Name: 광간섭 단층촬영을 통한 쥐 맥락막의 흑색종 이식 및 평가 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-12-02T14:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 46 s
Description: 학습하세요 광간섭 단층촬영(OCT)을 활용한 쥐 맥락막 흑색종 이식 및 평가 방법을. 실시간 영상으로 종양 위치와 성장을 모니터링하여 재현 가능한 실험 모델을 구축하고 치료 연구를 발전시킬 수 있습니다.

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이 연구는 Arie Marcovich를 위해 이스라엘 과학 재단(ISF)의 보조금 1304/20에 의해 부분적으로 지원되었습니다. 조직학 분석을 위해 이스라엘 레호보트에 있는 카플란 메디컬 센터 병리학과의 Shahar Ish-Shalom과 Ady Yosipovich에게 감사드립니다.

프로토콜의 실험은 이스라엘 국립 동물 실험 위원회(Israel National Council on Animal Experimentation)의 승인을 받았으며 안과 및 시력 연구에서 동물 사용에 대한 ARVO 성명서를 준수합니다. 8-10주령의 암컷 C57BL/6 마우스를 본 연구에 사용했으며 12/12시간 명암 주기에 노출되었습니다. 동물들은 상업적 공급원으로부터 입수하였다 ( 재료의 표 참조).
1. 세포 배양
<ol><li>B16LS9 세포를 RPMI 1640 배지에서 배양하고, 10% 소 태아 혈청, 2mM L-글루타민, 1mM 피루브산나트륨, 25mM HEPES, 1% 필수 비타민 혼합물, 200U/mL 페니실린 및 200mg/mL 스트렙토마이신( 재료 표 참조)을 5%CO2로 가습된 37°C 배양기에서 보충했습니다.</li>
	<li>70%-80% 합류점에서 주입할 세포를 수확합니다.</li>
</ol>2. 동물 준비
<ol><li>케타민(75mg/kg 체중)과 메데토미딘(0.5mg/kg 체중)의 마취 혼합물을 준비합니다. 마취 혼합물을 단일 주사로 복강 내 주사하여 마우스를 마취시킵니다.</li>
	<li>국소 안과 마취제 옥시부프로카인(0.4%)을 양쪽 눈에 바릅니다.</li>
	<li>tropicamide (0.5 %)를 국소 적으로 적용하여 마우스 동공을 확장하십시오.</li>
</ol>3. 결막 복막 절제술과 공막관을 맥락막하 공간으로 만들기
<ol><li>건조를 방지하기 위해 1.4% 하이드록시에틸셀룰로오스( 재료 표 참조)를 양쪽 눈에 윤활제로 바르십시오. 오른쪽 눈에 0.5% 트로피카마이드를 바릅니다.</li>
	<li>수술 현미경으로 마우스의 수술된 눈을 관찰합니다( 재료 표 참조). 멸균 된 인공 집게로 눈꺼풀을 벌립니다.</li>
	<li>안내 겸자를 사용하여 상측두엽 윤부 결막을 잡고 비강 하부 위치22 쪽으로 당깁니다. 전체 절차 동안 이 위치를 유지하여 고정합니다(그림 1A).</li>
	<li>30G 바늘 끝을 사용하여 윤부 뒤쪽 약 1-2mm의 등측두엽에 작은(1-2mm) 결막 복막절개술을 합니다. 참고: 더 미세한 바늘을 사용하면 과도한 천공을 방지하고 종양 위치를 더 정확하게 파악할 수 있습니다.</li>
	<li>복막 절제술의 개구부에서 과도한 Tenon의 캡슐을 제거하십시오. 참고: 장부 캡슐은 눈의 지구를 둘러싸고 있는 조밀한 결합 조직 층입니다22.</li>
	<li>이 위치에 바늘 끝을 삽입하여 공막을 관통합니다. 공막의 노출된 백질을 통해 맥락막의 갈색이 나타날 때까지 맥락막하 공간으로 관을 만들기 위해 절제합니다(그림 1B).</li>
</ol><img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64632/64632fig01.jpg"> 그림 1: 종양 세포 접종 . (A) 상측두엽 윤부 결막을 안구내 겸자를 사용하여 잡고 비강 하부 위치로 당깁니다. (B) 30G 바늘 끝을 삽입하여 공막을 관통하고 절제하여 맥락막하 공간에 트랙을 만듭니다. (C) 세포가 적재되고 32G 바늘이 장착된 주사기를 트랙에 삽입하고 세포를 주입합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64632/64632fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
4. 흑색종 세포의 접종
<ol><li>2μL의 PBS에 70,000개의 B16LS9 세포를 재현탁합니다. 이 양은 눈당 추정됩니다.</li>
	<li>45° 각도로 꼬인 32G 무딘 바늘이 장착된 멸균된 10μL 유리 Hamilton 주사기( 재료 표 참조)에 세포를 로드합니다.</li>
	<li>로드된 주사기 바늘을 3단계에서 만든 트랙에 약 2mm 삽입합니다.</li>
	<li>2 μL의 세포 현탁액을 주입합니다.</li>
	<li>주사 후 모든 체액이 제거될 때까지 2-3초 동안 바늘을 제자리에 고정합니다.</li>
	<li>트랙에서 누출되지 않도록 바늘을 부드럽고 천천히 당겨 제거합니다(그림 1C). 참고 사항 : 주사 속도와 힘을 조정하면 종양 발달 패턴에 영향을 줄 수 있습니다. 이러한 매개변수는 적용된 올바른 힘과 속도를 식별하기 위해 실험하는 개인이 보정하는 것이 좋습니다. 예비 실험에서 총 70,000개의 세포가 결정되었습니다. 그러나 세포 배양 유형이나 배치 또는 마우스 균주 간에 차이가 있을 수 있으므로 이 수치의 보정이 필요합니다.</li>
</ol>5. 주사 위치 평가
<ol><li>흑색종 세포 접종 직후 OCT 스캔으로 주입된 눈을 관찰하여 유리체에서 망막 박리(RD), 망막 손상 및/또는 세포의 출현을 확인합니다23. 참고 사항 : 필요에 따라 tropicamide, oxybuprocaine 및 ethylcellulose를 다시 바르십시오.</li>
	<li>단계 5.1로부터의 OCT 스캔에 기초하여, RD 패턴들(21 )을 다음에 따라 분류한다: (1) RD의 로컬 RD-1 사이트; (2) 유리체 내 관찰 세포 물질로의 누출; (3) RD의 확장 된 RD 다중 사이트.</li>
	<li>종양 국소화를 기초로 예측한다: (1) 국소 RD-예상 맥락막 종양; (2) 유리체에서 예상되는 종양 내로의 누출; (3) 확장된 RD 예상 가변 및 분산된 종양(그림 2). 참고: 국소 RD(약 50%)가 있는 마우스만 맥락막에 국한된 종양이 발생할 것으로 예상됩니다.</li>
</ol>6. RD 높이를 기준으로 종양 크기 예측
<ol><li>OCT 분할/분석 소프트웨어( 재료 표 참조)를 사용하여 OCT 스캔에서 로컬 RD의 높이를 측정하고 다음 그룹에 따라 분류합니다: 소형 = &lt;300μm; 매체 = 300-400 μm; 대형 = &gt;400 μm.</li>
	<li>다음 기준에 따라 종양이 주사 후 5일 이내에 도달할 것으로 예상되는 부피를 평가합니다. 작은 RD 높이는 전형적으로 작은 크기의 종양에서 관찰된다 (종양 부피는 0.0059 mm3 내지 0.07 mm3이고 평균 부피는 0.027 ± 0.005mm3이다). 중간 RD 높이는 중소 종양 모두에서 발견됩니다(종양 부피 범위는 0.015mm3 내지 0.15mm3, 평균 부피는 0.056mm± 0.016mm3). 큰 RD 높이는 최대 0.36mm3의 광범위한 종양 용적과 관련이 있습니다. 참고: 예상 종양 크기의 범위는 이전 결과에서 얻었으며 소형, 중형 및 대형 종양의 세 그룹으로 나뉩니다.</li>
</ol>7. 수술 후 절차
<ol><li>안과용 ofloxacin 0.3%를 국소적으로 적용하십시오.</li>
	<li>아티파메졸 염산염(3mg/kg)을 피하 주사하여 마취를 역전시킵니다.</li>
	<li>부프레노르핀(0.05mg/kg 체중)을 3일 동안 1일 2회 피하 주사하여 동물의 통증과 고통을 줄입니다.</li>
	<li>흑색종 세포 주입 후 5일째에 아래 단계에 따라 종양 크기를 평가합니다.<ol><li>단계 2.1에 설명된 대로 마우스를 마취합니다. 트로피 아미드 (0.5 %)를 바르십시오.</li>
		<li>세로 및 시상 OCT 스캔으로 눈을 검사하고 OCT 분할/분석 소프트웨어를 사용하여 종양 부피와 국소화를 측정합니다.</li>
		<li>공식24를 사용하여 종양 부피를 계산합니다: V = a*b*c*6/π(각각 a, b 및 c = 길이, 너비 및 높이).</li>
		<li>7.4.1-7.4.3 단계에 설명 된대로 2-3 일마다 종양 크기를 검사합니다. 참고: 다른 마우스 균주 또는 세포주를 사용하는 경우 절차를 최적화해야 합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

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Marcovich A.L.: Steba Biotech (P), Yeda Weizmann (P), EyeYon Medical (C, P), Mor Isum (P). (C) = 컨설턴트; (P) = 특허. 다른 모든 저자는 경쟁 관심사가 없습니다.

포도막 흑색종은 새로운 치료법이 절실히 필요한 치명적인 질병입니다. 그러나, 포도막 흑색종 및 잠재적 치료법에 대한 연구는 포도막 흑색종 동물 모델 1,25의 기술적 과제에 의해 제한된다. 암세포의 안구 내 주입에 의해 유도되는 안구 종양은 마우스 눈의 크기가 작기 때문에 국소화와 크기 모두에서 매우 다양합니다. 이러한 가변성은 종양 진행의 종합적인 평가에 장애물이다. 본원에 기술된 실험적 접근법은 살아있는 OCT 영상에 기초하여, 맥락막하 B16LS9 흑색종 세포 주입 직후의 안구내 종양 국소화 및 예측된 크기를 평가할 수 있게 한다21. 수년에 걸쳐 라이브 이미징 기술의 개발은 사전 정의된 종점뿐만 아니라 실험 전반에 걸쳐 종양 진행을 추적할 수 있게 함으로써 암 연구에 이점을 제공했습니다. 이러한 방법은, 예를 들어, 안구 종양 식별을 포함하여, 살아있는 동물에서 종양 및 전이...

포도막 흑색종(UM)은 성인에서 가장 흔한 안내 원발성 악성 종양입니다. 안구 흑색종의 약 90%는 포도막관 맥락막 부위의 멜라닌 세포에서 유래한다1. UM은 환자의 약 50%가 전이성 질환을 앓고 있으며, 간은 전이의 주요 부위로 추정되기 때문에 이환율과 사망률의 주요 원인이다2. 원발성 병변을 조기에 치료하면 전이 가능성을 줄일 수 있지만, 전이 형성을 예방하는 효과적인 치료법은 없다3.
포도막 흑색종의 표준 치료에는 시신경병증, 망막병증, 안구건조증 및 백내장으로 인한 시력 상실과 관련된 방사선 요법이 포함됩니다. 외과적 절제는 전형적으로 병변의 성장이 인식되고 특성화될 때까지 지연된다. 그러나, 이러한 지연은 전이성 질환 발병을 허용할 수 있다4. 어떤 경우에는 쓸데없는 적출이 필요합니다. 물론, 이 급진적인 시술은 시력을 손상시키고 극적인 미적 저하를 초래합니다.
포도막 흑색종을 연구하기 위한 실험 모델을 개발하는 데 많은 노력이 있었습니다. 이 악성 종양을 정확하게 평가할 수 있는 전임상 동물 모델은 포도막 흑색종에 대한 새로운 진단 및 치료 전략을 조사하는 데 중요합니다. 안구 흑색종의 실험 동물 모델은 주로 생쥐, 쥐 및 토끼의 종양 세포 접종을 기반으로 합니다 5,6. 마우스 모델은 빠른 번식률과 인간과의 높은 게놈 유사성으로 인해 비용 효율적이며 흑색종 연구에 널리 사용됩니다. 쥐 피부 흑색종 세포주 B16은 일반적으로 C57BL6 마우스를 접종하고 동계 종양을 유도하는 데 사용됩니다. 이 모델을 사용하여 포도막 흑색종을 유도할 때 종양이 있는 눈은 일반적으로 접종 후 7-14일 후에 적출해야 합니다. 또한, B16은 매우 침습적인 모델이다. 눈의 면역 특권 특성은 전이를 지원하며 전이는 일반적으로 종양 세포 접종 후 3-4주 후에 감지될 수 있습니다. 원래 B16 계통의 계대배양은 뚜렷한 전이적 특성을 나타낸다6. 예를 들어, 퀸즈 흑색종 계통은 전이율이 높습니다 7,8. B16LS9 세포주는 수지상 세포 형태를 가지며 모 피부 흑색종 계통 B16F1을 주사한 C57BL/6 마우스의 간 전이에서 유래되었습니다9. 눈의 후방 구획에 주입했을 때, 이들 세포는 조직학적으로 인간 포도막 흑색종과 유사하고 C57BL/6에서 간 특이적 전이를 형성하지만 Balb/C, 마우스10,11,12에서 간 특이적 전이를 형성하는 것으로 나타났습니다. 유전적으로, 세포는 간세포 성장 인자13에 대한 세포 수용체로서 작용하는 c-met 원발암유전자의 더 높은 발현을 특징으로 한다. 대조적으로, 부모 B16의 10번째 통로인 B16F10은 안구 내 접종 시 주로 폐로 전이된다14. B16F10과 B16LS9는 모두 색소가 있다12.
몇 가지 주요 과제는 쥐 포도막 흑색종 모델의 성공을 제한합니다. 첫째, 종양 세포 역류는 안구외 또는 결막하 흑색종을 유발할 수 있습니다. 둘째, 흑색종 세포의 안내 접종 후 종양 성장은 종종 매우 가변적이어서 치료 및 진행 상황을 평가하는 데 어려움을 겪습니다. 또 다른 주요 어려움은 생체 내에서 종양 성장을 추적하는 능력이 제한되어 있다는 것입니다. 루시페라아제 발현 종양과 같은 생체발광 영상화는 안구 종양 성장을 모니터링하기 위해 일반적으로 사용되지만15,16, 종양의 안구 내 위치에 대한 정보를 제공할 수 없다. 그러므로, 종양의 평가는 전형적으로 눈의 적출술 후에 수행된다10,17. 이것은 종양 진행 및 치료에 대한 반응을 광범위하게 특성화하는 능력을 크게 제한합니다. 포도막 흑색종 연구의 또 다른 주요 장애물은 색소 생쥐의 병변을 모니터링하는 데 어려움이 있다는 것입니다. 이러한 어려움을 극복하는 새로운 접근법은 동물 모델에서 포도막 흑색종 연구를 촉진하기 위해 필요합니다.
광간섭 단층촬영(OCT)은 고해상도로 눈의 여러 부분을 심층적으로 영상화할 수 있는 독특한 기능을 제공하며, 이는 초음파18,19를 포함한 다른 방법론과 비교할 수 없습니다. OCT 영상은 다양한 안구 질환을 연구하기 위해 동물 모델에서 사용되어 왔다20. 최근에, OCT 영상은 안구 내 종양 성장을 평가하기 위한 비침습적 수단으로서 입증되었다21. 여기에 설명된 프로토콜은 쥐 맥락막에 흑색종 세포를 이식하고 세포 접종 시 안구 내 종양 국소화 및 크기를 예측하기 위한 OCT의 활용을 묘사합니다.

<table><tbody><tr><td>10 &뮤; L 유리 주사기 (Hamilton Co., Bonaduz, Switzerland)</td> <td>Hamilton</td><td>721711</td><td></td></tr><tr><td>30 G 바늘</td><td>BD Microbalance</td><td>2025-01</td><td></td></tr><tr><td>Atipamezole hydrochloride</td><td>Orion Phrma</td><td></td><td></td></tr><tr><td>B16LS9 cells</td><td>from Hans Grossniklaus USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Buprenorphine&nbsp;</td><td>richter pharma</td><td>102047</td><td></td></tr><tr><td>C57BL / 6 암컷 마우스</td><td>Envigo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>필수 비타민 혼합물</td><td>satorius</td><td>01-025-1A</td><td></td></tr><tr><td>태아 혈청</td><td>레늄</td><td>10270106</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>satorius</td><td>03-025-1B</td><td></td></tr><tr><td>하이드 록시 에틸 셀룰로오스 1.4 % 안약</td><td>Fisher Pharmaceutical</td><td>390862</td><td></td></tr><tr><td>InSight OCT 세분화 소프트웨어&nbsp;</td><td>피닉스 마이크론, Inc&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>케타민</td><td>브레머 제약 GMBH (medimarket)</td><td>17889</td><td></td></tr><tr><td>L-글루타민</td><td>satorius</td><td>03-020-1B</td><td></td></tr><tr><td>메데토미딘&nbsp;</td><td>zoetis (vetmarket)</td><td>102532</td><td></td></tr><tr><td>Ofloxacin 0.3% 안약</td><td>알레르간</td><td>E92170</td><td></td></tr><tr><td>광학 간섭 단층 촬영&nbsp;</td><td>피닉스 마이크론, Inc&nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Oxybuprocaine 0.4%</td><td>Fisher Pharmaceutical</td><td>393050</td><td></td></tr><tr><td>Penicillin-streptomycin-amphoteracin</td><td>satorius</td><td>03-033-1B</td><td></td></tr><tr><td>인산염 완충 식염수 (PBS)&nbsp;</td><td>satorius</td><td>02-023-1a</td><td></td></tr><tr><td>RPMI 세포 매체</td><td>satorius</td><td>01-104-1A</td><td></td></tr><tr><td>피루브산 나트륨</td><td>satorius</td><td>03-042-1B</td><td></td></tr><tr><td>외과 현미경</td><td>Zeiss</td><td>OPMI-6 CFC</td><td></td></tr><tr><td>트로피카미드 0.5%</td><td>Fisher 제약</td><td>390723</td><td></td></tr></tbody></table>

광간섭 단층촬영을 통한 쥐 맥락막의 흑색종 이식 및 평가

Implantation and Evaluation of Melanoma in the Murine Choroid via Optical Coherence Tomography

실험적 맥락막 흑색종 모델을 확립하는 것은 올바른 국소화에서 종양을 유도하는 능력 측면에서 어렵습니다. 또한, 생체 내에서 후방 맥락막 흑색종을 관찰하는 데 어려움이 있어 종양 위치 및 성장 평가를 실시간으로 제한합니다. 여기에 설명된 접근 방식은 다단계 맥락막 B16LS9 세포 주입 절차를 통해 마우스에서 맥락막 흑색종을 확립하는 기술을 최적화합니다. 마우스 포도막의 작은 치수에 정밀하게 주입할 수 있도록 전체 절차를 현미경으로 수행합니다. 첫째, 결막 복막 절제술은 눈의 등쪽 측두엽 영역에 형성됩니다. 그런 다음 노출된 공막을 통해 바늘을 삽입하여 맥락막하 공간으로 관을 만듭니다. 그런 다음 무딘 바늘을 관에 삽입하고 흑색 종 세포를 맥락막에 주입합니다. 주사 직후 비침습적 광간섭단층촬영(OCT) 영상을 사용하여 종양 위치와 진행 상황을 결정합니다. 망막 박리는 종양 부위 및 크기의 예측 인자로 평가됩니다. 제시된 방법은 마우스에서 맥락막 국소 흑색종의 재현 가능한 유도 및 종양 성장 평가의 라이브 이미징을 가능하게 합니다. 따라서 안내 종양을 연구하는 데 유용한 도구를 제공합니다.

B16LS9 세포 주입 직후 OCT를 통해 눈을 검사하였다. 주사 후 국소 망막 박리가 관찰되었습니다. 마우스는 초점(그림 2, 상부 패널), 유리체로의 누출(그림 2, 중간 패널) 및 확장된 RD(그림 2, 하단 패널)의 세 가지 RD 패턴을 나타냈습니다. 확장 RD는 주사로 인한 손상으로 인해 발생할 수 있습니다. 주사 직후의 RD 패턴과 주사 후 5-7 일 종양의 국소화 사이에는 연관성이있었습니다. 그림 2에서 입증된 바와 같이, 국소 RD는 맥락막에 국한된 종양 세포 성장과 관련이 있었습니다. 그러나, 국소 RD를 나타내는 동물에서 주사 후 유리체의 세포를 관찰한 결과, 맥락막 외에 유리체강에서 종양 성장이 나타났다. 마지막으로, 연장된 RD 또는 여러 부위의 RD가 주사 후 관찰되었을 때, 종...

현재 프로토콜은 광간섭 단층촬영을 사용하여 쥐 맥락막에 흑색종의 이식 및 평가를 설명합니다.

Establishing experimental choroidal melanoma models is challenging in terms of the ability to induce tumors at the correct localization. In addition, ...

종양을 눈의 뒤쪽 부분으로 설정하는 것은 어렵습니다. 이 방법은 마우스에서 재현 가능한 맥락막 흑색종 종양의 유도 및 평가를 위한 종양 성장의 라이브 이미징을 가능하게 합니다. 이 프로토콜은 OCT 라이브 이미징을 사용하여 종양 세포 접종 당시 이미 종양의 위치를 평가하고 살아있는 동물의 종양 성장을 추적합니다.포도막 흑색종은 전이율이 50%에 가까운 치명적인 질병입니다. 실험 모델을 개발하는 것은 새로운 치료 가능성을 목표로 하는 연구를 발전시키는 데 중요합니다. 이 방법의 장점은 주사 성공에 대한 즉각적인 평가를 통해 균질 종양을 가진 연구 그룹에 도달하고 라이브 이미징을 통해 지속적으로 추적 할 수 있다는 것입니다.종양 진행을 검사합니다. 작은 쥐의 눈에 주사하려면 연습이 필요합니다. 주입 된 세포를 시각화하는 기능을 통해 즉시 성공을 평가하고 필요에 따라 더 많은 마우스로 반복 할 수 있습니다.이 절차를 시연하는 것은 Kaplan Medical Center의 Ophthalmology Research Laboratory의 Dr.Dimitri Gaber가 될 것입니다. 시작하기 위하여는, 0.4% 국소 안과 마취, Oxybuprocaine를 마취된 쥐의 양쪽 눈에 적용하십시오. 그런 다음 동공 확장을 위해 양쪽 눈에 0.5% 트로피카마이드를 국소적으로 바르고 눈의 건조를 방지하기 위해 윤활제로 1.4% 하이드록시에틸 셀룰로오스를 바릅니다.작동 현미경으로 마우스의 한쪽 눈을 관찰합니다. 멸균 된 인공 집게로 눈꺼풀을 벌립니다. 그런 다음 상측두엽 림보-결막을 잡고 하부 비강 위치로 당깁니다.절차 전반에 걸쳐 림보-결막을 잡고 이 위치를 고정합니다. 30 게이지 바늘 끝을 사용하여 윤부 뒤쪽 약 1-2mm의 등쪽 측두엽에 작은 결막 절제술을 합니다. 복막 절제술의 개구부에서 과도한 힘줄 캡슐을 제거합니다.바늘 끝을 삽입하여 공막을 관통하여 맥락막의 갈색이 공막의 노출된 백질을 통해 나타날 때까지 맥락막하 공간에 트랙을 만듭니다. 45도 각도로 꼬인 32게이지 무딘 바늘이 장착된 멸균된 10마이크로리터 유리 해밀턴 주사기에 세포를 넣습니다. 적재 된 주사기의 바늘을 생성 된 관에 약 2 밀리미터 삽입하고 2 마이크로 리터의 세포 현탁액을 주입한다.주사 후 모든 체액이 제거될 때까지 2-3초 동안 바늘을 제자리에 고정합니다. 관로에서 바늘이 새지 않도록 바늘을 부드럽게 당겨 제거합니다. 흑색종 세포 접종 직후, OCT 스캔으로 주입된 동물의 눈을 관찰한다.스캔을 기반으로 망막 박리 또는 RD 패턴을 국소 RD, 유리체로의 누출 또는 확장된 RD의 세 가지 범주에 따라 분류합니다. OCT 분할 분석 소프트웨어를 열어 RD 높이를 기반으로 종양 크기를 예측합니다. OCT 스캔에서 로컬 RD의 높이를 측정하고 세 그룹으로 분류합니다. 수술 후 단계에서 0.3%의 Ofloxacin을 국소적으로 도포합니다.맥락막하 세포 주입 후 종양 성장에 대한 OCT 기반 예측이 이 그림에 나와 있습니다. 마우스는 RD, Focal, Leakage To The Vitreous 및 Extended RD의 세 가지 패턴을 나타냈다. 주사 직후의 RD 패턴과 주사 5일 후 종양의 국소화 사이에는 연관성이 있었습니다. 국소 RD는 맥락막에 국한된 종양 세포 성장과 관련이 있었습니다.그러나, Focal RD를 나타내는 동물에서 주사 후 유리체의 세포를 관찰한 결과 유리체강과 맥락막에서 종양 성장이 나타났습니다. 확장 RD가 주사 후 관찰되었을 때, 종양은 5일 후에 맥락막 및 유리체 전체에 분산되었습니다. 이 모델에서 유도된 종양 크기의 범위는 소형, 중형 및 대형으로 나눌 수 있습니다.여기에 표시된 것은 주사 후 RD 높이의 OCT 측정의 대표 이미지, 및 해당 안저 이미지, 주사 후 5일째의 종양 높이 및 너비의 수평 OCT 스캔, 및 해당 안저 이미지 및 비교 가능한 종양 측정을 보여주는 해당 H&E 염색 눈 섹션입니다. 세포 주입 직후 소형, 중형 또는 대형 RD를 나타낸 마우스의 종양 부피 측정이 여기에 제시됩니다. 주입력을 조정하면 종양의 크기와 위치에 영향을 줄 수 있습니다.이를 보정하고 주사 후 OCT에 의해 유도된 망막 박리 패턴을 평가하는 것이 중요합니다. 맥락막 종양의 라이브 이미징은 종양 진행에 대한 다양한 요인 또는 잠재적 치료법의 효과를 조사할 수 있는 중요한 실험 도구입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 비디오는 감염 후 포도막염의 마우스 모델에서 안구 염증을 감지하고 정량화하기 위한 생체 내 이미징 기술을 보여줍니다. 광간섭 단층촬영(OCT)으로 알려진 이 기술은 질병 진행을 평가하기 위해 눈의 고해상도 단면 이미지를 생성합니다.

마우스 모델에서 포도막염을 평가하기 위한 광간섭 단층촬영 이미징(Optical Coherence Tomography Imaging)

출처: Jagodzinska, J., et. al., Optical Coherence Tomography: Imaging Mouse Retinal Ganglion Cells In Vivo. J. Vis. 특급. (2017) &lt;br /&gt; 이 비디오에서는 SD-OCT(spectral-domain optical coherence tomography)를 사용하여 망막층을 이미지화하고 시신경병증이 있는 유전자 변형 마우스 모델의 구조적 변화를 평가하는 방법을 보여줍니다.

광간섭 단층촬영(Optical Coherence Tomography)을 사용한 마우스 망막의 In vivo 이미징

우리는 종양의 성장하는 동안 재생에 일반적으로 생물 물리학 적 제약 조건을 되풀이되었습니다의 intravital 두 광자 현미경을위한 마우스에서 대뇌 피질의 소성을 glioblastoma의 모델을 설립했다. 종양 위의 두개골을 대체 만성 유리 창에는 두 개의 광자 현미경에 의해 시간이 지남에 따라 종양의 진행을 추적 할 수 있습니다.

소성을 Glioblastoma의 마우스 모델은 뇌 실질 물리적 제약 조건을 유지하고의 intravital 두 광자 현미경에 적합

우리는 난소암의 성장과 재발을 감지, 정량화 및 모니터링할 수 있는 비침습적 동물 이미징 플랫폼을 설명합니다. 이 복막내 이종이식 모델은 난소암 환자의 임상 프로필을 모방합니다.

비 침습적 영상에 대한 생쥐 모델 검색 및 모니터 난소 암 재발

이 원고는 고해상도 스펙트럼 도메인 광학 일관성 단층 촬영 (SD-10 월)와 마우스 망막의 비보에 이미징에 대 한 프로토콜을 설명합니다. 그것은 몇 가지 검색 및 측정 방법 설명 peripapillary 지역에서 망막 신경 절 세포 (RGC)에 초점을 맞추고.

광학 일관성 단층 촬영: 마우스 망막 신경 절 세포에서 Vivo에서 화상 진 찰

여기, 선물이 쥐에서 안 neovascularization 레이저 유도의 형태학 변화의 후속에서 경도 vivo에서 화상의 유용성.

Vivo에서 복합 이미징 및 마우스 레이저 유도 안 Neovascularization 모델의 분석

다음 절차는 유전자 조작 된 마우스 모델을 사용 하 여 뮤 린 등 피부에 멜 라 세포 종양 개시의 공간적 및 시간적 제어를 위한 방법을 설명 합니다. 이 프로토콜은 거시적 뿐만 아니라 현미경 피부 흑색 종 개시를 설명 합니다.

돌연변이 멜 뮤 린 줄기 세포에서 시작 하는의 공간적 및 시간적 제어

여기에서는 마우스에서 망막병증의 진단 및 정량적 측정을 용이하게 하기 위해 광학 간섭 단층 촬영을 사용하는 생체 내 이미징 기술에 대해 설명합니다.

망막병증의 마우스 모델에 대한 광학 간섭 단층 촬영의 적용

본 프로토콜은 in vivo 이미지에서 관찰된 망막 신경절 세포 축삭 다발 형태를 검증하기 위한 목적으로 in vivo 가시광선 광간섭 단층 촬영 fibergraphy(vis-OCTF) 이미지를 동일한 마우스 망막의 ex vivo 공초점 이미지와 정렬하는 단계를 설명합니다.

Align of Visible-Light Optical Coherence Tomography Fibergrams with Confocal Images of the Same Mouse Retina(가시광선 광간섭 단층 촬영 파이버그램과 동일한 마우스 망막의 컨포칼 이미지 정렬)

우리 쥐 피로와 같은 동작을 유도하는 대상 주변 조사를 사용하는 방법을 설명한다. 선택한 비 살상 조사 선량은 자발적 휠 실행 활동 주일간 감소로 이어집니다.

주변 방사선 조사에 의해 유도 된 피로의 마우스 모델

학습하세요 광간섭 단층촬영(OCT)을 활용한 쥐 맥락막 흑색종 이식 및 평가 방법을. 실시간 영상으로 종양 위치와 성장을 모니터링하여 재현 가능한 실험 모델을 구축하고 치료 연구를 발전시킬 수 있습니다.

광간섭 단층촬영을 통한 쥐 맥락막의 흑색종 이식 및 평가

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