Name: 인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-18T13:50:00.000+00:00
Duration: 5 min 14 s
Description: 배우세요 인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델을 통해 혈관 병리학적 특징과 분자 메커니즘을 연구하는 방법을 알아보세요. C57BL6J 마우스를 사용한 이 비용 효율적인 실험법은 치료 전략 개발에 활용됩니다.

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이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC, 81730010, 91839302, 81921001, 31930056 및 91529203)과 중국 국가 핵심 R & D 프로그램 (2019YFA 0801600)의 자금 지원으로 지원되었습니다.

동물 연구는 북경대학 보건과학센터 기관동물관리이용위원회의 지침에 따라 수행되었으며 북경대학 생명의료윤리위원회(LA2015142)의 승인을 받았습니다. 수술을 위한 모든 마우스를 이소플루란(1.5%-2%)으로 마취시키고, 마우스에 대한 통증 또는 불편함을 피하기 위해 마취를 주의 깊게 모니터링하였다.
1. 준비
<ol><li>파우더가없는 고무 장갑과 거즈의 0.3cm 너비를 자릅니다.</li>
	<li>8-10 주 된 C57BL / 6J 수컷 마우스를 구입하십시오. 12 시간의 명암 사이클과 음식과 물을 자유롭게 이용할 수있는 에어컨이 설치된 환경에 동물을 수용하십시오.</li>
	<li>수술 전에 거즈, 면봉, 가위, 집게를 오토클레이브합니다.</li>
	<li>베타 딘, 70 % 에탄올 및 방부제 손 씻기를 얻으십시오.</li>
	<li>마스크, 가운 및 멸균 장갑을 착용하십시오.</li>
</ol>2. 수술 절차
<ol><li>수술 2-4시간 전에 씹을 수 있는 카프로펜 정제(5mg/kg 용량)를 8-10주 된 C57BL/6J 마우스에게 먹이십시오. 그런 다음 마우스를 1.5%-2%의 유속으로 이소플루란이 포함된 유도 챔버(206mm x 210mm x 140mm)에 넣습니다.<ol><li>호흡이 눈에 띄게 느려질 때까지 약 5분 동안 마우스를 모니터링합니다. 수술 전에 마우스가 통증 자극에 반응하지 않는지 확인하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>눈에 안과 용 연고를 바르고 가열 패드 또는 담요로 보온성을 제공하십시오. 수술 중 15 분마다 발가락 꼬집음으로 마취 깊이를 확인하십시오.</li>
	<li>전기 클리퍼 또는 제모 크림을 사용하여 마우스의 복부 머리카락을 면도하십시오. 면도 한 부위를 베타 딘으로 닦은 다음 70 % 에탄올을 원을 그리며 여러 번 닦습니다. 불임을 유지하기 위해 장갑을 교체하십시오.</li>
	<li>가위를 사용하여 복부 정중선을 따라 하복부를 ~1.5cm 절개합니다.</li>
	<li>생리 식염수를 적신 멸균 면봉을 사용하여 하부 대동맥이 보일 때까지 장을 조심스럽게 제거하십시오.</li>
	<li>하부 대동맥에서 결합 조직과 지방을 약 0.5cm 섹션으로 해부하십시오. 등 쪽의 작은 혈관을 주목하고 찢어지지 않도록하십시오. 복부 대동맥을 복부 주 정맥에서 분리 할 필요가 없습니다.</li>
	<li>식염수에 적신 고무 장갑 스트립을 복부 대동맥과 복부 주 정맥 아래에 포장하십시오. 면봉을 사용하여 과도한 액체를 닦아냅니다.</li>
	<li>하부 복부 혈관계의 외막에 0.5M CaCl2 담근 거즈 조각을 10 분 동안 포장하십시오. 가짜 마우스 그룹의 경우 0.5MCaCl2 를 생리식염수로 교체하십시오.</li>
	<li>거즈를 제거하고 PBS 용액에 5 분 동안 담근 다른 거즈 조각을 포장하여 대동맥 외막에서 CaPO 4 결정을 생성합니다.</li>
	<li>고무 장갑 스트립과 거즈를 조심스럽게 제거하십시오. 마우스의 장을 재설정하십시오.</li>
	<li>복부 절개와 피부를 5-0 봉합사로 봉합하십시오.</li>
	<li>마우스가 의식을 회복 할 때까지 마우스를 가열 패드에 놓습니다. 지역 동물 윤리위원회에 따르면 수술 후 통증 회복 주택과 진통제를 제공합니다.</li>
	<li>마우스를 14 일 더 보관하십시오. 수술 후 마우스를 면밀히 모니터링하고 이후 매일 최소 1 회 관찰하십시오. 이 기간 동안 마우스가 죽으면 즉시 부검을 수행하십시오.</li>
</ol>3. 대동맥 이미징을 위한 수확
<ol><li>수술 14일 후,CO2를 사용하여 마우스를 희생시켰다.</li>
	<li>마우스 흉강과 복강을 복부로 자르고 우심방을 잘라냅니다.</li>
	<li>마우스를 심장의 좌심실을 통해 PBS 완충액으로 관류하여 대동맥의 혈액을 제거한 다음 앞서 설명한 대로 4% 파라포름알데히드로 관류합니다8.</li>
	<li>입체 경으로 대동맥을 수확하십시오.</li>
	<li>수확한 대동맥을 4% 파라포름알데히드 5mL가 들어 있는 튜브에 48시간 동안 넣습니다.</li>
	<li>입체 내시경 아래에서 외래 조직과 지방을 조심스럽게 제거하고 곤충 바늘로 검은 왁스 판에 대동맥을 고정시킵니다.</li>
	<li>대동맥 이미지를 획득합니다.</li>
</ol>4. 탄성섬유의 열화 평가
<ol><li>대동맥 동맥류 조직을 연속 냉동 절개 (두께 7μm)로 자릅니다.</li>
	<li>탄성섬유를 제조자의 프로토콜에 따라 상용 탄성 반 기에손(EVG) 염색 키트를 사용하여 분석한다.</li>
	<li>엘라스틴 분해를 등급화합니다. 1 등급 : <25 % 분해; 2 학년 : 25 %에서 50 % 분해; 3 학년 : 50 %에서 75 % 분해; 또는 4 등급 : >75 % 저하.</li>
</ol>

<ol><li>Kent, K. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Abdominal+aortic+aneurysms%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Abdominal aortic aneurysms.</a> The New England Journal of Medicine. 371, 2101-2108 (2014).</li>
<li>Patelis, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+in+the+research+of+abdominal+aortic+aneurysms+development%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Animal models in the research of abdominal aortic aneurysms development.</a> Physiological Research. 66 (6), 899-915 (2017).</li>
<li>Gertz, S. D., Kurgan, A., Eisenberg, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Aneurysm+of+the+rabbit+common+carotid+artery+induced+by+periarterial+application+of+calcium-chloride+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Aneurysm of the rabbit common carotid artery induced by periarterial application of calcium-chloride in vivo.</a> Journal of Clinical Investigation. 81 (3), 649-656 (1988).</li>
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<li>Li, Z. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Runx2+%28runt-related+transcription+factor+2%29-mediated+microcalcification+is+a+novel+pathological+characteristic+and+potential+mediator+of+abdominal+aortic+aneurysm%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Runx2 (runt-related transcription factor 2)-mediated microcalcification is a novel pathological characteristic and potential mediator of abdominal aortic aneurysm.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 40 (5), 1352-1369 (2020).</li>
<li>Kelly, M. J., Igari, K., Yamanouchi, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Osteoclast-like+cells+in+aneurysmal+disease+exhibit+an+enhanced+proteolytic+phenotype%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Osteoclast-like cells in aneurysmal disease exhibit an enhanced proteolytic phenotype.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (19), 4689(2019).</li>
</ol>

CaPO4의 대동맥 주위 적용은 마우스에서 AAA를 유도하는 강력한 접근법이다. 여러 연구에서 CaPO4 모델을 사용했으며 이것이 마우스 7,9에서 AAA를 연구하는 빠르고 재현 가능한 방법이라고 일관되게 보고했습니다. 이 모델은 인간 대동맥류의 특징 중 일부를 요약하고 염증 및 세포외 기질 분해를 포함한 AAA 발병 기전에 대한 기계론적 통찰력을 제공하는 것으로 간주됩니다.
인간 AAA의 위험 인자는 주로 노화, 남성 성별, 흡연, 고지혈증, 고혈압 및 죽상 동맥 경화증을 포함합니다10. 체계적으로 연구되지는 않았지만, 고지혈증은 또한 CaPO4 모델을 사용할 때 마우스가 AAA 확장에 걸리기 쉬운 것으로 밝혀졌습니다. 인간과 달리, 노화는 마우스 CaPO4 모델<sup c...

복부 대동맥류(AAA)는 복부 대동맥의 영구적인 확장을 특징으로 하는 치명적인 심혈관 질환으로, 파열이 발생하면 사망률이 높습니다. AAA는 노화, 흡연, 남성 성별, 고혈압 및 고지혈증과 관련이있습니다1. 세포외 기질 섬유 단백질 분해, 면역 세포 침윤 및 혈관 평활근 세포의 손실을 포함한 여러 병리학적 과정이 AAA 형성에 기여하는 것으로 나타났습니다. 현재 AAA의 병리학 적 메커니즘은 여전히 파악하기 어렵고 AAA1의 치료를위한 입증 된 약물은 없습니다. 인간 AAA에 대한 연구는 인간 대동맥 샘플이 거의 없기 때문에 제한적입니다. 따라서, 피하 안지오텐신 II (AngII) 주입, 혈관 주위 또는 관내 엘라스타제 배양, 및 혈관 주위 인산칼슘 적용2를 포함하는 여러 화학적 변형 유도 동물 AAA 모델이 확립되고 널리 채택되었다. 일반적으로 사용되는 마우스 모델은 인산 칼슘 (CaPO4)을 하부 복부 대동맥의 외막에 적용하는 것인데, 이는 비용 효율적이며 유전자 변형이 필요하지 않습니다.
동맥류 변화를 유도하기 위해 토끼의 경동맥에CaCl2를 직접 대동맥 주위 적용하는 것은 Gertz et al.3에 의해 처음에보고되었고 나중에 마우스의 복부 대동맥에 적용되었다. 이 모델은 마우스 4에서 CaPO4 결정을 사용하여 대동맥 확장을 가속화하기 위해 Yamanouchi et al.에 의해 개발되었습니다. 마우스 대동맥으로의 CaPO4의 침윤은 심오한 대 식세포 침윤, 세포 외 기질 분해 및 칼슘 침착을 포함하여 인간 AAA에서 관찰 된 많은 병리학 적 특징을 되풀이합니다. 고지혈증과 같은 인간 AAA의 위험 인자는 또한 마우스5에서 CaPO4 유도 AAA를 증가시킨다. ApoE-/- 또는 LDLR-/- 마우스에서 AngII 관류 유도 AAA와 대조적으로, CaPO4-유도 AAA는 인간 AAA를 모방하는 하부 대동맥 영역에서 발생한다. 현재이 방법은 유전자 변형 마우스에서 AAA 발달에 대한 감수성을 평가하고 약물 6,7의 항 -AAA 효과를 평가하는 데 널리 적용되었습니다.

<table><tbody><tr><td>CaCl2</td><td>MECKLIN</td><td>C805225</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Biomed</td><td>SH5001-01</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>HARVEYBIO</td><td>MB5051</td><td></td></tr><tr><td>소동물 인공호흡기</td><td>RWD</td><td>H1550501-012</td><td></td></tr></tbody></table>

인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델

A Calcium Phosphate-Induced Mouse Abdominal Aortic Aneurysm Model

복부 대동맥류(AAA)는 전 세계적으로 발생하는 생명을 위협하는 심혈관 질환으로 복부 대동맥의 돌이킬 수 없는 확장이 특징입니다. 현재, 화학적으로 유도된 여러 뮤린 AAA 모델이 사용되며, 각각은 AAA의 발병기전의 상이한 양상을 시뮬레이션한다. 인산칼슘 유도 AAA 모델은 안지오텐신 II- 및 엘라스타제 유도 AAA 모델에 비해 빠르고 비용 효율적인 모델입니다. 마우스 대동맥에CaPO4 결정을 적용하면 탄성 섬유 분해, 평활근 세포의 손실, 염증 및 대동맥 확장과 관련된 칼슘 침착이 발생합니다. 이 기사에서는 CaPO4 유도 AAA 모델에 대한 표준 프로토콜을 소개합니다. 이 프로토콜에는 재료 준비, 하부 복부 대동맥의 외래에 대한 CaPO4의 외과 적 적용, 대동맥 동맥류를 시각화하기위한 대동맥 수확 및 마우스의 조직 학적 분석이 포함됩니다.

CaPO4 적용 14일 후, C57BL/6J 수컷 마우스를 안락사시키고, 그들의 대동맥을 수확하고 세척하였다. 대동맥의 형태는 AAA 형성을 시각화하기 위해 이미지화되었습니다. 도 1A-B에 도시된 바와 같이, CaPO4의 적용은 하부 복부 대동맥의 확장을 유도하였다. 조직 학적으로, CaPO4는 엘라스틴 파괴에 의해 설명 된 바와 같이 탄성 섬유의 극적인 분해를 초래했다 (그림 1C).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64173/64173fig01.jpg"> 도 1<...

이 프로토콜은 AAA의 병리학적 특징과 분자 메커니즘을 연구하기 위해 인산칼슘 유발 복부 대동맥류(AAA) 마우스 모델을 설명합니다.

An abdominal aortic aneurysm (AAA) is a life-threatening cardiovascular disease that occurs worldwide and is characterized by irreversible dilation of the ...

이 프로토콜은 복부 대동맥류의 분자 메커니즘에서 병리학적 특징을 연구하기 위해 인산칼슘 유도 복부 대동맥류 트리플 A 마우스 모델을 설명합니다. 상기 인산칼슘 유도 복부 대동맥류 모델은 안지오텐신 튜브 및 엘라스타제 유도 복부 대동맥류 모델에 비해 신속하고 비용 효율적인 모델이다. 절차를 시연하는 것은 Zeyu Cai, 여기 포스트 닥터, 우리 실험실의 동료가 될 것입니다.시작하려면 0.3 센티미터 너비의 파우더가없는 고무 장갑과 거즈를 자릅니다. 그런 다음 8-10 주 된 C57BL6J Mayo 마우스를 구입하고 12 시간의 밝은 암주기와 음식과 물에 자유롭게 접근 할 수있는 에어컨이 설치된 환경에 동물을 수용하십시오. 다음으로 수술 전에 거즈, 면봉, 가위, 집게를 오토클레이브하고 베타딘, 70%에탄올, 소독 핸드워시를 얻습니다.마취된 마우스의 복부 모발을 전기 클리퍼 또는 제모 크림을 사용하여 면도합니다. 그런 다음 면도 부위를 베타딘으로 닦고 닦은 다음 70 % 에탄올을 원을 그리며 여러 번 닦습니다. 그런 다음 가위를 사용하여 복부 정중선을 따라 하복부에서 약 1.5cm 절개를하십시오.생리 식염수를 적신 멸균 면봉을 사용하여 하부 대동맥이 보일 때까지 장을 조심스럽게 제거하십시오. 다음으로, 하부 대동맥에서 결합 조직과 지방을 약 0.5cm 섹션으로 해부하면서 작은 혈관이 등쪽으로 찢어지는 것을 피하십시오. 그런 다음 면봉으로 과도한 액체를 닦아내면서 복부 대동맥과 복부 주정맥 아래에 식염수에 적신 고무 장갑 스트립 조각을 포장합니다.그 후, 하부 복부 혈관계의 외막에 0.5 몰 염화칼슘을 담근 거즈 조각을 10 분 동안 포장하십시오. 거즈를 제거하고 PBS 용액에 5 분 동안 담근 다른 거즈 조각을 포장하여 대동맥 외막의 C2에 칼슘 오르토 인산염 결정을 생성합니다. 그런 다음 고무 장갑 스트립과 거즈를 조심스럽게 제거하십시오.마우스의 장을 재설정 한 후 복부 절개와 피부를 5 개의 제로 봉합사로 봉합하십시오. 그런 다음 마우스가 의식을 회복 할 때까지 마우스를 가열 패드에 놓습니다. 마우스를 14일 동안 더 수용하고, 수술 후 마우스를 면밀히 모니터링하고, 이후 적어도 매일 관찰한다.수술 14일 후, 안락사된 쥐의 흉강과 복강을 복부로 절단하고 우심방을 절단합니다. 마우스에 PBS 버퍼를 심장의 좌심실을 통해 풍부하게 하여 대동맥의 혈액을 제거한 다음 원고에 설명된 대로 4%파라포름알데히드로 관류합니다. 실체 현미경으로 외래 조직과 지방을 조심스럽게 제거하십시오.그런 다음 대동맥을 수확하여 4 % 파라 포름 알데히드 5 밀리리터가 들어있는 튜브에 48 시간 동안 두십시오. 그런 다음 곤충 바늘로 검은 왁스 판에 대동맥을 고정하고 대동맥 이미지를 획득하십시오. 칼슘 오르토 인산염 적용 14 일 후 복부 대동맥류 형성을 시각화하기 위해 대동맥의 형태를 이미지화했습니다.오르토 인산 칼슘은 하부 복부 대동맥의 확장을 유도하고 엘라스틴 파괴로 설명 된 바와 같이 탄성 섬유의 극적인 분해를 초래하는 것으로 관찰되었습니다. 생리 식염수를 적신 멸균 면봉을 사용하여 하부 대동맥이 보일 때까지 장을 제거한 다음 하부 대동맥에서 결합 조직과 지방을 추출합니다. 전반적으로, 칼슘 포스포레이트 유도 마우스 복부 대동맥류 모델은 복부 대동맥류의 분자 메커니즘과 치료 전략을 탐구하기 위한 신속하고 비용 효율적인 접근 방식이며 다른 모델과 병행하여 인간 복부 대동맥류의 특징을 완전히 모방할 수 있습니다.

a-calcium-phosphate-induced-mouse-abdominal-aortic-aneurysm-model

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 동영상은 복부 대동맥의 infrarenal 세그먼트에 돼지의 췌장의 엘라스타제의 과도 intraluminal 주입을 통해 생쥐의 복부 대동맥 동맥류 (AAA)을 유도하는 방법을 보여줍니다. 모델은 다수의 유전자 변형과 유전자 녹아웃 마우스의 출현으로 인해 AAA의 pathobiology에 광범위한 통찰력을 추가할 수 있습니다.

엘라스타제와 Murine 실험 복부 대동맥 동맥류의 생성

이 문서는 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에 대동맥 직경 정량화에 대 한 murine 맥 관 구조 perfuse를 방사선 불 투과성 리드 기반 실리콘 고무를 사용 하 여 상세한 방법론을 설명 합니다.

Β-aminopropionitrile-유도 대동맥 동맥 및 해 부의 마우스 모델에서 Aortopathy의 양적 마이크로 CT 분석

이 새로운 모델은 풍선 혈관 성형술, 엘라스타제/ 콜라주나아제 관류, 국소 엘라스타제 응용 및 콜라겐 교차 연결을 방해하는 경구 화합물 β-아미노프로피온리리리 투여의 조합을 사용하여 돼지에 강력한 관치 성 복부 대동맥류를 생성합니다.

돼지 모델 의 관막 복 대동맥류

본 프로토콜은 마우스에서 적외선 복부 대동맥의 출현에 엘라스타제의 직접 적용을 통해 엘라스타아제 유도 AAA 모델에 대한 표준화된 수술 방법을 기술한다.

엘라스타제의 혈관주위 적용에 의해 유도된 마우스 복부 대동맥류 모델

이 원고는 염화칼슘과 엘라스타제를 사용하여 생쥐 복부 대동맥류 모델을 확립하기 위한 프로토콜을 제시하고 이전 모델링 방법의 장점을 결합합니다. 이 모델은 복부 대동맥류의 기저에 있는 병태생리학적 메커니즘을 조사하는 데 사용할 수 있습니다.

Periadventitial Calcium Chloride and Elastase Infiltration에 의한 마우스 복부 대동맥류 모델

이 프로토콜은 엘라스타제를 대동맥에 직접 적용하고 음용수를 통해 ß-아미노프로피오니트릴을 투여하는 조합을 통해 마우스의 진행성 복부 대동맥류를 모델링하는 체계적인 외과적 접근 방식을 설명합니다.

국소 엘라스타제와 구강 ß-아미노프로피오니트릴의 조합에 의한 마우스의 고급 복부 대동맥류 모델링

이 프로토콜은 면역 감작 성분을 포함한 AAA 모델로서, 엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제 적용을 사용하여 C57BL/6 마우스에서 복부 대동맥류(AAA)를 반복 가능하고 신뢰할 수 있게 유도하는 방법을 제공합니다.

엘라스틴 감작과 혈관 주위 엘라스타제를 이용한 쥐 복부 대동맥류 모델의 신뢰성 높은 생성

Angiogenesis는, 기존 vasculature의 혈관이 돋아는 자연과 병리 학적 프로세스를 모두와 연결되어 있습니다. 여기 angiogenic potentiators와 억제제가 직접 문화에 대동맥 링으로 추가할 수 대동맥 고리 분석을 보여줍니다. 돋아 및 neovessel의 파생물은 6-12 일 기간 동안 대동맥 고리를 조사하여 결정하실 수 있습니다.

대동맥 링 분석

난소암의 Orthotopic 동물 모델은 더 나은 인간의 질병을 복제하기 때문에 암 진행 및 치료 종양 반응의 우리의 이해를 향상시킬 수 있습니다. 마우스 모델 루시페라제 - 표현 난소 종양 세포의 intrabursal 주사를 받게됩니다. 치료는 경구 gavage를 통해 관리합니다. 종양 성장에 의해...

생체내 이미징 및 난소암의 Orthotopic 마우스 모델에서 치료 트리 트먼트

혈관 내피 세포는 많은 중요한 심혈관 질환에서 중요한 역할을 합니다. 이 기사에서는 특별한 장비를 사용하지 않고 쥐 대동맥에서 내피 세포를 분리하고 확장하는 간단한 방법을 설명합니다. 당사의 프로토콜은 내피 세포 생리병리학에서 메커니즘을 식별하는 효과적인 수단을 제공합니다.

분리 및 마우스 대동맥 내피 세포의 차 문화

배우세요 인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델을 통해 혈관 병리학적 특징과 분자 메커니즘을 연구하는 방법을 알아보세요. C57BL6J 마우스를 사용한 이 비용 효율적인 실험법은 치료 전략 개발에 활용됩니다.

인산칼슘 유도 마우스 복부 대동맥류 모델

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