Name: 비침습적 미세투석 기술을 통한 쥐 심장의 동적 연속 혈액 추출 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-09-13T15:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 52 s
Description: 배우세요 쥐 심장에서 비침습적 미세투석 기술을 이용한 동적 연속 혈액 추출 방법을. 심혈관 질환의 혈액 바이오마커 실시간 분석에 활용할 수 있습니다.

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이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단(82104533), 중국 박사후 과학 재단(2020M683273), 쓰촨성 과학 기술부(2021YJ0175) 및 쓰촨성 과학 기술 계획의 핵심 R&D 프로젝트(2022YFS0438)의 지원을 받았습니다. 한편, 저자들은 TRI-ANGELS D&H TRADING PTE의 수석 장비 엔지니어인 Yuncheng Hong에게 감사의 말을 전하고 싶습니다. LTD. (싱가포르 시, 싱가포르), 미세 투석 기술에 대한 기술 서비스 제공.

동물 프로토콜은 청두 중의과대학 행정위원회의 승인을 받았습니다(기록 번호: 2021-11). 특정 병원체가 없는 수컷 Sprague Dawley(SD) 랫트(8-10주, 260-300g)를 독립적인 환기 케이지에서 키우고 실험실 환경을 22°C 및 65% 상대 습도로 유지하여 본 연구에 사용했습니다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조). 모든 랫트는 해당 기간 동안 무료 물과 식이요법으로 1주일 동안 적응 섭식에 익숙해졌습니다.
1. 실험 준비
<ol><li>그림 1과 같이 혈액 샘플링의 미세 투석과 관련된 장비를 조립합니다(재료 표 참조).</li>
	<li>미세투석 채혈을 위한 관류액으로 구연산염 3.50mmol/L, 구연산나트륨 7.50mmol/L, 포도당 13.60mmol/L를 포함하는 항응고제 구연산염 포도당 용액(ACD)을 준비합니다( 재료 표 참조).</li>
	<li>사용하기 전에 0.22μm 멤브레인 여과 장치로 ACD를 여과하고 초음파로 기포를 제거합니다. SD 쥐에 대한 자극을 줄이기 위해 ACD를 37°C로 유지하십시오.</li>
</ol>2. 미세투석 배관 시스템의 개통 검사
<ol><li>투석 장치의 프로브 입구를 주사기 바늘, 튜브 어댑터 및 fep 튜브에 부착합니다( 재료 표 참조). 알림: 미세 투석 프로브의 파란색 끝은 유체 유입용이고 투명 끝은 유체 유출용입니다.</li>
	<li>ACD18 을 2μL/min의 속도로 배관 시스템에 관류하여 미세 투석 배관 시스템의 개통성을 확인합니다. 참고: ACD가 s에서 흐르는 경우ample 수집 장소, 방해받지 않는 미세 투석 시스템을 추가 심장 혈액 수집에 사용할 수 있습니다. 그렇지 않은 경우 혈액 프로브에 누출이 파손되었는지 또는 파이프-파이프 조인트가 밀봉되었는지 확인해야 합니다.</li>
</ol>3. 미세투석 프로브 주입
<ol><li>0.6L/min의 공기-산소 혼합물에 2% 이소플루란으로 쥐를 마취하고, 완전히 의식을 잃은 쥐를 수술대에 고정하고, 동물 체온 유지제를 사용하여 체온을 37°C로 유지합니다( 재료 표 참조).</li>
	<li>전기 면도기로 목에서 털을 제거하고 베타 딘과 70 % 알코올을 번갈아 가며 수술 부위를 소독하십시오. 쥐에게 부피바카인(1.5mg/kg)을 주사합니다. 목의 정중선을 따라 1.5cm 절개를 통해 연조직과 혈관주위 근막을 무딘 절개하여 오른쪽 경정맥을 노출시킵니다. 참고: 실험에 사용된 모든 수술 기구 및 도구는 고압 증기멸균으로 미리 멸균해야 합니다. 멸균 장갑과 수술용 드레이프를 사용하십시오. 전체 실험 작업은 무균 환경에서 수행되어야합니다. 마취 및 진통 요법에 대한 현지 동물 사용 지침을 따르십시오.</li>
	<li>심장 말단부의 우측 경정맥에 4-0 수술용 봉합사를 이용하여 탈착식 슬립노트를 만들어 일시적으로 혈류를 차단하고, 심장 근처의 우측 경정맥을 1.5cm 절개한다.</li>
	<li>바늘 모양의 카테터 스타일릿(길이 25mm, 직경 0.7mm, 재료 표 참조)을 쥐 심장의 근위 끝을 향한 오른쪽 경정맥에 삽입하고 혈액 미세투석 프로브(총 프로브 길이 24mm, 막 길이 10mm)를 카테터에 삽입하고 카테터 스타일릿19의 비스듬한 절개를 따라 안과용 집게로 프로브를 이식합니다.</li>
	<li>유도 카테터 탐침을 제거하고 프로브의 반투과성 막(막 길이 10mm, 막 직경 0.5mm)을 오른쪽 경정맥에 완전히 잠급니다. 오른쪽 경정맥의 혈류를 회복하기 위해 심장의 말단부에서 분리 가능한 슬립노트를 풉니다.</li>
	<li>4-0 수술 봉합사를 사용하여 오른쪽 경정맥으로 프로브를 합자하고 프로브 테일 튜브를 목 뒤쪽에 피하 나사로 끼웁니다. 구체적인 프로브 주입 단계는 그림 2 를 참조하십시오. 참고: 이 연구에 사용된 혈액 미세투석 프로브에 의한 분자 컷오프는 >20kD입니다. 수집 된 혈액 샘플에는 분자량이 20kD 미만인 물질이 포함되어 있습니다.</li>
</ol>4. 미세 투석 샘플링
<ol><li>미세 투석 프로브 이식 일주일 후, 외과적 외상으로부터 회복된 쥐는 미세 투석 샘플링을 받습니다. 깨어 있는 쥐를 자유롭게 움직이는 탱크( 재료 표 참조)에 넣고 프로브를 미세 투석 시스템에 연결합니다. 1시간 동안 2μL/min의 속도로 ACD를 관개하여 프로브 투석막을 평형화합니다.</li>
	<li>미세 투석 혈액 샘플을 2μL/min의 유속으로 수집하고 4°C 분수 용기에 임시로 보관합니다. 참고: 얻은 혈액 샘플은 실온에서 20,000분 동안 10 x g 에서 원심분리하여 직접 테스트할 수 있습니다. 또는 다음 테스트를 위해 -80 °C에서 보관할 수 있습니다. 샘플을 수집할 때 프로브가 탈출 및/또는 누출되는지 항상 관찰하는 것이 중요합니다.</li>
</ol>5. 샘플링 후 작업
<ol><li>SD 쥐를 0.6L/min의 공기-산소 혼합물에서 2% 이소플루란으로 마취합니다.</li>
	<li>프로브가 오른쪽 경정맥에 있는지 다시 확인하기 위해 해부합니다. 오른쪽 경정맥에서 미세 투석 프로브를 제거하고 초순수에 넣습니다.</li>
	<li>마지막으로, 5% 이소플루란을 흡입하여 쥐를 안락사시킨다.</li>
	<li>프로브를 파이프라인에 연결하고 초순수로 2μL/min의 속도로 밤새 헹구어 파이프와 프로브에 남아 있는 염분을 완전히 씻어냅니다.</li>
	<li>프로브를 제거하고 초순수에 담그십시오. 프로브 투석막이 수축하는 것을 방지하기 위해 4°C에서 보관하십시오. 알림: 투석액의 부피가 관류액의 부피와 일치하지 않으면 응고된 혈액에 의해 프로브가 차단될 수 있습니다. 프로브는 눈에 보이는 물질이 프로브 멤브레인의 끝에서 벗겨질 때까지 췌장 단백질 용액에 넣을 수 있습니다.</li>
</ol>

<ol><li>van Rensburg, W. J. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-mortem+evidence+of+a+diverse+distribution+pattern+of+atherosclerosis+in+the+South+African+population%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Post-mortem evidence of a diverse distribution pattern of atherosclerosis in the South African population.</a> Scientific Reports. 12 (1), 11366(2022).</li>
<li>Katz, A. J., Chen, R. C., Usinger, D. S., Danus, S. M., Zullig, L. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+prevention+and+management+of+pre-existent+cardiovascular+disease+in+a+cohort+of+prostate+cancer+survivors%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cancer+Survivorship%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease prevention and management of pre-existent cardiovascular disease in a cohort of prostate cancer survivors.</a> Journal of Cancer Survivorship. , (2022).</li>
<li>Rødevand, L., Tesli, M., Andreassen, O. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+in+people+with+severe+mental+disorders%3A+an+update+and+call+for+action%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Psychiatry%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk in people with severe mental disorders: an update and call for action.</a> Current Opinion in Psychiatry. 35 (4), 277-284 (2022).</li>
<li>Izumi, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+circulating+cathepsin+K+on+the+coronary+calcification+and+the+clinical+outcome+in+chronic+kidney+disease+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Heart+and+Vessels%22%5BJournal%5D)">Impact of circulating cathepsin K on the coronary calcification and the clinical outcome in chronic kidney disease patients.</a> Heart and Vessels. 31 (1), 6-14 (2016).</li>
<li>Wang, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Whey+protein+hydrolysate+alleviated+atherosclerosis+and+hepatic+steatosis+by+regulating+lipid+metabolism+in+apoE-%2F-+mice+fed+a+Western+diet%5BTitle%5D)+AND+%22Food+Research+International%22%5BJournal%5D)">Whey protein hydrolysate alleviated atherosclerosis and hepatic steatosis by regulating lipid metabolism in apoE-/- mice fed a Western diet.</a> Food Research International. 157, 111419(2022).</li>
<li>Angelone, T., Rocca, C., Pasqua, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nesfatin-1+in+cardiovascular+orchestration%3A+From+bench+to+bedside%5BTitle%5D)+AND+%22Pharmacological+Research%22%5BJournal%5D)">Nesfatin-1 in cardiovascular orchestration: From bench to bedside.</a> Pharmacological Research. 156, 104766(2020).</li>
<li>Bernardi, P. M., Barreto, F., Dalla Costa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+a+LC-MS%2FMS+method+for+evaluating+lung+penetration+of+tobramycin+in+rats+by+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+and+Biomedical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Application of a LC-MS/MS method for evaluating lung penetration of tobramycin in rats by microdialysis.</a> Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis. 134, 340-345 (2017).</li>
<li>Anderzhanova, E., Wotjak, C. T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Brain+microdialysis+and+its+applications+in+experimental+neurochemistry%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+and+Tissue+Research%22%5BJournal%5D)">Brain microdialysis and its applications in experimental neurochemistry.</a> Cell and Tissue Research. 354 (1), 27-39 (2013).</li>
<li>Joukhadar, C., Müller, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis%3A+current+applications+in+clinical+pharmacokinetic+studies+and+its+potential+role+in+the+future%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Pharmacokinetics%22%5BJournal%5D)">Microdialysis: current applications in clinical pharmacokinetic studies and its potential role in the future.</a> Clinical Pharmacokinetics. 44 (9), 895-913 (2005).</li>
<li>Stangler, L. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+and+microperfusion+electrodes+in+neurologic+disease+monitoring%5BTitle%5D)+AND+%22Fluids+and+Barriers+of+the+CNS%22%5BJournal%5D)">Microdialysis and microperfusion electrodes in neurologic disease monitoring.</a> Fluids and Barriers of the CNS. 18 (1), 52(2021).</li>
<li>Young, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Critical+Care+Nursing+Clinics+of+North+America%22%5BJournal%5D)">Cerebral microdialysis.</a> Critical Care Nursing Clinics of North America. 28 (1), 109-124 (2016).</li>
<li>O'Connell, M. T., Krejci, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+techniques+and+microdialysis-based+patient-near+diagnostics%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+and+Bioanalytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Microdialysis techniques and microdialysis-based patient-near diagnostics.</a> Analytical and Bioanalytical Chemistry. 414 (10), 3165-3175 (2022).</li>
<li>Hammarlund-Udenaes, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+as+an+important+technique+in+systems+pharmacology-a+historical+and+methodological+review%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis as an important technique in systems pharmacology-a historical and methodological review.</a> The AAPS Journal. 19 (5), 1294-1303 (2017).</li>
<li>Stahl, M., Bouw, R., Jackson, A., Pay, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Pharmaceutical+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Human microdialysis.</a> Current Pharmaceutical Biotechnology. 3 (2), 165-178 (2002).</li>
<li>Pierce, C. F., Kwasnicki, A., Lakka, S. S., Engelhard, H. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cerebral+microdialysis+as+a+tool+for+assessing+the+delivery+of+chemotherapy+in+brain+tumor+patients%5BTitle%5D)+AND+%22World+Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">Cerebral microdialysis as a tool for assessing the delivery of chemotherapy in brain tumor patients.</a> World Neurosurgery. 145, 187-196 (2021).</li>
<li>Sørensen, M., Jacobsen, S., Petersen, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+in+equine+research%3A+a+review+of+clinical+and+experimental+findings%5BTitle%5D)+AND+%22Veterinary+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis in equine research: a review of clinical and experimental findings.</a> Veterinary Journal. 197 (3), 553-559 (2013).</li>
<li>Dmitrieva, N., Rodríguez-Malaver, A. J., Pérez, J., Hernández, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+release+of+neurotransmitters+from+superficial+and+deep+layers+of+the+dorsal+horn+in+response+to+acute+noxious+stimulation+and+inflammation+of+the+rat+paw%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pain%22%5BJournal%5D)">Differential release of neurotransmitters from superficial and deep layers of the dorsal horn in response to acute noxious stimulation and inflammation of the rat paw.</a> European Journal of Pain. 8 (3), 245-252 (2004).</li>
<li>Li, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+sampling+and+HPLC-MS%2FMS+quantification+of+sinomenine%2C+ligustrazine%2C+gabapentin%2C+paracetamol%2C+pregabalin+and+amitriptyline+in+rat+blood+and+brain+extracellular+fluid%5BTitle%5D)+AND+%22Acta+Pharmaceutica+Sinica%22%5BJournal%5D)">Microdialysis sampling and HPLC-MS/MS quantification of sinomenine, ligustrazine, gabapentin, paracetamol, pregabalin and amitriptyline in rat blood and brain extracellular fluid.</a> Acta Pharmaceutica Sinica. 55 (9), 2198-2206 (2020).</li>
<li>Chauzy, A., Lamarche, I., Adier, C., Couet, W., Marchand, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+study+of+Aztreonam-Avibactam+distribution+in+peritoneal+fluid+and+muscle+of+rats+with+or+without+experimental+peritonitis%5BTitle%5D)+AND+%22Antimicrobial+Agents+and+Chemotherapy%22%5BJournal%5D)">Microdialysis study of Aztreonam-Avibactam distribution in peritoneal fluid and muscle of rats with or without experimental peritonitis.</a> Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 62 (10), 01228(2018).</li>
<li>Fang, X. X., Ardehali, H., Min, J. X., Wang, F. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+metabolic+landscape+of+iron+and+ferroptosis+in+cardiovascular+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews.+Cardiology%22%5BJournal%5D)">The molecular and metabolic landscape of iron and ferroptosis in cardiovascular disease.</a> Nature Reviews. Cardiology. , 1-17 (2022).</li>
<li>Samson, R., Ennezat, P. V., Le Jemtel, T. H., Oparil, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+disease+risk+reduction+and+body+mass+index%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Hypertension+Reports%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular disease risk reduction and body mass index.</a> Current Hypertension Reports. , (2022).</li>
<li>Kim, M. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((School+racial+segregation+and+long-term+cardiovascular+health+among+Black+adults+in+the+US%3A+A+quasi-experimental+study%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Medicine%22%5BJournal%5D)">School racial segregation and long-term cardiovascular health among Black adults in the US: A quasi-experimental study.</a> PLoS Medicine. 19 (6), 1004031(2022).</li>
<li>Qin, Y. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+m6A+RNA+methylation+in+cardiovascular+disease+%28Review%29%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Role of m6A RNA methylation in cardiovascular disease (Review).</a> International Journal of Molecular Medicine. 46 (6), 1958-1972 (2020).</li>
<li>Xu, C. M., Liu, C. J., Xiong, J. H., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cardiovascular+aspects+of+the+%28pro%29renin+receptor%3A+Function+and+significance%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+Journal%22%5BJournal%5D)">Cardiovascular aspects of the (pro)renin receptor: Function and significance.</a> FASEB Journal. 36 (4), 22237(2022).</li>
<li>Guvenc-Bayram, G., Yalcin, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+intermediary+role+of+the+central+cyclooxygenase+%2F+lipoxygenase+enzymes+in+intracerebroventricular+injected+nesfatin-1-evoked+cardiovascular+effects+in+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience+Letters%22%5BJournal%5D)">The intermediary role of the central cyclooxygenase / lipoxygenase enzymes in intracerebroventricular injected nesfatin-1-evoked cardiovascular effects in rats.</a> Neuroscience Letters. 756, 135961(2021).</li>
<li>Ahrens Kress, A. P., Zhang, Y. D., Kaiser-Vry, A. R., Sauer, M. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+comparison+of+blood+collection+techniques+in+mice+and+their+effects+on+welfare%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Association+for+Laboratory+Animal+Science%22%5BJournal%5D)">A comparison of blood collection techniques in mice and their effects on welfare.</a> Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 61 (3), 287-295 (2022).</li>
<li>Joshi, A., Patel, H., Joshi, A., Stagni, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pharmacokinetic+applications+of+cutaneous+microdialysis%3A+Continuous%2Bintermittent+vs+continuous-only+sampling%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmacological+and+Toxicological+Methods%22%5BJournal%5D)">Pharmacokinetic applications of cutaneous microdialysis: Continuous+intermittent vs continuous-only sampling.</a> Journal of Pharmacological and Toxicological Methods. 83, 16-20 (2017).</li>
<li>Reyes-Garcés, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+brain+sampling+using+a+microextraction+probe+reveals+metabolic+changes+in+rodents+after+deep+brain+stimulation%5BTitle%5D)+AND+%22Analytical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">In vivo brain sampling using a microextraction probe reveals metabolic changes in rodents after deep brain stimulation.</a> Analytical Chemistry. 91 (15), 9875-9884 (2019).</li>
<li>Kho, C. M., Enche Ab Rahim, S. K., Ahmad, Z. A., Abdullah, N. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+review+on+microdialysis+calibration+methods%3A+the+theory+and+current+related+efforts%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Neurobiology%22%5BJournal%5D)">A review on microdialysis calibration methods: the theory and current related efforts.</a> Molecular Neurobiology. 54 (5), 3506-3527 (2017).</li>
<li>Zhuang, L. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Theory+and+application+of+microdialysis+in+pharmacokinetic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Drug+Metabolism%22%5BJournal%5D)">Theory and application of microdialysis in pharmacokinetic studies.</a> Current Drug Metabolism. 16 (10), 919-931 (2015).</li>
<li>Zhang, Y. F., Huang, X. X., Zhu, L. X. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Metabonomics+research+strategy+based+on+microdialysis+technique%5BTitle%5D)+AND+%22China+Journal+of+Chinese+Materia+Medica%22%5BJournal%5D)">Metabonomics research strategy based on microdialysis technique.</a> China Journal of Chinese Materia Medica. 45 (1), 214-220 (2020).</li>
<li>Carpenter, K. L., Young, A. M., Hutchinson, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advanced+monitoring+in+traumatic+brain+injury%3A+microdialysis%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Opinion+in+Critical+Care%22%5BJournal%5D)">Advanced monitoring in traumatic brain injury: microdialysis.</a> Current Opinion in Critical Care. 23 (2), 103-109 (2017).</li>
<li>Brunner, M., Langer, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microdialysis+versus+other+techniques+for+the+clinical+assessment+of+in+vivo+tissue+drug+distribution%5BTitle%5D)+AND+%22The+AAPS+Journal%22%5BJournal%5D)">Microdialysis versus other techniques for the clinical assessment of in vivo tissue drug distribution.</a> The AAPS Journal. 8 (2), 263-271 (2006).</li>
<li>Tettey-Amlalo, R. N., Kanfer, I., Skinner, M. F., Benfeldt, E., Verbeeck, R. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+dermal+microdialysis+for+the+evaluation+of+bioequivalence+of+a+ketoprofen+topical+gel%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Pharmaceutical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Application of dermal microdialysis for the evaluation of bioequivalence of a ketoprofen topical gel.</a> European Journal of Pharmaceutical Sciences. 36 (2-3), 219-225 (2009).</li>
<li>Dhanani, J. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Recovery+rates+of+combination+antibiotic+therapy+using+in+vitro+microdialysis+simulating+in+vivo+conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pharmaceutical+Analysis%22%5BJournal%5D)">Recovery rates of combination antibiotic therapy using in vitro microdialysis simulating in vivo conditions.</a> Journal of Pharmaceutical Analysis. 8 (6), 407-412 (2018).</li>
</ol>

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CVD는 중국에서 발병률이 점차 증가하는 클리닉에서 흔한 만성 질환이며 발병 연령이 젊어지는 경향이 있어 대부분의 환자의 우려와 공황을 유발합니다20,21. CVD는 전 세계 주요 사망 원인이기 때문에 뇌경색 및 기타 사망률이 높은 질환을 유발하여 환자의 건강한 삶을 심각하게 위협할 수 있다22. 허혈성 심장 질환, 심근 병증, 죽상 동맥 경화증, 고혈압, 뇌졸중 및 심부전을 포함한 CVD는 심장에 혈액을 공급하는 동맥이 좁아지거나 굳어 질 때 발생합니다23,24. CVD를 진단하기위한 많은 방법이 있지만 혈액 검사는 여전히 가장 편리하고 빠릅니다. CVD와 관련된 초기 마커의 정확하고 민감하며 신속한 결정은 질병의 병태생리학적 상태를 신속하게 진단하고 이해할 수 있습니다. 그러...

삶의 속도가 빨라지고 심리적 압박이 증가함에 따라 심혈관 질환 (CVD)은 젊은이, 중년 및 노인에서 발생하는 경향이 있습니다 1,2. CVD의 이환율과 사망률은 높으며, 급성 발병, 빠른 진행, 긴 질병 경과 등의 특징이 있어 환자의 안전에 심각한 영향을 미친다3. CVD의 발생은 콜레스테롤, 혈청 지질, 혈당, 심근 효소 및 단백질 키나아제 K 4,5,6과 같은 일부 혈액 성분의 변화와 밀접한 관련이 있을 수 있습니다. 환자의 관련 상황은 일상적인 혈액 검사 항목을 분석하여 가장 빠르게 관리 할 수 있습니다. 따라서 혈액 샘플의 품질에 따라 검사 결과의 정확도가 결정됩니다. 그러나, 종래의 채혈 방법은 몇 가지 불가피한 단점을 가지고 있으며, 이는 큰 외상 부위, 작은 혈액 수집량, 작업자에 대한 높은 요구 사항, 실시간으로 약물 변화를 반영 할 수 없음, 번거로운 혈액 샘플 전처리, 실험 동물의 대량 소비 및 동물 윤리적 요구 사항을 충족시키지 못하는 것과 같은 실험 결과에 심각한 영향을 미친다 7,8,9 . 의료 기술의 지속적인 발전으로 채혈의 품질도 더 높은 요구 사항을 제시했습니다. 따라서 상기와 같은 단점을 극복하기 위해 새로운 혈액 샘플링 기술을 개발하는 것이 시급하다.
미세투석(Microdialysis)은 투석 원리10에 기초한 생체 내 샘플링 기술이다. 비평형 조건 하에서, 측정될 화합물은 농도 구배를 따라 조직으로부터 투석액 내로 조직 내에 내장된 미세 투석 프로브 내로 확산 및 관류되고, 투석액과 함께 연속적으로 제거되어, 생체 조직으로부터 샘플링하는 목적을 달성한다(11,12). 전통적인 샘플링 방법과 비교하여, 미세 투석 기술은 다음과 같은 측면에서 훌륭한 이점을 갖는다13,14,15 : 혈액 내 다양한 화합물의 변화에 대한 지속적인 실시간 추적; 샘플링은 지루한 전처리가 필요하지 않으며 샘플링 현장에서 표적 화합물의 농도를 진정으로 나타낼 수 있습니다. 프로브는 표적 화합물의 흡수, 분포, 대사, 배설 및 독성을 조사하기 위해 신체의 다른 부분에 이식될 수 있습니다. 획득 한 샘플에는 생물학적 거대 분자 (>20 kD)가 포함되어 있지 않습니다. 따라서 고품질 혈액 샘플은 CVD와 민족 의학으로 치료되는 메커니즘에 대한 더 나은 해석을 보장합니다.
미세 투석 샘플링 시스템은 일반적으로 미세 주입 펌프, 연결 튜브, 동물이 없는 이동 탱크, 미세 투석 프로브 및 샘플 수집기로 구성된다16. 미세 투석 시스템의 장치의 가장 중요한 부분으로서, 일반적인 미세 투석 프로브는 동심 프로브, 플렉시블 프로브, 선형 프로브 및 션트 프로브(17)를 포함한다. 이 중에서, 플렉시블 프로브는 연질 및 비금속 프로브로서, 주로 깨어 있거나 자유롭게 움직이거나 마취된 동물의 혈관 및 심장, 근육, 피부 및 지방과 같은 말초 조직으로부터 샘플을 수집하는데 사용된다13. 혈관이나 조직과 접촉할 때 프로브를 유연하게 구부릴 수 있으므로 프로브 또는 샘플링 부위에 돌이킬 수 없는 손상을 방지할 수 있습니다. 프로브 기술의 지속적인 발전으로 다양한 분야에서 미세 투석 기술의 적용도 심화되고 있습니다. 본 논문에서는 채혈을 위해 설계된 플렉시블 프로브를 통해 비침습적 미세투석 기술로 쥐의 심장 혈액을 역동적이고 지속적으로 획득하였다.

<table><tbody><tr><td>동물 마취 시스템</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R500IE</td><td></td></tr><tr><td>동물 온도 유지기</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>69020</td><td></td></tr><tr><td>혈액 미세투석 프로브</td><td>  CMA 미세투석 AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>카테터</td><td>  CMA Microdialysis AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>Citrate</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>251275</td><td></td></tr><tr><td>전기 면도기</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>CP-5200</td><td></td></tr><tr><td>Fep 튜빙</td><td>  CMA 미세투석 AB</td><td>3409501</td><td></td></tr><tr><td>동물을 위한 자유로운 이동 탱크</td><td>  CMA 미세 투석 AB</td><td>CMA120</td><td></td></tr><tr><td>포도</td><td>당 Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>지혈</td><td>겸자 Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F21020-16</td><td></td></tr><tr><td>Isofluran</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>R510-22</td><td></td></tr><tr><td>마이크로 가위</td><td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd</td><td>FS221</td><td></td></tr><tr><td>미세 투석 제품분류 Tube</td><td>  CMA 미세투석 AB</td><td>7431100</td><td></td></tr><tr><td>미세</td>투석 수집기<td>  CMA Microdialysis AB</td><td>CMA4004</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis in vitro 스탠드</td><td>  CMA 미세투석 AB</td><td>CMA130</td><td></td></tr><tr><td>미세투석 미세주입 펌프</td><td>  CMA 미세투석 AB</td><td>788130</td><td></td></tr><tr><td>미세투석 주사기 (1.0 mL)</td><td>  CMA Microdialysis AB</td><td>8309020</td><td></td></tr><tr><td>Microdialysis 튜빙 어댑터</td><td>  CMA 미세 투석 AB</td><td>3409500</td><td></td></tr><tr><td>미세 다공성 필터 멤브레인</td><td>Merck Millipore Ltd.</td><td></td><td></td>R0DB36622</tr><tr><td>비흡수성 외과용 봉합사</td><td>Shanghai Tianqing Biological Materials Co., Ltd</td><td>S19004</td><td></td></tr><tr><td>수술대</td><td>Yuyan Scientific Instrument Co., Ltd</td><td>30153</td><td></td></tr><tr><td>안과 겸자</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>F12016-15</td><td></td></tr><tr><td>구연산나트륨</td><td>Merck Chemical Technology (Shanghai) Co., Ltd</td><td>1613859</td><td></td></tr><tr><td>스프라그 돌리  (SD) 쥐</td><td>Chengdu Dossy Experimental Animals Co., Ltd</td><td>SYXK(<img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/64531/64531eq01.jpg" style="margin: auto; ">)2019-049</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>Rayward Life Technology Co., Ltd</td><td>S14014-15</td><td></td></tr><tr><td>수술용 가위</td><td>Shanghai Bingyu Fluid technology Co., Ltd</td><td>BY-103</td><td></td></tr><tr><td>주사기 바늘</td><td>  CMA 미세 투석 AB</td><td>T55347</td><td></td></tr><tr><td>초음파 세척기</td><td>Guangdong Goote Ultrasonic Co., Ltd</td><td>KMH1-240W8101</td><td></td></tr></tbody></table>

비침습적 미세투석 기술을 통한 쥐 심장의 동적 연속 혈액 추출

Dynamic Continuous Blood Extraction from Rat Heart via Noninvasive Microdialysis Technique

혈액 성분의 동적 분석은 심근 경색, 부정맥, 죽상 동맥 경화증, 심인성 폐부종, 폐색전증 및 뇌색전증과 같은 심혈관 질환 및 관련 질병을 이해하는 데 매우 중요합니다. 동시에, 독특한 민족 의학 요법의 효과를 평가하기 위해 살아있는 쥐에서 지속적인 심장 혈액 샘플링 기술을 돌파하는 것이 시급합니다. 이 연구에서는 정확하고 비침습적인 수술 절차로 쥐의 오른쪽 경정맥에 혈액 미세 투석 프로브를 이식했습니다. 그런 다음 온라인 미세 투석 샘플 수집 시스템에 연결하여 2.87nL/min에서 2.98mL/min의 속도로 심장 혈액 샘플을 수집했습니다. 더욱 중요한 것은 획득된 혈액 샘플을 4°C의 미세 투석 용기에 임시로 보관할 수 있다는 것입니다. 쥐 심장의 미세 투석 기반 온라인 연속 채혈 프로그램은 혈액 샘플의 품질을 크게 보장하여 전신 심혈관 질환 연구의 과학적 합리성을 발전시키고 활성화하며 혈액학의 관점에서 민족 의학 요법을 평가합니다.

본 프로토콜은 미세 투석 장비에 설정된 샘플링 매개변수에 따라 의식이 있는 쥐로부터 심장 혈액을 채취하는 것을 허용했습니다. 정상적인 혈액 샘플은 밝은 빨간색이어야하며 저산소증, 잠재적 혈전 또는 빈혈 질환이있는 동물은 짙은 자주색 또는 진한 빨간색을 가질 수 있습니다. 혈액 미세 투석 기술을 통해 얻은 샘플은 무색, 투명 및 투명하여 고성능 액체 크로마토 그래피 또는 질량 분석법을 사용하여 다양한 질병의 혈청 마커와 약물 및 대사 산물의 혈액 분포를 분석하는 데 사용할 수 있습니다. 설정된 파라미터 및 수집된 단일 혈액의 부피는 표 1에 나와 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64531/64531fig01.jpg"> 그림 1: 혈액 미세...

본 프로토콜은 미세투석 기술을 사용하여 쥐 심장 혈액의 실시간 및 동적 수집을 위한 간단하고 효율적인 방법을 설명한다.

Dynamic analysis of blood components is of great importance in understanding cardiovascular diseases and their related diseases, such as myocardial ...

쥐 심장의 동적 연속 채혈 기술은 혈액 성분을 분석하여 심혈관 질환 및 관련 질병을 이해하는 데 매우 중요합니다. 전통적인 샘플링 방법과 비교하여 이 기술은 생체 내, 실시간, 동적이라는 장점이 있으며 비침습적이며 생물학적 미세 분자가 없고 외국 테스트를 위한 역가 샘플 전처리가 없습니다. 이 기술은 심혈관 질환에만 적용할 수 있는 것이 아니라 고상 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법과 결합된 혈액 바이오마커를 검출하여 질병 진단 및 치료에도 효과가 있어야 합니다.이 방법은 심근 경색, 무호흡 및 죽상 동맥 경화증과 같은 심혈관 질환을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 또한 심인성 폐부종과 폐 및 뇌색전증에도 적용됩니다. 실험 준비를 마친 후 투석 장치 프로브의 입구를 주사기 바늘, 튜브 어댑터 및 FEP 튜브로 부착합니다.항응고제 구연산염 포도당 용액을 배관 시스템에 관류하여 미세 투석 배관 시스템의 개통성을 확인합니다. 연조직과 혈관주위 근막을 무딘 절개하여 오른쪽 경정맥을 노출시키는 절개를 합니다. 4-0 수술 봉합사를 사용하여 심장 말단부의 오른쪽 경정맥에 분리 가능한 슬립 매듭을 만들어 혈류를 일시적으로 차단합니다.그런 다음 심장 근처의 오른쪽 경정맥을 절개하십시오. 바늘 모양의 카테터 스타일릿을 쥐 심장의 근위 끝을 향한 오른쪽 경정맥에 삽입합니다. 혈액 미세 투석 프로브를 카테터에 삽입하고 카테터 탐침의 비스듬한 절개를 따라 안과 겸자로 프로브를 이식합니다.유도 카테터 스타일릿을 제거하고 프로브의 반투과막을 오른쪽 경정맥에 완전히 담그십시오. 오른쪽 경정맥의 혈류를 회복하기 위해 심장의 말단부에서 분리 가능한 슬립 매듭을 풉니다. 그런 다음 4-0 수술 봉합사를 사용하여 프로브를 오른쪽 경정맥으로 결찰합니다.깨어 있는 쥐를 자유롭게 움직이는 탱크에 넣고 프로브를 미세 투석 시스템에 연결합니다. 이어서, 항응고제 시트레이트 덱스트로스 용액을 1시간 동안 분당 2마이크로리터의 속도로 관개하여 프로브 투석막을 평형화시킨다. 미세 투석 혈액 샘플을 수집하여 섭씨 4도 분수 용기에 임시로 보관하십시오.프로브가 오른쪽 경정맥에 있는지 재확인하려면 쥐를 해부하십시오. 오른쪽 경정맥에서 미세 투석 프로브를 제거하고 초순수에 넣습니다. 프로브를 파이프라인에 연결하고 초순수로 밤새 헹구어 파이프와 프로브에 남아 있는 염분을 철저히 씻어냅니다.정상적인 혈액 샘플은 밝은 빨간색으로 나타났고 저산소 샘플에서는 잠재적인 혈

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 프로토콜은 고립 된, 관류 쥐 심장에서 심장 간질 유체를 수집하는 방법을 설명합니다. 관상 정맥 유출 물 관류 액으로부터 간질 혈관 유출 물을 물리적으로 분리하기 위해 관류 액 Langendorff가 반전되고 심장 표면에 형성된 유액 (간질 액)이 부드러운 라텍스 캡을 사용하여 수집됩니다.

고립 된 랫트 심장으로부터의 간질과 투과 물 수집을위한 역전 된 심장 모델

여기, vivo에서 microdialysis 뇌 파 기록 함께에서 간 질 및 간 질 비 쥐의 복 부 해 마에 aspartate 및 조미료 자료를 분석 하는 방법을 설명 합니다. Extracellular 농도 aspartate 및 조미료의 질병의 다른 단계와 상관 될 수 있습니다.

자유롭게 이동 하는 쥐에서 뇌 파 기록 하는 동안 흥분 성의 아미노산의 Microdialysis

여기, 우리 실험 쥐, 동물 시설에 표준 장비와 함께 할 수 있으며 생리 또는 약리학에 적용할 수 있는 심전도와 간 동맥 혈압 (BP) 동시 녹음에 대 한 설치 설명 심장 혈관 약에 병원 또는 치료 메커니즘을 조사 연구.

동시 심전도 기록 및 침략 적 혈액 압력 측정 쥐에

이 문서는 최소 침습 적 접근을 사용하여 쥐에 있는 심근 허혈 및 후속 만성 재관전을 능력을 발휘하는 능률적인 방법을 제시합니다. 또한, 쥐의 좌심실 혈역학 적 기능은 에코카예그래피와 고립 된 작업 심장 방법에 의해 평가됩니다.

쥐의 심근 경색과 격리 된 작업 심장 시스템에 의한 심장 기능 평가를 유도하는 반 최소 침습 적 방법

세포 및 분자 기능 실험을 위한 심장학의 황금 표준은 심근 세포입니다. 이 기사에서는 마우스 심근 세포를 분리하기 위한 비 Langendorff 기술에 대한 적응에 대해 설명합니다.

마우스 심근 세포를 일관되게 분리하는 간단하고 효과적인 방법

본 프로토콜은 생체외 신생아 뮤린 심장의 대동맥 캐뉼레이션 및 역행 관류를 기술한다.  해부 현미경과 무딘 작은 게이지 바늘을 사용하는 두 사람 전략은 신뢰할 수있는 통조림을 허용합니다. 종방향 수축 장력의 정량화는 좌심실의 정점에 연결된 힘 변환기를 사용하여 달성된다.

Langendorff 준비에서 신생아 뮤린 하트의 사용을위한 수정 된 기술

여기서 프로토콜은 미세 투석 시스템을 사용하여 깨어 있는 쥐의 해마에서 세포외액의 상세한 실시간 동적 샘플링을 제공합니다.

Microdialysis System을 사용한 의식이 있는 쥐의 해마 세포외 유체의 실시간 동적 수집

이 프로토콜은 지속적인 비디오 뇌전도(EEG) 모니터링과 병행하여 수행된 간질 쥐의 반복적인 뇌척수액 및 혈액 수집을 보여줍니다. 이는 다양한 체액 분자의 변화와 발작 활동 사이의 가능한 연관성을 탐구하는 데 도움이 됩니다.

EEG 기록 중 쥐의 측면 꼬리 정맥에서 뇌척수액 및 혈액 샘플링

이 프로토콜은 압력-부피 전도도 기법을 사용하여 좌심실 압력 및 부피를 측정하는 방법을 설명합니다. 이 방법을 사용하면 약물이 심장에 미치는 영향을 지속적으로 실시간으로 모니터링할 수 있습니다.

압력-부피 전도도 카테터를 사용한 쥐 좌심실에 대한 페룰산 효과의 실시간 검출

이 프로토콜은 광학 및 전기 양방향 생체 인터페이스를 위한 고급 재료 제조 및 생체 외 쥐 심장 방법을 간략하게 설명하여 생체 전자 연구를 위한 정확한 심장 자극, 기록 및 경색 모델링을 가능하게 합니다.

Bidirectional electrical and Optoelectronic interfaces in healthy and ischemic ex vivo Rat Hearts(건강한 쥐와 허혈성 생체 외 쥐 심장의 양방향 전기 및 광전자 인터페이스)

배우세요 쥐 심장에서 비침습적 미세투석 기술을 이용한 동적 연속 혈액 추출 방법을. 심혈관 질환의 혈액 바이오마커 실시간 분석에 활용할 수 있습니다.

비침습적 미세투석 기술을 통한 쥐 심장의 동적 연속 혈액 추출

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