Name: 무균 기술, 마취 및 진통의 현대 표준과 일치하는 수정된 쥐 이종 심장 이식 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-28T13:20:00.000+00:00
Duration: 12 min 40 s
Description: 학습하세요 수정된 쥐 이종 심장 이식 기술로 무균 기술, 마취 및 진통을 적용하는 방법을. 이 경제적이고 재현 가능한 모델은 미세수술 기술 향상과 이식 면역학 연구에 필수적입니다.

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저자는 웨스턴 오스트레일리아 대학 (University of Western Australia)과 해리 퍼킨스 의학 연구소 (Harry Perkins Institute of Medical Research)의 동물 관리 직원의 탁월한 노력에 감사를 표합니다.

<ol><li>Mann, F. C., Priestley, J. T., Markowitz, J., Yater, W. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+the+intact+mammalian+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Transplantation of the intact mammalian heart.</a> Archives of Surgery. 26 (2), 219-224 (1933).</li>
<li>Neptune, W. B., Cookson, B. A., Bailey, C. P., Appler, R., Rajkowski, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homologous+heart+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homologous heart transplantation.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (2), 174-178 (1953).</li>
<li>Downie, H. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homotransplantation+of+the+dog+heart%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Homotransplantation of the dog heart.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 66 (5), 624-636 (1953).</li>
<li>Blanco, G., Adam, A., Rodriguezperez, D., Fernandez, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Complete+homotransplantation+of+canine+heart+and+lungs%5BTitle%5D)+AND+%22A.M.A.+Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">Complete homotransplantation of canine heart and lungs.</a> A.M.A. Archives of Surgery. 76 (1), 20-23 (1958).</li>
<li>Abbott, C. P., Lindsey, E. S., Creech, O., Dewitt, C. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+technique+for+heart+transplantation+in+the+rat%5BTitle%5D)+AND+%22Archives+of+Surgery%22%5BJournal%5D)">A technique for heart transplantation in the rat.</a> Archives of Surgery. 89, 645-652 (1964).</li>
<li>Ono, K., Lindsey, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Improved+technique+of+heart+transplantation+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Thoracic+and+Cardiovascular+Surgery%22%5BJournal%5D)">Improved technique of heart transplantation in rats.</a> The Journal of Thoracic and Cardiovascular Surgery. 57 (2), 225-229 (1969).</li>
<li>Corry, R. J., Winn, H. J., Russell, P. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Primarily+vascularized+allografts+of+hearts+in+mice.+The+role+of+H-2D%2C+H-2K%2C+and+non-H-2+antigens+in+rejection%5BTitle%5D)+AND+%22Transplantation%22%5BJournal%5D)">Primarily vascularized allografts of hearts in mice. The role of H-2D, H-2K, and non-H-2 antigens in rejection.</a> Transplantation. 16 (4), 343-350 (1973).</li>
<li>Joffre, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prevention+of+acute+and+chronic+allograft+rejection+with+CD4%2BCD25%2BFoxp3%2B+regulatory+T+lymphocytes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Prevention of acute and chronic allograft rejection with CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T lymphocytes.</a> Nature Medicine. 14 (1), 88-92 (2008).</li>
<li>Gregori, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulatory+T+cells+induced+by+1+alpha%2C25-dihydroxyvitamin+D3+and+mycophenolate+mofetil+treatment+mediate+transplantation+tolerance%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Immunology%22%5BJournal%5D)">Regulatory T cells induced by 1 alpha,25-dihydroxyvitamin D3 and mycophenolate mofetil treatment mediate transplantation tolerance.</a> The Journal of Immunology. 167 (4), 1945-1953 (2001).</li>
<li>Niimi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+technique+for+heterotopic+cardiac+transplantation+in+mice%3A+Experience+of+3000+operations+by+one+surgeon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Heart+and+Lung+Transplantation%22%5BJournal%5D)">The technique for heterotopic cardiac transplantation in mice: Experience of 3000 operations by one surgeon.</a> The Journal of Heart and Lung Transplantation. 20 (10), 1123-1128 (2001).</li>
<li>Hasegawa, T., Visovatti, S. H., Hyman, M. C., Hayasaki, T., Pinsky, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Heterotopic+vascularized+murine+cardiac+transplantation+to+study+graft+arteriopathy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Protocols%22%5BJournal%5D)">Heterotopic vascularized murine cardiac transplantation to study graft arteriopathy.</a> Nature Protocols. 2 (3), 471-480 (2007).</li>
<li>Hoogstraten-Miller, S. L., Brown, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Techniques+in+aseptic+rodent+surgery%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Techniques in aseptic rodent surgery.</a> Current Protocols in Immunology. 82, 1-14 (2008).</li>
<li>Navarro, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia%3A+The+art+and+science%5BTitle%5D)+AND+%22ILAR+Journal%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia: The art and science.</a> ILAR Journal. , (2021).</li>
<li>Adams, S., Pacharinsak, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+anesthesia+and+analgesia%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Protocols+in+Mouse+Biology%22%5BJournal%5D)">Mouse anesthesia and analgesia.</a> Current Protocols in Mouse Biology. 5 (1), 51-63 (2015).</li>
<li>Australian code for the care and use of animals for scientific purposes. NHMRC. , Available from: 
 <a target="_blank" href="https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes">https://www.nhmrc.gov.au/about-us/publications/australian-code-care-and-use-animals-scientific-purposes</a> (2013).</li>
<li>Prosser, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+to+tissue-resident+immunity+after+MHC-matched+and+MHC-mismatched+solid+organ+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes to tissue-resident immunity after MHC-matched and MHC-mismatched solid organ transplantation.</a> Cell Reports. 35 (7), 109141(2021).</li>
</ol>

저자는 공개할 이해 상충이 없습니다.

쥐 동소 심장 이식 모델은 면역학적 거부반응의 수준과 특성에 대한 MHC 불일치의 영향을 조사하기 위해 주로 사용되는 강력한 전임상 모델이며, 최근에는 이식편 조직 상주 면역의 유지에 대한 이식의 영향을 조사하기 위해 사용된다16. 처음에는 Corry et al.7 프로토콜을 밀접하게 따랐지만 무균 기술, 진통 및 마취의 모범 사례 표준을 통합하도록 프로토콜을 개선했습니다. 이러한 새로운 관행의 업데이트는 추가 교육, 멸균 수술용 장갑, 가운 및 수술용 드레이프 제공, 추가 마취 적용 및 진통제 투여 업데이트를 통해 달성되었습니다. 이러한 변화로 인해 수술 설정 시간과 수술당 추가 비용이 약간 증가했습니다.
중요한 연구 문제를 해결하기 위해 동물을 사용하는 것은 연구자와 동물 윤리위원회 (AEC) 간의 계약에 따라 그러한 작업을 수행 할 수있는 사회적 면허를 유지하는 것이 허용됩니다. AEC의 ...

우리는 면역학과 이식에 대한 많은 이해를 동물 피험자를 이용한 고형 장기 이식의 실험 모델을 기반으로 한 연구에 빚지고 있습니다. 포유류의 혈관 심장 이식에 대한 최초의 기술1 이후, 이러한 모델은 저체온증의 치료적 적용2, 특수 봉합사 사용의 이점3, 폐 및 심장 전체 동종 이식 기술4을 포함한 광범위한 영역에 대한 지식에 기여했습니다. 쥐 5,6에서 심장 이식 모델의 개발은 다양한 육종 계통의 가용성으로 인해 면역학적 실험을 위한 더 넓은 범위를 제공했습니다. 이용 가능한 근친교배 및 돌연변이 마우스 균주의 실질적으로 더 넓은 범위로 인해 Corry 등[7]은 이 범위가 이식 연구에 가져다주는 상당한 이점으로 인해 쥐 이종 심장 이식 기술을 개발하게 되었습니다. 이 모델은 널리 사용되어 왔으며 이식 거부 반응8 및 치료제9에 대한 이해를 높이는 데 기여했다. 그러나, 그것의 첫 번째 설명 이후, 이 기술은 문합 부위10,11의 위치에 대한 조정과 같은 몇 가지 사소한 기술적 세부사항을 제외하고는 크게 변하지 않았다.
Corry et al.7 의 기술을 실험에 통합한 이후로 우리는 프로토콜을 개선하기 위한 약속 영역, 즉 무균 기술, 마취 및 진통 영역을 확인했습니다. 이러한 영역의 개선은 실험 결과에 긍정적인 영향을 미치고 동물 복지를 개선할 것으로 기대되었습니다. 이는 이전에 작은 동물 수술에서 무균 기법을 사용할 때 수술 후 감염 감소에 도움이 되기 때문에 나타났으며12, 이는 이환율과 사망률에 영향을 미칠 뿐만 아니라 이식 수술 후 면역 반응을 평가하기 위해 고안된 실험을 손상시킬 수 있다. 마취 및 진통제의 관점에서 볼 때, 정제 된 요법을 사용하면 실험 대상의 고통과 고통을 완화함으로써이 수술 모델의 윤리적 주장을 줄이고 동물 비용을 줄이는 데 도움이됩니다. 또한, 적절한 마취와 진통은 통증 관련 스트레스 반응을 제한하여 수술 후 회복의 질을 향상시키고, 궁극적으로 수술 성공률을 높인다13.
동물 복지와 실험 결과를 모두 개선하기 위해 이러한 격차를 해소하기 위한 조정이 포함된 프로토콜이 개발되었습니다. 이 프로토콜은 Corry et al.7 이 수의학 마취 전문의와 상담하고 마취 및 진통 요법에 사용되는 약리학적 개입의 효과와 효과 지속 기간을 충분히 고려하여 설명한 프로토콜에서 채택되었습니다. 이 접근법은 적절한 수술 전후 관리를 보장하기 위해 균형 잡힌 마취와 복합 진통제의 원칙을 기반으로 했다14. 무균 기술의 적용 외에도 오피오이드 부프레노르핀과 국소 마취제 부피바카인을 선제적으로 투여했습니다. 전신 마취는 흡입 마취제인 이소플루란을 사용하여 시행하였다.

<table><tbody><tr><td>2030 Rycroft 관개 캐뉼라 30 G</td><td>McFarlane</td><td>56005HU</td><td></td></tr><tr><td>꼰 수술용 실크 7-0</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>불독 클램프 곡선형 - 35 mm&nbsp;</td><td>Roboz</td><td>RS-7441-5</td><td></td></tr><tr><td>부피바카인 0.25%&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>카스트로비에호 바늘 홀더 캐치 커브드 -&nbsp; 145 mm</td><td>Haag-Streit</td><td>11.62.15</td><td></td></tr><tr><td>클로르헥시딘 5% 용액</td><td>Ebos</td><td>JJ61371</td><td></td></tr><tr><td>면 팁 애플리케이터 - 7.5 cm</td><td>Dove</td><td>SN109510</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 70% 용액</td><td>Ebos</td><td>WH130192EE</td><td></td></tr><tr><td>거즈 5 x 5 cm 화이트</td><td>에어로</td><td>AGS50</td><td></td></tr><tr><td>젤폼 80 mm x 125 mm&nbsp;</td><td>Pfizer</td><td>7481D</td><td></td></tr><tr><td>헤어 클리퍼</td><td>Wahl</td><td>9860L</td><td></td></tr><tr><td>Heparin 1,000 IU in 1 mL</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Iris SuperCut 가위 스트레이트 - 11.5 cm&nbsp; &nbsp;</td><td>잉카 외과&nbsp;</td><td>11550.11</td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane 증발기</td><td>Darvall</td><td>9176</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 불독 클램프 - 3.7 cm</td><td>Greman</td><td>14119-G</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위 곡선형 105 mm&nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Micropore 일반 종이 수술 테이프 - 2.5cm 너비</td><td>Ebos</td><td>7810L</td><td></td></tr><tr><td>Microsurgical 가위 - 곡선 팁</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>모노필라멘트 폴리프롤렌 봉합사 - 5/0</td><td>Surgipro</td><td>P-205-X</td><td></td></tr><tr><td>Myweigh i101 정밀 저울 100 g x 0.005 g</td><td>Myweigh</td><td>Kit00053</td><td></td></tr><tr><td>바늘 - 30 g x 0.5 인치</td><td>BD</td><td>BD304000</td><td></td></tr><tr><td>바늘 홀더 15cm 곡선 "슈퍼 파인</td>"<td>외과 전문의</td><td>ST-B-15-8.2</td><td></td></tr><tr><td>닐렌 10/0 × 15cm 3.8 mm 3/8 서클 라운드 바디 테이퍼 (직경 0.07mm) CV300</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>원형 봉합 겸자 곡선 0.3 mm 120mm</td><td>B. 브라운</td><td>FD281R</td><td></td></tr><tr><td>라운드 바디 봉합 집게 스트레이트 0.3 mm 120mm</td><td>B. 브라운</td><td>FD280R</td><td></td></tr><tr><td>라운드 핸들 vannas 스프링 가위-str/12.5 cm</td><td></td><td>15400-12</td><td></td></tr><tr><td>스프링 가위-Cvd Sm 블레이드</td><td></td><td>15001-08</td><td></td></tr><tr><td>Stevens 가위 무딘 직선 110 mm</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>수술용 백보드</td><td></td><td></td><td>강성 라미네이트 판지. 15 x 15 cm</td></tr><tr><td>수술용 드레이프</td><td></td><td></td><td>두 가지 크기로 잘립니다. 25 cm x 25 cm, 그리고 25 cm x 40 cm&nbsp;</td></tr><tr><td>수술 용 현미경</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>주사기 - 1 mL</td><td>BD</td><td>592696</td><td></td></tr><tr><td>주사기 - 3 mL</td><td>Leica</td><td>M651</td><td></td></tr><tr><td>톱니 겸</td>자 <td>BD</td><td>309657</td><td></td></tr><tr><td>위스콘신 대학교 솔루션</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>온난화 패드</td><td></td><td></td><td>원적외선 온난화 패드 20 x 25 cm</td></tr><tr><td>Westcott 봄 가위</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Yasargil 클립 애플리어 총검</td><td>Aesculap</td><td>FE582K</td><td></td></tr><tr><td>Yasargil 티타늄 클립 펌 6.6mm</td><td>Aesculap</td><td>A19FT222T</td><td></td></tr><tr><td>Mouse usage</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Strain/SEX/Weight</td><td>Donor</td><td>Recipent</td><td></td></tr><tr><td>BALB/c, 암, 19-23 g</td><td>7</td><td>21</td><td></td></tr><tr><td>C57BL/6, 암, 17-20 g</td><td>7</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD45.1 BALB/c, 암, 17-21 g</td><td>5</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

무균 기술, 마취 및 진통의 현대 표준과 일치하는 수정된 쥐 이종 심장 이식 프로토콜

A Modified Murine Heterotopic Heart Transplant Protocol Matching Contemporary Standards of Aseptic Technique, Anesthesia, and Analgesia

동물의 심장 이식 실험 모델의 개발은 면역학 및 고형 장기 이식 분야의 많은 발전에 기여했습니다. 이종 혈관화 쥐 심장 이식 모델은 처음에는 일치하지 않는 근친 교배 마우스 균주의 조합을 사용한 이식 거부 연구에 활용되었지만 유전자 변형 균주 및 치료 양식에 대한 접근은 강력한 새로운 전임상 통찰력을 제공할 수 있습니다. 근본적으로, 이 기술의 수술 방법론은 개발 이후 변경되지 않았으며, 특히 수술 후 이환율과 사망률에 중대한 영향을 미치는 무균 기술, 마취 및 진통과 같은 중요한 요소와 관련하여 변하지 않았습니다. 또한 수술 전후 관리의 개선은 동물 복지와 실험 결과 모두에서 개선을 제공할 것으로 예상됩니다. 이 논문은 수의학 마취 분야의 주제 전문가와 협력하여 개발한 프로토콜에 대해 보고하고 수술 전후 관리에 중점을 둔 수술 기법을 설명합니다. 또한 이러한 개선의 의미에 대해 논의하고 이 절차의 중요한 수술 단계 문제 해결에 대한 세부 정보를 제공합니다.

상처 치유 및 마우스 회복의 좋은 결과를 촉진하는 수술 기술의 효과를 결정하기 위해 실험실에서의 초기 실험은 수혜자에게 다양한 면역원성을 가진 다양한 심장 이식편의 생존 특성을 결정했습니다. 여기에는 수혜자와 동일한 주요 조직적합성 복합체(MHC) 마커를 공유하는 선천성(n = 5) 및 동계(n = 5) 이식편과 이식편과 수혜자가 서로 다른 MHC 마커를 갖는 주요 불일치 이식편(n = 9)이 포함됩니다. 우리는 이종 복부 심장 박동의 직접적인 촉진을 사용하여 진행 중인 이식 기능과 생존력을 평가했으며, 이는 거부 대 내성의 대리 마커 역할을 합니다.
두 대조군 모두에서 모든 이식편은 100일의 실험 시간 종점에서 생존 가능했습니다(평균 정의되지 않음). 일치하지 않는 그룹의 평균 생존 기간은 9일이었습니다. 그림 1 은 일치하지 않는 심장 이식편과 대조군 심장 이식편 사이의 이식편 생존율에서 뚜렷한 대조를 보여주는 Kapla...

본 논문은 업데이트된 무균 기술, 진통 및 마취를 사용하여 이종 혈관 심장 이식을 위한 수정된 기술을 설명합니다.

The development of experimental models of cardiac transplantation in animals has contributed to many advances in the fields of immunology and solid organ ...

이것은 경제적이고 재현 가능한 심장 이식 모델입니다. 미세 수술 기술을 향상시키고 유전자 변형 마우스 균주를 기증자 또는 수혜자로 사용할 수 있도록 하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술은 수술 후 이환율을 제한하기 위해 정상적인 인간 수술의 모든 통증 관리 및 마취 복잡성을 광범위하게 포함합니다.이 모델은 외과적 유도 면역, 불일치가 이식 거부에 미치는 영향 및 이식 수명을 연구하는 데 중요합니다. 이 모델의 일반적인 외과적 접근법은 변형된 형태로 다른 마우스 고형 장기 이식에 적용될 수 있습니다. 미세한 규모와 관련 시간 제약으로 인해 약간의 오차 범위가 남습니다.성공의 열쇠는 전문적인 감독하에 정기적으로 연습하여 어려운 영역에 대한 구체적인 피드백을 제공하는 것입니다. 절차를 시연하는 것은 제 연구실의 연구 조교인 Ms. Liu Liu가 될 것입니다. 수술 절차를 지원하는 것은 Dr.Wen Hua Huang, Ms.Jas Kaur 및 Ms.Xiao Zhang입니다.마우스를 마취시키고 유도실에서 꺼낸 후, 클리퍼를 이용하여 복부를 밀착시켜 제모를 제거한다. 기증자의 경우 생식기에서 복부 흉부의 위쪽 가장자리까지 이어지는 부위를 면도하십시오. 면도한 부위가 측면으로 겨드랑이 중앙선에 도달하는지 확인하십시오.윤활 처리된 깨끗한 직장 프로브를 동물의 직장에 삽입한 다음 미세 기공 테이프를 사용하여 수술판에 고정하여 온도를 모니터링합니다. 외상성 겸자, 안검 반사 및 근긴장도에 의해 가해지는 압력으로 인한 발 또는 꼬리의 자극에 대한 반응을 관찰하여 마취 깊이를 평가합니다. 호흡 노력을 관찰하면서 흉벽의 움직임을 관찰하여 호흡수를 측정하여 일회 호흡량을 평가한 다음 원고에 설명된 대로 호흡수를 계산합니다.멸균 면봉 어플리케이터를 사용하여 수술 부위를 소독한 후 클로르헥시딘을 수술 부위 중앙에서 가장자리까지 원을 그리며 세 번 도포한 다음 클로르헥시딘과 에탄올을 동일한 패턴으로 혼합하여 도포합니다. 멸균 기구를 배치할 부위로 수술판의 양쪽에 멸균 수술용 드레이프를 배치하여 수술 부위를 준비합니다. 드레이프에 작은 타원형의 구멍을 만든 후 제안된 절개 부위에 천공 드레이프를 놓습니다.앞에서 설명한대로 동물을 준비한 후 눈 윤활제를 바르십시오. 계획된 절개 부위를 따라 29게이지 인슐린 주사기를 사용하여 복부 복부에 중량 기반 용량의 부피바카인을 피하 주사하고 계획된 절개 범위를 덮는 가시적인 출혈의 직선을 찾습니다. 그런 다음 멸균 수술용 메스 칼날을 사용하여 복부 정중선 피부를 8배 배율로 절개합니다.개복술이 하복부에서 늑골 가장자리까지 뻗어 있는지 확인하십시오. 그리고 견인기를 삽입하여 수술 부위를 최대화합니다. 멸균 거즈 부분을 따뜻한 0.9% 염화나트륨 용액으로 적셔 수술 부위의 위쪽에 배치합니다.이제 축축한 멸균 면봉을 사용하여 내장을 부드럽게 내장을 제거합니다. 이 거즈 위에 놓고 거즈를 오르간으로 감싼다. 면봉 어플리케이터와 둥근 몸체 봉합사 겸자의 조합을 사용하여 둔기 해부 기술로 주변 조직에서 복부 대동맥과 하대정맥을 제거하고 동원합니다.여유 공간이 혈관의 신장 하부 측면 사이와 대동맥의 분기점 위에 있는지 확인하십시오. 후방 복부 혈관을 확인한 후 집게를 사용하여 척추에서 멀어지는 방향으로 대동맥을 부드럽게 당깁니다. 복부 혈관 뒤쪽에 구부러진 집게를 통과시켜 이 혈관의 양쪽에 두부로 채널을 만듭니다.기구로 묶인 10-O 나일론 길이를 사용하여 계획된 문합 구역에서 식별 및 동원된 각 용기를 한 번 더 던지면 외과의의 매듭에 연결합니다. 복부 혈관의 머리와 코들 끝에 수술용 클램프를 설치하여 문합 부위를 순환에서 격리합니다. 클램프가 완전한 폐색을 보장하기에 충분한 정도로 두 용기를 가로지는지 확인하십시오.주로 사용하지 않는 손에 집게를 사용하여 대동맥을 안정시킵니다. 대동맥의 앞쪽에 30게이지 바늘을 사용하여 대동맥 절개술을 시행합니다. 끝이 곧은 미세 수술 가위를 사용하여 대동맥 절개술을 확장합니다.선절개술을 시행하려면 직선 집게를 사용하고 대동맥 절개술의 중간과 일치하는 지점에서 하대정맥에 부드러운 전방 견인을 가하십시오. 오목한 면이 앞쪽을 향하도록 구부러진 미세수술용 가위를 사용하여 대동맥 절개술과 동일한 길이의 하대정맥 부분을 제거합니다. 헤파린 화 된 염화나트륨 용액으로 남아있는 혈액의 열린 혈관 내부를 씻으십시오.기증자 심장을 복부에 놓고 상행 대동맥이 복부 대동맥 절개술과 직접 나란히 있고 심장이 회전하여 두 번째 문합을 위해 폐동맥을 그릴 수 있도록 합니다. 10-O 나일론을 사용하여 대동맥 절개술의 12:00 위치와 상행 대동맥 내강의 해당 말단 사이에 스테이 봉합사를 놓습니다. 미세 수술 바늘 홀더에 끝이 곧은 집게를 사용하여 외과 의사의 매듭을 세 번 던지고 끝을 잘라 약 2mm의 봉합사를 남깁니다.대동맥 절개술의 6:00 위치와 상행 대동맥의 해당 측면 사이에 두 번째 스테이 봉합사를 놓습니다. 이 봉합사는 후속 봉합사의 기초 역할도 하므로 궁극적인 타이 오프를 위해 꼬리의 최소 10mm를 남겨 두십시오. 대동맥 절개술의 해부학적 오른쪽 가장자리와 상행 대동맥의 해당 자유 가장자리에 반대하도록 10-O 나일론의 연속 실행 봉합사를 오름차순으로 배치합니다.이 절차를 신중하게 수행하고 이 줄에 약 4번의 던지기를 사용합니다. 대동맥 절개술의 나머지 자유 가장자리와의 부착에 영향을 미치기 위해 해부학적 왼쪽 아래로 두 번째 연속 실행 봉합사를 배치하기 전에 원위 스테이 봉합사 주위에 봉합사의 자유 끝을 통과시킵니다. 외과 의사의 매듭을 사용하여 봉합사를 꼬리에 묶고 두 번 더 던집니다.하대정맥의 12:00 위치, 정맥 절개술 및 폐동맥 내강의 해당 말단 사이에 스테이 봉합사를 놓습니다. 이 앵커 포인트에서 폐동맥의 해부학 적 왼쪽 가장자리와 정맥 절개술의 해당 가장자리 사이에 지속적으로 달리는 봉합사를 배치합니다. 정맥 절개술의 6:00 위치와 폐동맥 내강의 해당 말단을 통해 바늘을 통과시킵니다.오름차순으로, 폐동맥의 나머지 자유 가장자리와 venotomy의 해부학 적 권리를 통해 바늘을 통과시킵니다. 이 선에 평균 4회 던지기를 사용한 다음 폐동맥과 정맥 절개술의 최종 자유 가장자리를 함께 그립니다. 봉합사의 자유 끝을 앵커에 묶고기구를 사용하여 외과 의사의 매듭을 두 번의 추가 던지기로 묶고 여분의 실을 자릅니다.혈류를 방해할 수 있는 혈관이 비틀리지 않았는지 확인하십시오. 봉합사 라인 위에 젤 폼을 놓습니다. 그 주위에 약 2mm 젤 폼 두 조각을 놓고 눈에 보이는 모든 봉합선이 덮이도록 성형합니다.혈관 cl을 풀어amps는 coddle cl로 시작합니다.amps 그리고 그 다음 cephalo clamp. 소량의 출혈이 예상되므로 문합 부위에 면봉 어플리케이터를 선제적으로 배치하여 압력을 가합니다. 눈에 보이는 누출을 고친 후 심장의 맥동을 확인하십시오.그것이 없으면 심장 혈관이 비틀어지는지 확인한 다음 장을 심장 위와 주위로 재배치하고 건조해 보이면 따뜻한 염화나트륨 용액으로 복강을 적십니다. 연속 비 중단 기술을 사용하여 비 흡수성 6-O 프롤렌 모노 필라멘트를 사용하여 근육층을 먼저 봉합 한 다음 피부를 봉합하여 복강을 닫습니다. 수혜자가 수술판에서 제거되고 마취제에서 제거되면 1밀리리터의 따뜻한 식염수를 피하 투여하고 수술 후 회복 프로토콜에 따라 관찰을 위해 수혜자를 온난화와 함께 준비된 케이지에 넣습니다.수술 후 100일 동안 동계성 및 선천성 이종 쥐 심장 이식의 경우 완전한 회복 및 수용이 관찰되었습니다. 그러나, 주요 불일치 이종 쥐 심장 이식의 경우 수술 후 7 일 이내에 빠른 거부가 관찰되었다. 문합 중에는 수술 부위 내에서 봉합사가 어디에 있는지 인식을 유지해야 합니다.그렇게 하지 않으면 구조물에 심각한 손상이 발생하거나 봉합사가 엉킬 수 있습니다. 이러한 해부 및 문합의 미세 수술 기술은 이종 종양 및 동소 간 이식을 포함한 다른 작은 포유류 수술 모델에 매우 적용 가능하여 연구자들이 이식 거부를 연구할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

마우스 heterotopic 심장 이식 모델은 거부하고 면역 반응의 메커니즘을 연구를위한 중요한 방법으로 많은 수사관에 의해 입증되었습니다. 그러나, 관련 기술은 여전히​​ 도전하고 있습니다. 표준 기술을 수정하여 우리는 1000 개 이상의 이식 성공을 있었다.

마우스의 Heterotopic 심장 이식

뮤린 자궁 심장 이식 모델은, 면역뿐만 아니라 허혈 재관류 손상 연구에 매우 적합하다. 우리는 비 봉합 커프 기술을 사용하여 절차를 수정이 방법으로 1,000 개 이상의 성공적인 이식을 수행 하였다.  여기서, 우리는 비디오를 보충하기위한이 기술의 추가 정보를 제공합니다.

수정 커프 기술을 사용하여 쥐의 자궁 심장 이식 모델

기증자 적출 및 수혜자 혈관 문합을 위한 단순화된 방법을 포함하여 마우스의 심장 이종성 이식을 위한 미세 수술 절차를 위한 기술이 시연됩니다.

이소성 마우스 심장 장기 이식에 대한 수정 방법

원고는 마우스에 이소성 심장 이식을 수행하는 데 필요한 단계를 설명합니다.

쥐 이소성 심장 이식 기술

커프 기술은 기술적으로 어려운 작은 혈관의 봉합 문합을 피함으로써 마우스의 이소성 경추 심장 이식 모델을 단축하고 용이하게 합니다. 이 비디오 백서에 표시된 기술적 세부 사항을 통해 연구자는 실험실에서 이 모델을 설정할 수 있습니다.

마우스의 이소성 자궁 심장 이식

우리는 쥐에 있는 이종 성 복부 심혼 이식의 모형을 기술합니다, 현재 전략의 수정을 암시하는, 이는 단순화한 외과 접근으로 이끌어 내는. 추가적으로, 우리는 쥐에 있는 추가 이식 면역학 분석을 허용하는 중요한 심장 근육 세포의 귀 주입에 의하여 새로운 거부 모델을 기술합니다.

쥐에 있는 이종 심혼 및 심장 근육 세포 이식을 위한 면역학 모형

마우스 자궁 경부 이성애 심장 이식을 위한 커프 기술에 대한 내부 튜브 접근법을 도입하여 커프스 위에 혈관을 상회합니다. 우리는 두 경험이 풍부한 외과 의사 사이의 협력이 수술 시간을 현저하게 단축한다는 것을 발견했습니다.

뮤린 심장 이식을 위한 커프 기술의 최적화

우리는 돼지 이종성 심장 이식 모델에서 전체 심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 규범발열 ex vivo sanguinous perfusion system을 활용하기 위한 프로토콜을 제시한다.

심장 동종이식편에 치료제를 전달하기 위한 돼지 이질성 심장 이식 프로토콜

본 프로토콜에서, 마우스 심장 이식 모델은 심장 동종이식 거부반응의 메카니즘을 조사하기 위해 사용된다. 이 이종 심장 이식 모델에서는 수술 효율이 향상되고 수정된 커프 기술을 사용하여 심장 이식의 자궁경부 종단 간 문합에 의해 심장 이식편의 생존이 보장됩니다.

마우스 자궁경부 이종 심장 이식 모델을 위한 수정된 커프 기술

마우스 심장 이식 모델은 이식 면역학을 연구하기 위한 귀중한 연구 도구입니다. 본 프로토콜은 층류 혈류를 허용하기 위해 수혜자의 총 경동맥 및 기증자의 폐동맥 트렁크에 커프를 배치하는 것을 포함하는 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식을 자세히 설명합니다.

혈관 수갑을 이용한 마우스 이종 자궁 경부 심장 이식

이 프로토콜은 마우스 자궁경부 심장 이식을 위한 단순화된 끝 투 측면 봉합 문합 기법을 제시하여, 이식 면역학 연구를 위한 견고하고 재현 가능한 모델을 제공합니다.

종단 간 문합 기법을 이용한 경추 이종성 마우스 심장 이식 이식 면역학 연구

학습하세요 수정된 쥐 이종 심장 이식 기술로 무균 기술, 마취 및 진통을 적용하는 방법을. 이 경제적이고 재현 가능한 모델은 미세수술 기술 향상과 이식 면역학 연구에 필수적입니다.

무균 기술, 마취 및 진통의 현대 표준과 일치하는 수정된 쥐 이종 심장 이식 프로토콜

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