사한다. 참고: ACE2, TMPRSS2 및 Furin 항체는 이들 단백질이 SARS-CoV-2 감염성11,12에서 역할을 하는 것으로 여겨지기 때문에 사용되며, 이 프로토콜은 SARS-CoV-2가 중이(13)를 감염시킬 수 있는 가능한 메커니즘을 조사하고자 하기 때문이다.</li>
	<li>HRP 접합된 항토끼 2차 항체(ACE2, Furin; 1:100 희석) 또는 항-염소(TMPRSS2, 1:100 희석) 2차 항체로 치료한다.</li>
	<li>물에 70 % 헤마톡실린으로 슬라이드를 얼룩지게하십시오.</li>
	<li>장착된 디지털 카메라로 광학 현미경으로 이미지를 캡처합니다. 중이 점막과 유스타키오 관의 이미지를 각각 20x 및 10x 배율로 얻습니다.</li>
</ol>

<ol><li>Nogueira, J. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+brief+history+of+otorhinolaryngology%3A+Otology%2C+laryngology+and+rhinology%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Otorhinolaryngology%22%5BJournal%5D)">A brief history of otorhinolaryngology: Otology, laryngology and rhinology.</a> Brazilian Journal of Otorhinolaryngology. 73 (5), 693-703 (2007).</li>
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<li>McCall, A. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extralabyrinthine+manifestations+of+DFNA9%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+Association+for+Research+in+Otolaryngology%22%5BJournal%5D)">Extralabyrinthine manifestations of DFNA9.</a> Journal of the Association for Research in Otolaryngology. 12 (2), 141-149 (2011).</li>
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<li>Lopez, I. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunohistochemical+techniques+for+the+human+inner+ear%5BTitle%5D)+AND+%22Histochemistry+and+Cell+Biology%22%5BJournal%5D)">Immunohistochemical techniques for the human inner ear.</a> Histochemistry and Cell Biology. 146 (4), 367-387 (2016).</li>
</ol>

저자는 선언 할 이해 상충이 없습니다.

인간의 측두골 연구는 내과 중이 병리학을 연구하는 데 중요하지만 시간과 자원 집약적 인 노력으로 남아 있습니다. 이 논문은 다이아몬드 마이크로 톱을 사용하여 추가 절편화 전에 신속하게 탈석회화 할 수있는 두꺼운 측두골 절편을 생성하여 조직 수확에서 연구까지의 시간을 9-10 개월에서 10-14 일로 단축 할 수있는 기술을 설명합니다. 이 기술은 측두골 처리에 필요한 자원을 줄이고 COVID-19 중이 및 내이 병리학(13)과 관련된 것과 같은 시간에 민감한 연구를 촉진 할 수 있으며,이 프로토콜을 개발하기위한 동기였습니다. 이 프로토콜은 중이 및 유스타키오 관 내에서 ACE2, TMPRS22 및 Furin 발현의 시각화를 허용하여 SARS-CoV-2가 비인두에서 유스타키오 관을 통해 확산되어 중이를 감염시킬 수있는 메커니즘을 제공했습니다.
이 프로토콜의 주요 혁신은 탈석회화 전에 조직을 절단하는 다이아몬드 톱의 사용이며, 이는 탈석회화제...

인간의 측두골 연구는 내이와 중이의 병리학 및 병리 생리학을 연구하는 데 귀중한 자원을 제공합니다. 19세기 이전에는 이비인후과 질환 1,2,3에 대해 알려진 바가 거의 없었다. 이비인후과 질환을 더 잘 이해하고 "돌팔이의 손에서 청각 수술을 구하기"위해 Joseph Toynbee (1815-1866)는 인간 측두골의 조직 학적 섹션을 연구하는 방법을 개발했습니다3. 이 연구는 19 세기의 나머지 기간 동안 비엔나와 유럽 전역의 Adam Politzer (1835-1920)에 의해 촉진되었으며, 그는 측두골 섹션을 사용하여 귀 2,3,4에 영향을 미치는 많은 일반적인 조건의 조직 병리학을 설명했습니다.
미국 최초의 인간 측두골 실험실은 1927 년 존스 홉킨스 병원 (Johns Hopkins Hospital)에 문을 열었으며, 스테이시 길드 (Stacy Guild, 1890-1966)는 측두골 절편 5,6 방법을 개발했습니다. 길드가 개발 한 방법은 사후 수확, 고정, 질산에서의 탈석회화, 에탄올에서의 탈수, 셀로이드 임베딩, 절개, 염색 및 장착을 포함하는 9-10 개월 과정으로 구성되었습니다. 이 기술에 대한 수정은 나중에 Harold Schuknecht (1917-1996)7에 의해 이루어졌습니다. 그러나이 프로세스의 기본 구성 요소는 본질적으로 변경되지 않습니다.
측두골 실험실을 유지하는 데 필요한 중요한 자원은 측두골 연구에 대한 도전을 제시했으며 지난 30 년 동안 4,8 년 동안 인기가 감소하는 데 기여했을 가능성이 큽니다. 측두골 실험실 자원의 상당 부분은 측두골 준비의 9-10 개월 과정에 전념해야합니다. 준비에서 가장 시간이 많이 걸리는 단계 중 하나는 인체에서 가장 밀도가 높은 뼈 인 측두골의 탈석회화입니다. 탈석회화는 일반적으로 질산 또는 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA)에서 수행되며 용액 7,9를 자주 교체해야 하는 동안 몇 주에서 몇 달이 걸립니다. 또한, COVID-19 전염병과 관련된 것과 같이 인간의 귀에 대한 시간에 민감한 연구는 이러한 느린 준비 과정에 의해 방해받을 수 있습니다. 이 논문은 다이아몬드 마이크로 톱을 사용하여 측두골 수확 후 10-14 일 이내에 신속한 탈석회화 및 조직 분석을 가능하게하는 두꺼운 섹션을 생성하는 고속 측두골 절편화 기술을 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>Anti-ACE-2 항체 (1:50 희석)</td><td>Novus Biologicals</td><td>SN0754</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Furin 항체 (1:250 희석)</td><td>Abcam</td><td>EPR 14674</td><td></td></tr><tr><td>Anti-TMPRSS2 항체 (1:1,000 희석)</td><td>Novus Biologicals</td><td>NBP1-20984</td><td></td></tr><tr><td>BX43 수동 시스템 현미경</td><td>Olympus Life Science Solutions</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CBN/Diamond Hybrid 웨이퍼링 Blade</td><td>Pace Technologies</td><td>WB-007GP</td><td></td></tr><tr><td>Collin Mallet - 8''</td><td>Surgical Mart</td><td>SM1517</td><td></td></tr><tr><td>DS-Fi3 현미경 카메라</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Dual Endogenous Enzyme Block (상업용 차단 솔루션)</td><td>Dako</td><td>S2003</td><td></td></tr><tr><td>Eaosin Stain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>548-24-3</td><td></td></tr><tr><td>포르말린 용액, 중성 완충된 10%</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Formical-4 Decalcifier (포름산 석회질 제거 용액)</td><td>StatLab</td><td>1214-1 GAL</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin Stain</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>HRP-Conjugated Anti-Rabbit Secondary Antibody (1:100 dilution)</td><td>Leica Biosystems</td><td>PV6119</td><td></td></tr><tr><td>ImmPRESS HRP Horse Anti-Goat igG Detection Kit, Peroxidase (1:100 희석)</td><td>Vector Laboratories</td><td>MP-7405</td><td></td></tr><tr><td>Lambotte Osteotome</td><td>Surgical Mart</td><td>SM1553</td><td></td></tr><tr><td>Metallographic PICO 155P Precision Saw</td><td>Pace Technologies</td><td>PICO 155P</td><td>microsaw</td></tr><tr><td>NIS Elements 소프트웨어 버전 4.6</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraplast Plus</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P3683</td><td>파라핀</td></tr><tr><td>백색 젖빛 끝이 있는 양전하 현미경 슬라이드</td><td>Walter 제품</td><td>1140B15</td><td></td></tr><tr><td>Thermo Shandon Crytome FSE 저온 유지 장치 Microtome</td><td>New Life Scientific Inc.</td><td>A78900104</td><td>cryotome</td></tr><tr><td>Triology Pretreatment Solution (상용 전처리 솔루션)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>920P-05</td><td></td></tr><tr><td>Xylene</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>920P-05</td><td></td></tr></tbody></table>

covid-19 관련 중이 병리학 평가를위한 고속 인간 측두골 절편

High-Speed Human Temporal Bone Sectioning for the Assessment of COVID-19-Associated Middle Ear Pathology

인간의 측두골 절편의 조직병리학적 분석은 내이 및 중이 병리학을 연구하기 위한 근본적인 기술이다. 측두골 절편은 사후 측두골 수확, 고정, 탈석회화, 임베딩 및 염색에 의해 준비됩니다. 측두골의 밀도로 인해 탈석회화는 시간이 많이 걸리고 자원 집약적 인 과정입니다. 완전한 조직 준비는 평균 9-10 개월이 걸릴 수 있습니다. 이것은 이비병리학 연구를 늦추고 COVID-19 전염병과 관련된 연구와 같이 시간에 민감한 연구를 방해합니다. 이 논문은 조직 처리 속도를 높이기 위해 측두골 절편의 신속한 준비 및 탈석회화 기술을 설명합니다.
측두골은 표준 기술을 사용하여 사후 수확하고 10% 포르말린으로 고정하였다. 트윈 다이아몬드 블레이드가 달린 정밀 마이크로 톱을 사용하여 각 섹션을 세 개의 두꺼운 섹션으로 절단했습니다. 두꺼운 측두골 절편을 파라핀에 매립하기 전에 7-10일 동안 탈석회화 용액에서 탈석회시키고, 냉동고를 사용하여 얇은 (10 μm) 절편으로 절편화하고, 충전되지 않은 슬라이드에 장착하였다. 이어서, 조직 샘플을 탈파라핀화하고 항체 염색 (ACE2, TMPRSS2, Furin)을 위해 재수화시키고, 이미지화하였다. 이 기술은 수확에서 조직 분석까지의 시간을 9-10 개월에서 10-14 일로 단축했습니다. 고속 측두골 절제술은 이비병리학 연구의 속도를 높이고 조직 준비에 필요한 자원을 줄이는 동시에 COVID-19와 관련된 것과 같은 시간에 민감한 연구를 촉진 할 수 있습니다.

중이 점막 및 유스타키오관의 헤마톡실린 및 에오신 염색은 처리 후 중이 점막 및 중이 조직의 보존을 나타내었다(도 1). 면역조직화학 이미지는 중이 점막 및 유스타키오관 내에서 ACE2, TMPRSS2, 및 퓨린 단백질의 발현을 보여주었다(도 1). 중이 내에 이러한 단백질의 존재는 SARS-CoV-2가 중이 내의 호흡기 상피를 감염시킬 수있는 가능한 경로를 제공합니다11,12,13. 또한, 유스타키오관 내에서 이러한 단백질의 발현은 바이러스가 중이에 들어가고, 유스타키오관을 통해 비인두로부터 중이로 이동하는 경로를 설명할 수 있다.
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이 기사에서는 트윈 다이아몬드 블레이드가있는 마이크로 소를 사용하여 측두골 면역 조직 화학의 신속한 탈석회화 및 분석을 위해 얇은 조각을 생성하는 신속한 인간 측두골 절편 기술을 설명합니다.

COVID-19 관련 중이 병리학 평가를위한 고속 인간 측두골 절편

Histopathologic analysis of human temporal bone sections is a fundamental technique for studying inner and middle ear pathology. Temporal bone sections ...

이 프로토콜은 측두골 처리 시간을 9 개월에서 10 개월에서 10 일에서 14 일로 줄입니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 우리의 경우 COVID-19 관련 중이 병리학의 평가와 관련된 이토 병리학의 신속한 평가를 가능하게한다는 것입니다. 이 기술은 측두골의 시간에 민감한 연구에 특히 유용할 수 있다.앞으로는 내이 병리학을 연구하는 데 더 최적화 될 수 있습니다. 부검 중에 수확을 시작하고 두개골 신경을 내부 청각 운하로 급격하게 나눕니다. 첫 번째 뼈 절개를 골골과 평행하게하고 측두골의 편평한 부분에 내측으로 만듭니다.그런 다음 두 번째 뼈 절개를 측두골의 내측 경계에서 첫 번째 뼈와 평행하게 수행하십시오. 세 번째 절개를 서너 센티미터 앞쪽에 놓고 페트로우스 능선과 평행하게 만듭니다. 다음으로, 네 번째 절개를 페트로우스 능선에 두 센티미터 후방에서 세 번째 절개와 대략 평행하게 만듭니다.날카로운 해부를 사용하여 표본의 열등한 가장자리를 따라 부착 된 연조직을 제거하고 측두골을 제거하십시오. 수확 후, 즉시 조직을 10 % 완충 포르말린의 200 ~ 300 밀리리터에 잠급니다. 그런 다음 트윈 다이아몬드 블레이드가있는 정밀 마이크로 톱을 다섯 밀리미터 거리로 설정하십시오.신속한 조직 탈석회화를 위해 각 표본을 세 개의 섹션으로 잘라 측두골의 중앙 부분이 다섯 밀리미터 두께이고 양쪽 끝에있는 부분이 세 밀리미터에서 다섯 밀리미터 두께가되도록하십시오. 절편을 연화를 위해 실온에서 7 ~ 10 일 동안 0.37 몰 EDTA의 200 내지 300 밀리리터에 놓습니다. 중이 점막 및 유스타키오 관의 헤마톡실린 및 에오신 염색은 이러한 프로토콜을 사용하여 처리 후 조직이 보존되는 것으로 나타났다.면역 조직 화학 분석은 ACE2, 막횡단 프로테아제 세린 및 퓨린 단백질의 존재를 보여 주었고, 중이의 호흡기 상피에서 SARS-CoV2 감염의 가능한 뿌리를 제공했습니다. 측두골 조직을 다이아몬드 톱 내에 적절히 위치시키는 것이 중요합니다. 이 방법과 조합될 수 있는 대안적인 기술은 상이한 단백질, 상이한 조직 얼룩, 및 전사체학에 대한 면역조직화학을 포함한다.이 기술을 통해 우리는 COVID-19 전염병 기간 동안 중이 내에서 SARS-CoV2 감염에 관련된 단백질의 존재를 신속하게 평가할 수있었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

immunohistochemistry과 공촛점 현미경 다음 Corti의 기관을 sectioning vibratome의 간단한 절차 설명합니다. 이 절차는 Corti의 포유 동물 장기의 벌금 cytoarchitecture 개선 보존을 허용하고, 결과적으로 세포 유형의 정확한 양을 정함을 허용합니다.

Vibratome는 Corti의 포유 동물 조직의 Cytoarchitecture의 향상된 보존을위한 Sectioning

동물 모델의 달팽이관에 이독성 물질을 도입하는 다양한 방법이 있습니다. 제시된 것은 이독성 물질을 둥근 창 틈새에 전달하기 위한 수술 프로토콜입니다. 이 절차는 신뢰할 수 있고, 표적화된 달팽이관 내 병변을 생성하며, 마이크로아키텍처에 대한 기계적 손상을 방지합니다. 달팽이관 자가 수리/재생에 대한 검사가 가능합니다.

인공 와우 세포 변성을 유도하기위한 신속하고 신뢰할 수있는 기술 : Ototoxic 에이전트 배달을 위해 마우스 라운드 창 접근

우리는 세 가지 그대로 인공 회전 (정점, 중,베이스)로 코르티 성인 기관을 분리하는 방법을 제시한다. 또한 형광 태그 항체 면역 염색을위한 절차를 보여준다. 함께 이들 기술은 달팽이관 검색된 유모 세포,지지 세포 및 다른 세포 유형의 연구를 허용한다.

전체 마운트 해부 및 성인 마우스 달팽이관의 면역 형광

우리는 전체 마운트 및 조직학적 분석을 위해 산후 마우스에서 청각용 수포, 캡슐 및 이소골을 분리하는 프로토콜을 제시합니다.

출생 후의 쥐의 청각 수포의 해부 : 중이의 뼈와 조직 학적 분석의 분리

이 문서의 목표 독점적으로 내 시경 싱가포르로 중간 귀 해 부의 방법론을 설명 하는. 또한, 우리는 내 시경 중간 귀 해부학에 포괄적인 가이드를 제공을 목표로.

Transcanal 내 시경 귀 수술에 의해 중간 귀 해부학 발견: 해 부 매뉴얼

이 프로토콜의 목표 decellularize 알려줍니다 마우스 cochleae 조직 공학 응용 프로그램에 대 한 공중 발판으로 이용 하는 효과적인 방법 설명 하는 것입니다.

내가 조직 공학에 대 한 마우스 Cochleae Decellularizing에 대 한 프로토콜

PCD 진단을 위한 성공적이고 고품질의 섬모 기능 분석을 보장하려면 호흡기 상피 샘플링 및 처리를 위한 정확하고 신중한 방법이 필수적입니다. COVID-19 팬데믹 기간 동안 PCD 진단 서비스를 계속 제공하기 위해 섬모 비디오 현미경 프로토콜이 적절한 감염 관리 조치를 포함하도록 업데이트되었습니다.

디지털 고속 섬모 비디오 현미경을 사용한 비강 칫솔질 샘플링 및 처리 – COVID-19 전염병에 대한 적응

이 논문은 뚜렷한 해부학적 랜드마크를 따라가면서 드릴 아웃을 통해 사체 측두골에서 인간의 달팽이관을 추출하는 신뢰할 수 있는 방법을 제시합니다.

인간의 측두골에서 달팽이관 추출: 시체 프로토콜

여기에서, 우리는 마우스에서 일차 달팽이관 유모 세포를 분리하고 배양하기 위한 상세한 프로토콜을 제시합니다. 처음에는 Corti의 장기를 현미경으로 신생아(3-5일령) 쥐 달팽이관에서 절개했습니다. 이어서, 세포를 효소에 의해 단일세포 현탁액으로 절단하고, 배양에서 며칠 후에 면역형광을 이용하여 확인하였다.

신생아 마우스의 일차 달팽이관 유모 세포의 분리 및 배양

여기에서는 미로 절제술 중 생리학적 조건에서 인간 전정 말단을 적출하는 기술과 면역 염색을 사용한 분석에 대해 설명합니다.

Labyrinthectomy 중 생리학적 조건 하에서 전정 말단 장기의 수확

학습하세요 고속 측두골 절편 기법으로 COVID-19 관련 중이 병리학을 신속히 평가하는 방법입니다. 이 기술은 처리 시간을 9~10개월에서 10~14일로 단축하여 긴급한 이과 연구에 활용할 수 있습니다.

COVID-19 관련 중이 병리학 평가를위한 고속 인간 측두골 절편

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