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형광 미토콘드리아를 이용한 조건부 불멸화 마우스 사구체 내피 세포의 분리
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JoVE Journal Biology
Isolation of Conditionally Immortalized Mouse Glomerular Endothelial Cells with Fluorescent Mitochondria

형광 미토콘드리아를 이용한 조건부 불멸화 마우스 사구체 내피 세포의 분리

Full Text
2,787 Views
11:49 min
September 13, 2022

DOI: 10.3791/64147-v

Rihab Bouchareb1, Liping Yu1, Emelie Lassen1, Ilse S. Daehn1

1Department of Medicine, Division of Nephrology,The Icahn School of Medicine at Mount Sinai

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article describes a method for isolating conditionally immortalized glomerular endothelial cells (GECs) from transgenic mice, allowing for the examination of mitochondrial structures in response to various stimuli. Utilizing high yields of GECs, the method serves as a foundation for screening potential therapies for diabetic kidney disease.

Key Study Components

Research Area

  • Cell biology
  • Diabetic kidney disease research
  • Endothelial cell biology

Background

  • Immortalized GECs provide a model for studying kidney functions.
  • The use of fluorescent mitochondria aids in observing intracellular changes.
  • Understanding GEC responses to stimuli can inform therapeutic strategies.

Methods Used

  • Isolation and culturing procedures for glomerular endothelial cells
  • Transgenic mice expressing fluorescent markers
  • Use of collagen IV and magnetic beads for cell selection

Main Results

  • A successful isolation protocol yielding viable GECs.
  • Verification of cell identity through CD31 positivity and mitochondrial fluorescence.
  • Demonstration of the method's application to drug screening in kidney disease.

Conclusions

  • The study illustrates a straightforward method for obtaining GECs from mice.
  • Results are relevant for understanding endothelial function and developing treatments for kidney diseases.

Frequently Asked Questions

What is the significance of using immortalized GECs?
They provide a stable model to study endothelial functions and responses.
How does the method help in diabetic kidney disease research?
It allows for screening potential therapies directly on GECs affected by the disease.
What precautions should be taken during the procedure?
Sterilization of equipment and workspace is crucial to prevent contamination.
Can the cells be preserved for future experiments?
Yes, the cells can be cryopreserved for later use.
What are CD31 positive cells?
They are a marker for endothelial cells, indicating successful isolation of GECs.
What role do the fluorescent mitochondria play in the study?
They allow researchers to visualize and evaluate mitochondrial changes in cells.

이 논문은 열안정성 유인원 바이러스 40 및 광활성성 미토콘드리아를 발현하는 트랜스제닉 마우스의 신장으로부터 조건부로 불멸화된 사구체 내피 세포를분리하는 방법을 설명한다. 우리는 구슬, 소화 단계, 파종 및 GECs-CD31 양성의 배양을 사용하여 전체 신장에서 사구체를 분리하는 절차를 설명합니다.

안정적인 형광 미토콘드리아를 가진 불멸화 된 사구체 내피 세포는 시험관 내에서 미토콘드리아 구조에 대한 다양한 자극의 효과를 조사하는 훌륭한 도구입니다. 현재 기사에서 기술된 방법은 많은 수의 사구체 내피 세포를 생성한다. GEC에서 소분자를 테스트함으로써 GEC가 영향을받는 당뇨병 성 신장 질환에 대한 단독 요법을 선별 할 수 있습니다.

설명 된 방법은 수행하기 쉽고 특정 장비가 필요하지 않습니다. 그러나 오염 방지를 위해 설명 된 단계를 따르고 장비를 멸균하는 것이 중요합니다. 시작하려면 신장 사구체 세포를 분리하는 데 필요한 관류 및 분리 재료를 작업 공간에 배치하십시오.

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