Name: Microdialysis System을 사용한 의식이 있는 쥐의 해마 세포외 유체의 실시간 동적 수집 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-21T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 43 s
Description: 학습하세요 마이크로다이얼리시스 시스템을 사용하여 의식이 있는 쥐의 해마 CA1 영역에서 세포외 유체를 실시간으로 수집하는 방법을. 이 기술은 중추신경계 질환의 질병 마커를 동적으로 모니터링하여 약물 효능과 대사 변화를 연구하는 데 활용됩니다.

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이 연구는 중국 국립 자연 과학 재단 (82104533), 쓰촨성 과학 기술부 (2021YJ0175) 및 중국 박사후 과학 재단 (2020M683273)의 지원을 받았습니다. 저자는 Tri-Angels D&H Trading Pte.의 선임 장비 엔지니어인 Mr. Yuncheng Hong에게 감사의 말을 전합니다. Ltd. (싱가포르)는 미세 투석 기술에 대한 기술 서비스를 제공합니다.

실험 프로토콜은 청두 한의과대학 실험동물 사용 및 기관 동물 관리 및 사용 위원회(기록 번호: 2021-11)의 요구 사항에 따라 수행되었습니다. 수컷 Sprague Dawley (SD) 래트(280 ± 20 g, 6-8주령)를 본 연구에 사용하였다.
1. 뇌 미세 투석 프로브 이식 수술
<ol><li>쥐 마취의 유도 및 유지를 위해 각각 3% 및 1.5% 이소플루란을 사용하고 0.6L/min의 공기-산소 혼합물에서 동물 마취 시스템을 사용합니다. 쥐가 통증 반사와 각막 반사 없이 깊게 마취되었는지 확인하십시오. 마취 상태에서 건조를 방지하기 위해 눈에 수의학 연고를 사용하십시오.</li>
	<li>준비 구역에서 전기 면도기로 마취 된 쥐의 두개골에 있는 털을 제거합니다. 그런 다음 마취 된 쥐를 정위 뇌 탐지기에 고정시킵니다. 수술 전 수술 부위에 포비돈 요오드와 에탄올 3배를 멸균 면봉으로 발라 수술 부위를 소독합니다. 국소 진통을 위해 부피바카인을 국소적으로 바르십시오. 참고: 미세 투석 기반 HECF 샘플 수집의 전체 프로세스는 그림 1에 나와 있습니다.</li>
	<li>수술용 가위로 중간에 1.5cm 두개안면 절개를 하고 수술용 가위와 안과용 집게를 사용하여 골막을 제거합니다.</li>
	<li>브레그마를 기저 위치로 간주하고 두개골을 뚫어 전후(AP) 위치(-2mm), 내측(ML) 위치(-3.5mm) 및 배측(DV) 위치(-3.5mm)(해마 CA1 영역)에서 2mm 구멍을 뚫습니다.</li>
	<li>정위 뇌 탐지기의 그리퍼에 카테터 스타일릿을 고정하고 AP(-2mm), ML(-3.5mm) 및 DV(0mm) 위치에서 미세 투석 케이싱의 위치를 조정합니다. 뇌 스테레오 로케이터의 DV 값을 조정하고 미세 투석 케이싱을 3.5mm 깊이의 CA1 영역에 이식합니다. 알림: 동물 온도 유지 장치를 사용하여 작동 중 동물의 온도를 37°C로 유지하십시오.</li>
	<li>3개의 구멍이 프로브 구멍이 중앙에 위치하는 삼각형을 형성하도록 직경 2mm의 구멍 3개를 더 뚫습니다. 1mm 깊이의 구멍에 나사를 삽입합니다.</li>
	<li>프로브 카테터를 치과용 시멘트로 고정하고 4-0 수술용 봉합사를 사용하여 피부를 봉합합니다. 프로브 배치는 그림 2 를 참조하십시오.</li>
	<li>회복을 위해 7 일 동안 새장에 쥐를 두십시오. 수술 후 1일 1회 부피바카인(1.5mg/kg)을 국소적으로 침윤시킵니다.  음식과 물을 임의로 제공하십시오. 히알루론산 나트륨 점안액을 하루에 3번 사용하여 수술 후 건조를 예방하십시오. 알림: 모든 절차는 멸균 수술실에서 수행하십시오. 동물이 37 °C 조건에서 흉골 누운 상태를 유지하기에 충분한 의식을 회복할 때까지 동물을 방치하지 마십시오. 완전히 회복 될 때까지 수술을받은 동물을 다른 동물의 회사에 돌려 보내지 마십시오.</li>
</ol>2. 미세 투석 시스템 연결 및 프로브 점검
<ol><li>미세 투석 펌프, 미세 주사기, 각성 활동 장치 및 극저온 s를 연결하십시오.amp제조업체의 지침에 따라 수집기. 미세 투석 펌프에 ACSF가 있는 미세 주사기를 설치하고 미세 투석 펌프를 1μL/min의 속도로 설정하여 파이프라인의 공기를 배출합니다.</li>
	<li>파이프라인과 뇌 미세 투석 프로브를 연결합니다(멤브레인: PAES, 멤브레인 길이: 4mm, 멤브레인 OD: 0.5mm, 컷오프: 20kDa, 샤프트 길이: 14mm). 미세 투석 펌프를 1μL/min의 속도로 작동하여 프로브 표면이 약간 촉촉해질 때까지 ACSF를 프로브에 주입합니다. 후속 사용을 위해 프로브를 헤파린 나트륨 주입 용액에 담그십시오. 알림: 중력 상태에서 육안으로 볼 수 있듯이 ACSF의 큰 흐름이 프로브의 반투과성 멤브레인에서 떨어지면 프로브를 새 것으로 교체하십시오.</li>
</ol>3. 깨어있는 쥐의 HECF 수집
<ol><li>뇌 미세 투석 프로브를 프로브 카테터에 삽입하고 쥐가 자유롭게 움직일 수 있도록 패딩이 있는 챔버(높이: 360mm, 직경: 400mm)에 쥐를 넣습니다.</li>
	<li>파이프라인, 미세주사기 펌프 및 뇌 미세투석 프로브를 연결합니다. 쥐 구속 장치 상단의 구멍과 스테인리스 스틸 스위블을 통해 쥐를 연결합니다.</li>
	<li>쥐가 자유롭게 움직이는 동안 미세 투석 파이프 라인이 얽히지 않도록 다중 채널 회전 컨트롤러를 켭니다. 미세 주사기 펌프를 켜고 ACSF를 1μL/min의 속도로 펌핑합니다. 미세투석 HECF 수집 시스템의 60분 평형 후 주기적으로 HECF를 수집합니다.</li>
	<li>HECF의 유속이 있는지 확인하십시오.amp냉장 분획 수집기의 파일은 ACSF 주입과 일치합니다. 20μL의 HECF를 수집하고 다음 샘플링 튜브로 자동 변경합니다. 프로브를 삽입할 때 프로브 멤브레인이 손상되지 않았는지 주의하십시오.</li>
</ol>4. HECF에 대한 삼투압 측정
<ol><li>삼투압계를 켜고 감지 시스템에 로그인합니다. 터치 스크린에서 Cal 버튼을 클릭하고 페이지에서 Res 버튼을 클릭하여 이전 보정 메모리를 지웁니다.</li>
	<li>기포가 없는 순수한 물 100μL가 들어 있는 1.5mL 튜브를 측정 헤드에 설치합니다. 측정 헤드를 차가운 히드라진 용기의 바닥으로 당깁니다.</li>
	<li>터치 스크린에 샘플 번호 0을 입력하고 테스트를 확인합니다. 다이오드 바늘을 샘플 튜브에 빠르게 담근 다음 빠르게 당겨 -6.2 °C의 온도에서 샘플의 결정화를 유도합니다.</li>
	<li>화면이 표시될 때까지 기다립니다: 측정 헤드를 위로 밀고 Cal 및 Cal 0을 차례로 클릭하여 보정합니다. 300mOsm 보정 용액으로 측정을 수행하고 위에서 설명한 대로 HECF 샘플의 삼투압을 측정합니다. 알림: 보정 또는 측정 후에는 부드러운 종이 타월로 측정 헤드를 닦으십시오. 기포가 없는 HECF 샘플은 잘 혼합되어야 합니다.</li>
</ol>5. 샘플링 후 미세 투석 시스템 및 장치의 유지 보수
<ol><li>샘플링 종료 후 프로브 카테터에서 뇌 미세 투석 프로브를 꺼냅니다. 프로브를 탈이온수에 담그고 탈이온수로 12시간 동안 세척하여 파이프라인과 프로브에서 좌초된 염 침전물을 제거합니다.</li>
	<li>프로브를 제거하고 4°C에서 0.05% 트립신 용액을 넣는다. 파이프라인을 25°C의 공기 건조 오븐에서 건조하고 실온에서 보관하십시오. 참고: 미세 투석 프로브는 비싸고 이 단계는 프로브의 재사용성을 높일 수 있습니다. 프로브 표면에 부착된 단백질은 트립신 용액으로 분해되어 프로브 막이 단백질에 의해 차단되는 것을 방지할 수 있으며 트립신은 프로브 물질에 영향을 미치지 않았습니다.</li>
</ol>6. 시료 채취 후 동물 처리
<ol><li>샘플링 후, 동물 윤리에 따라 1.5% 이소플루란을 흡입하게 한 다음 5% 이소플루란을 과다 투여하여 고통 없이 안락사시킵니다.</li>
</ol>

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중추 신경계 질환의 발병 기전은 아직 완전히 이해되지 않아 새로운 치료법과 약물 개발을 방해합니다. 연구에 따르면 대부분의 CNS 질환은 해마 병변과 밀접한 관련이 있습니다20,21,22. 제안 된 뇌 미세 투석 기술은 뇌의 특정 영역, 특히 해마를 표적으로 삼을 수 있으므로 HECF를 수집하는 전통적인 접근 방식에서 두드러집니다. 이식 수술을 통해 쥐 뇌의 CA1 영역에 프로브를 배치하여 인공막의 수동 확산에 의해 특정 크기의 분자를 분리합니다. 프로브의 이식은 프로브의 손상 및 프로브 이식으로 인해 발생할 수 있는 단백질, 응집체(23)와 같은 뇌 조직의 국소 손상이 실험의 실패 또는 측정의 부정확성의 증가로 이어질 수 있는 중요한 단계입니다. 따라서 프로브의 무결성을 확인하고 미세투석 프로브 이식 수술 후 동물에게 ...

신경퇴행성 질환, 외상성 뇌 손상, 고지대 저산소증으로 인한 뇌 손상 및 허혈성 뇌졸중과 같이 이환율이 높은 중추신경계(CNS) 질환은 전 세계적으로 사망률이 증가하는 중요한 원인입니다 1,2,3. 특정 뇌 영역의 사이토카인 및 단백질 변화의 실시간 모니터링은 중추신경계 질환의 진단 정확도와 투약 후 뇌 약동학 연구에 기여합니다. 전통적인 과학 연구는 특정 물질의 검출 및 약동학 연구를 위해 뇌 조직 균질액 또는 동물 간질 뇌액의 수동 수집을 사용합니다. 그러나 이것은 제한된 표본 크기, 지표의 변화를 동적으로 관찰할 수 없음, 고르지 않은 표본 추출 품질 4,5,6과 같은 몇 가지 단점이 있습니다. 간질액인 뇌척수액은 뇌와 척수를 기계적 손상으로부터 보호합니다. 그 구성은 혈액 뇌 장벽 (BBB)의 존재로 인해 혈청의 구성과 다릅니다.7. 뇌척수액 샘플의 직접 분석은 CNS 병변 및 약물 발견의 메커니즘을 밝히는 데 더 도움이 됩니다. 필연적으로, 주사기를 통해 수조 마그나 및 뇌실에서 직접 수동으로 얻은 뇌척수액 샘플은 혈액 오염의 단점, 무작위 샘플 수집 기회, 수량의 불확실성 및 다중 검색 가능성이 거의 없습니다 8,9. 특히, 기존의 간질성 뇌액 샘플링 방법은 손상된 뇌 영역에서 샘플을 얻을 수 없어 특정 뇌 영역에서 CNS 질환의 발병기전을 탐색하고 표적 민족 의학 요법의 효능 평가를 방해합니다 9,10.
뇌 미세투석(brain microdialysis)은 깨어 있는 동물에서 간질성 뇌액을 채취하는 기술이다11. 미세 투석 시스템은 뇌에 이식 된 프로브의 도움으로 혈관 투과성을 모방합니다. 미세 투석 프로브는 반투과성 막으로 무장하고 특정 뇌 영역에 이식됩니다. 등장성 인공 뇌척수액(African artificial cerebrospinal fluid, ACSF)으로 관류한 후, 투석된 간질성 뇌액은 작은 표본 크기, 연속적인 샘플링 및 동적 관찰의 이점으로 유리하게 수집될 수 있다12,13. 위치 측면에서, 뇌 미세투석 프로브는 관심 있는 뇌 구조 또는 두개골 수조에 선택적으로 이식될 수 있다14. 해마 세포 외액 (HECF)에서 내인성 물질의 비정상적인 수준을 관찰하면 CNS 질환의 발생 또는 질병의 발병 기전을 알 수 있습니다. 여러 연구에 따르면 정신분열증의 D-아미노산, 알츠하이머병의 β-아밀로이드 및 타우 단백질, 외상성 뇌 손상의 신경필라멘트 경쇄, 저산소성 허혈성 뇌병증의 유비퀴틴 카르복시 말단 가수분해효소 L1과 같은 CNS 질환에 대한 바이오마커를 뇌척수액에서 분석할 수 있습니다15,16,17 . 뇌 미세투석 샘플링 기법에 기초한 화학 분석 방법을 사용하여 특정 뇌 영역에서 확산 및 분포하는 민족 의학의 활성 성분과 같은 외인성 화합물의 동적 변화를 모니터링할 수 있다14.
이 기사는 깨어 있는 쥐에서 동적 HECF 획득의 특정 과정을 제시하고 샘플 품질을 보장하기 위해 삼투압을 측정합니다.

<table><tbody><tr><td>&nbsp; 공기 건조 오븐</td><td>Suzhou Great Electronic Equipment Co., Ltd</td><td>GHG-9240A</td><td></td></tr><tr><td>동물 마취 시스템</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>동물 온도 유지기</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>인공 뇌척수액</td><td>Beijing leagene biotech. Co., Ltd</td><td>CZ0522</td><td></td></tr><tr><td>뇌 미세 투석 프로브</td><td>&nbsp; CMA 미세투석 AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>카테터</td><td>&nbsp; CMA 미세 투석 AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>Covance 주입 하네</td>스 <td>Instech Laboratories, Inc.</td><td>CIH95</td><td></td></tr><tr><td>의치 베이스 수지</td><td>Shanghai Eryi Zhang Jiang Biomaterials Co., Ltd</td><td>190732</td><td></td></tr><tr><td>전기 두개골 드릴</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>78001</td><td></td></tr><tr><td>전기 면도기</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>동물용 자유 이동 탱크</td><td>&nbsp; CMA Microdialysis AB</td><td>CMA120</td><td></td></tr><tr><td>Heparin sodium injection</td><td>Chengdu Haitong Pharmaceutical Co., Ltd</td><td>H51021208</td><td></td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Sichuan Lekang Pharmaceutical Accessories Co., Ltd</td><td>202201</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis catheter stylet</td><td>&nbsp; CMA 미세투석 AB</td><td>8011205</td><td></td></tr><tr><td>미세투석 수집 튜브</td><td>&nbsp; CMA 미세투석 AB</td><td>7431100</td><td></td></tr><tr><td>미세</td>투석 수집기<td>&nbsp; CMA 미세투석 AB</td><td>CMA4004</td><td></td></tr><tr><td>미세투석 fep 튜브</td><td>&nbsp; CMA Microdialysis AB</td><td>3409501</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis in vitro stand</td><td>&nbsp; CMA 미세투석 AB</td><td>CMA130</td><td></td></tr><tr><td>미세투석 미세주입 펌프</td><td>&nbsp; CMA 미세투석 AB</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>미세투석 주사기 (1.0 mL)</td><td>&nbsp; CMA Microdialysis AB</td><td>8309020</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis 튜빙 어댑터</td><td>&nbsp; CMA 미세 투석 AB</td><td>3409500</td><td></td></tr><tr><td>비흡수성 외과용 봉합</td>사 <td>Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd</td><td>S19004</td><td></td></tr><tr><td>안과 겸자</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F12016-15</td><td></td></tr><tr><td>삼투압계</td><td>L&ouml; ser</td><td>OM 807</td><td></td></tr><tr><td>히알루론산 나트륨 안약</td><td>URSAPHARM Arzneimittel GmbH</td><td>H20150150</td><td></td></tr><tr><td>입체 택시 장치</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>68025</td><td></td></tr><tr><td>수술 용 가위</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>S14014-15</td><td></td></tr><tr><td>수술 용 가위</td><td>Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd</td><td>BY-103</td><td></td></tr><tr><td>주사기 바늘</td><td>&nbsp; CMA 미세 투석 AB</td><td>T56518</td><td></td></tr><tr><td>트립신 솔루션</td><td>Boster Biological Technology, Ltd.</td><td></td><td></td>PYG0107</tr><tr><td>초음파 세척기</td><td>Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd</td><td>KMH1-240W8101</td><td></td></tr></tbody></table>

microdialysis system을 사용한 의식이 있는 쥐의 해마 세포외 유체의 실시간 동적 수집

Real-Time Dynamic Collection of Hippocampal Extracellular Fluid from Conscious Rats Using a Microdialysis System

다양한 중추신경계(CNS) 질환은 해마 세포외액(HECF) 구성의 변화와 관련이 있습니다. 그러나 의식이 있는 쥐로부터 실시간으로 HECF를 얻는 데 어려움이 있어 CNS 질병 진행 평가와 민족의학 요법의 효과가 오랫동안 제한되어 왔습니다. 고무적으로, 뇌 미세 투석 기술은 동적 관찰, 정량 분석 및 작은 샘플링 크기의 장점으로 연속 샘플링에 사용될 수 있습니다. 이를 통해 살아있는 동물의 뇌에서 전통적인 허브의 화합물과 대사 산물에 대한 세포 외액 함량의 변화를 모니터링 할 수 있습니다. 따라서 이 연구의 목적은 3차원 뇌 정위 장치를 사용하여 Sprague Dawley(SD) 쥐의 해마 영역에 뇌척수액 미세 투석 프로브를 정확하게 이식하여 20kDa 이상의 분자량을 차단하는 것이었습니다. 그런 다음 2.87nL/min - 2.98mL/min에서 샘플링 속도를 조정할 수 있는 미세 투석 샘플링 제어 시스템을 사용하여 의식이 있는 쥐로부터 고품질 HECF를 얻었습니다. 결론적으로, 우리의 프로토콜은 미세 투석 기술의 도움으로 깨어 있는 쥐에서 HECF를 얻을 수 있는 효율적이고 신속하며 역동적인 방법을 제공하여 CNS 관련 질병의 발병기전을 추가로 탐색하고 약물 효능을 평가할 수 있는 무한한 가능성을 제공합니다.

상기 실험 프로토콜 및 표 1에 설정된 샘플링 파라미터에 따라, 설정된 샘플링 속도에서 물-유사, 무색 및 투명 래트 HECF를 수득하였다(도 1K). 수득 된 쥐 HECF의 삼투압은 290-310 mOsm / L이며, 이는 간접적으로 샘플18,19의 품질을 보장 할 수있다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64530/64530fig01.jpg"> 그림 1: 미세 투석 샘플링 장비를 사용하여 수집된 쥐 HECF. (A,B) 동물...

여기서 프로토콜은 미세 투석 시스템을 사용하여 깨어 있는 쥐의 해마에서 세포외액의 상세한 실시간 동적 샘플링을 제공합니다.

Microdialysis System을 사용한 의식이 있는 쥐의 해마 세포외 유체의 실시간 동적 수집

A variety of central nervous system (CNS) diseases are associated with changes in the composition of hippocampal extracellular fluid (HECF). However, ...

뇌 미세투석 기술에 의한 해마 세포외액 및 군중은 중추신경계 질환의 질병 특이적 마이크로를 모니터링하는데 기여한다. 뇌 미세 투석 기술은 마취되지 않은 쥐의 특정 뇌 영역에서 간질 뇌액의 역동적이고 지속적인 조사를 달성합니다. 마취된 쥐를 정위 뇌 탐지기에 고정하고 수술 전에 면도한 수술 부위를 포비돈 요오드와 에탄올 면봉으로 세 번 닦습니다.그런 다음 수술 용 가위로 중간에 1.5cm 두개골 안면 절개를하고 수술 용 가위와 안과 겸자를 사용하여 골막을 제거합니다. 브레그마를 기저 위치로 간주하여 두개골 드릴을 사용하여 내두개를 뚫어 해마 CA1 영역에 2mm 구멍을 뚫습니다. 이제 카테터 스틸렛을 정위 뇌 탐지기의 그리퍼에 고정하고 전후, 내측 및 등쪽 복부 위치에서 미세 투석 케이싱의 위치를 조정합니다.뇌 입체 탐지기의 배측 밸브를 조정하고 미세 투석 케이싱을 3.5mm 깊이의 CA1 영역에 이식합니다. 직경이 2mm인 조리개 3개를 더 뚫어 3개의 구멍이 프로브 구멍이 중앙에 위치하는 삼각형을 형성하도록 합니다. 1mm 깊이의 구멍에 나사를 이식하고 프로브 카테터를 치과 용 시멘트로 고정합니다.그런 다음 4-O 수술 봉합사를 사용하여 피부를 닫습니다. 미세 투석 펌프 미세 주사기를 ACSF 각성 활동 장치 및 극저온 s와 연결하십시오.amp제조업체의 지침에 따라 수집기. 다음으로, 파이프 라인의 공기를 배출하기 위해 미세 투석 펌프를 분당 1 마이크로 리터의 속도로 설정하십시오.그런 다음 파이프라인과 뇌 미세 투석 프로브를 연결하고 분당 1마이크로리터의 속도로 미세 투석 펌프를 작동하여 프로브 표면이 약간 촉촉해질 때까지 프로브에 ACSF를 주입합니다. 후속 사용을 위해 프로브를 헤파린 나트륨 주입 용액에 담그십시오. 깨어 있는 쥐에게서 HECF를 수집하려면 뇌 미세 투석 프로브를 프로브 카테터에 삽입하고 쥐가 자유롭게 움직일 수 있도록 패딩이 있는 챔버에 쥐를 넣습니다.쥐가 자유롭게 움직이는 동안 미세 투석 파이프 라인이 얽히지 않도록 다중 채널 회전 컨트롤러를 켭니다. 그런 다음 마이크로 주사기 펌프를 켜고 분당 1 마이크로 리터의 속도로 ACSF를 펌핑하십시오. 미세투석 HECF 수집 시스템의 60분 평형 후, 주기적으로 HECF를 수집한다.샘플링 종료 후 프로브 카테터에서 뇌 미세 투석 프로브를 꺼냅니다. 프로브를 탈이온수에 담그고 탈이온수로 12시간 동안 세척하여 파이프라인과 프로브에서 좌초된 염 침전물을 제거합니다. 프로브를 제거하고 섭씨 4도에서 0.05% 트립신 용액에 넣습니다.뇌 미세 투석 기술로 획득 한 해마 세포 외액은 물과 같고 무색이며 설정된 샘플링 속도에서 투명합니다. 가장 중요한 절차는 미세 투석을 CA1 영역에 조심스럽게 이식하고 프로브를 팝 카테터에 삽입하는 것입니다. 미세 투석 기술은 특정 뇌 영역에서 질병 마커의 동적 변화, 약물 효능의 물질 및 약물 성분의 조직 이화 작용을 도울 수 있습니다.

real-time-dynamic-collection-hippocampal-extracellular-fluid-from

Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

자유롭게 동물을 이동 고유 뇌 세포 지역에서 신경 전달 물질 수준의 모니터링 신경 전달 물질 방출과 행동 사이의 링크에 통찰력을 제공합니다. 그리고 기초 neurotransmission가 약리 또는 생리적 조작에 의해 변경하는 방법에 대한 정보, 전기 탐지와 결합하여 생체내 microdialysis 우수한 해부 학적 및 화학적 해상도를 제공합니다.

설치류에 살아서 Stereotaxic 외과

직접 intrahippocampal microinjection에 의해 hippocampally에 의존 공간 작업 기억의 변조는 함께하고...

Hippocampal 인슐린 Microinjection 및<em&gt; 생체에</em공간 메모리 테스트 기간 동안&gt; Microdialysis

이 동영상은 미세 투석 프로브를 사용하여 마우스 뇌의 간질액(ISF)에서 세포 외 단백질을 수집하는 과정을 보여줍니다. 고분자량 컷오프 반투과성 멤브레인이 장착된 미세 투석 프로브는 이식된 가이드 캐뉼라를 통해 마취된 마우스의 뇌에 삽입됩니다. 펌프에 연결된 프로브는 생리학적 완충액이 뇌 조직을 관류하고 ISF와 혼합할 수 있도록 합니다. ISF의 단백질은 반투과성 멤브레인을 통해 확산되고 분석을 위해 수집됩니다.

세포 외 단백질을 분리하기 위한 생쥐 뇌의 간질액의 미세투석

여기에서, 우리는 격리 된 전체 해마 제조물로부터 리듬 뉴런 네트워크 세타 및 감마 진동을 기록하기위한 프로토콜을 제시한다. 우리는 해마 추출에서 현장, 단일 및 전체 세포 패치 클램프 녹음뿐만 아니라 theta 리듬의 광 발생기 페이싱에 이르기까지의 실험 단계를 설명합니다.

Hippocampal 쎄타 밴드의 튜닝<em&gt; 체외에서</em&gt; : 격리 된 설치류 Septohippocampal Circuit에서 기록하는 방법론

이 프로토콜 로컬 필드 전위 선형 실리콘 프로브 멀티 생크와의 녹음을 설명 합니다. 현재 소스 밀도 분석을 사용 하 여 신호 변환 마우스 해 마에 지역 전기 활동의 개조를 허용 한다. 이 기술을 공간적으로 제한 된 뇌 진동 자유롭게 마우스를 이동에 공부 될 수 있다.

행동 하는 쥐의 해 마에서 진동 제한 공간 기록

Vivo에서 microdialysis는 깨어, 자유롭게 행동 하는 동물에서 뇌 중간 유체 (ISF)에 존재 하는 분자의 컬렉션을 사용할 수 있습니다. ISF에 상대적으로 큰 분자를 분석 하기 위해 현재 문서 막 잘라 높은 분자 무게를 가진 프로브를 사용 하 여 microdialysis 프로토콜에 특히 초점을.

Vivo에서 Microdialysis 메서드를 잘라 높은 분자 무게와 뇌 간 질 성 액체에서 큰 Extracellular 단백질을 수집 조사

여기, vivo에서 microdialysis 뇌 파 기록 함께에서 간 질 및 간 질 비 쥐의 복 부 해 마에 aspartate 및 조미료 자료를 분석 하는 방법을 설명 합니다. Extracellular 농도 aspartate 및 조미료의 질병의 다른 단계와 상관 될 수 있습니다.

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

신경 전달 물질 변경은 뇌진탕 후 발생 하 고 때로는 치명적인 장기 결과에 기여 하는 신경 기능 장애의 메커니즘. 이 쥐 모델은 미세 투액을 결합하여 생체 내 신경 전달 물질 정량화를 허용하며, 인간 두개 내 뇌 외상의 중요한 요소인 머리와 몸통의 빠른 가속 및 감속을 발휘하는 체중 투하 기술을 사용합니다.

생체 뇌 미세 투석과 힘과 회전을 결합 하는 뇌진탕의 소설 및 번역 쥐 모델

본 프로토콜은 미세투석 기술을 사용하여 쥐 심장 혈액의 실시간 및 동적 수집을 위한 간단하고 효율적인 방법을 설명한다.

비침습적 미세투석 기술을 통한 쥐 심장의 동적 연속 혈액 추출

이 프로토콜은 국소 자기장 전위를 기록하고 쥐 해마와 전전두엽 피질의 정보 흐름을 조사하기 위해 맞춤형으로 설계된 기록 장치와 전극의 사용을 간략하게 설명합니다.

Mouse Hippocampus and Prefrontal Cortex의 Dual Extracellular Recordings in the Mouse Hippocampus and Prefrontal Cortex(생쥐 해마와 전전두엽 피질의 이중 세포외 기록)

학습하세요 마이크로다이얼리시스 시스템을 사용하여 의식이 있는 쥐의 해마 CA1 영역에서 세포외 유체를 실시간으로 수집하는 방법을. 이 기술은 중추신경계 질환의 질병 마커를 동적으로 모니터링하여 약물 효능과 대사 변화를 연구하는 데 활용됩니다.

Microdialysis System을 사용한 의식이 있는 쥐의 해마 세포외 유체의 실시간 동적 수집

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