Name: 부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-10-06T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: 학습하세요 부분 좌골 신경 결찰(PSNL) 수술법으로 만성 신경병성 통증 마우스 모델을 구축하는 방법을. 이 표준화된 프로토콜은 통증 기전 연구와 새로운 진통 요법 개발에 필수적입니다.

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이 연구는 국립 보완 및 통합 건강 센터 [R01AT009716, 2017] (M.M.I.), 종합 만성 통증 및 중독 센터-애리조나 대학교 (M.M.I.) 및 애리조나 대학교 의과 대학 투손의 의학 과학자 교육 프로그램 (MSTP).

모든 절차는 애리조나 대학의 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았으며 국립 보건원의 실험 동물 사용 지침(NIH 간행물 번호 80-23, 1966)을 준수합니다. 병원체가 없는 성체 C57Bl6/J 마우스(테스트 시 무게: 22-28g)는 12시간 명암 주기로 기후 조절실의 표준 동물 사육장 마우스 케이지(케이지당 5마리)에 수용되었으며 음식과 물에 임의로 접근할 수 있었습니다. 모든 행동 실험은 치료 조건에 눈이 먼 실험자에 의해 수행되었습니다.
1. 기준선: 기계적 감도 측정
<ol><li>생쥐가 도착하면 1 주일 동안 동물 시설에 익숙해 지도록하십시오. 이어서, 그 후 ≥7일 동안 실험자 취급에 동물을 습관화시킨다.</li>
	<li>마우스를 시험실과 같은 방에서 철망 위의 투명한 플렉시글라스 상자에 넣어 시험하기 전에 1시간 동안 von Frey 시험 장치에 습관화합니다.</li>
	<li>3.61(3.9mN) 필라멘트로 시작하여 보충 표 S1에 설명된 von Frey 필라멘트를 사용하여 "상하" 방법을 통해 기준선 발 인출 임계값을 설정합니다.<ol><li>일련의 보정된 미세(von Frey) 모노필라멘트로 중간 발바닥 뒷발을 조사할 때의 금단 반응을 측정합니다. 매달린 철망 케이지에 보관된 동물의 pSNL 동측 뒷발의 발바닥 표면에 각 필라멘트를 수직으로 한 번 적용합니다. "up-and-down" 방법을 사용하여 기계적 감도 평가15: 필라멘트의 크기에 해당하는 자극 강도를 순차적으로 증가시키거나 감소시켜 인출 역치를 결정한다. 각 필라멘트를 순차적으로 한 번 도포합니다. 알림: 실험자는 동물 간에 일관된 결과를 얻기 위해 발판을 자극하지 않아야 합니다.</li>
		<li>예를 들어, 동물이 3.61 필라멘트에 반응하지 않으면 더 두꺼운 4.08 필라멘트 (9.8 mN)를 사용하십시오 (반응은 영향을받는 발의 철수, 흔들림 또는 핥기로 시각적으로 표시됨). 동물이 처음 반응하면 더 얇은 3.22 (1.6 mN) 필라멘트를 사용하십시오. 동물이 각각 긍정적 또는 부정적 후속 반응을 보였는지 여부에 따라 점점 더 두꺼운 필라멘트를 계속 사용하십시오. 보충 표 S1에 제시된 데이터시트에 부정적인 반응과 긍정적인 반응을 보고합니다. 첫 번째 양성 반응 후 다른 필라멘트로 동일한 발을 4x 테스트합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>2. 기준선: Hargreaves 테스트를 사용한 열 감도 측정
<ol><li>생쥐가 도착하면 1 주일 동안 동물 시설에 익숙해 지도록하십시오. 이어서, 그 후 ≥7일 동안 실험자 취급에 동물을 습관화시킨다.</li>
	<li>마우스를 시험실과 같은 방에서 투명한 플렉시글라스 상자에 넣어 시험하기 전에 1시간 동안 Hargreaves 시험 장치에 습관화시킵니다. 참고: Hargreaves 테스트에서는 동물이 몇 초 동안 가만히 서 있어야 합니다. 생쥐의 경우 습관화는 성공적인 실험의 핵심입니다. 따라서 생쥐가 1 시간의 습관화 후에도 매우 활동적이라면 필요에 따라 더 오래 적응할 수 있습니다.<ol><li>Hargreaves et al.16에 의해 설명된 대로 발 철수 대기 시간을 결정합니다. Plexiglas 인클로저 내의 마우스를 투명한 Plexiglass 플레이트에 적응시킵니다.</li>
		<li>복사열원(고강도 프로젝터 램프)을 pSNL과 동측인 뒷발의 발바닥 표면에 집중시킵니다. 열원의 강도를 조정하여 약 10초의 발 철수 대기 시간의 기준선을 얻습니다. 그런 다음 실험의 나머지 기간 동안 강도를 일정하게 유지합니다.</li>
		<li>발을 뺄 때 동작 감지기가 자극과 타이머를 자동으로 중지할 때까지 기다립니다. 조직 손상을 방지하기 위해 최대 33.5초의 컷오프를 사용하십시오. 참고: 컷오프는 추가 피부 손상11,17,18을 방지하기 위해 이전 실험 및 기사를 기반으로 결정됩니다. 이 연구에 사용된 강도에서 33.5는 컷오프이며, Hargreaves 장치를 사용한 자극 강도 30(50W)에 해당합니다. 관찰 된 행동은 자발적인 행동이 아니라 반사적 인 행동입니다.</li>
		<li>Hargreaves 장치를 사용하고 pSNL 동측 뒷발의 발바닥 표면을 목표로 하여 기준선 발 철수 대기 시간을 설정합니다. 열 자극을 시작하고 금단 대기 시간을 기록합니다. 열 자극의 온도에 영향을 미치지 않으려면 시험 중에 소변을 청소하십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 기준선 : 열판 테스트를 이용한 열감도 측정
<ol><li>실험 전에 1시간 동안 동물을 시험실에 습관화시킵니다. 알림: 실내 온도가 중요하고 열판 테스트에 대한 반응에 영향을 미칠 수 있으므로 습관화 기간과 테스트 기간 동안 실내 온도가 지속적으로 약 22°C인지 확인하십시오.</li>
	<li>열판을 52°C로 설정하면, 이 온도는 이상적으로 혐오적인 열 반응을 이끌어내는 것으로 나타났기 때문이다19.</li>
	<li>동물을 실험실에 넣고 크로노 미터를 시작하십시오.</li>
	<li>통각 행동(예: 발 철수, 핥기, 흔들기)을 관찰합니다. pSNL 수술은 뒷다리에 영향을 미치므로 앞다리에서 관찰되는 모든 행동(특히 앞다리 핥기)은 무시하십시오.</li>
	<li>통각 행위가 관찰되는 즉시 크로노미터를 중지하십시오.</li>
	<li>챔버에서 동물을 제거하고이 행동에 대한 대기 시간을 기록하십시오. 알림: 조직 손상을 방지하기 위해 최대 30초 후에 챔버에서 동물을 제거합니다. 또한 관찰된 행동은 자발적인 행동이 아니라 반사적인 행동이라는 점에 유의하는 것이 중요합니다.</li>
	<li>냄새의 행동 영향을 줄이기 위해 동물 사이에 70% 에탄올로 테스트 챔버를 청소하십시오. 열 자극의 온도에 영향을 미치지 않도록하려면 테스트 된 각 동물 사이의 소변 장치를 청소하십시오.</li>
	<li>결과를 확인하려면 동물 테스트 후 검토를 위해 테스트 중 핫 플레이트 챔버에 있는 동물의 비디오를 녹화합니다. 참고: 비디오 검토를 사용하여 대기 시간을 정량화함으로써 실험자는 테스트를 반복적으로 관찰하고 실시간 관찰 중에 놓쳤을 수 있는 통각 행동을 면밀히 분석할 수 있습니다.</li>
</ol>4. 수술 전 준비
알림: 수술 후 마우스를 회수하기 위해 깨끗한 케이지를 사용할 수 있는지 확인하십시오. 70 % 에탄올로 수술 부위를 청소하고, 70 % 에탄올로 손을 소독하고, 멸균 장갑을 사용하고, 적절한 개인 보호 장비 (PPE) (실험실 코트, 헤어 네트, 신발 커버)를 착용하고, 수술 내내 멸균 기술을 연습하십시오.
<ol><li>수술에 사용할 도구(보충 그림 S1)와 추가 리소스(거즈)를 미리 고압증기멸균하여 준비합니다.</li>
	<li>휘발성 이소플루란을 사용하여 마취를 유도하고 수술 평면을 유지하기 위해 필요에 따라 조정합니다. 산소가 적절한 유속인지 확인하십시오.</li>
	<li>동물이 마취되었는지 확인하려면 핀셋으로 뒷발의 발가락을 꼬집어 발 반사가 없는지 확인하고 윤활 안과 연고를 바르기 전에 각막 깜박임 반사를 확인하십시오. 참고: 진통제는 분석하려는 통증 경로를 변경하거나 통증 연구 목표20,21,22에 따라 측정되는 행동을 중화 및 무효화할 수 있으므로 이 연구에서 제공할 수 없습니다.</li>
	<li>수술을 수행 할 쪽을 선택하면 (왼쪽은 여기에 시연 됨) 동물의 뒷다리를 허벅지 주위, 슬개골 쪽쪽으로, 엉덩이쪽으로 위쪽으로, 대퇴골 위로 면도합니다. 따뜻한 멸균 식염수로 번갈아 가며 3 개의 분리 된 거즈로 한 방향으로 클로르헥시딘으로 3 번 닦아냅니다. 알림: 앞으로 일관성을 유지하기 위해 모든 동물이 같은 쪽에서 수술을 받았는지 확인하십시오.</li>
	<li>10cm x 10cm 멸균 드레이프로 만든 슬릿을 통해 다리를 밀어 넣어 선택한 다리 주위에 멸균 필드를 만듭니다.</li>
</ol>5. 수술 절차
<ol><li>미세 수술용 가위(보충 그림 S1F)를 사용하여 허벅지 측면의 정중선에서 피부를 2mm 작게 자릅니다. 가위를 피부 아래로 원을 그리며 밀어 근막을 뚫고 틈을 만들어 절개 공간을 넓힙니다.</li>
	<li>묶는 집게(보충 그림 S1H)를 사용하여 허벅지 근육을 90cm 깊이의 1° 각도로 수직으로 날카로운 절개를 만듭니다.</li>
	<li>가는 작은 가위(보충 그림 S1G)를 같은 절개 부위에 90° 각도로 삽입하고 부드럽게 벌려 근육을 분리합니다. 좌골 신경이 시각화 될 때까지 계속하십시오.</li>
	<li>엉덩이에서 무릎 방향으로 수직 허벅지와 평행하게 뻗어 있고 광택이 있고 얇아 보일 수 있는 좌골 신경을 찾습니다. 계속하기 전에 몸에서 가위와 묶는 집게를 제거하십시오.</li>
	<li>초미세 집게(보충 그림 S1D)와 신경 유리 고리(보충 그림 S1E)를 사용하여 신경을 아래에서 분리합니다. 엉덩이에 가장 가깝고 무릎에서 가장 먼 대퇴골 기병 근처의 부위에서 주변 결합 조직에서 신경을 조심스럽게 제거합니다.</li>
	<li>신경이 유리 막대에 놓이도록 하고 막대 끝이 신경이 굴러가는 것을 방지하는지 확인합니다.</li>
	<li>좌골 신경 너비의 1/3을 9-0 나일론 봉합사를 사용하여 묶기 전에 수술 매듭을 놓고 총비골, 경골 및 비복 신경 가지로 나눕니다3. 참고: 분기는 좌골 신경이 엉덩이에서 멀어지면서 무릎 아래로 흐를 때 발생합니다. 신경의 이 세 가지 가지에는 세 가지 다른 신경 분포가 있기 때문에 모든 동물 수술에서 동일한 신경 결손이 있는지 확인하기 위해 분기 전에 수술 매듭을 배치하는 것이 필수적입니다.</li>
	<li>실을 꽉 당길 때 실을 매듭에 가깝게 잡고 과도한 힘으로 신경을 잡아 당기지 않도록 주의하여 신경이 유리 막대에서 미끄러지는 것을 방지하고 더 이상의 스트레칭 부상을 방지하십시오.</li>
	<li>매듭이 완성되면 유리 막대에서 신경을 조심스럽게 빼내고 분리된 근육 아래 수준의 원래 위치로 다시 밀어 넣습니다.</li>
	<li>흡수성 폴리글리콜릭 5-0 봉합사를 사용하여 절개한 근육을 봉합합니다. 별도로, 비 흡수성 폴리 프로필렌 6-0 봉합사를 사용하여 피부를 봉합하십시오.</li>
	<li>수술 및 마취 정지 시간을 기록합니다. 마우스를 새로운 깨끗한 케이지로 되돌리기 전에 회복 케이지에서 혼자 깨어나도록 합니다. 참고: 수술 내내 동물의 발가락을 꼬집어 마취의 적절한 유지를 확인하고 호흡과 신체 관류(빨간색, 분홍색, 창백함)를 모니터링합니다. 호흡이 현저히 감소하거나 동물이 창백해 보이면 마취 흐름을 줄이거나 산소 흐름을 늘리는 것을 고려하고 식염수로 채워진 주사기를 피하 주사하여 동물을 재수화할 준비를 하십시오. 동물은 항상 몸의 따뜻함을 유지하기 위해 열원을 그 아래에 두어야합니다.</li>
</ol>6. 대조 동물에 대한 가짜 수술 절차
<ol><li>수술 절차의 5.1-5.11 단계를 따르십시오. 5.4-5.9단계를 제외합니다.</li>
</ol>7. 수술 후 행동 검사
알림: 실험자가 모든 치료에 대해 눈이 멀었는지 확인하십시오. 만성 신경병성 통증은 수술 후 2주에 걸쳐 발생하며, 그 후 관심 화합물 투여 후 행동 검사를 수행할 수 있습니다.
<ol><li>von Frey, Hargreaves 또는 Hot plate 테스트를 사용하여 열적 및 기계적 과민성과 잠재적 반전을 평가합니다.</li>
	<li>기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 설명한 종점 기준을 충족하는 경우 연구에서 동물을 제거합니다.</li>
	<li>행동 테스트가 끝날 때 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 설명한 절차에 따라 동물을 안락사시킵니다.</li>
</ol>8. 데이터 분석
<ol><li>폰 프레이:<ol><li>Chaplan과 동료23에 의해 기술된 바와 같이, Dixon의 비모수적 방법을 사용하여 데이터를 분석하고, 데이터를 평균 인출 임계값으로 표현한다.<ol><li>참조된 소프트웨어의 기본 페이지( 재료 표 참조)에서 스터디에 사용된 모든 필라멘트(2.44, 2.83, 3.22, 3.61, 4.08, 4.31 및 4.56)를 선택합니다. 그룹 패널에서 마지막 시뮬레이션에 해당하는 필라멘트를 선택합니다. 빈 상자에 긍정적(X ) 및 부정(o) 응답을 보고합니다. 관찰된 반응 패턴의 왼쪽에 있는 상자에 보고된 임계값을 기록합니다. 참고: 패턴 및 정량화의 예는 보충 그림 S2에 나와 있습니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>하그리브스와 핫 플레이트 :<ol><li>추가 통계 분석을 위해 스프레드시트에 대기 시간을 보고합니다.</li>
		<li>결과를 민감도(임계값 또는 대기 시간)의 평균으로 시간 함수로 표시합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>9. 신경 유리 고리를 만드는 방법에 대한 지침
알림: 이 과정에서 화재 안전을 실천하십시오. 필요에 따라 내열 장갑이나 안경과 같은 적절한 보호 장치를 착용하십시오.
<ol><li>분젠 버너를 켭니다.</li>
	<li>유리 막대(A)의 한쪽 끝을 한 손으로 불에 붙입니다. 이 유리 막대가 녹을 때 다른 손에 있는 다른 유리 막대(B)를 사용하여 막대 A의 녹는 유리를 안내하고 당깁니다. 유리 막대 A를 불에서 꺼내고 녹은 부분의 끝이 자연스럽게 안쪽으로 굴러 작은 공 모양을 형성하도록 합니다. 유리 막대 B를 사용하여 이 모양을 안내합니다.</li>
</ol>

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저자는 보고할 이해 상충이 없습니다. 원고의 저자 중 누구도 다른 방식으로 보수나 상환 또는 사례금을 받지 못했습니다. 저자는 이 연구와 관련된 공급업체 또는 제약 회사와 제휴하지 않습니다.

만성 통증 치료는 종종 장기간의 약물 치료가 필요하므로 통증 관리가 어렵습니다. 따라서 전임상 모델은 약리학적 또는 비약리학적 접근에 의존하는 혁신적인 치료법의 잠재적 이점을 평가하는 데 필수적인 도구입니다. 만성 신경병성 통증의 수많은 모델은 다양한 연구자들 사이에서 수술 기술의 다양성이 증가하여 재현성이 감소하기 때문에 문제를 야기합니다. 따라서 잘 특성화되고 표준화된 여러 모델에서 새로운 치료법의 잠재적인 항통각수용 효과를 특성화하는 것이 필수적입니다.
이 보고서는 좌골 신경의 부분 결찰이 비교적 저렴한 방법을 사용하여 생쥐에서 오래 지속되는 만성 신경병성 통증의 발달을 초래한다는 것을 보여줍니다. pSNL은 열적 및 기계적 자극에 대한 반응을 과장하고, 모델은 용량 의존적 방식으로 일반적으로 사용되는 진통제의 투여에 반응합니다. 따라서 pSNL 모델은 신약의 잠재적 이점을 평가하기에 편리하고 민감한 모델로 보입니다. 신경병증성 통증의 주요 특징은 통각과민과 이질통입니다. ...

만성 통증은 전 세계적으로 중요한 의료 문제이며 미국에서 가장 비용이 많이 드는 건강 문제 중 하나입니다. 만성 통증은 약리학적 양식과 비약리학적 양식이 다학제적 방식으로 활용될 때 더 잘 관리된다1. 만성 통증의 관리는 어렵고, 어떤 경우에는 통증을 적절하게 치료하지 못한다2. 따라서 만성 통증 관리를 개선하기 위해서는 새롭고 보완적인 방법이 필요하며 동물 모델은 혁신적인 치료법을 조사하는 데 중요합니다.
만성 신경병증성 통증은 당뇨병, 감염, 신경 압박 또는 자가면역 질환을 포함한 체감각계의 병변 또는 질병으로 인해 발생합니다3. 신경병성 통증은 말초 및 중추 감작 메커니즘에 의존하며 신경의 병변에서 비롯됩니다. 이 통증은 촉각 및 열 유발 통각과민과 이질통, 지속적인 통증, 영향을 받은 사지의 온도 변화 등을 특징으로 할 수 있다4. 기전을 더 잘 이해하고 새로운 치료법을 발전시키기 위해, 설치류에서 신경병증성 통증의 증상과 원인을 모방하는 몇 가지 모델이 개발되었다5. 예를 들어, 신경병증성 통증은 화학요법제 주사, 척추 신경 결찰술 (SNL), 좌골 신경의 만성 수축 손상 (CCI), pSNL, 보존된 신경 손상, 좌골 신경 절제술 및 좌골 신경 삼부로 유도될 수 있다6. 특히, 좌골 신경의 결찰은 기계적 및 열적 과민증 또는 복합 부위 통증 증후군(CRPS)의 특징인 영향을 받은 사지의 온도 변화와 같이 인간에서 관찰되는 신경병성 통증의 여러 특징을 재현합니다7. 따라서, 이 모델은 만성 신경병증성 통증을 유도하는 CRPS 또는 임의의 다른 신경 손상 애정의 연구에 매우 적합하다. 이 모델은 1990 년 Seltzer에 의해 처음 개발되었으며 8, 새로운 진통제 화합물을 조사하거나 만성 통증의 인지 효과를 평가하기 위해 통증 연구에서 널리 사용됩니다9,10,11,12,13. 이 모델은 높은 재현성을 나타내며 부분 결찰은 말초 자극에 대한 행동 반응을 보존합니다6.
현재 사용되고 있는 모델 중 상당수는 pSNL에서 관찰되지 않는 단점을 가지고 있습니다. CCI 모델은 수축기의 아늑함에 따라 각 동물 간의 손상 변동성이 훨씬 더 높으며, 자가절제술은 뒷발을 변경하여 모델을 행동 분석에 부적합하게 만든다6. SNL 모델은 훨씬 더 복잡하고 긴 수술로 고급 기술이 필요할 뿐만 아니라 심각한 운동 장애의 위험이 높습니다3. 이러한 단점은 pSNL 모델에서는 볼 수 없습니다. 재현성의 용이성, 짧은 수술 기간, 수술 후 나타나는 운동 결손의 위험 감소로 인해 이 모델은 말초 신경병성 통증을 연구하는 데 유용합니다 8,14. 그럼에도 불구하고, 부분 결찰 절차 자체는 실험자들 사이에서 가변성을 가질 수 있으며, 그 결과 결찰된 신경 섬유의 수의 일관성이 떨어질 수 있습니다. 따라서 수술의 세부 사항을 제시하는 것은 연구 간의 재현성을 높이는 데 중요합니다.
만성 신경병증을 유도하기 위해 9-0 비흡수성 나일론 봉합사를 사용하여 좌골 신경 너비의 1/3을 결찰합니다. 수술 후 열 및 기계적 자극에 대한 반응이 과장되어 수술 후 1일째부터 시작하여 50일 이상 지속된다8. 여기에서 Hargreaves, hot plate 및 von Frey 필라멘트 테스트를 사용하여 28일 동안 열적 및 기계적 감도를 평가했습니다. 모든 행동 분석은 오래 지속되는 과민증의 일관성을 입증했습니다. 이 모델은 모르핀과 이부프로펜 모두의 용량 의존적 효과가 있는 것으로 나타났으며, 이는 전임상 통증 연구에 매우 적합함을 확인시켜줍니다. 특히, 이 기사에서는 "신경 유리 후크"라고 하는 고유한 수제 유리 도구에 대한 지침을 설명합니다. 이 도구는 관자 대신 신경을 조작하고 수술 중 의도하지 않은 추가 신경 손상을 방지하는 데 사용됩니다.

<table><tbody><tr><td>5/0, FS-2, 30" 염색되지 않은 PGA 꼰 폴리글리콜산 합성 흡수성 봉합</td>사 <td>CP Medical</td><td>421A</td><td>https://cpmedical.com/suturesearch/product/421a-visorb-50-fs-2-30/</td></tr> <tr><td>6/0, P-1, 18" 파란색 폴리프로필렌 모노필라멘트 비흡수성 봉합</td>사 <td>CP Medical</td><td>8697P</td><td>https://cpmedical.com/suturesearch/product/8697p-polypro-60-p-1-18/</td></tr> <tr><td>9/0(0.3 미터법) 나일론 블랙 모노필라멘트 봉합사</td><td>크레스트포인트 안과</td><td>MANI 1407</td><td>https://crestpointophthalmics.com/mani-1407-suture-trape-spatula-nylon-black-mono-box-of-12.html</td></tr><tr><td>Allodynia 소프트웨어&nbsp;</td><td>National Instruments, LabView 2015</td><td></td><td>평균 인출 임계값 정량화(Von Frey 데이터)</td></tr><tr><td>C57Bl6/J 마우스&nbsp;</td><td>잭슨 연구소, 바 하버, ME</td><td>000664</td><td>https://www.jax.org/strain/000664</td></tr><tr><td>Castroviejo 바늘 홀더</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td>https://www.finescience.com/en-US/Products/Wound-Closure/Needle-Holders/Castroviejo-Needle-Holder/12565-14</td></tr><tr><td>Cold Hot Plate Test</td><td>Bioseb</td><td>BIO-CHP</td><td>https://www.bioseb.com/en/pain-thermal-allodynia-hyperalgesia/563-cold-hot-plate-test.html</td></tr><tr><td>Von Frey</td><td>Bioseb</td><td>BIO-STD2-EVF</td><td>용</td>고가 금속 메쉬 스탠드 https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1689-elevated-metal-mesh-stand-30-cm-height-to-fit-up-to-2-pvf-cages.html</tr><tr><td>극세 Graefe 집게</td><td>Fine Science Tools</td><td>11152-10</td><td>https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-curved-medium-point-general-purpose-forceps/16100110</td></tr><tr><td>Fine Castroviejo 바늘 홀더</td><td>Simovision/Geuder</td><td>17565</td><td>https://simovision.com/assets/Uploads/Brochure-Geuder-Ophthalmic-Surgical-Instruments-EN2.pdf</td></tr><tr><td>Fine scissors (11.5 cm)</td><td>Fine Science Tools</td><td>14558-11</td><td>https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-11</td></tr><tr><td>파인 사이언스 도구 (9cm)</td> <td>파인 사이언스 도구</td><td>14558-09</td><td></td></tr><tr><td>https://www.finescience.com/en-US/Products/Scissors/Standard-Scissors/Fine-Scissors-Tungsten-Carbide-ToughCut%C2%AE/14558-09 아이리스 집게</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>11064-07</td><td>https://www.finescience.com/en-US/Products/Forceps-Hemostats/Fine-Forceps/Iris-Forceps/11064-07</td></tr><tr><td>Micro Adson 집게</td><td>파인 사이언스 도구</td><td>392487</td><td></td></tr><tr><td>쥐와 생쥐 Bioseb</td><td></td><td>BIO-PVF</td><td>를 위한 https://www.fishersci.com/shop/products/micro-adson-tissue-forceps-1x2-teeth-german-steel/13820072#?keyword=adson%20forceps 모듈식 홀더 케이지https://www.bioseb.com/en/pain-mechanical-allodynia-hyperalgesia/1206-modular-holder-cages-for-rats-and-mice.html</td></tr><tr><td>Moretti/Effetre #240 라이트 코발트 블루 유리 막대 4mm</td><td>Ebay</td><td>N/A</td><td>https://www.ebay.com/itm/402389491328?hash=item5db0485e80:g:agYAAOS w9CtfnIVJ& amdata=enc %3AAQAHAAAAwCoqvgWRo NTe5Vq8PWOgfE4ygWeW4tL k81J1AFu%2Fkcbsk6pxYtJi6 digE5TL9SzlgMzYUMNDr%2B dku2%2B%2FEvB1qXqFmebE 020SGs9LPDXLL5w21un7jrM0 9xfWYvS izBYQYh6FRWyUJngC uuA9Bkjb9lxtZoYlg5y6PyFR2P 34xFk5xaNC5ib65M1%2Fr%2F 4w2Iw45QqsSyXH2cuUKRom0 AGBoBaIr%2BbJw1VnlMjGuc9dtx 4fbPbqoBNSWjj3RbZPOPTYS8Q %3D%3D%7Ctkp% 3ABk9SR4q6- </td></tr><tr><td>열 자극을 위한 6LfYA 발바닥 테스트 - Hargreaves Apparatus</td><td>Ugo Basile</td><td>37570</td><td>https://ugobasile.com/products/categories/pain-and-inflammation/plantar-test-for-thermal-stimulation</td></tr><tr><td>터치 테스트 감각 평가기, 20개 모노필라멘트 세트</td><td>North Coast Medical</td><td>NC12775-99</td><td>https://www.ncmedical.com/products/touch-test-sensory-evaluators_1278.html</td></tr><tr><td>집게</td><td>Duckworth & 켄트</td><td>2-504ER8</td><td>https://duckworth-and-kent.com/product/tying-forceps-9/</td></tr></tbody></table>

부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델

Partial Sciatic Nerve Ligation: A Mouse Model of Chronic Neuropathic Pain to Study the Antinociceptive Effect of Novel Therapies

만성 통증의 관리는 오늘날까지 여전히 어려운 일이며 현재 치료법은 내성 및 중독을 포함한 부작용과 관련이 있습니다. 만성 신경병증성 통증은 체감각계의 병변이나 질병으로 인해 발생합니다. 부작용이 감소된 잠재적 치료법을 조사하기 위해 동물 통증 모델은 전임상 연구의 황금 표준입니다. 따라서 잘 특성화되고 잘 설명된 모델은 혁신적인 치료법의 개발 및 검증에 매우 중요합니다. 
좌골 신경의 부분 결찰(pSNL)은 기계적 및 열적 과민증, 지속적인 통증 및 사지 온도의 변화를 특징으로 하는 생쥐의 만성 신경병성 통증을 유발하는 절차로, 이 모델은 전임상 신경병성 통증을 연구하는 데 매우 적합합니다. pSNL은 신경병성 통증이 있는 인간에게서 관찰되는 많은 증상을 재현하기 때문에 신경병성 통증을 연구하는 데 유리한 모델입니다. 또한 수술 절차는 비교적 빠르고 간단하게 수행할 수 있습니다. 한쪽 팔다리의 편측 pSNL은 동측발과 반대쪽 발을 비교하고 중추 감작을 평가할 수 있습니다. 
만성 신경병증성 과민증을 유발하기 위해 9-0 비흡수성 나일론 실을 사용하여 좌골 신경의 등쪽 1/3을 결찰합니다. 이 기사는 수술 절차를 설명하고 일반적으로 사용되는 여러 행동 테스트를 통해 만성 신경병성 통증의 발병을 특징짓습니다. 현재 만성 통증을 치료하기 위해 수많은 혁신적인 치료법이 연구되고 있기 때문에 이 기사는 신경병성 통증을 유발하는 데 필요한 수술에 대한 정확한 설명과 표준화를 위한 중요한 개념을 제공합니다.

만성 신경병성 통증은 C57Bl6/J 수컷 마우스의 좌골 신경의 부분 결찰을 통해 유도되었습니다(그림 1A). 기계적 감도는 폰 프레이 필라멘트와 "상하" 방법을 사용하여 평가되었습니다. 열에 대한 열 민감도는 Hargreaves 및 핫 플레이트 테스트를 사용하여 평가되었습니다. 모든 데이터는 시간 경과에 따른 가짜 동물에 대한 pSNL 수술의 효과 또는 모르핀 및 이부프로펜의 다른 용량의 효과를 비교하기 위해 Geisser-Greenhouse 보정을 사용한 반복 측정 양방향 ANOVA로 분석되었습니다.
pSNL 수술을 받은 마우스는 28일 동안 가짜 동물에 비해 기계적 자극에 대한 역치가 더 낮은 것으로 나타났습니다(그림 1B). 열 과민성 평가에서도 유사한 결과가 얻어졌다. 복사열 자극에 노출된 후 발 금단 잠복기는 pSNL 동물에서 증가했으며(그림 1C), 동물을 52...

부분 좌골 신경 결찰술은 열 및 기계적 자극에 대한 과장된 반응을 특징으로 하는 오래 지속되는 만성 신경병성 통증을 유발합니다. 이 신경병성 통증 마우스 모델은 일반적으로 통증 관리를 위한 혁신적인 치료법을 연구하는 데 사용됩니다. 이 기사에서는 표준화 및 재현성을 개선하기 위한 수술 절차에 대해 자세히 설명합니다.

Management of chronic pain remains challenging to this day, and current treatments are associated with adverse effects, including tolerance and addiction. ...

만성 통증을 치료하기 위해 수많은 혁신적인 치료법이 연구되고 있기 때문에 우리의 프로토콜은 신경병성 통증을 유발하는 데 필요한 수술의 표준화를 위한 중요한 개념을 제공합니다. 부분 좌골 신경 결찰술(PSNL)은 신경병성 통증이 있는 인간에게서 관찰되는 많은 증상을 재현하기 때문에 신경병성 통증을 연구하는 데 유리한 모델입니다. PSNL은 신경병성 통증이 있는 사람에게서 관찰되는 많은 증상을 재현하기 때문에 이 프로토콜은 새로운 통증 관리 요법을 연구하고 개발하는 데 중요한 개념을 제공합니다.이 절차를 시연하는 것은 내 실험실의 MD 박사 과정 후보자 인 Kevin Cheng이 될 것입니다. 시작하려면 테스트실과 같은 방의 철망에 있는 투명한 플렉시 유리 상자에 마우스를 넣어 테스트하기 전에 1시간 동안 Von Frey 테스트 장치에 마우스를 습관화합니다. 매달린 철망 케이지에 고정된 동물의 PSNL 동측 뒷발의 화분 표면에 수직으로 보정된 일련의 미세 모노 필라멘트를 적용합니다.필라멘트의 크기에 대응하는 자극 강도를 순차적으로 증가시키거나 감소시킴으로써 인출 역치를 결정한다. 반응이 음수일 때 필라멘트의 크기를 늘리고 동물이 발을 뺄 때 필라멘트의 크기를 줄입니다. 데이터 시트에 부정적인 반응과 긍정적인 반응을 보고하고 첫 번째 긍정적인 반응에 이어 다른 필라멘트로 동일한 발을 네 번 테스트합니다.마우스를 시험실과 같은 방에 있는 투명 플렉시글라스 상자에 넣어 시험하기 전에 1시간 동안 Hargreaves 시험 장치에 익숙하게 합니다. Hargreaves 장치를 사용하여 기준 발 인출 대기 시간을 설정합니다. 복사열원을 PSNL과 동측인 뒷발의 화분 표면에 집중시키고 자극을 시작합니다.동물이 발을 뺄 때 동작 감지기가 자극을 멈추고 타이머를 멈출 때까지 기다리십시오. 열원의 강도를 조정하여 약 10초의 발 철수 대기 시간을 얻습니다. 다음으로 출금 시간을 표에 기록하십시오.열판을 섭씨 52도로 설정합니다. 동물을 실험실에 넣고 크로노 미터를 시작하십시오. 통각 행동을 관찰하고 통각 행동이 관찰되는 즉시 크로노미터를 중지하십시오.그런 다음 챔버에서 동물을 제거하고이 행동에 대한 대기 시간을 기록하십시오. 열 자극의 온도에 영향을 미치지 않도록 테스트 된 각 동물 사이의 소변 장치를 청소하십시오. 냄새의 행동 영향을 줄이기 위해 동물 사이에 70% 에탄올로 테스트 챔버를 청소하십시오.신경 유리 고리를 만들려면 분젠

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

용서해주 신경 부상 동물 모델은 나머지 sural 신경은 그대로두고, tibial 및 일반 peroneal 신경 가지를 lesioning하여 좌골 신경의 부분 denervation 다음과 주변 neuropathic 고통의 마우스 모델로 여기에 설명되어 있습니다. 기계 allodynia 인한 행동 수정은 폰 프라이 필라멘트에 의해 계량입니다.

마우스에서 유도된 기계 Allodynia의 겪었던 신경 상해 (스니) 모델

수술의 단순하고 강력한 행동 결과로 인해 좌골 신경의 만성적인 수축이 neuropathic 고통의 사전 저명한 동물 모델 중 하나입니다. 수술에 따라 24 시간 내에 통증 과민성 설립되고 양적 폰 프라이 aesthesiometer (기계적 시험)과 발바닥 진통제 측정기 (온도 시험)를 사용하여 측정할 수있다.

좌골 신경 및 쥐의 통증 과민성 시험의 만성 수축

신경 병증 성 통증은 체성 시스템에 영향을 미치는 장애 또는 질병의 결과이다. 생쥐의 신경 병증 성 통증의 "팔목 모델은"좌골 신경의 주요 지점 주위에 폴리에틸렌 커프스의 주입으로 구성되어 있습니다. 기계적 이질통은 본 프레이 필라멘트를 사용하여 테스트된다.

마우스의 신경 병증 성 통증의 좌골 신경의 바지를 접 모델

수정된 수술은 생쥐 또는 쥐 보존 신경 손상 모델에 대한 단순화된 방법으로, 일반 비골 신경과 천성 신경을 모두 손상시키기 위해 한 번의 결찰과 한 번의 절개만으로 됩니다.

마우스의 신경병증성 통증에 대한 수정된 보존 신경 손상 수술 모델

쥐의 좌골 신경통을 유도하기 위해 만성 수축 손상 모델에서 Fu의 피하 침을 사용하기 위한 프로토콜을 제시합니다.

좌골 신경통에 대한 Fu의 피하 침의 효능: 만성 수축 손상 쥐 모델의 행동 및 전기 생리학적 변화

이 논문은 쥐에서 신경절 후 요추 교감신경 신경을 외과적으로 제거하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 절차는 원위 조직 표적에서 교감신경 분포의 역할을 조사하기 위한 다양한 연구를 용이하게 할 것입니다.

생쥐의 외과적 요추 교감신경 절제술

이 프로토콜은 인간 신경종 통증을 모방하고 외과적 치료를 평가하기 위해 감각 신경을 사용하는 재현 가능한 쥐 모델을 제시하여 중개 신경종 연구를 위한 귀중한 도구를 제공합니다.

복재 신경을 통한 표적 근육 재신경 분포를 사용하여 신경종 통증 치료 옵션을 연구하기 위한 새로운 외과적 설치류 모델

이것은 일반적인 마우스 경동맥의 intraplaque 네오 - vascularization (4 주)와 방해 흐름 조건 및 후속 죽상 경화증 개발 (2 주) 원인 부분 경동맥 내고 수술을 설명합니다. 우리는 또한 고순도 내피 RNA를 제공하고, 경동맥 intima에서 RNA의 분리의 소설 방법을 설명합니다.

부분 결합하여 마우스 경동맥 동맥에있는 방해 흐름 유발 죽상 경화증과 경동맥 내피로부터 RNA 분리의 간단한 방법의 모델

이 동영상은 쥐에 이식 vasculopathy (TVP)의 개발을 연구하기위한 간단한 모델로 orthotopic 대동맥 이식 모델을 보여줍니다.

Orthotopic 대동맥 이식 : 만성 Vasculopathy의 개발 연구에 생쥐 모델

패혈증은 미생물 감염으로 인한 전신 염증 반응 증후군을 참조하고, cecal 내고 주사 (CLP)을 되나 수술 기법에 의한 시뮬레이션이 될 수 있습니다. 여기 치료 대리인을위한 약초를 구분할 CLP 유발 동물 모델을 사용하는 방법을 설명합니다.

소설 허벌 요법을 평가하는 패혈증의 동물 모델의 사용

학습하세요 부분 좌골 신경 결찰(PSNL) 수술법으로 만성 신경병성 통증 마우스 모델을 구축하는 방법을. 이 표준화된 프로토콜은 통증 기전 연구와 새로운 진통 요법 개발에 필수적입니다.

부분 좌골 신경 결찰: 새로운 치료법의 항통각수용 효과를 연구하기 위한 만성 신경병성 통증의 마우스 모델

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