Name: 실험실 조건에서 잎 절단 개미 (Atta)의 수집 및 장기 유지 관리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-08-30T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: 배우세요 실험실에서 Atta 잎 절단 개미 군집을 수집하고 장기 유지 관리하는 방법을. 인공 둥지 설정과 곰팡이 정원 관리를 통해 개미 생물학 연구와 과학 교육에 활용할 수 있습니다.

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마리오 오투오리(추모) 와 월터 휴고 드 안드라데 쿠냐 잎사귀 연구에 크게 기여한 사람. 우리는 상파울루 주립 대학과 생명 과학 연구소의 지원을 인정합니다. 이 연구는 부분적으로 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior-Brasil (CAPES) - Finance Code 001, Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) 및 Fundação para o Desenvolvimento da UNESP (Fundunesp)에 의해 재정 지원을 받았다.

저자는 공개 할 이해 상충이 없습니다.

잎을 자르는 개미 식민지를 유지하기 위해 여기에 설명 된 프로토콜은 단호하고 복제 가능한 방식으로 3 년 이상 개발 및 적용되었습니다. 그것은 현장 조건에 의해 제한 될 연구의 개발을 허용했습니다. 이로써 건강한 개미와 식민지는 개인 및 식민지 수준에서 비교 형태학, 독성학 51,52, 조직학53 및 미생물학54,55,56과 같은 여러 영역에서 연구에 사용할 수있게되었습니다. 실험실에서의 유지 관리에는 유리한 비 생물 적 조건에서의 현장 준비, 여왕 및 어린 식민지 수집 및 지속적인 관리를 포함하는 여기에 설명 된 몇 가지 절차가 포함됩니다.
통제 된 조건에서 잎 절단...

개미는 대부분의 육상 환경에 영향을 미치는 다양한 개체 그룹을 구성합니다1. 그들은 효율적인 분산기 2,3,4, 포식자5 및 생태계 엔지니어 6,7,8,9,10 역할을하여 자연 생태계에서의 중요성과 생태 학적 성공을 강조합니다. 모든 개미 종은 진사회적 곤충으로 분류됩니다. 그러나 그들의 사회 조직은 다른 종 그룹, 즉 노동 분업 시스템, 기능 그룹, 개인 간의 의사 소통, 사료 조직, 식민지 기초 및 번식 과정11에 따라 크게 다릅니다. 매우 다양한 그룹으로서 그들은 여러 식량 자원과 전문화 된 섭식 행동에 의존합니다. 사실, 농업은 인류 문명뿐만 아니라 개미 종에게도 큰 발걸음이었습니다. 대략 55 내지 65 Ma12 전, attine 개미는 곰팡이를 배양하여 거의 독점적 인 식단에 통합하기 시작했습니다. 그들은 너무 전문화되어 한 개인이 다른 사람 없이는 생존하지 못하는 공생으로 분류되는 엄격하고 의존적이며 의무적인 상호 작용을 개발했습니다.
낮은 곰팡이 성장 개미는 썩은 잎 조각과 같은 죽은 유기물을 수집하고 처리하여 상호 주의적 곰팡이를 성장시킵니다. 더 높은 곰팡이 성장 개미가 신선한 식물 재료를 수확하는 동안 가장 성공적인 공생 자연 시스템 중 하나를 구성합니다13. 이 고도로 전문화 된 농업 기술을 통해 새로운 틈새 시장을 확보 할 수있었습니다. 더 높은 attine 개미는 19 Ma (15-24 Ma)와 18 Ma (14-22 Ma) 사이에서 일어나는 단일 계통 그룹 인 잎 절단 개미로 구성됩니다.14,15,16 네 개의 유효한 속으로 구성됩니다 : Atta Fabricius, Acromyrmex Mayr, Amoimyrmex Cristiano 및 Pseudoatta Gallardo. 잎사귀 개미가 수행하는 잎사귀 농업 시스템은 파생 농업 시스템17에서 진화했습니다. 이 종의 대부분은 상호 주의적 곰팡이 종 Leucoagaricus gongylophorus Singer 18 (Leucocoprinus gongylophorus Heim19라고도 함)을 독점적으로 이용하며, 이는 중요한 진화 적 전환을 표시합니다11. 곰팡이 품종은 원래 둥지에서 자손으로 수직으로 전염되어 클론 적으로 번식 함을 시사합니다20.
놀랍게도, Atta 사회는 환경에서 매우 중요하고 myrmecologists에게 큰 관심을 끄는 복잡한 조직 구조를 개발했습니다. 그들의 인구는 수백만 명의 개인으로 구성 될 수 있으며, 대부분은 뚜렷한 다형성, 즉 뚜렷한 크기와 해부학 적 형태를 나타내는 무균 여성 근로자입니다. 인구는 연령, 생리적 상태, 형태 학적 유형, 행동 및 식민지의 특수 활동에 따라 카스트로 구별됩니다21. 작업자는 정원사와 간호사, 둥지 내 일반인, 수렵채집인과 굴착기, 방어자 또는 군인으로 차별될 수 있습니다21. 이 조직은 협력을 통한 작업 수행과 고도로 구조화 된 집단 행동을 생성 할 수있는 자기 조직화 시스템을 허용하여 환경 교란22에 효율적으로 대응할 수 있도록합니다.
인구 재생의 역할은 그녀가 살아있는 한 한 명의 여왕 (즉, 일부일처 제)에 의해 수행되며 영구 생식 카스트22를 구성합니다. Atta 여왕은 20 년 이상 살며 평생 동안 알을 낳는 것으로 알려져 있습니다23. 여왕은 대체 할 수 없기 때문에 지구력은 식민지 13,20,23,24의 생존에 매우 중요합니다. 그러나 번식기에는 수천 마리의 날개 달린 생식 암컷과 수컷이 둥지에서 발견 될 수 있지만 원래 둥지에 머무르는 사람은 아무도 없어 임시 카스트22를 형성합니다. Atta sexdens 식민지에서는 거의 3,000 명의 생식 암컷과 14,000 명의 생식 수컷이생산됩니다 25. 식민지가 시행 후 약 38 개월 후에 성적으로 성숙 할 때 발생하며 그 이후로 소멸 될 때까지 매년 반복됩니다23,25. 새로운 Atta 식민지는 한 여왕이 새로운 둥지를 시작하는 haplometrosis를 통해 형성됩니다.
환경 조건이 좋으면 재현자는 지하 둥지를 떠나 결혼식 비행을 시작합니다. 발생 기간은 종에 따라 브라질 영토 전체에 걸쳐 지역마다 다릅니다. 그러나, 이 사건은 강우 및 습도 상승(26)에 선행되는 것으로 보이며, 이는 토양 수분(22)으로 인한 굴착 촉진과 관련될 수 있다. 종종 결혼식 비행 1-5 주 전에 둥지 입구와 채널을 넓혀 생식 개체가 쉽게 출발 할 수 있습니다. 그들의 어머니 식민지를 떠나기 전에, 날개 달린 암컷은 상호 주의적 곰팡이20,27의 일부를 협측 하부 구멍에 모아서 저장합니다. 비행 중에 여러 번의 교미가 수행되며, 일부 종28에서는 한 마리의 여왕이 3-8 마리의 수컷 (즉, 일부다처제)에 의해 수정 될 수 있다고 계산되어 유전 적 다양성을 보장합니다 29. 그 후, 여왕은 토양으로 이동하여 초목이 없거나 거의없는 위치를 선호하며25 날개를 제거하고 첫 번째 둥지 방을 굴착합니다. 이것은 둥지 밖에서 여왕을 볼 수있는 유일한 기간입니다. 임시 카스트의 개체가 인공 둥지에서 관찰되었지만 실험실 조건에서 성공적인 교미 (즉, 결혼식 비행)가 수행되었는지 여부는 알려져 있지 않습니다24.
초기 둥지 건설은 식민지의 가장 중요한시기에 해당하며 6 시간에서 8 시간23,25까지 지속될 수 있습니다. 이 순간, 여왕은 초기 방에서 자신을 회랑하고, 며칠 만에 산란이 시작됩니다. 첫 번째 알은 여왕이 역류하는 균사체에 공급되어 식민지의 곰팡이 정원의 시작을 알립니다. 첫 번째 유충은 약 25 일22 일에 나타나며, 거의 첫 달 말에 식민지는 미성숙 (알, 유충 및 번데기)이 둥지를 틀고있는 증식하는 곰팡이 매트와 초기 자손을 고립시켜 키우는 여왕으로 구성됩니다23. 계란은 또한 첫 번째 유충의 식량 자원이며 여왕13에 의해 많이 소비됩니다. 또한 여왕은 더 이상 사용되지 않는 뚱뚱한 몸과 이화 날개 근육으로 자신을 유지합니다13. 초기 곰팡이 배양은 식민지 생존이 발달에 달려 있기 때문에 소비되지 않으며,이 기간 동안 여왕은 대변13으로 수정한다. 출현 후 며칠 후, 첫 번째 작업자는 둥지 입구를 열고 둥지13의 바로 옆 영역에서 채집 활동을 시작합니다. 그들은 곰팡이 정원의 기질로 수집 된 재료를 통합하여 현재 근로자13,22를위한 음식으로 사용됩니다. 곰팡이 배양에 첨가되기 전에, 작업자에 의해 운반 된 식물 재료는 작은 조각으로 절단되고 배설물액체 13로 적셔진다. 개미는 곰팡이 접종 물을 조작하여 성장을 증가시키고 제어하며, 이는 정원 13,22,25를 조절하는 데 특화된 큰 토양 굴착 챔버를 분할하는 역할을합니다.
결혼식 비행 후 약 6 개월 후, A. sexdens 둥지에는 곰팡이 챔버와 몇 개의 채널이 있습니다. 잎 절단 개미 둥지 건설의 위대한 전문화는 천적과 불리한 환경 요인에 대한 방어 메커니즘으로 작동합니다22. 잎 절단 개미는 곰팡이 정원을 조각화하고 챔버가 마르기 시작할 때 습도가 높은 챔버로 옮기는 것으로 알려져 있습니다13. 따라서, 상당한 에너지 비용을 갖는 둥지의 굴착에도 불구하고, 투자된 에너지는 식민지 자체에 대한 이익에서 역전된다(22). 몇 가지 예외를 제외하고 Atta 종은 대부분 고갈 된 곰팡이 기질과 죽은 개미의 시체로 만들어진 식민지의 폐기물을위한 특수 챔버를 만들어 나머지 둥지와 격리하고 중요한 사회적 면역 전략을 수립합니다30. 또한 별개의 작업자 그룹이 다른 개인의 오염을 피하기 위해 쓰레기를 직접 조작합니다. 노동자들은 식민지의 주요 영양 자원 인 곰팡이를 키우기 위해 끊임없이 먹이를 찾습니다. 그러나 그들은 파편을 자르는 동안 식물 수액을 먹을 수 있습니다. 식물 재료는 곰팡이 정원 유지를 위해 신중하게 선택되며 잎 특성 및 생태계의 특성과 같은 많은 요인의 영향을받습니다13.
신선한 재료를 얻기 위해 개미를 자르는 채집 전략은 매우 복잡하며 기존 식민지의 높은 수확 수요와 결합되어 농업 생산자에게 상당한 경제적 손실을 초래하고 산림 복원 지역을 위태롭게합니다22,31. 따라서이 개미는 미국 남부에서 아르헨티나 북동부 11,13,22,32에 이르기까지 발생할 수있는 대부분의 지역에서 해충으로 분류 될 수 있습니다. 문제가있는 식민지의 멸종은 이러한 곤충의 생물학에 내재 된 일련의 적응 (즉, 사회 조직, 채집, 곰팡이 재배, 위생 및 복잡한 둥지 구조)으로 인해 어렵습니다 33. 따라서 개체군 통제 전략은 다른 해충에 일반적으로 적용되는 전략과 구별되며 주로 매력적인 오염 된 미끼 제물33,34에 의존합니다. 그러나 이러한 개미는 곰팡이와 식민지 개체 모두에 유해한 물질을 거부하고 경작지를 손상시킬 수 있기 때문에 33, 새로운 천연 화합물 및 방제 대안이 지속적으로 테스트되고 있습니다33,35,36. 현장 테스트를 거친 콜로니에서는 실험 결과를 거의 모니터링 할 수 없기 때문에 예비 에세이는 통제 된 환경에서 수행됩니다.
따라서, 실험 프로토콜은 개미의 이질적인 생활 방식을 고려하고, 종 수준에 대한 연구를 지원하고, 하나의 개미가 복잡한 초유기체(11)의 요소인 운영 단위로서 콜로니를 설명하는 관심 그룹에 적응되어야 한다. 지금까지 Atta 속에 관해 수집 된 보고서는 실험실 조건에서 식민지를 성공적으로 수집 및 유지하고 기본 요구와 일반적인 기능을 인정할 수있게했습니다. 번식, 식민지 설립 및 먹이 행동과 같은 자연적 과정을 기반으로 다양한 유형의 둥지에 식민지를 장기간 설립 할 수있는 일상적인 관행이 개발되었습니다. 여기에서는 실험실에서 잎사귀 개미를 유지하기 위한 절차적 프로토콜이 설명되고 뚜렷한 실험 목적과 과학 지원을 통해 가능한 일반 연구를 강조합니다.

<table><tbody><tr><td>곤충학 겸자</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A 해당 없음</td></tr><tr><td>유리 탱크</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>강화 유리, 맞춤형</td></tr><tr><td>호스</td><td>N/A</td><td>N/</td><td>A 투명, PVC 1/2 인치 x 2,0 mm</td></tr><tr><td>라텍스 장갑</td><td>Descarpack</td><td>550301</td><td>N/A</td></tr><tr><td>니트릴 장갑</td><td>Descarpack</td><td>433301</td><td>N/A</td></tr><tr><td>오픈 아레나</td><td>N/A</td><td>해당 없음</td><td>폴리 프로필렌 상자</td></tr><tr><td>석고 pouder</td><td>N / A</td><td>N / A</td><td>건축에 사용되는 석고 pouder는 흡수성이어야합니다</td></tr><tr><td>수집 용 플라스틱 용기</td><td>Prafesta</td><td>Natural C&oacute; : 8231 / Natural C&oacute; d : 8262</td><td>뚜껑이 달린 투명, 폴리 프로필렌</td></tr><tr><td>둥지 용 플라스틱 용기</td><td>Prafesta</td><td>단종</td><td>폴리스티렌, 밀폐</td></tr><tr><td>테프론</td><td>듀퐁</td><td>N/A</td><td>폴리테트라플루오로에틸렌 액체(PTFE Dispertion 30)</td></tr></tbody></table>

실험실 조건에서 잎 절단 개미 (atta)의 수집 및 장기 유지 관리

Collection and Long-Term Maintenance of Leaf-Cutting Ants (Atta) in Laboratory Conditions

개미는 지구상에서 가장 생물 다양성이 높은 동물 그룹 중 하나이며 다양한 환경에 서식합니다. 통제 된 환경에서 개미 식민지를 유지하면 응용 연구에 기여할 수있는 생물학에 대한 풍부한 이해가 가능합니다. 이 관행은 일반적으로 Atta 개미와 같이 경제적 손실을 초래하는 종의 인구 통제 연구에 사용됩니다. 그들의 상호 주의적 곰팡이를 재배하기 위해,이 잎사귀 개미는 잎을 모으고이를 위해 미국 대륙 전역에 널리 분포하는 농업 해충으로 간주됩니다. 그들은 고도로 사회적으로 조직되어 있으며 다양한 방으로 구성된 정교한 지하 둥지에 서식합니다. 통제 된 환경에서의 유지 관리는 여기에 설명 된 여러 절차와 빈번한 관리의 일상 생활에 달려 있습니다. 그것은 번식기 (즉, 결혼식 비행) 동안 여왕의 수집으로 시작하여 개별적으로 플라스틱 용기로 옮겨집니다. 여왕의 사망률이 높기 때문에 결혼식 비행 후 약 6 개월 후에 곰팡이 뭉치가 발달 한 초기 둥지를 발굴하고 손으로 골라 플라스틱 용기에 넣을 때 두 번째 수집을 수행 할 수 있습니다. 실험실에서는 잎이 매일 확립 된 식민지에 제공되고 개미가 생산 한 폐기물은 남아있는 건조한 식물 재료와 함께 매주 제거됩니다. 곰팡이 정원이 계속 자라면서 식민지는 실험 목적에 따라 다른 유형의 용기로 옮겨집니다. 잎을 자르는 개미 식민지는 상호 연결된 용기에 배치되어 자연에서 곤충이 만든 기능적인 챔버가있는 조직 시스템을 나타냅니다. 이 설정은 폐기물 양, 곰팡이 정원 건강, 작업자와 여왕의 행동과 같은 요소를 모니터링하는 데 이상적입니다. 촉진 된 데이터 수집과보다 상세한 관찰은 개미 식민지를 통제 된 상태로 유지하는 가장 큰 이점으로 간주됩니다.

개미 수집 과정을 보여주는 순서도는 그림 6에 나와 있습니다. 여기서, 위에서 설명한 수집, 유지 관리 및 둥지 설정의 프로토콜을 사용하여 얻은 일부 결과가 표시됩니다.
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64154/64154fig6v2.jpg"> 그림 6: 잎사귀 개미의 군락 수집을 위한 순서도. 프로토콜에 따라 첫 번째 수집은 결혼식 비행 직후에 이루어집니다. 날개를 제거한 여왕을 모아서 석고 바닥이있는 작은 용기에 넣습니다. 결혼식 비행 6 개월 후 두 번째 수집이 발생합니다. 토양을 발굴하고 성공적으로 식민지 기초를 시작한 여왕이 수집됩니다. 식민지가 발달 한 후에는 더 큰 컨테이너로 옮...

여기에서는 실험실 조건에서 건강한 Atta (Hymenoptera : Formicidae) 개미 식민지를 성공적으로 수집하고 유지하기위한 프로토콜이 설명됩니다. 또한 가능한 실험 절차와 함께 다양한 둥지 유형 및 구성이 자세히 설명되어 있습니다.

실험실 조건에서 잎 절단 개미 (Atta)의 수집 및 장기 유지 관리

Ants are one of the most biodiverse groups of animals on the planet and inhabit different environments. The maintenance of ant colonies in controlled ...

실험실 조건에서 다양한 유형의 둥지에서 식민지를 성공적으로 수집하고 유지하면 일반 연구를 개발할 수 있으며 과학 봉사 활동을 촉진 할 수 있습니다. 파일 테스트를 거친 콜로니는 모니터링하기 어렵기 때문에 이 프로토콜은 전체 콜로니를 운영 단위로 사용하여 통제된 환경에서 예비 실험 조건을 허용합니다. 이 프로토콜은 Acromimix 속의 독특한 개미와 같은 개미 종의 이질적인 생활 방식을 고려할 때 관심있는 다른 그룹에 적용될 수 있습니다.이 기술을 수행 한 적이없는 개인은 사건의 불확실성과 복잡한 일상 관리를 어려움으로 간주 할 수 있습니다. 첫 번째 수집은 날개를 제거하고 발굴을 시작한 여왕이 석고 바닥이있는 작은 용기에 놓이는 결혼식 비행 직후에 이루어져야합니다. 두 번째 수집은 식민지 기초를 성공적으로 시작한 여왕이 개발 한 식민지가 수집되는 결혼식 비행 후 6 개월 후에 이루어져야합니다.식민지가 발달 한 후에는 더 큰 컨테이너로 옮겨지고 선택적으로 다른 둥지 설정으로 옮겨집니다. 여왕을 개별적으로 유지하기 위해 바닥 석고 층이있는 플라스틱 뚜껑 용기를 준비하십시오. 번식기에는 잎을 자르는 개미가 발생하는 지역에서 Atta 둥지를 확인하고 날개 달린 생식 개미의 다가오는 출발을 나타내는 외부 특징을 찾으십시오.둥지 특징에는 터널 입구가 넓어지고, 터널 입구에 날개 달린 생식 개미가 나타나고, 가능한 포식자에 대해보다 공격적인 행동을 보이는 작업자의 흐름이 증가합니다. 결혼식 비행 후 여성 번식자가 토양으로 돌아 오면 날개를 제거하고 둥지 발굴을 시작하십시오. 여왕의 수집을 시작하십시오.석고 층으로 준비된 플라스틱 용기에 조심스럽게 개별적으로 넣으십시오. 여왕을 통제 된 환경에 놓고 스트레스를 피하기 위해 약 3 일 동안 조작하거나 움직이지 마십시오. 조심스럽게 뚜껑을 뚫고 2 일마다 용기의 석고 층에 바늘 주사기로 2.5 밀리리터의 물을 붓습니다.곰팡이 정원이 물 부재로 건조한 측면을 나타내는 한 석고 층을 관개하십시오. 여왕이 수집 2 주 후에 곰팡이를 역류했는지 확인하십시오. 곰팡이가 없다면 건강하고 확립 된 식민지의 곰팡이 정원 2 그램을 모아서 여왕의 용기로 옮깁니다.곰팡이가 발생하지 않더라도이 단계를 수행하십시오. 첫 번째 작업자가 출현 한 후 식민지의 절단 활동에 따라 정기적으로 젊고 얇은 잎 조각을 제공하고 식민지 폐기물과 마른 잎 조각을 제거하십시오. 식민지의 발달을 따르고 곰팡이 정원이 용기 부피의 절반 이상에 도달하면 식민지를 인위적이고 내구성있는 둥지로 옮깁니다.마지막 결혼식 비행 후 6 개월 후, 잎 절단 개미의 발생 위치에 초기 도달의 과립 화 된 토양 입자가있는 표시 타워 모양의 마운드를 식별하십시오. 젊은 식민지의 둥지는 결혼식 비행 6 개월 후 토양에서 최대 1 미터 깊이로 추정됩니다. 이 순간, 정원 괭이로 어린 식민지를 잡고있는 방에 도달 할 때까지 둥지 입구를 굴착하십시오.여왕, 곰팡이 정원, 미성숙 및 젊은 근로자를 모아서 약 500 밀리리터의 플라스틱 용기에 넣으십시오. 식민지를 담고있는 플라스틱 뚜껑이있는 용기를 지정된 통제 된 환경으로 옮깁니다. 스트레스를 피하기 위해 약 3 일 동안 식민지를 조작하거나 움직이지 마십시오.나뭇잎 제공을 시작하십시오. 새 잎을 제공 할 때 마른 잎과 식민지 폐기물을 제거하십시오. 숟가락의 도움으로 수집에서 토양 잔해를 제거하십시오.식민지의 발달을 따르고 곰팡이 정원이 컨테이너 부피의 절반 이상에 도달하면 식민지를 인위적이고 내구성있는 둥지 회랑 수직 둥지, 회랑 수평 둥지 및 열린 경기장 둥지로 옮깁니다. 더 적합한 설정 회랑 수직 둥지, 회랑 수평 둥지 및 열린 경기장 둥지로 인공적이고 내구성있는 둥지를 준비하십시오. 채집실, 폐기물 챔버 및 곰팡이 정원 챔버가있는 회랑 수직 둥지 설정을 준비하십시오.그런 다음 채집실, 폐기물 챔버 및 곰팡이 정원 챔버가있는 회랑 수평 둥지 설정을 준비하십시오. 다음으로, 채집 및 폐기물 챔버와 곰팡이 정원 챔버가 연결된 개방형 경기장 둥지 설정을 준비하십시오. 경기장은 또한 곰팡이 챔버를 보유 할 수 있습니다.한 번의 움직임으로 폴리 테트라 플루오로 에틸렌 액체의 한 층을 개미를 담기 위해 경기장 경계에 바르십시오. 액체 및 니트릴 장갑에 적신면을 사용하십시오. 곰팡이 정원 부피 1 리터로 식민지 당 채집 실에 매일 적어도 하나의 큰 잎을 제공하십시오.제공 빈도는 작업자가 곰팡이에 식물 재료를 통합하는 민첩성에 따라 다릅니다. 개미의 절단 활동이 강하면 잎의 수를 늘리십시오. 회랑 둥지에서는 개미가 먹이를 찾는 방에서 탈출하지 않도록 신속하게 제물을 수행하십시오.다른 유형의 리소스도 제공 될 수 있습니다. 열린 경기장 둥지에서는 곰팡이 리터에 따라 잎을 제공하고 폐기물을 멀리하십시오. 개체수 통제 목적으로 모든 식민지와 내구성있는 둥지 및 작업자 당 2 주마다 폐기물 챔버의 모든 내용물을 제거하십시오.폐기되는 폐기물의 양이 많거나 너무 습한 경우 일주일에 한 번 제거하십시오. 작업자가 건강한 곰팡이를 폐기물 챔버로 옮기면 여왕이 그 위에 있지 않은지 확인하고 제거하십시오. 새 재료를 제공 할 때마다 개미가 채집 실에서 가져 가지 않은 재료를 제거하고 항상 깨끗한 지 확인하십시오.작업자가 건강한 곰팡이를 채집 챔버로 옮기면 방해하고 용기 뚜껑을 열어두고 챔버 가장자리 표면에 중성 활석 가루를 바르십시오. 이렇게하면 작업자가 곰팡이를 잃어 버리거나 미성숙하지 않고 용기로 다시 옮길 수 있습니다. 더 많은 곰팡이 정원이 필요하면 다른 회 반죽 용기를 추가하고 곰팡이 스폰지의 일부를 그 안으로 옮깁니다.곰팡이 정원의 성장은 식민지 균형을 손상시키지 않고 점진적으로 이루어져야합니다. 더 큰 용기를 원한다면 옮기기 전에 곰팡이가 가장 작은 용기의 전체 공간을 차지하도록하십시오. 식민지 폐기물은 곰팡이 정원 챔버에 축적되어서는 안됩니다.프로토콜에 설명 된대로 초기 생애주기의 다른 순간에 여왕을 수집하고 개인의 가스터에 나일론 실을 도입함으로써 처녀 여왕, 최근에 짝짓기 한 여왕 및 6 개월 동안 짝짓기 한 여왕 사이의 개별 면역 저항을 평가하고 비교할 수있었습니다. 캡슐화 수준은 개인의 가스터에 삽입된 나일론 필라멘트의 이미지로부터의 평균 회색 값을 통해 평가되었다. 가장 어두운 실은 효율적인 세포 방어를 나타내는 것으로 간주되었습니다.Atta laevigata는 최근에 짝을 바른 여왕이 가장 높은 캡슐화 수준을 보여 효과적인 개인 면역 방어를 보였습니다. 인구 통제 방법을 개선하기 위해 프로토콜을 통해 수집 된 식민지가 Bates 매력도 테스트에 제출되었습니다. 실험 전반에 걸쳐 각 종의 5 개 콜로니 인 Atta laevigata 및 Atta Sextens로 5 회 반복되었습니다.다른 하위 제품으로 공식화 된 무독성 미끼는 반복 내에서 다양하게 배열되었습니다. Atta laevigata 및 Atta sexdens 작업자의 평균 적재 비율은 여기에 표시됩니다. 구연산 펄프, 대두 및 대두와 구연산 펄프 처리는 두 종 모두에 대해 가장 많이 적재되었습니다.그러나 Atta sexdens에 대한 마지막 부하 처리는 Atta laevigata 작업자에 의해 60 %로드되었습니다. 2016 년부터 2019 년까지 약 34 개 학교에서 온 약 2, 020 명의 학생들이 잎 절단 개미 실험실을 방문하여 이전에 설명한 프로토콜을 사용하여 수집 및 유지 관리되는 개미 식민지를 관찰 할 수있었습니다. 학생들이 면밀히 관찰 할 수있는 개미와 같은 살아있는 곤충의 전시회를 실시하는 교육 기관의 관심이 증가하는 것을 볼 수 있습니다.방문은 학생들의 교육 수준에 따라 일반 생물학에서 사회적 행동 학습에 이르기까지 다른 목표를 가졌습니다. 이 기술의 몇 가지 중요한 단계는 곰팡이 정원의 성장을 촉진하고 둥지를 깨끗하게 유지하며 가능한 탈출을 피하는 것과 관련이 있습니다. 이 프로토콜은 예를 들어 초기 단계의 식민지 개발 및 독성 미끼 상호 작용 연구를 이해하기 위해 과학적 관심의 다른 종에 적용될 수 있습니다.이 기술은 비교 형태학, 조직학, 독성학 및 미생물학과 같은 여러 분야의 연구자들이 개인 및 식민지 수준에서 22 년 동안 사용해 왔습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

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우리는 자유롭게 개인 이동 불가능 분석의 수준에서 시각적 학습 및 메모리 형성 연구에 연구를 이용한 개미 클래식 컨디셔닝에 대 한 프로토콜을 제시.

나무 개미에 비주얼 고전 컨디셔닝

개별 클립 및 동반 정의 실험적인 감염 시나리오에서 질병 방어 동작을 시각적 가이드 잎-절단 개미에 선물이. 우리의 주요 목표는 주요 방어 동작을 인식 하는 다른 연구자 고이 분야에서 미래 연구에 대 한 일반적인 이해를 제공.

공부 하는 병원 체에 행동 방어 위한 비주얼 가이드 잎-절단 개미에 공격

이 프로토콜에서 근 친 십자가 실시 하 고 그 십자가의 성공을 평가 하기 위한 메서드가 개미 Vollenhovia emeryi에 대 한 설명 합니다. 이러한 프로토콜은 실험 Hymenoptera에 섹스 결정 시스템의 유전 기초를 이해 하기 위한 중요 합니다.

유도 및 개미, Vollenhovia Emeryi 를 사용 하 여 근 친 십자가의 평가

이 프로토콜은 단일유전학적 곤충인 겨자 진딧물(Lipaphis erysimi (Kalt .))에 대한 곤충병원성 곰팡이(EPF)의 효과를 평가하기 위해 최적화된 분리형 잎 생물검정 시스템을 제공합니다. 이 방법은 페트리 접시 실험 중 데이터 수집 프로세스를 간략하게 설명하여 연구원이 겨자 진딧물 및 기타 단일유전 곤충에 대한 EPF의 독성을 일관되게 측정할 수 있도록 합니다.

Parthenogenetic 곤충, 겨자 진딧물, Lipaphis erysimi (Kalt.)에 대한 곤충 병원성 곰팡이의 무균 효과 평가

여기에서 우리는 숲 나무 천공충에서 곤충병원성 균류를 얻기 위한 프로토콜과 딱정벌레목 모델 곤충을 사용하여 곤충병원성 활성을 평가하는 대체 방법을 제시합니다. 이 방법은 자연 산림에서 나무를 뚫는 곤충 해충으로부터 곤충 병원성 곰팡이 자원을 탐사하는 데 효율적이고 편리합니다.

Isolation, Behavioral Identification, and Pathogenicity Assessment of Entomopathogenic Fungi from a Forest Wood Borer(포레스트 우드 보어의 곤충병원성 곰팡이의 격리, 행동 식별 및 병원성 평가)

우리는 미생물군 및 생물막과 함께 식물 및 곰팡이 바이오매스를 포함하는 매우 이질적이고 섬세한 샘플을 시각화하기 위한 최적화된 주사 전자 현미경 프로토콜을 제안합니다. 이 프로토콜을 사용하면 미생물군 조직의 공간적 차원을 설명할 수 있습니다.

Attine Ants' Gardens의 미생물군: 주사 전자 현미경을 통한 미생물 풍경 시각화

배우세요 실험실에서 Atta 잎 절단 개미 군집을 수집하고 장기 유지 관리하는 방법을. 인공 둥지 설정과 곰팡이 정원 관리를 통해 개미 생물학 연구와 과학 교육에 활용할 수 있습니다.

실험실 조건에서 잎 절단 개미 (Atta)의 수집 및 장기 유지 관리

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