Langendorff 모델에서 생체 외 쥐 뇌실 기능 평가

설명된 프로토콜을 통해 기증자의 심장 좌심실과 보존 후 심실 기능을 비교할 수 있으며, 이러한 보존 과정에서 양쪽 심실의 보존 생물학의 차이를 조사할 수 있습니다. 이 기술은 생체 외 관류 시스템을 사용하여 보존 후 심장 기능을 검사합니다. 보존 후 기증자의 심장 기능을 개선하기 위해 새로운 치료법을 선별할 수 있는 강력하고 신뢰할 수 있는 도구를 제공합니다.

텍스트에 설명된 대로 반죽 준비부터 시작하여 반죽의 작은 조각을 타원형 모양으로 만들어 머리를 얻습니다. 마른 스파게티 가닥 끝에 부착하십시오. 이미 준비된 설탕 용액에 헤드를 담그고 용액의 얇은 필름으로 잘 코팅되면 천천히 제거합니다.

그런 다음 스파게티 가닥을 폴리스티렌 폼 블록이나 다른 홀더에 매달아 머리 위에 균일하고 광택 있는 덮개가 형성되도록 하고 밤새 건조시킵니다. 다음날 자일렌에 분산된 실리콘 엘라스토머에 몰드를 담그고 스파게티 가닥을 섭씨 37도의 폴리스티렌 폼 블록에 2시간 동안 또는 마를 때까지 다시 넣습니다. 이 단계를 한 번 더 반복합니다.

그런 다음 틀을 물에 넣어 풍선을 분리하고 모으십시오. 풍선을 0.02% 아지드화나트륨에 보관하십시오. 이제 22게이지 바늘에서 두 개의 뭉툭한 끝 끝을 자르고 한쪽 뭉툭한 끝을 실리콘 풍선에 장착하고 다른 뭉툭한 끝을 PE 튜브에 장착합니다.

4-0 실크 봉합사를 사용하여 풍선을 바늘에 묶습니다. C57Black/6 마우스를 사용하여 항응고를 위해 동물의 복부에 200단위의 헤파린을 복강내로 주입합니다. 발가락 꼬집으로 적절한 마취를 확인한 후 흉골 바로 아래를 절개합니다.

그리고 가위를 사용하여 갈비뼈의 횡격막을 잘라 가슴을 엽니다. 그런 다음 전방 흉벽을 접어 흉부를 완전히 노출시킨 후 대동맥궁에 가까운 하행 대동맥을 절개합니다. 이제 쥐의 심장, 폐 및 흉선을 얼음처럼 차가운 히스티딘-트립토판-케토글루타레이트 또는 HTK 완충액으로 옮겨 장기를 분리합니다.

결합 조직을 제거하여 대동맥을 노출시킵니다. 대동맥 끝을 22게이지 바늘에 연결하고 6-0 실크 봉합사로 묶습니다. 대동맥 판막을 방해하지 않도록 캐뉼라가 대동맥 뿌리 위에 있는지 확인하십시오.

섭씨 4도로 예냉된 10밀리리터의 HTK 완충액으로 약 10분 동안 대동맥을 관류합니다. 실험 유형에 따라 심장을 얼음처럼 차가운 HTK가 있는 50밀리리터 튜브에 8시간 동안 보관하거나 즉시 주입합니다. 풍성한 시술을 하려면 바늘에 장착된 심장을 랑겐도르프 장치의 캐뉼라에 연결하고 실크 봉합사로 묶습니다.

분당 3밀리리터의 정유량 모드에서 풍량을 시작한 다음 수은 70-80밀리미터에서 정압 모드로 변경한 후 관류 속도를 분당 약 6밀리리터로 조정합니다. 그런 다음 3방향 탭을 사용하여 수축된 물이 채워진 실리콘 풍선을 압력 변환기와 물이 채워진 주사기에 연결합니다. 이전 관류 후 15-20분의 평형 기간 후에 우심방(RA)을 절단하고 RA를 통해 우심실(RV)에 풍선을 삽입합니다. 테이프를 사용하여 RV 내부의 풍선을 고정하고 RA의 열린 영역을 최소화하여 심실에서 풍선을 구속하는 데 도움이 됩니다.

RV에 대한 기능 데이터 수집 20분 후 좌심방(LA)을 절단하고 공기를 뺀 물이 채워진 풍선을 LA를 통해 좌심실(LV)에 삽입합니다. 테이프를 사용하여 풍선을 LV.To 내부에 고정하고 압력 변환기를 보정하고 먼저 10밀리리터 주사기에 따뜻한 식염수를 채우고 3방향 탭을 통해 주사기를 돔에 연결합니다. 수도꼭지를 열고 돔에 식염수를 천천히 채운 후 모든 수도꼭지를 닫고 주사기를 제거합니다. 그런 다음 압력 게이지를 3방향 탭의 세 번째 끝에 연결하여 채워진 돔을 변환기에 부착합니다.

녹음 소프트웨어의 변환기에 연결하는 채널의 드롭다운 메뉴에서 Bridge Amp 옵션을 선택합니다. 녹음을 시작하기 전에 0을 클릭하여 변환기 판독값을 수은 0mm로 설정합니다. 몇 초 동안 기록한 후 주사기를 천천히 누르고 압력을 100으로 높입니다.

딸깍 하는 소리 중지 녹음을 종료합니다. 단위 변환 대화상자에서 0밀리미터의 수은에 대한 기록 영역을 선택하고 0밀리미터의 수은을 입력하기 전에 화살표를 1로 클릭합니다. 마찬가지로 100mm의 수은에 대한 기록 영역을 선택합니다.

화살표 2를 클릭하고 100mm 수은을 입력합니다. 이제 OK(확인)를 클릭하여 변환기를 보정합니다. 보정이 완료되면 풍선이 있는 압력 변환기에 해당하는 채널의 이름을 심실 압력 또는 LV 압력으로 바꾸고 심장이 시스템에 연결되면 기록을 시작합니다.

풍선을 심실에 삽입한 후 마이크로미터 주사기를 사용하여 3방향 탭을 통해 풍선의 물의 양을 조절하여 끝 이완기 압력을 5-10mm의 수은으로 유지합니다. 그런 다음 빈 채널의 이름을 dP/dt로 바꾸고 미분 소스 채널을 심실 압력으로 유지합니다. 이 채널은 수축 중 심실강의 압력 변화 비율을 기록합니다.

혈압 모듈에서 설정으로 이동하기 전에 안정 측정 기간을 선택하십시오. 그런 다음 LV 압력을 입력 채널로 선택하고 확인을 누르기 전에 선택을 클릭합니다. 이제 Classifier View(분류기 보기)를 클릭하여 이상치 심장 주기를 제거하고 Table View(테이블 보기)를 클릭하여 선택한 기간의 최대 dP/dt 및 최소 dP/dt의 평균에 대한 테이블을 생성합니다. 쥐의 심장이 관류 전 0시간 동안 HTK 완충액에 보관되었을 때, RV에 비해 LV에 대해 더 높은 수축기 혈압이 기록되었습니다. 또한 RV에 비해 LV는 훨씬 더 많은 근육 수축과 이완을 보여주었습니다.

그러나 심장을 8시간 동안 냉장 보관한 후 관류를 시행했을 때 LV와 RV 모두 0시간 단계에 비해 상당한 기능 감소를 보였습니다. 감소는 RV에 비해 LV에서 더 심각한 것으로 관찰되었습니다. 8시간 보관 후 LV의 수축 및 이완은 0시간 보관에 해당하는 기능의 25.1%와 30.7%였으며, RV는 0시간 기준선과 비교하여 32.5%와 29.1%의 기능을 나타냈습니다. 장기간 보관 후 LV의 원발성 이식편 기능 장애를 나타내는 것은 RV보다 더 유의했습니다. 보존 품질은 HTK의 관류에 크게 좌우됩니다.

관류가 일관성이 있는지 확인하고 다른 치료를 정확하게 비교하는 것이 중요합니다. 기증자의 심장 보존 기능을 정밀하게 측정하면 기증자의 심장 기능을 개선할 수 있는 약물 스크리닝에 쉽게 적응할 수 있으며 이종 이식 모델을 사용하여 추가로 검증할 수 있습니다.