라임병 스피로체테 보렐리아 부르그도르페리의 파지 매개 유전자 조작

이 프로토콜은 라임 병 에이전트 Borrelia burgdorferi의 분자 생물학을 해부하기위한 또 다른 중요한 도구를 설명하기 때문에 중요합니다. 이 기술의 주요 장점은 파지 형질 도입을 사용하여 전기 천공에서와 같이 전기 펄스를 적용하지 않고도 Borrelia burgdorferi에 DNA를 도입하는 대체 방법을 제공한다는 것입니다. 이 방법은 Borrelia burgdorferi가 동물주기에서 지속되고 궁극적으로 인간에게 라임 병을 일으키는 데 사용하는 분자 메커니즘에 대한 추가 통찰력을 제공하는 데 사용될 수 있습니다.

시작하려면 형질도입 프로토콜을 위해 단단히 캡이 있는 멸균 원추형 원심분리 튜브에 150마이크로리터의 적절한 Borrelia burgdorferi 클론을 15밀리리터의 BSK에 접종합니다. 그런 다음 Borrelia burgdorferi 클론 내에서 이종 DNA의 선택 및 유지를 위해 적절한 농도의 항생제 또는 항생제 조합으로 배지를 보충하고 섭씨 33도에서 샘플을 배양합니다. 배양 물이 성장한 후, 적절한 양의 배양 물을 6, 000 G에서 10 분 동안 원심 분리한다.