Name: 토끼에서 외상 후 골관절염을 생성하기 위한 재현 가능한 연골 충격 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-21T12:20:00.000+00:00
Duration: 8 min 42 s
Description: 학습하세요 토끼 무릎 연골 충격 모델을 이용한 외상 후 골관절염 연구 방법을. 스타인만 핀 삽입과 낙하 타워를 활용하여 재현 가능한 연골 손상을 유도하고 새로운 치료제 평가에 활용합니다.

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이 연구는 미 육군 의학 연구 획득 활동(U.S. ARMY MEDICAL RESEARCH ACQUISITION ACTIVITY)의 DoD Peer Reviewed Medical Research Program - Investigator-Initiated Research Award W81XWH-20-1-0304, NIH NIAMS R01AR076477, NIH(AR065971)의 종합 근골격계 T32 교육 프로그램(Comprehensive Musculoskeletal T32 Training Program) 및 NIH NIAMS Grant R01 AR069657의 지원을 받았습니다. 저자들은 이 프로젝트에 기계 가공 및 제작에 대한 전문 지식을 제공한 Kevin Carr와 조직학을 지원해 준 Drew Brown과 Indiana Center for Musculoskeletal Health Bone Histology Core에 감사의 뜻을 전합니다.

다음 절차는 인디애나 대학교 의과대학 기관 동물 관리 및 사용 위원회(IACUC)의 승인을 받아 수행되었습니다. 모든 생존 수술은 NIH 지침에 명시된 대로 무균 상태에서 수행되었습니다. 통증 및 감염 위험은 성공적인 결과를 최적화하기 위해 적절한 진통제와 항생제로 관리되었습니다. 본 연구에는 3.0-4.0kg의 골격적으로 성숙한 수컷 뉴질랜드 흰 토끼가 사용되었습니다.
1. 드롭 타워 제작
<ol><li>드롭 타워, 베이스 플랫폼 및 메커니즘의 구성 요소에 대한 CAD 도면을 생성하여 Steinman 핀을 고정합니다(보충 그림 1-14).</li>
	<li>시중에서 판매되는 구성 요소를 구입하십시오( 재료 표 참조).</li>
	<li>장치의 기계 부품을 조달하거나 제작을 위해 CAD 도면을 기계공에게 제공하십시오. 알림: 3mm 직경의 임팩터 팁을 제작하려면 공구 제작 능력이 있는 고정밀 기계공이 필요합니다(보충 그림 1, 파트 20 및 추가 그림 13,14). 임팩터 헤드의 충격면은 내측 토끼 과두(35)의 곡률에 맞추기 위해 시상면 및 관상면에서 각각 7.14mm 및 5.56mm의 곡률을 가졌다(보충 그림 13,14).</li>
	<li>드롭 타워가 고정 정렬 선형 볼 베어링을 통해 두 개의 수직 막대를 따라 이동하는 캐리지로 구성되고 기본 플랫폼이 토끼를 지지하고 Steinman 핀을 고정하도록 부품을 조립합니다(그림 1 및 그림 2). 알림: 이 설계의 캐리지 대들보는 허용 가능한 진동 수준으로 이전 드롭 타워38 과 동일한 굽힘 강성을 가지고 있습니다.</li>
</ol>2. 동물 준비
<ol><li>토끼의 무게를 측정하고 2.5mg/kg 알팍살론 및 0.15mg/kg 미다졸람 IM을 사용하여 마취합니다( 재료 표 참조). 유도 후 양쪽 눈에 눈 연고를 바릅니다. ~2%-3% 이소플루란을 사용하여 마취를 유지합니다. 진통을 위해 부프레노르핀 SR(0.1mg/kg) SQ를, 수술 전후 엔로플록사신(10mg/kg) SQ를 투여합니다. 부프레노르핀 대신에, 카프로펜, 4mg/kg 또는 멜록시캄, 0.2 – 0.3mg/kg 또는 케토프로펜, 3mg/kg과 같은 NSAIDs는 SQ 주사로 주어질 수 있습니다.</li>
	<li>토끼의 뒷다리를 발목에서 뒷다리까지 면도합니다. 토끼 털 제거 시 절개 부위의 오염을 방지하기 위해 각별한 주의가 요구됩니다. 전용 날카로운 토끼 이발기 세트를 사용하는 것이 중요합니다.</li>
	<li>스테인리스 스틸 앞다리 블록(보충 그림 1, 부품 번호 2 및 보충 그림 4)을 임팩트 플랫폼 끝 아래에 놓고 플랫폼을 가열 패드로 덮습니다. 토끼 흉골(즉, 엎드린 자세)을 가열 패드에 놓습니다. 반대쪽 엉덩이 아래에 패딩 처리된 범프를 놓습니다.<ol><li>수술 말단이 무릎 중앙에 있고 폴리에틸렌 블록에 놓여 있는지 확인합니다(그림 2A1). 실크 테이프를 사용하여 꼬리를 수술 사지의 위쪽과 반대쪽 방향으로 부드럽게 집어넣습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>클로로헥시딘과 70% 알코올에 적신 멸균 거즈로 수술 부위를 닦아냅니다. 무릎 뒤쪽에서 시작하여 바깥쪽으로 원을 그리며 수술 부위를 문지릅니다. 신선한 스크럽으로 최소 3회 반복하고 알코올 70%로 끝납니다.</li>
	<li>멸균 장갑을 수술 발에 발목까지 놓고 멸균 점착성 랩으로 감쌉니다.</li>
	<li>수술 부위를 세 개의 드레이프로 무균 상태로 드레이프합니다: 하나는 수술 사지 바로 아래에 있고 다른 두 개는 신체의 나머지 부분을 덮습니다. 수건 클램프로 커튼을 고정하십시오.</li>
</ol>3. 외과적 노출
참고: 수술 및 충격 전에 연골하 골절 없이 눈에 띄는 연골 손상을 제공하는 체중과 낙하 높이는 토끼의 특정 변형, 연령 및 성별에 대해 경험적으로 결정되어야 합니다.
<ol><li>슬개골의 앞쪽 위치를 촉진하여 슬개골의 원위부에 위치한 무릎 관절의 위치를 추정합니다. 15개의 날을 사용하여 슬개골의 상극 높이에서 확장된 무릎의 뒤쪽을 따라 3-4cm를 절개합니다.</li>
	<li>밑에 있는 표재성 근막을 통해 뭉툭하고 날카로운 절개를 수행합니다. 내측의 피부와 측면의 내측 비복근 사이의 간격을 발달시킵니다. 이 간격에 자체 고정 Weitlaner 견인기를 놓습니다( 재료 표 참조).<ol><li>복재동맥과 정맥 바로 위에 2차 근막층이 보입니다. 복재 측방을 절개하고 내측으로 혈관을 수축시키고 후방 위염 복합체를 측면으로 수축시킵니다. 알림: 이 혈관을 자르지 않도록 주의하십시오. 이 동맥이 손상된 경우 수술 후 출혈성 쇼크가 발생할 수 있으므로 적절한 결찰을 확인하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>뒤쪽 내측 대퇴골 과두에서 작은 이동식 fabella가 식별될 때까지 원위부로 절개합니다. 관절 절개술을 수행하여 fabella superolateral을 동원하여 기저 내측 대퇴 과두를 노출시킵니다. 내측 대퇴골 과두의 후방을 노출시키기 위해 뭉툭하고 날카로운 해부로 연조직을 부드럽게 제거합니다. Freer 및 Cricket 자가 유지장치( 재료 표 참조)를 사용하여 이 수준에서 연조직을 수축시킵니다.</li>
	<li>과두를 노출된 상태로 유지하면서 원위 대퇴골을 가로질러 0.062인치 Steinman 핀( 재료 표 참조)을 전진시키되, 내측 대퇴 과두의 상부 측면에서 시작하여 내측 대퇴 과두의 전후 방향, 과두의 후방 측면에서 약 5mm 떨어진 곳에 있습니다.<ol><li>배터리로 구동되는 Steinman 핀 드라이버를 사용하여 관절 표면과 평행한 뼈와 외측 피부를 통해 와이어를 측면으로 구동합니다. 외측 상과를 촉진하면 Steinman 핀의 적절한 궤적이 보장됩니다.</li>
	</ol></li>
	<li>견인기를 제거하고 3-0 다착 봉합사( 재료 표 참조)로 피부를 닫으십시오. 멸균 거즈로 절개 부위를 덮습니다.</li>
</ol>4. 대퇴골 과두의 영향
<ol><li>작동 다리 아래의 드레이프를 제거하고 Steinman 핀을 사용자 정의 및 높이 조절 가능한 임팩트 플랫폼에 고정합니다. 먼저 높이 조절이 가능한 Steinman 핀 고정 장치의 아래쪽을 핀 아래에 놓습니다(그림 2A2). 필요에 따라 나사 높이를 조정하여 와이어가 이 플랫폼의 접지와 평행한지 확인하십시오.<ol><li>Steinman 핀이 지면과 평행한지 확인한 후 보안 플랫폼의 상단 나사 기반 측면(그림 2A3)을 높이 조절 부품의 하단 나사 기반 측면에 놓습니다. 상단 막대를 핀 고정 플랫폼의 낮은 높이 조절 부분에 나사로 고정하여 Steinman 핀이 단단히 고정되었는지 확인합니다(그림 2A2).</li>
	</ol></li>
	<li>Steinman 핀이 플랫폼에 고정되면 봉합사를 제거하고 절개 부위를 다시 엽니다. 내측 대퇴골 과두를 자체 유지 Weitlaner 및 크리켓 견인기로 노출시킵니다. 임팩터 팁의 경로에서 추가 연조직을 집어넣기 위해 추가 Freer가 필요할 수 있습니다(그림 2B).</li>
	<li>승인된 소독제로 드롭 타워를 닦으십시오. 멸균 3mm 임팩터 헤드(그림 2A4)를 드롭 타워 캐리지에 부착합니다. 낙하 타워를 작동 말단 위로 가져오고 베이스(그림 2A6)를 충격 플랫폼(그림 3A) 아래에 놓습니다.</li>
	<li>임팩터(보충 그림 2, 파트 20 및 보충 그림 13)를 후측 내측 대퇴골 과두의 중앙으로 부드럽게 내립니다. 임팩터의 경로에 연조직이 없는지 확인하십시오.<ol><li>필요에 따라 토끼 또는 탑을 움직여 임팩터 헤드가 후방 내측 대퇴골 과두의 중앙에 오도록 합니다(그림 3B). 토끼를 옮기거나 위치를 변경할 때마다 수술 부위에 무균 손상이 발생할 수 있는지 평가하고 필요한 경우 해당 부위를 다시 멸균해야 합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>적절한 궤적이 보장되면 clamp 토글 cl을 사용하여 플랫폼에 타워를 올립니다.amps(그림 2A5,  재료 표 참조).</li>
	<li>흡입제 마취를 증가시키지 않고 더 깊은 마취를 위해 충격 5-10분 전에 알팍살론(0.5-0.7mg/kg) 정맥 주사(0.5-0.7mg/kg)를 투여합니다. 참고: palpebral reflex, pedal withdrawal 및 pinna reflex의 부족은 더 깊은 마취의 증거입니다. 이 더 깊은 마취는 장치에 배치하는 동안 그리고 충격 중에 발생할 수 있는 사지 반응을 방지하는 데 도움이 됩니다. 주의: 알팍살론을 너무 빨리 투여하면 토끼에게 일시적인 무호흡증과 저산소증을 유발할 수 있으므로 1-2분에 걸쳐 천천히 투여해야 합니다. 저산소증이 발생하면 진행하기 전에 적절한 산소 공급과 바이탈 회복을 확인하십시오.</li>
	<li>임팩터를 내측 대퇴골 과두 위의 원하는 높이에 드롭 타워에 설정합니다. 베어링을 포함한 현재 캐리지 어셈블리의 경우 질량이 1.41kg이고 높이는 7cm입니다. 참고: 낙하 타워 높이는 사체 조직에 대한 파일럿 연구에서 결정되었습니다. 이 키는 눈에 띄는 연골 손상을 일으켰지만 이 연구에서 토끼의 연골하 골절은 일으키지 않았습니다.</li>
	<li>스핀들 스톱을 해제하기 직전에 LabVIEW 데이터 수집 소프트웨어 (보충 코딩 파일 1)의 시작 버튼 (보충 그림 2, 항목 번호 14)을 클릭하여 캐리지를 해제하고 중력에 의해 떨어지도록하십시오. 참고: 데이터 수집 소프트웨어는 데이터 수집 모듈에 연결된 노트북을 사용하여 100kHz에서 충격을 가하는 동안 임팩터와 캐리지 사이에 위치한 로드셀(그림 1, 6)과 가속도계(그림 1, 7) 사이에 위치한 로드셀(그림 1, 7)에서 데이터를 수집합니다.</li>
	<li>데이터 수집 소프트웨어에서 생성된 txt 파일을 Matlab 데이터 분석 코드(보충 코딩 파일 2)와 동일한 폴더에 넣고 데이터 분석 코드를 실행하여 원시 데이터를 필터링하고 영향 파라미터를 계산합니다.</li>
	<li>최대 부하가 식별되었는지 확인합니다. 연결된 시점은 최대 변형 및 0 속도의 시간으로 간주됩니다. 참고: 데이터 분석 코드는 폴더의 모든 txt 파일을 분석하고 각 파일에 대한 결과를 보고합니다. 이 코드는 로드 시간 데이터의 변경 사항에 따라 영향의 시작과 끝을 결정합니다. 가속도계의 데이터는 속도를 계산하기 위해 수치적으로 적분되고 변위를 계산하기 위해 다시 적분됩니다. 데이터 분석 코드는 다음 공식에서 임펄스, 일 및 운동 에너지를 수치적으로 계산합니다. <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64450/64450eq01.jpg" style="margin: auto;"> <img alt="Equation 2" src="/files/ftp_upload/64450/64450eq02.jpg" style="margin: auto;"> <img alt="Equation 3" src="/files/ftp_upload/64450/64450eq03.jpg" style="margin: auto;"> 여기서 F는 하중 센서에 의해 측정된 힘, x 0 및 t 0은 충격 시작 시 변위 및 시간, x 및 tf는 충격 종료 시 변위 및 시간입니다. 하중 속도는 충격 하중 단계에서 dσ/dt의 평균으로 수치적으로 계산됩니다. 피크 응력은 피크 하중을 임팩터 헤드의 접촉 영역으로 나누어 계산됩니다.</li>
	<li>연골 표면의 시각화를 수행하여 적절한 연골 손상이 발생했는지 확인합니다(그림 4A).</li>
</ol>5. 수술 부위 폐쇄
<ol><li>수술 말단 위에서 드롭 타워를 제거합니다. 사용한 수술 도구를 모두 옆에 두고 새 멸균 장갑으로 갈아입습니다. 알림: 낙하 타워가 멸균되지 않았다는 점을 감안할 때 충격까지 사용된 모든 도구는 이제 오염된 것으로 간주되어야 합니다.</li>
	<li>멸균 드레이프를 하지에 다시 적용하고 사용하지 않은 멸균 자체 견인기를 얻습니다.</li>
	<li>내측 대퇴 과두를 다시 노출시키고 50-60mL의 멸균 식염수로 수술 부위를 철저히 세척합니다.</li>
	<li>5-0 다착 봉합사로 후방 캡슐을 닫은 다음 4-0 단흡 봉합사로 피부를 봉합합니다( 재료 표 참조).</li>
	<li>피내 절개 부위 주변의 국소 진통을 위해 리도카인/부피바카인 2mL를 주사합니다.</li>
	<li>연조직 손상을 최소화하기 위해 진동하여 파워 드라이버 세트( 재료 표 참조)가 있는 Steinman 핀을 제거합니다.</li>
	<li>비접착 드레싱으로 상처를 드레싱한 다음 접착 테이프를 붙입니다. 수술 사지의 X-ray를 수행하여 골절이 발생하지 않았는지, 핀이 적절하게 배치되었는지 확인합니다(그림 4B).</li>
</ol>6. 수술 후 관리
<ol><li>토끼를 케이지로 돌려보내고 마취에서 회복될 때까지 가열된 담요에서 모니터링합니다(~25분).</li>
	<li>수술 후 며칠 동안 토끼를 계속 면밀히 관찰하여 적절하게 치유되고 이동성을 회복하는지 확인하십시오. 감염 예방을 위해 수술 후 2일 동안 엔로플록사신(10mg/kg)을 투여합니다. 부프레노르핀 SR 진통제(0.1mg/kg)를 수술 후 2-3일마다 필요에 따라 피하 투여합니다. 부프레노르핀 대신에, 카프로펜(Carprofen), 4mg/kg SQ 데일리, 멜록시캄(Meloxicam), 0.2 – 0.3mg/kg SQ 데일리(최대 3일) 또는 케토프로펜(Ketoprofen, 3mg/kg SQ 데일리)과 같은 비스테로이드성 소염진통제(NSAIDs)는 수술 후 3-5일 후와 필요에 따라 투여할 수 있습니다. 참고: 토끼가 핥거나 씹는 것으로 인한 수술 후 상처 탈구를 예방하는 데 성공했으며, 인간의 신생아 바지를 뒷다리 위에 배치하는 데 성공했습니다39. 토끼가 바지를 씹는 경우 절개 부위가 씹히는 것을 방지하기 위해 엘리자베스 칼라( 재료 표 참조)를 착용할 수 있습니다.</li>
</ol>7. 조직학적 평가
<ol><li>부상 후 16주가 되면 안락사된 토끼의 무릎을 채취하여 10% 중성 완충 포르말린으로 48시간 동안 고정한 다음 파라핀을 삽입하고 5μm 두께의 조각으로 절단합니다.</li>
	<li>탈파라핀화 및 재수화 후 표준 프로토콜40,41에 따라 사프라닌 O 빠른 녹색으로 섹션을 염색합니다.</li>
	<li>제조업체의 지침에 따라 Hematoxylin42 로 대조염색된 TUNEL Chromogenic Apoptosis Detection 키트를 사용하여 절편에 대해 말단 deoxynucleotidyl transferase dUTP nick end labeling(TUNEL) 분석을 수행합니다( 재료 표 참조).</li>
</ol>

Roman Natoli는 AO Trauma North America에서 강의를 하고 Current Osteoporosis Reports의 섹션 편집자이며 Morgan and Claypool로부터 교과서 로열티를 받았습니다. Todd McKinley는 Innomed로부터 로열티를 받습니다. 나머지 저자는 공개할 것이 없습니다.

이 수술 절차는 PTOA 모델에서 토끼 내측 대퇴골 과두의 체중 지지 표면에 일관된 연골 손상을 생성하는 것을 목표로 합니다. 이 시술의 장점은 무릎에 대한 후방 접근을 통해 전체 후측 대퇴골 과두를 직접 시각화할 수 있으며 약 37분 내에 수행할 수 있다는 것입니다(표 2). 또한, 이것은 개방성 손상 모델이며, 활막 및 관절낭(17,44)에 대한 잠재적 손상으로 인한 충격을 넘어 급성 염증성 변화를 야기할 수 있다는 점에 유의해야 한다. 모델의 장점과 단점은 표 3에 요약되어 있습니다. 관절 안정성을 보장하기 위해 인대와 반월상 연골 구조가 손상되지 않도록 주의를 기울였습니다. 그 결과, 반대측 대조군과 충격 영역 밖의 관절 구획(내측 및 외측 경골 고원 및 외측 대퇴 과두)의 매복 사지 간에 차이가 발견되지 않았습니다.
<p class="jove_con...

외상 후 골관절염(PTOA)은 전 세계적으로 장애의 주요 원인이며 증상이 있는 골관절염(OA)의 12%-16%를 차지합니다1. 현재 말기 골관절염 관리의 표준은 무릎 및 고관절 전치환술(total knee and hip arthroplasty)2 또는 말기 경골 또는 거골하 관절염의 경우와 같이 관절 고정술이다. 인공관절 치환술은 대체로 성공적이기는 하지만, 비용이 많이 들고 병적인 합병증을 유발할 수 있다3. 또한, 인공관절 치환술은 50세 미만의 환자에서 교정이 필요 없는 임플란트 생존율이 77%-83%로 낮기 때문에 덜 바람직합니다4,5. 현재 PTOA의 진행을 예방하거나 완화하기 위해 FDA가 승인한 치료법은 없습니다.
PTOA는 활막 조직, 연골하 뼈 및 관절 연골을 포함한 전체 관절에 영향을 미칩니다. 관절 연골 퇴행, 활막 염증, 연골하 뼈 리모델링 및 골극 형성이 특징입니다 6,7. PTOA의 표현형은 연골, 활막 및 연골하 뼈 사이의 복잡한 상호 작용 과정을 통해 발달합니다. 현재 알려진 바에 따르면 연골 손상은 제2형 콜라겐(COL2) 및 아그레칸(ACAN)과 같은 세포외 기질(ECM) 성분의 방출로 이어집니다. 이러한 ECM 구성 요소 단편은 염증을 유발하며 IL-6, IL-1β 및 활성 산소 종의 생산을 증가시킵니다. 이러한 매개체는 연골세포에 작용하여 MMP-13과 같은 기질 금속단백분해효소(MMP)의 상향조절을 유발하여 관절 연골을 저하시키는 동시에 기질 합성을 감소시켜 관절 연골의 전반적인 이화 환경을 유발한다8. 또한 원발성 골관절염 및 PTOA 9,10에서 연골 세포 사멸이 증가했다는 증거가 있습니다. 미토콘드리아 기능 장애는 연골 11,12,13,14의 생 리학적 부하 후에 발생하며, 이는 연골 세포 사멸을 증가시킬 수 있다12,15. 향상된 연골세포 사멸은 프로테오글리칸 고갈 및 연골 이화작용 증가와 관련이 있으며, 연골 및 연골하골 리모델링의 변화에 선행하는 것으로 나타났다16,17,18.
대부분의 인간 질병과 마찬가지로 질병의 병태생리학을 더 깊이 이해하고 새로운 치료법을 테스트하기 위해서는 PTOA의 신뢰할 수 있는 중개 모델이 필요합니다. 돼지 및 송곳니와 같은 대형 동물은 PTOA17,19의 관절 내 골절 및 충격 모델에 사용되었지만 비용이 많이 듭니다. 생쥐, 쥐 및 토끼와 같은 더 작은 동물 모델은 비용이 저렴하며 일반적으로 전방 십자인대(ACL)의 외과적 절개 및/또는 내측 반월상 연골의 파괴를 포함하는 관절 불안정화를 통해 생성된 PTOA를 연구하는 데 사용됩니다 20,21,22,23,24,25. 관절 외상은 인대 손상을 포함한 다양한 결과를 초래할 수 있지만26 거의 모든 경우에 연골의 기계적 과부하가 발생한다.
인대 불안정성(전방십자인대 절개에서와 같이)과 급성 연골손상 후 PTOA의 발병 이면에 있는 병리학이 뚜렷한 메커니즘에 기인한다는 새로운 증거가 있다27. 따라서 연골에 대한 직접적인 손상 모델을 개발하는 것이 중요합니다. 현재 쥐와 생쥐에서 골연골 또는 연골 손상을 일으키는 충격 모델의 수는 제한되어 있다28,29. 그러나 쥐 연골은 고립된 연골 결손을 생성하는 데 적합하지 않습니다. 쥐 관절 연골은 3-5 세포층의 두께에 불과하고 조직화된 표재성, 요골 및 전이 연골 영역과 인간과 더 큰 동물에서 발견되는 두꺼운 석회화 연골층이 없기 때문입니다. 쥐 모델은 또한 부분적인 연골 결손의 자발적 해소를 나타낸다30,31. 따라서 토끼의 연골 두께와 조직이 인간과 유사하고 PTOA를 초래하는 일관된 연골 충격을 전달할 수 있는 가장 작은 동물 모델이기 때문에 이 충격 모델을 선택했습니다. 토끼의 대퇴 과두 충격에 대한 이전의 개방 수술 모델은 진자(32), 휴대용 스프링-장착된 연골 매복 장치(33) 및 토끼 특이적 충격기 생성(34)을 가능하게 하는 드롭 타워를 사용했다. 그러나 이러한 연구는 생체 내 데이터가 부족했습니다. 다른 연구들은 진자 기반35, 공압36 및 스프링 장착37 충격 장치(10)를 사용한 생체 내 데이터를 보고했으며, 이러한 연구는 방법 간에 피크 응력 및 하중 속도의 높은 변동성을 보여줍니다. 그러나 이 분야에서는 생체 내 급성 연골 외상을 안정적으로 모델링할 수 있는 일관된 접근 방식이 부족합니다.
현재 프로토콜은 토끼 무릎의 후방 내측 과두에 일관된 충격을 전달하기 위해 드롭 타워 기반 시스템을 사용합니다. 무릎에 대한 후방 접근은 후방 내측 대퇴골 과두를 노출시키기 위해 사용됩니다. 그런 다음 Steinman 핀을 관절면과 일직선으로 내측에서 외측으로 대퇴골 과두를 가로질러 배치하고 플랫폼에 고정합니다. 일단 고정되면 하중이 후방 내측 대퇴 과두에 전달됩니다. 이 방법을 사용하면 토끼 대퇴골 원위부의 체중 지지 표면에 일관된 연골 손상이 전달될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>납작머리 나사</td><td>McMaster-Carr</td><td>92210A194</td><td>스테인리스 스틸 육각 드라이브 납작머리 나사, 8-32, 1/2"</td></tr><tr><td>#15 메스 블레이드</td><td>McKesson</td> 1029066 <td>메스 McKesson No. 15 스테인리스강/플라스틱 클래식 그립 핸들 멸균 일회용</td><td></td></tr><tr><td>1/2"-20 나사산 막대</td><td>McMaster-Carr</td><td>99065A120</td><td>1/2"-20 나사산 막대</td></tr><tr><td>10mL 주사기</td><td>McKesson</td><td>1031801</td><td>관개용; 범용 주사기 McKesson 10 mL 블리스터 팩 Luer Lock Tip Without Safety</td></tr><tr><td>3 mL 주사기</td><td>McKesson</td><td>1031804</td><td>리도카인/부피비아카인 주사용; 범용 주사기 McKesson 3 mL 블리스터 팩 Luer Lock Tip 안전 장치 없음.</td></tr><tr><td>3-0 polysorb</td><td>Ethicon</td><td>J332H</td><td>3-0 Vircryl, CT-2, 1/2 circle, 26 mm, 테이퍼</td></tr><tr><td>4-0 monosorb</td><td>Ethicon</td><td>Z397H</td><td>4-0 PDS 2, FS-2, 3/8 circle, 19mm, cutting</td></tr><tr><td>edge 5-0 polysorb</td><td>Med Vet International</td><td>NC9335902</td><td>Med Vet International 5-0 ETHICON COATED VICRYL C-3</td></tr><tr><td>가속도계</td><td>Kistler</td><td>8743A5</td><td>가속도계</td></tr><tr><td>Adson-Browns 펜셉스</td><td>월드 정밀 도구</td><td>500177</td><td>Adson-Brown 펜치, 12 cm, 스트레이트, TC 죠스, 7 x 7 치아</td></tr><tr><td>Alfaxalone</td><td>Jurox</td><td>49480-002-01</td><td>Jurox에 의한 Alfaxan 멀티도용량 : 10 mg/mL</td></tr><tr><td>부프레노르핀</td><td>Par Pharmaceuticals</td><td>42023-0179-05</td><td>부프레노르핀 HCL 주사: 0.3 mg/mL</td></tr><tr><td>부토르판올&nbsp;</td><td>Zoetis</td><td>54771-2033</td><td>부토르판올 타르타르산염&nbsp; 10mg/ml by Zoetis</td></tr><tr><td>클로르헥시딘 핸드 스크럽</td><td>BD</td><td>371073</td><td>BD E-Z 스크럽 107 수술용 스크럽 브러시/스폰지, 4% CHG, 레드</td></tr><tr><td>콜릿</td><td>STRYKER</td><td>14023</td><td>스트라이커 4100-62 와이어 콜릿 0.28-0.71''</td></tr><tr><td>무선 드라이버 핸드피스</td><td>STRYKER</td><td>OR-S4300</td><td>스트라이커 4300 CD3 무선 드라이버 3 핸드피스</td></tr><tr><td>크리켓 견인</td>기 <td>Novosurgical</td><td>G3510 21</td><td>2x Heiss (Holzheimer) 크로스 액션 리트랙터</td></tr><tr><td>디스섹터 가위</td><td>Jorvet labs</td><td>J0662</td><td>Aesculap AG, Metzenbaum, 가위, 스트레이트 5 3/4&Prime;</td></tr><tr><td>Elizabethian Collar</td><td>ElizaSoft</td><td>62054</td><td>ElizaSoft Elizabethan Recovery Collar</td></tr><tr><td>Enrofloxacin</td><td>맞춤형 의약품</td><td></td><td>Enrofloxacin이 맞춤형 의약품</td></tr><tr><td>눈 연고</td><td>Pivetal</td>로 합성됨;<td>46066-753-55</td><td>Pivetal Articifical Tears- 최근에 리콜된</td></tr><tr><td>페이스 마운트 샤프트 칼라</td><td>McMaster-Carr</td><td>5631T11</td><td>페이스 마운트 샤프트 칼라</td></tr><tr><td>패스트 그린</td><td>Millipore Sigma</td><td>F7258</td><td>패스트 그린</td></tr><tr><td>Freer</td><td>Jorvet labs</td><td>J0226Q</td><td>프리어 엘리베이터</td></tr><tr><td>헤드 나사 -1</td><td>McMaster-Carr</td><td>91251A197</td><td>흑색 산화물 합금강 소켓 헤드 나사, 8-32, 3/4"</td></tr> <tr><td>헤드 스크류 -2</td><td>McMaster-Carr</td><td>92196A194</td><td>스테인레스 스틸 소켓 헤드 나사, 8-32, 1/2"</td></tr> <tr><td>헤드 스크류 -3</td><td>McMaster-Carr</td><td>92196A146</td><td>스테인레스 스틸 소켓 헤드 나사, 8-32, 1/2"</td></tr> <tr><td>헤드 스크류 -4</td><td>McMaster-Carr</td><td>92196A151</td><td>스테인레스 스틸 소켓 헤드 나사, 6-32, 3/4"</td></tr><tr><td>헤마톡실린 솔루션, Gill No. 1</td><td>Millipore Sigma</td><td>GHS132-1L</td><td>헤마톡실린 용액, 아가미 No. 1</td></tr><tr><td>육각 너트</td><td>McMaster-Carr</td><td>91841A007</td><td>스테인리스강 육각 너트, 6-32</td></tr><tr><td>홀드다운 토글 클램프</td><td>McMaster-Carr</td><td>5126A71</td><td>홀드다운 토글 클램프</td></tr><tr><td>임팩트 장치</td><td>n/a</td><td>해당</td><td>없음</td></tr> 맞춤형 <tr><td>임팩트 플랫폼</td><td>n/a</td><td>해당 없음</td><td></td></tr> 맞춤형 <tr><td>K-와이어</td><td>Jorvet Labs</td><td>J0250A</td><td>JorVet 골수내 스타인만 핀, 투관구-투관구 1/16" x 7"</td></tr><tr><td>Lab View</td><td>National Instruments</td><td>해당</td><td>없음</td></tr><tr><td>로드셀</td><td>Kistler</td><td>9712B5000</td><td>로드셀</td></tr><tr><td>MATLAB</td><td>The MathWorks Inc.</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>현미경</td><td>Leica</td><td>DMi-8</td><td>Leica DMi8 현미경 LAS-X 소프트웨어</td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Almaject</td><td>72611-749-10</td><td>Midazolam Hydrochloride 주입: Almaject 밀링 머신에 의한 5mg/ml</td></tr><tr><td>깊이 정지</td><td>McMaster-Carr</td><td>2949A71</td><td>클램프온 밀링 머신 깊이 정지</td></tr><tr><td>모바일 C-arm</td><td>Philips</td><td>718095</td><td>BV&nbsp; Pulsera, 모바일 C-arm</td></tr><tr><td>장착 선형 볼 베어링</td><td>McMaster-Carr</td><td>9338T7</td><td>장착 선형 볼 베어링</td></tr><tr><td>니들 드라이버</td><td>A2Z Scilab</td><td>A2ZTCIN39</td><td>TC 웹스터 니들 홀더 부드러운 턱 5", 프리미엄</td></tr><tr><td>Pentobarbital</td><td>Vortech</td><td>0298-9373-68</td><td>Pentobarbital 390 mg/mL by Vortech</td></tr><tr><td>Safranin O</td><td>Millipore 시그마</td><td>HT90432</td><td>Safranin O</td></tr><tr><td>소형 배터리 팩</td><td>STRYKER</td><td></td><td>NS014036 6212 소형 배터리 팩 - 9.6V</td></tr><tr><td>강철 막대, 2'</td><td>McMaster-Carr</td><td>89535K25</td><td>스틸 로드, 2'</td></tr><tr><td>멸균 식염수</td><td>ICU 의료</td><td>6139-22</td><td>AquaLite 솔루션 주입 병, 250 mL</td></tr><tr><td>Stryker 6110-120 시스템 6 배터리 충전기</td><td>STRYKER</td><td>OR-S6110-120</td><td></td></tr><tr><td>수술용 장갑</td><td>McKesson</td><td>1044729</td><td>수술용 장갑 McKesson Perry 크기 6.5 멸균 쌍 라텍스 확장 커프 길이 스무스 브라운 화학 승인 수술</td></tr><tr><td>가운</td><td>McKesson</td><td>1104452</td><td>수건이 달린 비강화 수술 가운 McKesson 대형 블루 멸균 AAMI 레벨 3 일회용</td></tr><tr><td>봉합 가위</td><td>Jorvet Labs</td><td>J0910SA</td><td>슈퍼 컷 가위, 메이요, 스트레이트, 5 1/2&Prime;</td></tr><tr><td>TUNEL 염색 키트</td><td>ABP Bioscience</td><td>A049</td><td>TUNEL 발색 세포 사멸 검출 키트</td></tr><tr><td>Weitlaner 견인기</td><td>미세 과학 도구</td><td>17012-11</td><td>2x Weitlaner-Locktite 견인기</td></tr></tbody></table>

토끼에서 외상 후 골관절염을 생성하기 위한 재현 가능한 연골 충격 모델

A Reproducible Cartilage Impact Model to Generate Post-Traumatic Osteoarthritis in the Rabbit

외상 후 골관절염(PTOA)은 미국 내 모든 골관절염 사례의 12%를 차지합니다. PTOA는 관절 연골에 작용하는 고충격 하중과 같은 단일 외상성 사건 또는 전방 십자인대 파열과 같은 관절 불안정에 의해 시작될 수 있습니다. 현재 PTOA를 예방할 수 있는 효과적인 치료법은 없습니다. 연골 손상이 진행되는 메커니즘을 더 잘 이해하고 PTOA의 진행을 완화하거나 예방하기 위한 새로운 치료 전략을 조사하기 위해서는 신뢰할 수 있는 PTOA 동물 모델을 개발하는 것이 필요합니다. 이 프로토콜은 연골 손상을 유도하기 위한 개방형 낙하탑 기반 토끼 대퇴골 과두 충격 모델을 설명합니다. 이 모델은 579.1 ± 71.1N의 피크 하중과 81.9 ± 10.1MPa의 피크 응력과 2.4 ± 0.5ms의 피크 하중을 제공했습니다. 매복 내측 대퇴 과두(MFC)의 관절 연골은 비매복 무릎의 반대측 MFC(0.56 ± 0.42) 및 기타 연골 표면(p < 0.0001)에 비해 세포사멸 세포의 비율이 더 높았고(p=0.0058) 3.38 ± 1.43으로 더 높았습니다. OARSI 점수의 차이는 영향을 받지 않은 관절 표면 사이에서 감지되지 않았습니다(p > 0.05).

이 시술의 성공 여부는 충격 직후 외과의가 과두를 시각화하고(그림 4A) 방사선 촬영을 통해 골절이 발생하지 않도록 모니터링했습니다(그림 4B). 과두의 수술 중 골절로 이어지는 충격 실패의 위험이 있습니다. 이는 일반적으로 Steinman 핀이 잘못 배치되었기 때문입니다(그림 5). 이 모델을 사용하면 수술 중 골절에 의한 이차성 골절 실패율이 9.0%(67건 중 6건)였습니다. 평균 최대 충격 응력은 81.9MPa ± 10.1MPa(CV = 12.3%)였으며 평균 하중 속도는 36.6 ± 11.0MPa/ms(CV = 30.1%)였습니다. 다른 매개 변수도 CV가 5 % -23.5 % 범위로 일관되었습니다 (표 1).
n = 8 토끼로부터 무릎 관절의 사프라닌 O-패스트 녹...

토끼의 개방성 내측 대퇴골 과두 충격 모델은 외상 후 골관절염(PTOA)과 PTOA 진행을 완화하기 위한 새로운 치료 전략을 연구하는 데 신뢰할 수 있습니다. 이 프로토콜은 임팩터 헤드가 있는 캐리지 기반 드롭 타워를 사용하여 토끼의 후방 내측 대퇴골 과두의 고립된 연골 결손을 생성합니다.

Post-traumatic osteoarthritis (PTOA) is responsible for 12% of all osteoarthritis cases in the United States. PTOA can be initiated by a single traumatic ...

이 방법은 토끼 무릎의 체중 부하 표면에 급성 연골 손상을 일으켜 외상 후 골관절염을 확실하게 유발합니다. 이 모델은 임상 실습과 관련된 관절 외상을 반영합니다. 이를 통해 외상 후 관절염을 완화하기 위한 새로운 치료법을 평가할 수 있습니다.주요 기술적 장애물은 Steinmann 핀을 대퇴골축에 배치하는 것입니다. 잘못 배치하면 대퇴골 골절이 발생합니다. 토끼 사체에서 이 모델을 먼저 연습하는 것이 좋습니다.시작하려면 스테인리스 스틸 앞다리 블록을 임팩트 플랫폼 끝 아래에 놓고 플랫폼을 가열 패드로 덮습니다. 마취된 토끼를 가열 패드의 엎드린 자세에 놓습니다. 반대쪽 엉덩이 아래에 패딩 처리된 범프를 놓습니다.실크 테이프를 사용하여 꼬리를 수술 사지의 위쪽과 반대쪽으로 부드럽게 집어넣습니다. 클로르헥시딘과 70% 알코올에 적신 멸균 거즈로 수술 부위를 무릎 뒤쪽에서 시작하여 바깥쪽으로 원을 그리며 청소합니다. 멸균 장갑을 수술 발에 발목까지 놓고 멸균 점착성 랩으로 감쌉니다.3개의 드레이프를 사용하여 수술 부위를 드레이프하여 하나는 수술 사지 바로 아래에 놓고 다른 두 개는 신체의 나머지 부분을 덮습니다. 수건 클램프로 커튼을 고정하십시오. 슬개골의 위치를 앞쪽으로 촉진하여 무릎 관절의 위치를 추정합니다.15 칼날을 사용하여 슬개골의 상극 높이에서 뻗은 무릎의 뒤쪽을 따라 3-4cm를 절개합니다. 밑에 있는 표재성 근막을 통해 뭉툭하고 날카로운 절개를 수행합니다. 내측으로 피부와 내측 비복근 사이의 간격을 발달시킨 후 이 간격에 자체 유지 Weitlaner 견인기를 놓습니다.그런 다음 복재를 측면으로 절개하고 혈관을 내측으로, 위전체 복합체를 측면으로 수축시킵니다. 후대퇴골 과두(posteromedial femoral condyle)에서 작은 이동성 파벨라(mobile fabella)가 확인될 때까지 원위부로 계속 해부합니다. 관절 절개술을 시행하여 상외측 골당을 해체하여 밑에 있는 내측 대퇴골 과두를 노출시킵니다.연조직을 수축시킵니다. 과두가 노출된 상태로 유지하면서 0.062인치 Steinmann 핀을 내측 대퇴 과두의 상부 측면에 놓고 과두의 후방 측면에서 약 5mm 떨어진 내측 대퇴 과두의 전방 후방 방향 중앙에 놓습니다. 그런 다음 배터리로 구동되는 Steinmann 핀 드라이버를 사용하여 관절 표면과 평행한 뼈와 외측 피부를 통해 핀을 측면으로 구동합니다.견인기를 제거하고 3-0 Polysorb 봉합사로 피부 절개 부위를 연속적으로 봉합합니다. 멸균 거즈로 절개 부위를 덮습니다. 수술 팔다리 아래의 드레이프를 제거합니다.Steinmann 핀 클램프의 아래쪽 측면 높이를 조정하여 핀 높이와 일치하도록 합니다. 클램프의 상단을 부착하고 나사를 조여 무릎 양쪽에 Steinmann 핀을 고정합니다. 봉합사를 제거하고 절개 부위를 다시 엽니다.자체 유지 Weitlaner 및 크리켓 견인기를 사용하여 내측 대퇴골 과두를 노출시킵니다. 멸균 3mm 임팩터 헤드를 드롭 타워 캐리지에 부착합니다. 낙하 타워를 작동 말단 위로 가져오고 충격을 가하는 플랫폼 아래에 베이스를 놓습니다.임팩터를 대퇴골 후과두의 중앙으로 부드럽게 내립니다. 토끼나 탑을 움직여 임팩터 헤드가 내측 대퇴골 과두의 중앙에 오도록 합니다. 적절한 궤적이 확보되면 clamp 토글 cl을 사용하여 플랫폼에 타워를 고정합니다.amps.다음으로, 임팩터를 내측 대퇴부 과두에서 7cm 위에 드롭 타워에 설정합니다. 실험실 보기 데이터 수집 소프트웨어에서 스핀들 스톱을 풀기 직전에 시작 버튼을 클릭하여 캐리지를 해제하고 중력에 의해 떨어지도록 합니다. 연골 표면의 시각화를 수행하여 적절한 연골 손상이 발생했는지 확인합니다.MATLAB 코드를 사용하여 데이터를 분석하려면 센서의 데이터 파일을 MATLAB과 동일한 폴더로 이동한 다음 코드를 실행하십시오. 하중 시간 곡선을 검사하고 매끄러운지 확인하여 파손이 발생하지 않았음을 나타냅니다. 수술 말단 위에서 드롭 타워를 제거하고 사용한 모든 수술 도구를 따로 보관합니다.새 멸균 장갑을 착용한 후 멸균 드레이프를 하지에 다시 도포합니다. 그런 다음 내측 대퇴부 과두를 다시 노출시킵니다. 수술 부위를 50-60 밀리리터의 멸균 식염수로 철저히 헹굽니다.5-0 Polysorb 봉합사를 사용하여 후방 캡슐을 닫은 다음 4-0 Monosorb 봉합사로 피부를 봉합합니다. Steinmann 핀을 고정하는 높이 조절 나사 메커니즘을 제거합니다. 전원이 공급되는 와이어 드라이버를 사용하여 대퇴골에서 Steinmann 핀을 제거합니다.비접착 드레싱으로 상처를 드레싱한 다음 접착 테이프를 붙입니다. 수술 사지의 X-ray를 수행하여 골절이 발생하지 않았는지, 핀이 적절하게 배치되었는지 확인합니다. 수술 성공 여부는 과두의 시각화와 방사선 촬영을 통해 모니터링하여 골절이 없음을 확인했습니다.Steinmann 핀을 잘못 배치한 결과 충격으로 골연골 골절이 발생했습니다. 이 모델에서 평균 피크 충격 응력은 82메가파스칼이었고 평균 로딩 속도는 밀리초당 37메가파스칼이었습니다. 연골 손상은 손상되지 않은 반대측 대퇴 과두에서 관찰되지 않았으며 주로 충돌 부위에 국한되었습니다.영향을 받은 16주 내측 대퇴골 과두(MFC)는 대조군 MFC에 비해 OARSI 점수가 더 높았습니다. 또한 매복 무릎 MFC는 MTP, LTP 및 LFC에 비해 더 높은 OARSI 점수를 보였습니다. 대조적으로, 반대측 비매복 무릎의 MFC, LTP, MTP 및 LFC 구획 간에 OARSI 점수의 차이는 관찰되지 않았습니다.충격을 받은 LFC, MTP 및 LTP 접합 표면과 충격을 받지 않은 관절 표면 사이에는 유의미한 차이가 없었습니다. 영향을 받은 MFC의 관절 연골은 터널 양성 수준이 더 높았으며, 이는 영향을 받지 않은 MFC에 비해 연골세포 세포사멸이 증가했음을 나타냅니다. 시술이 끝나면 토끼의 통증 행동을 추적할 수 있습니다.연구 후 외상 후 골관절염의 발병은 영상 기술, 조직학 및 기타 방법을 사용하여 평가됩니다. 우리는 이 모델을 사용하여 외상 후 골관절염을 완화하는 것을 목표로 하는 치료법과 장치를 테스트하고 있습니다. 이 모델은 또한 이 질병의 진행을 더 잘 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

토끼의 무릎 관절 chondral 결함의 치료를위한 실험 기법을 설명합니다. 매트릭스 시드자가 연골 세포의 이식은 만족 장기적인 결과를 제공 관절 연골 병변의 개조 및 수리를위한 잘 받아 들여진 방법입니다. 매트릭스를 이용한자가 연골 세포 이식 (MACT)는 표준화 된 임상 설립 주입 방법을 제공합니다.

토끼 모델에서 Chondral 결함의 리모델링 및 수리를위한 매트릭스를 이용한자가 연골 세포 이식

여기에서는 20N 이상의 60 순환 압박에 의해 생성 된 쥐 무릎의 순환 로딩 유도 관절 내 연골 병변 모델을 제시하여 쥐의 대퇴 과두 연골에 손상을 입 힙니다.

래트 무릎의 순환 로딩 유도 관절내 연골 병변 모델을 생성하기 위한 비침습적 방법

본 프로토콜은 내측 소인대를 절단하여 마우스 무릎을 불안정하게 한 후 관절 연골의 표면에 조절된 마이크로블레이드 스크래치를 기술한다. 이 동물 모델은 골괴사 형성, 골경화증 및 초기 단계 통증을 연구하기에 적합한 가속 형태의 골관절염(OA)을 제시합니다.

내측 반월판 및 연골 스크래치 쥐의 불안정화 가속화된 골관절염의 모델

이 프로토콜은 쥐의 대퇴골 활차 홈에 구멍을 뚫고 후속 통증 행동 및 조직병리학적 변화를 측정하여 전층 연골 결손(FTCD) 모델을 설정합니다.

전층 연골 결손의 쥐 모델 개발 및 평가

이 프로토콜에서는 수정된 Videman 방법을 사용하여 무릎 골관절염 모델을 준비했으며 acupotomy의 수술 절차 및 주의 사항을 자세히 설명합니다. acupotomy의 효과는 대퇴사두근, 대퇴골 및 힘줄의 기계적 특성과 연골의 기계적 및 형태학적 특성을 테스트하여 입증되었습니다.

토끼의 무릎 골관절염 모델에서 Acupotomy의 적용

이 프로토콜은 무릎 골관절염의 토끼 모델에서 Tuina 중재 방법을 설명합니다.

무릎 골관절염의 토끼 모델에 대한 Tuina 개입

기계적 연골 과부하에 대한 연골 세포 손상 반응을 더 잘 이해하기 위해, 이 프로토콜은 24시간 동안 치명적이지 않은 체외 연골 충격 모델의 개발을 설명합니다.

체외(In Vitro ) 소 연골 외식에서 치명적 연골 세포 손상을 일으키는 충격 모델

여기에서는 설치류에서 무릎 골관절염을 유발하는 신뢰할 수 있는 모델로서 전방십자인대(ACL)를 횡단하는 수술 방법과 무릎 활액 채취, 무릎 부종 측정 및 골관절염 중증도 평가를 위한 방법론을 설명합니다.

관절 염증 및 외상 후 골관절염을 연구하기 위한 설치류 모델의 전방십자인대 절개 및 활액 세척

여기서는 양 무릎에서 통제된 골연골 병변을 생성하는 통합 프로토콜을 제시하여 뼈 및 연골 조직 재생 연구에 적합한 실험 모델을 구축합니다. 프로토콜은 동물 복지에 미치는 영향과 결과 변동을 최소화하는 기법을 사용하여 대퇴골 과과에 전층 골연골 결손을 유도하는 방법을 제시합니다.

전층 골연골 결함의 양 모델 구축 및 평가

골관절염 (OA) 또는 퇴행성 관절 질환, 부분적으로 만 가능한 진통제 통증 제어 유지와 관련된 쇠약 상태이다. 동물 모델은 OA 관련 통증 메커니즘에 대한 이해를 향상시키기 위해 개발되고있다. 여기에서 우리는 마우스의 OA 통증의 monoiodoacetate 모델에 대한 방법을 설명합니다.

마우스에서 관절염 통증의 Monoiodoacetate 모델

학습하세요 토끼 무릎 연골 충격 모델을 이용한 외상 후 골관절염 연구 방법을. 스타인만 핀 삽입과 낙하 타워를 활용하여 재현 가능한 연골 손상을 유도하고 새로운 치료제 평가에 활용합니다.

토끼에서 외상 후 골관절염을 생성하기 위한 재현 가능한 연골 충격 모델

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