Name: 골관절염을 식별하기 위한 활액 분석 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-20T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 51 s
Description: 학습하세요 활액 분석을 통해 골관절염과 통풍을 진단하는 방법을. 편광 및 보상 광학 현미경으로 요산과 칼슘 결정을 식별하여 관절 질환의 염증 상태를 평가하고 적절한 치료를 결정하는 데 활용합니다.

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저자는 활액 분석 분야에서 귀중한 멘토링을 해준 Leonardo Punzi 교수와 Padova University Hospital의 지원에 감사드립니다.

본 프로토콜은 파도바 대학 병원 윤리위원회의 지침을 준수합니다. SF는 클리닉에 처음 내원할 때 또는 관절염 발적에 대한 반응으로 관절 삼출에 대한 치료적 관절 천자를 받는 환자의 무릎 관절에서 환자의 동의를 얻어 수집되었습니다. 절차에 대한 금기 사항은 응고 병증, 항응고제, 피부 병변, 피부염 또는 관절 위의 봉와직염이었습니다. 모든 SF 샘플은 비식별화되었습니다.
1. 활액 준비
<ol><li>부어오른 관절15 의 관절 천자 동안 수집된 SF 샘플을 항응고제가 포함된 튜브(바람직하게는 EDTA, 재료 표 참조)와 첨가제가 포함되지 않은 두 번째 튜브로 옮깁니다(그림 1).</li>
	<li>감염이 의심되는 경우 미생물 검사를 위해 SF 샘플(~ 1mL)의 일부를 배양 병에 무균적으로 옮깁니다. 참고: 감염은 임상적 특징(심한 종양, 돌로르, 칼로리, functio laesa 및 때때로 발열)과 SF의 거시적 외관(탁도, 색상)의 결과로 의심될 수 있습니다. 이 경우 의사는 미생물학 실험실에서 수행하는 미생물 분석을 처방합니다.</li>
	<li>샘플을 채취하는 즉시 SF 분석(2-5단계)을 수행합니다.</li>
</ol>2. 육안 검사
참고: SF 샘플의 거시적 평가는 주관적, 정성적 및 반정량적 평가로 구성됩니다. 참조 표준 스케일이 없으며 대조 샘플이 사용되지 않습니다.
<ol><li>밀리리터로 표시된 SF 부피에 주석을 답니다. 옅은 노란색에서 짙은 노란색까지 다양할 수 있는 샘플의 색상을 정의합니다. 혈액의 존재를 기록하십시오.</li>
	<li>백라이트에서 샘플을 관찰하고 유체 튜브를 통해 인쇄된 페이지를 쉽게 읽을 수 있는지 확인하여 선명도를 정의합니다(그림 2A).</li>
	<li>일회용 피펫에서 샘플을 떨어뜨려 점도를 평가합니다. 긴 스트링 또는 드롭 형성은 각각 점도가 좋거나 낮음을 나타냅니다(그림 2B).</li>
	<li>튜브와 백라이트를 통해 샘플을 관찰하여 조직 조각 또는 피브린을 포함한 미립자 물질의 존재를 평가합니다.</li>
</ol>3. 현미경 검사
참고: SF 현미경 분석은 총 및 미분 백혈구(WBC) 수와 결정 검색을 포함한 세포학적 검사로 구성됩니다.
<ol><li>아래 단계에 따라 총 셀 수를 결정합니다.<ol><li>혈구계를 사용하여 EDTA 튜브에 수집 된 SF의 총 백혈구 수를 결정하십시오 ( 재료 표 참조).</li>
		<li>Malassez-Potain 피펫(마크 0.5, 재료 표 참조)을 사용하여 EDTA 튜브에서 SF 0.5μL를 추출합니다(보충 그림 1). 동일한 피펫으로 0.1% 메틸렌 블루 용액 9.5μL를 그립니다(마크 11). 최종 희석은 20 배입니다.</li>
		<li>부드러운 반전으로 피펫을 혼합하고 첫 번째 방울을 버리고 활액 + 메틸렌 블루 용액을 계수 챔버에 붓습니다.</li>
		<li>9 개 중 2 개의 연속 사각형으로 셀을 세고 얻은 숫자에 100을 곱합니다 (단순화 된 공식; 보충 그림 2). 백혈구를 입방 밀리미터당 백혈구 수로 표현합니다. 참고: 단순화된 공식: 백혈구(N/mm3) = 연속된 두 개의 제곱에서 계수된 세포 수 x 100.</li>
		<li>이전에 발표된 보고서16,17에 따라 총 WBC 수에 따라 SF를 분류합니다(표 1).</li>
	</ol></li>
	<li>미분 셀 카운트를 수행합니다.<ol><li>supravital 또는 traditional staining을 사용하여 polymorphonuclear (PMN) 세포, 단핵구 및 림프구의 백분율을 결정하십시오13,18.</li>
		<li>초생명 염색을 위해 크레실 바이올렛과 메틸렌 블루로 미리 코팅된 즉시 사용 가능한 슬라이드의 중앙에 작은 SF 한 방울을 떨어뜨립니다(보충 그림 3, 재료 표 참조).</li>
		<li>커버슬립으로 덮고 현미경 침지 오일 한 방울을 떨어뜨립니다.</li>
		<li>전통적인 염색을 위해 공기 건조 SF 도말을 준비합니다(일상적인 분석에는 적합하지 않음). 깨끗한 슬라이드 끝에 SF를 조금 떨어 뜨립니다. 두 번째 슬라이드 또는 커버 슬립을 사용하여 앞으로 움직여 슬라이드를 따라 펼칩니다. 얼룩을 자연 건조시키십시오.</li>
		<li>표준 May-Grünwald-Giemsa 절차18에 따라 샘플을 염색합니다.</li>
		<li>오일 이멀젼 대물렌즈(1,000x) 아래의 슬라이드를 검사합니다.</li>
		<li>100개의 연속된 세포를 세고 다형핵 세포, 단핵구 및 림프구를 구별합니다(그림 3, 보충 그림 4).</li>
		<li>각 범주의 총 수를 백분율로 표현합니다. 참고: 정확한 결과를 얻으려면 SF를 수집하자마자 또는 적절하게 보관된 경우 관절 천자 후 24-48시간 이내(4°C)에 세포학적 검사를 수행해야 합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>4. 크리스탈 감지
<ol><li>추가적인 편광 필터와 적색 보정기(19 )가 장착된 편광 현미경을 사용하여 병리학적 결정의 존재를 결정한다( 재료 표 참조).</li>
	<li>결정 감지를 위한 슬라이드 준비를 수행합니다.<ol><li>광학 용지 또는 에탄올이 흡수 된 부드러운 종이로 유리 슬라이드를 조심스럽게 청소하십시오. 유리 슬라이드에 SF를 약간 떨어 뜨립니다.</li>
		<li>커버슬립으로 덮고 슬라이드를 현미경 아래에 놓습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>크리스탈을 식별합니다.<ol><li>저전력 배율 대물렌즈를 사용하여 현미경으로 슬라이드의 초점을 맞춥니다. 40x 대물렌즈로 밝은 필드 아래에서 슬라이드를 주의 깊게 검사합니다. 세포 안팎을 살펴보십시오.</li>
		<li>크기와 모양(예: 마름모꼴, 바늘 모양, 막대 모양)에 따라 결정을 식별합니다.</li>
		<li>광원과 시편 사이에 편광 필터를 삽입합니다. 광축이 분석기에 수직이 될 때까지(대물렌즈 위에 배치됨) 편광판을 회전하여 어두운 배경을 만듭니다.</li>
		<li>복굴절 결정이 확인되면 편광판과 시편 사이에 보정기를 삽입하고 결정의 광축에 평행 또는 수직으로 이동합니다.</li>
		<li>결정에 의해 드러난 색을 관찰한다(표 2). 참고: MSU 결정은 바늘 모양으로 나타나고 암시야에서 밝게 복굴절되며 축이 보정기와 평행할 때 노란색/주황색을 표시합니다. 반대로, 수직으로 위치할 때(음수 부호) 파란색입니다(표 2; 그림 4). CPP 결정은 막대 또는 마름모꼴 모양의 결정으로 편광 아래에서 약하게 복굴절되며 보상기 축에 평행 또는 수직으로 정렬될 때 각각 파란색 또는 노란색을 나타냅니다(양의 부호). 그림 5).</li>
	</ol></li>
</ol>5. 알리자린 레드 염색
<ol><li>알리자린 레드 S (pH 4.1-4.3)의 2 % 용액을 준비하고, 0.22 μm 필터를 통해 용액을 여과하고, 빛으로부터 멀리 보관하십시오.<ol><li>슬라이드를 준비하려면 깨끗한 슬라이드에 같은 양의 알리자린 레드 용액 (1 : 1)과 SF 한 방울을 섞습니다. 커버슬립으로 덮고 400x 배율로 검사합니다.</li>
		<li>현미경으로 결정을 확인하십시오. 참고: 투과광 아래에서 밝고 짙은 빨간색 침전물이 둥근 모양과 동심원 층으로 보일 때 테스트는 양성입니다. 편광된 빛에서는 강한 복굴절이 나타난다20(그림 6).</li>
	</ol></li>
</ol>

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</ol>

모든 저자는 이해 상충을 공개하지 않습니다.

OA에서 SF 분석은 총 및 차등 백혈구 수와 CPP 및 BCP를 포함한 결정 검색과 같은 간단한 단계를 통해 질병 특성을 정의하는 데 도움이 됩니다. 또한, MSU 결정의 검출은 중요한 동반 질환을 강조할 수 있습니다.
저렴한 비용과 간단한 실행에도 불구하고 테스트의 민감도와 결과의 신뢰성은 주로 결정 식별과 관련된 경험이 없는 분석가로 인해 영향을 받을 수 있습니다. 분석가의 교육과 경험은 CPP 및 MSU 결정의 모양과 복굴절을 구별하고 그 모양을 복굴절 정도와 일치시키는 데 중요합니다. 일부 연구에서는 서로 다른 실험실 간의 결정 식별 불일치를 보고했습니다. 따라서 신뢰할 수 있고 일관된 결과를 얻기 위해서는 실험실 기술자를 교육하는 것이 필수적이다14. 결정 식별은 또한 병원성 결정과 혼동될 수 있는 복굴절 입자의 잘못된 해석에 의해 영향을 받습니다. 이들은 외부 소스(즉, 먼지 또는 섬유)에서 파생되거나 관절강 내부(즉, 코르...

골관절염(OA)은 복잡하고 다인성인 만성 관절 질환으로, 전 세계적으로 15세 이상 피험자의 유병률이 16%, 40세 이상 피험자의 경우 23%로 추정됩니다. 골관절염 발병률은 인구 고령화와 비만, 대사증후군 등의 위험인자의 증가로 인해 증가할 것으로 예상된다2.
OA와 관련된 주요 문제 중에는 초기 단계에서 질병을 진단하는 데 어려움이 있으며 현재 사용 가능한 치료법은 통증 관리 및 글리코사미노글리칸과 같은 증상이 있는 느린 작용 약물(SYSADOA)로 제한됩니다. OA의 진단은 임상 증상과 영상 소견을 기반으로 합니다. 그러나 두 평가 사이의 상관관계가 부족하면 OA 진단 및 치료 시작이 수년간 지연될 수 있다2. OA는 퇴행성 과정과 낮은 등급의 염증이 특징이며, 이는 활액(SF) 분석을 통해 쉽게 조사할 수 있습니다. SF는 히알루론산이 풍부한 점성 혈장 투석액으로 관절 공간을 윤활하고 연골에 영양분과 산소를 공급하며 대사 노폐물을 제거합니다. SF는 또한 충격 흡수 장치 역할을 하여 응력과 변형이 발생하는 동안 관절을 보호합니다3.
SF 분석은 근골격계 증상 및 관절 삼출액이 있는 환자의 초기 평가 시 항상 수행해야 하는 간단하고 신뢰할 수 있는 방법입니다3. 미국 류마티스 학회(American College of Rheumatology), 영국 류마티스 학회(British Society for Rheumatology) 등의 권장 사항에는 주로 급성 단일관절염을 평가할 때 수행해야 하는 류마티스 질환 진단 검사 중 SF 분석이 포함됩니다 4,5. SF 분석에서 얻은 총 및 차등 백혈구 수는 관절에서 발생하는 병리학 적 과정의 스냅 샷을 제공하여 염증 정도를 분류합니다. 편광에서 요산일나트륨(MSU) 및 피로인산칼슘(CPP) 결정과 같은 병원성 결정의 식별은 결정 관절염(예: 통풍 및 가성 통풍)의 진단 및 치료에 매우 중요합니다. 또한, 미생물의 존재는 패혈증 성 관절염의 진단을 시사합니다.
칼슘 결정은 OA6 환자로부터 채취한 샘플에서 빈번합니다. 염기성 인산칼슘(BCP) 결정과 CPP는 OA6 환자로부터 각각 SF 샘플의 약 22% 및 23%에서 보고되었습니다. 그들의 역할은 불분명하지만, 이러한 결정은 더 심각한 형태의 OA7 과 관련이 있으며 병리학 적 과정 자체의 부수 현상으로 간주됩니다. 칼슘 결정은 무릎 치환술을 받는 OA 환자의 조직 샘플 중 100%에서 검출되었다8. 또한, 칼슘 결정은 염증 효과로 인해 골관절염의 발병에 관여할 수 있다는 가설이 제기되었으며, 이는여러 연구에서 입증 되었으며9 적어도 부분적으로는 NLRP3 인플라마솜(inflammasome)에 의해 매개된다10.
보다 최근에, 칼슘 결정은 OA 의 초기 및 후기 단계 6 모두에서 설명되었으며, 이는 OA 및 약리학적 치료의 다양한 임상 하위 집합을 진단하는 데 중요한 역할을 할 수 있음을 나타냅니다.
SF 분석의 전반적인 목표는 SF의 염증 정도를 결정하고 특정 결정 또는 미생물을 식별하여 결정 또는 패혈성 관절염을 진단하는 것입니다. 호중구의 비율이 매우 낮거나 없는 전형적인 비염증성 패턴으로 인해 OA를 진단하는 데 특히 유용하고 간단하며 신뢰할 수 있는 도구입니다.
대체 기술에 비해 장점 SF 분석은 총 및 차등 백혈구 수와 결정 검색을 포함하는 간단한 절차로 구성됩니다. 전문 실험실 기술자가 수행하는 수동 세포 계수 3,11은 활액 및 기타 체액의 세포학적 분석을 위한 황금 표준으로 남아 있습니다. 그러나, 이 방법의 시간 소모적인 한계와 관찰자 간 및 관찰자 내 가변성으로 인해, 자동 세포 계수기는 SF 분석을 가능하게 하기 위해 혈액 및 소변 분석기가 조정된 대규모 일상 임상 실험실에서 수동 계수를 점진적으로 대체하고 있다11,12. 그럼에도 불구하고, 수동 계수는 특정 설정에서 몇 가지 이점을 제시한다 : (1) 보행기에서, 시간에 대한 총 및 차등 WBC 값을 얻기 위해; (2) 자동 카운터가 인식할 수 없는 세포탐식 단핵(Reiter) 세포 또는 활액막과 같은 비조혈 세포와 같은 세포 유형을 식별하기 위해; (3) 샘플이 너무 작아서 기기에서 취급할 수 없는 경우; (4) 연구 목적으로 쉽게 접근할 수 있는 지역 실험실 레지스트리를 만듭니다. 수동 계수의 또 다른 장점은 유리 슬라이드 준비 직후 세포를 매우 빠르게 분화할 수 있는 방법인 인서프라바이탈 염색(insupravital staining)입니다. 대조적으로, Wright 및 May-Grünwald-Giemsa 절차와 같은 전통적인 염색은 공기 건조 SF 도말과 세포 염색시간이 필요합니다 13. 시간에 민감한 일상적인 분석에는 적합하지 않지만 이러한 염색 방법은 적혈구, 호염기구, 호산구, 다형핵 백혈구, 림프구 및 혈소판을 포함한 샘플의 보다 상세한 세포 집단을 보여줍니다.
마지막으로, 결정에 대한 일상적인 SF 분석은 빠른 결과를 제공하는 편광 현미경을 기반으로 하는 간단한 기술을 사용하여 수행됩니다14. 주사 및 전자 현미경과 같은 대체 방법은 더 정확하고 민감한 결과를 산출하지만 높은 비용과 시간이 많이 소요되는 샘플 준비 및 분석으로 인해 일상적인 임상 실습에서 사용하는 것은 불가능합니다.

<table><tbody><tr><td>Alizarin red S</td><td>Merck</td><td>A5533</td><td>BCP 크리스탈 검색</td></tr><tr><td>Burker 챔버</td><td>Merck</td><td>BR718905</td><td>총 백혈구 수를 위해</td></tr><tr><td>커버 안경</td><td>Merck</td><td>C7931</td><td>현미경 검사용&nbsp;</td></tr><tr><td>EDTA 튜브</td><td>BD</td><td>368861</td><td>SF 컬렉션&nbsp;</td></tr><tr><td>유리 슬라이드&nbsp;</td><td>Merck</td><td>S8902</td><td>수정 검색용</td></tr><tr><td>람다 필터(보정기)</td><td>임의&nbsp;</td>결정 식별을 위해 <td>현미경 회사를 참조하십시오</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Malassez-Potain 피펫</td><td>Artiglass</td><td>54830000</td><td>코노비엘 액체의 희석용</td></tr><tr><td>메틸렌 블루 용액</td><td>Merck</td><td>3978</td><td>총 백혈구 수를 위해</td></tr><tr><td>편광 현미경&nbsp;</td><td>Leica, Nikon, 기타</td><td>모델 및 회사에 따라 완전한</td><td>활막 유체 분석을 위해</td></tr><tr><td>편광 렌즈</td><td>Any&nbsp;</td>결정 식별을 위해 <td>현미경 회사를 참조하십시오</td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>테스트심플&nbsp;</td><td>Waldeck</td><td>14386</td><td>세포 분화를 위한 Supravital 염색</td></tr></tbody></table>

골관절염을 식별하기 위한 활액 분석

Synovial Fluid Analysis to Identify Osteoarthritis

활액(SF) 분석은 골관절염(OA) 진단에 중요합니다. 총 및 미분 백혈구(WBC) 수를 포함한 거시적 및 미시적 특징은 OA의 특징인 SF의 비염증성 특성을 정의하는 데 도움이 됩니다. OA 환자에서 SF 샘플의 WBC는 일반적으로 마이크로 리터당 2000 세포를 초과하지 않으며 호중구와 같은 염증 세포의 비율은 매우 낮거나 없습니다. 칼슘 결정은 OA 환자로부터 수집된 SF에서 빈번합니다. OA의 발병기전에서 그들의 역할은 불분명하지만 경미한 염증 과정 및 더 심각한 질병 진행과 관련이 있습니다. 최근에, 칼슘 결정은 OA의 초기 및 후기 단계 모두에서 설명되었으며, 이는 OA 및 약리학적 치료의 다양한 임상 하위 집합을 진단하는 데 중요한 역할을 할 수 있음을 나타냅니다. OA에서 SF 분석의 전반적인 목표는 SF의 비염증성 정도를 확인하고 칼슘 결정의 존재를 강조하는 두 가지입니다.

골관절염의 영향을 받는 큰 관절은 종종 부어오르고 상당한 양의 SF를 생성하며, 이는 관절 천자를 통해 배출된다15. 관절 천자 직후에 평가되는 SF의 거시적 특성은 본질적으로 양, 색, 투명도 및 점도를 포함한다17. 낮은 특이성에도 불구하고 염증 정도에 대한 예비 데이터를 제공합니다. 색상은 SF 세포성과 세포외 기질 거대분자의 단편화 정도에 따라 다릅니다. OA 환자로부터 채취한 SF는 옅은 노란색으로 일반적으로 비염증성 샘플과 관련된 음영인 반면 짙은 노란색은 염증성 삼출액과 관련이 있습니다(그림 2). 예를 들어, 모세혈관 파열로 인해 샘플에 소량의 혈액이 존재하면 약간 주황색을 띠게 됩니다. 혈구 삼출액은 잠재적인 혈통을 나타낼 수 있으므로 신중하게 고려해야 합니다. 선명도는 OA 환자로부터 수집한 SF의 특징입니다. 사실, 비염증성 SF는 염증성 SF의 탁한 외관...

투과, 편광 및 보상 광 현미경 하에서의 활액 분석은 간단한 단계를 통해 샘플의 염증성 또는 비염증성 특성을 평가하는 데 사용됩니다. 골관절염에서 칼슘 결정을 검출하고 골관절염의 더 심각한 하위 집합을 식별하는 데 특히 유용합니다.

Synovial fluid (SF) analysis is important in diagnosing osteoarthritis (OA). Macroscopic and microscopic features, including total and differential white ...

활액 분석은 근골격계 증상 및 관절 삼출액이 있는 환자의 초기 평가 동안 염증 정도와 병원성 결정의 존재를 밝힐 수 있습니다. 이 기술의 가장 큰 장점은 단순성과 신뢰성입니다. 몇 단계만 거치면 임상의는 환자의 질병에 대한 중요한 진단 정보를 얻을 수 있습니다.특정 결정의 식별은 진단 및 치료에 매우 중요합니다. 요산염 결정은 통풍을 나타내는 반면, 피로인산칼슘 및 기타 칼슘 결정은 칼슘 관련 관절병증 또는 더 심각한 형태의 골관절염을 나타냅니다. 시작하려면 환자의 부은 관절의 관절 천자 중에 수집 된 활액 샘플을 채취하십시오.샘플의 부피를 밀리리터 단위로 주석을 달고 항응고제 EDTA가 들어있는 튜브와 첨가제가없는 다른 튜브에 별도로 옮깁니다. 감염이 의심되는 경우 미생물 검사를 위해 몇 밀리리터의 활액 샘플을 배양 병에 무균 상태로 옮깁니다. 샘플을 거시적으로 검사하려면 샘플이 들어 있는 튜브를 사용하여 옅은 노란색에서 짙은 노란색까지 샘플의 색상을 정의합니다.혈액이 있는 경우 이를 기록하십시오. 샘플의 선명도는 백라이트에서 관찰하고 샘플이 들어 있는 튜브를 통해 인쇄된 페이지를 쉽게 읽을 수 있는지 결정하여 정의합니다. 그런 다음 일회용 피펫에서 샘플을 떨어 뜨려 샘플의 점도를 평가하십시오.긴 액체 끈의 모양은 높은 점도를 나타내지만 방울의 형성은 낮은 점도를 나타냅니다. 조직 조각이나 피브린을 포함한 미립자 물질의 존재에 대해 배경에 빛이 있는 튜브를 통해 샘플을 관찰하십시오. 총 백혈구 수를 측정하려면 Malassez-Potain 피펫을 사용하여 EDTAA가 들어 있는 튜브에서 0.5마이크로리터의 샘플을 채취합니다.동일한 피펫을 사용하여 9.5마이크로리터의 0.1% 메틸렌 블루 용액을 채취합니다. 부드러운 반전으로 피펫에 있는 샘플과 메틸렌 블루 용액을 혼합합니다. 혼합물을 혈구계의 계수 챔버에 붓기 전에 처음 몇 방울을 버리십시오.이제 9 개 중 2 개의 연속 사각형으로 셀을 세고 얻은 숫자에 100을 곱합니다. 총 백혈구 수를 입방 밀리미터당 백혈구 수로 표현합니다. 첨가제 없이 튜브의 활액 샘플을 사용하여 활액 샘플의 차등 백혈구 수를 결정합니다.supravital 염색을 사용하여 감별 세포 수를 측정하려면 크리스탈 바이올렛과 메틸렌 블루로 미리 코팅된 즉시 사용 가능한 슬라이드를 가져와서 슬라이드 중앙에 작은 샘플 한 방울을 떨어뜨립니다. 다음으로, 샘플 방울을 커버슬립으로 덮고 현미경 침지 오일 한 방울을 커버슬립에 놓습니다. 감별 세포 수를 추정하기 위해 기존 염색을 사용하려면 먼저 깨끗한 슬라이드 끝에 샘플을 작은 방울로 떨어뜨립니다.이제 두 번째 슬라이드 또는 커버슬립을 사용하여 앞으로 움직여 슬라이드를 따라 드롭을 펼칩니다. 얼룩을 공기 중에서 말리십시오. 공기 건조 도말이 포함된 슬라이드를 1, 000X 오일 침지 대물렌즈로 검사합니다.다형핵 세포, 단핵구 및 림프구를 서로 구별하면서 100개의 연속 세포를 계수하여 차등 세포 수를 추정합니다. 에탄올을 흡수한 광학 또는 부드러운 종이로 유리 슬라이드를 청소하십시오. 유리 슬라이드에 첨가제와 혼합되지 않은 샘플을 작은 방울로 바르고 슬라이드를 현미경 아래에 놓기 전에 커버슬립으로 덮습니다.저전력 배율 대물렌즈를 사용하여 현미경으로 슬라이드의 초점을 맞추고 40X 대물렌즈로 명시야 아래에서 주의 깊게 검사합니다. 세포 내부와 외부를 살펴보고 마름모꼴, 바늘 모양 또는 막대 모양일 수 있는 크기와 모양에 따라 결정을 식별합니다. 그런 다음 광원과 시편 사이에 편광 필터를 삽입합니다.어두운 배경을 만들려면 광축이 분석기에 수직이 될 때까지 편광판을 돌립니다. 복굴절 결정이 확인되면 편광판과 시편 사이에 보정기를 삽입하고 결정의 광축에 평행 또는 수직으로 이동합니다. 크리스탈에 의해 드러난 색을 관찰하십시오.Alizarin Red 염색의 경우, 활액 샘플 한 방울을 깨끗한 슬라이드에서 이전에 준비된 동일한 양의 Alizarin Red 용액과 혼합합니다. 슬라이드를 커버슬립으로 덮고 현미경으로 400X 배율로 검사하여 결정을 식별합니다. 활액 샘플의 거시적 특성은 염증의 정도를 나타냅니다.옅은 노란색과 더 선명한 샘플은 일반적으로 골관절염과 같은 비염증성 상태와 관련이 있습니다. 반면에 짙은 노란색과 탁한 외관을 가진 샘플은 염증성 삼출액과 관련된 세포, 파편, 히알루론산 및 피브린 조각의 존재를 나타냅니다. 골관절염 환자의 활액 샘플에서 관찰된 백혈구는 대부분 단핵구와 활액막과 같은 다른 단핵 세포였습니다.칼슘 피로인산염 결정은 활액 샘플에서 검출되었으며, 이는 상대적으로 더 높은 수준의 염증성 사이토카인을 나타냅니다. 또한, 양성 Alizarin Red 염색은 샘플에서 염기성 인산 칼슘 결정의 존재를 밝혀 냈습니다. 결정을 찾을 때 일반 조명 아래에서 슬라이드를 주의 깊게 검사하는 것이 매우 중요합니다.피로인산염 결정은 종종 복굴절이 약하고 편광된 빛 아래에서 놓칠 수 있음을 기억하십시오. 활액에 칼슘 결정이 존재하고 더 심각한 형태의 질병과의 연관성으로 인해 연구자들은 골관절염의 발병 기전과 진행에 대한 새로운 메커니즘을 탐구하게 되었습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

현재 프로토콜은 골관절염을 동반하는 형태학적 관절 변화를 정량화하기 위한 엄격하고 재현 가능한 방법을 확립합니다. 이 프로토콜의 적용은 질병 진행을 모니터링하고 골관절염의 치료 적 개입을 평가하는 데 유용 할 수 있습니다.

외과 마우스 모형에 있는 골관절염의 표준화한 조직 형측정 평가

여기에서, 우리는 뮤린 비장, 골수, 림프절 및 교압 조직 내의 엑스트라 세포 염색 분석체를 모두 사용하여 단세포/대식세포 및 T 세포 하위 세트를 식별하기 위해 상세하고 재현 가능한 유동 세포 측정 프로토콜을 설명하며, 골관절염의 확립된 수술 모델을 활용합니다.

골관절염 모델에서 뮤린 비장, 골수, 림프절 및 치압 조직 내의 면역 세포 하위 집합의 흐름 세포 분석

총 무릎 관절 성형술 다음 환자에서 얻은 1 차 조직은 최대 임상 과격성관절염 연구를위한 실험 모델을 제공합니다. 이 프로토콜은 인간 골관절염에 있는 기계론적인 조사를 지원하기 위하여 7개의 유일한 무릎 조직에서 RNA를 확인, 프로세스 및 격리하는 방법을 설명합니다.

인간 골관절염 무릎 관절에서 조직 수집 및 RNA 추출

본 프로토콜은 두 개의 접촉하는 생물학적 카운터페이스에 동시 상호 슬라이딩 및 정상 하중을 적용하는 마찰 시험 장치를 기술한다.

마찰 테스트 - 활막 관절 생물 역학, Mechanobiology 및 물리적 조절 연구를위한 생물 반응기 장치

여기에 제시된 것은 활막 염증, 활막 증식, 혈관 증식 등을 포함한 II형 콜라겐분해효소 유도 골관절염 마우스의 급성 증상을 효과적으로 개선하기 위해 은 나노 입자를 사용하기 위한 프로토콜입니다.

은 나노 입자를 사용한 마우스의 골관절염 개선

여기에서는 설치류에서 무릎 골관절염을 유발하는 신뢰할 수 있는 모델로서 전방십자인대(ACL)를 횡단하는 수술 방법과 무릎 활액 채취, 무릎 부종 측정 및 골관절염 중증도 평가를 위한 방법론을 설명합니다.

관절 염증 및 외상 후 골관절염을 연구하기 위한 설치류 모델의 전방십자인대 절개 및 활액 세척

우리는 활막의 급성 염증, 감염, 구조적 변화를 평가할 수 있는 인간 체외 트랜스웰 시스템을 개발했습니다.

기능과 구조가 보존된 체 외 인간 낙액 조직을 이용한 전임상 접속 모델

골관절염 (OA) 또는 퇴행성 관절 질환, 부분적으로 만 가능한 진통제 통증 제어 유지와 관련된 쇠약 상태이다. 동물 모델은 OA 관련 통증 메커니즘에 대한 이해를 향상시키기 위해 개발되고있다. 여기에서 우리는 마우스의 OA 통증의 monoiodoacetate 모델에 대한 방법을 설명합니다.

마우스에서 관절염 통증의 Monoiodoacetate 모델

미니피그의 활액과 골수에서 분리하고 주사기 흡인을 사용하여 비침습적으로 채취한 중간엽 줄기세포(MSC)를 확립하는 프로토콜이 제시됩니다. 세포 표현형분석은 세포 분리 후 유세포 분석을 사용하여 수행되었으며 MSC에서 유래한 골수 및 활액의 체외 배양을 수행했습니다.

Minipigs의 활액과 골수 유래 중간 엽 줄기 세포의 분리 및 세포 표현형

여기서, 임상의의 관점에 기초하여, 우리는 임상, 기능 평가 방법론 이외에 2 모델 하체 양성 압력 (LBPP) 프로토콜 (걷기 및 쪼그리고 는 모형)를 제안합니다, 추가 격려를 위한 세부사항을 포함하여 무릎 관절염 환자에서 비 약물 외과 개입 전략의 개발. 그러나, 우리는 단지 3 차원 보행 분석을 통해 한 환자에서 통증과 무릎 기능의 개선에 LBPP 훈련의 효과를 제시. 이 접근의 정확한, 장기 효과 미래 연구에서 탐구 한다.

무릎 관절염 재활을위한 하체 양압 러닝 머신

학습하세요 활액 분석을 통해 골관절염과 통풍을 진단하는 방법을. 편광 및 보상 광학 현미경으로 요산과 칼슘 결정을 식별하여 관절 질환의 염증 상태를 평가하고 적절한 치료를 결정하는 데 활용합니다.

골관절염을 식별하기 위한 활액 분석

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