Name: 클레마티디스의 진위 여부를 식별하기 위한 다중 패턴 인식을 위한 화학적 지문과 결합된 HPLC 아르 만디 콜리스 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-11T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 29 s
Description: 학습하세요 HPLC 화학적 지문과 다중 패턴 인식을 활용하여 클레마티디스 아르만디 콜리스의 진위 여부를 식별하는 방법을. 이 프로토콜은 한약재 품질 연구에 활용됩니다.

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이 작업은 쓰촨 한약청 프로젝트(no. 2020JC0088, no. 2021MS203)의 지원을 받았습니다.

1. 화학적 지문 검출 방법
<ol><li>크로마토그래피 조건<ol><li>아세토니트릴(A)/물(B) 이동상을 준비합니다. HPLC 소프트웨어에서 다음과 같이 그라디언트 프로그램을 설정하십시오 : 0-20 분, 3 % A-10 % A; 20-25 분, 10 % A-13 % A; 25-65 분, 13 % A-25 % A; 65-75 분, 25 % A-40 % A; 75-76 분, 40 % A-3 % A; 76-85 분, 3 % A-3 % A.</li>
		<li>이동상의 유속을 1.0mL/분으로 유지합니다.</li>
		<li>30°C로 유지된 C18 컬럼(250 mm x 4.6 mm, 5 μm)에서 크로마토그래피 분리를 수행한다.</li>
		<li>주입량을 10μL로 설정합니다.</li>
		<li>205 nm의 파장에서 샘플을 검출합니다. 참고: 크로마토그래피 조건의 특정 설정은 고성능 액체 크로마토그래피 작동 소프트웨어의 작동 절차(재료 표)를 참조하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>시료용액 준비<ol><li>원료를 내경 850 μm ± 29 μm 인 나일론 메쉬를 통과시켜 균일 한 입자 크기로 분쇄합니다.</li>
		<li>분쇄 된 원료 2g (정확하게 칭량)을 마개가있는 50mL 원추형 플라스크에 넣고 메탄올 50mL를 첨가합니다. 플라스크에 스토퍼를 놓고 초음파 (600W, 40kHz)를 30 분 동안 놓습니다.</li>
		<li>그런 다음 플라스크를 실온(RT)으로 냉각합니다. 샘플을 다시 칭량하고 손실된 추출제를 교체하여 초기 중량을 보충합니다.</li>
		<li>약재 추출물이 포함된 메탄올 용액 4mL를 10mL 부피 플라스크에 붓습니다. 6mL의 H2O를 넣고 혼합하고 10분 동안 가라앉힙니다.</li>
		<li>마지막으로 0.45μm 필터 멤브레인을 통해 상청액을 여과하고 대기 상태로 둡니다.</li>
	</ol></li>
	<li>지문 검출 방법 검증<ol><li>상기와 같이 샘플을 준비하고(단계 1.2) 하루에 6회 HPLC 분석(단계 1.1)을 실시한다. 정밀도를 평가하려면 1.3.5단계에 설명된 대로 상대 머무름 시간 및 상대 피크 영역의 상대 표준 편차(RSD)를 계산합니다.</li>
		<li>0, 2, 4, 6, 8, 12 및 24시간 동안 RT에 저장된 동일한 샘플 용액을 분석하여 샘플 용액의 안정성을 평가하고 단계 1.3.5에 설명된 대로 상대 머무름 시간 및 상대 피크 영역의 RSD를 계산합니다.</li>
		<li>동일한 샘플(CMT-4)의 6회 반복을 취하고, 위의 절차(단계 1.2)에 따라 샘플 용액을 준비하고, 1.1단계에 따라 HPLC에서 지문을 검출합니다. 상대 머무름 시간 및 상대 피크 영역의 RSD를 계산하고 1.3.5단계에 설명된 대로 반복성을 평가합니다.</li>
		<li>그런 다음 그림 1B 의 피크 번호 10을 기준 피크로 사용하고 단계 1.3.5에 설명된 대로 각 공통 피크의 상대 머무름 시간 및 상대 피크 면적의 RSD를 계산합니다.</li>
		<li>아래에 언급된 공식을 사용하여 각 공통 피크의 상대 머무름 시간과 상대 피크 면적을 계산합니다. T re = T 특성/T참조 A re =특성/A참조 여기서, Tre=상대 머무름 시간, T 특성 = 특성 피크 체류 시간, T 기준 = 기준 피크 체류 시간, Are = 상대 피크 면적, A 특성 = 특성 피크 면적, 및 A 기준 = 기준 피크 면적. 참고: 중국 전통 의학 지문을 설정하려면 일반적으로 얻기 쉽고 분해능이 높은 크로마토그래피 피크를 선택해야 합니다. 이것은 지문을 식별하고 안정성과 재현성을 검사하기 위한 기준 피크로 사용됩니다.</li>
	</ol></li>
</ol>2. 촨무통 지문 및 유사성 분석 수립
<ol><li>10 개의 정통 샘플 배치와 Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC), Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd와 같은 5 개의 간음제를 사용하십시오. et 윌스. (DC), 클레 마티스 피터라 핸드 .- 마즈. (DE), 클레 마티스 구 리아나 록스. Var. finetii Rehd. et Wils (XS), 그리고 클레 마티스 파인 티아나 레블. et Vaniot. (SMT)를 지문 분석용 샘플로 사용합니다.</li>
	<li>단계 1.2에 설명된 대로 샘플 용액을 준비합니다. 단계 1.1에 설명된 조건에 따라 HPLC로 모든 샘플 용액의 지문 분석을 수행합니다.</li>
	<li>관련 데이터를 중국 전통 의학의 크로마토 그래피 지문의 유사성 평가 시스템으로 가져옵니다 (SESCF-TCM, 2012 버전). 시스템은 모든 샘플의 크로마토그램에서 합리적인 높이와 우수한 해상도를 가진 피크를 공통 피크로 지정합니다. 참고: SESCF-TCM 소프트웨어는 등록 후 중국 약전 위원회(http://114.247.108.158:8888/login) 웹사이트에서 다운로드할 수 있습니다.<ol><li>소프트웨어에서 메뉴에서 참조 스펙트럼 설정 버튼을 클릭합니다.</li>
		<li>그런 다음 파라미터 설정 창에서 시간 창 너비를 0.5로 설정하고 제어 스펙트럼 생성 방법을 중앙값 방법으로 선택합니다.</li>
		<li>메인 메뉴에서 다지점 보정을 클릭한 다음, 피크 매칭을 전체 스펙트럼 피크 매칭으로 선택합니다.</li>
		<li>마지막으로 제어 생성을 클릭하여 Chuanmutong의 실제 종의 참조 크로마토그래피 지문을 생성합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>분석을 위해 정통 Chuanmutong 샘플 10개 배치와 불순물 5개 배치의 머무름 시간과 피크 영역을 SESCF-TCM으로 가져옵니다. 구체적인 작업은 다음과 같습니다.<ol><li>소프트웨어에서 기본 메뉴의 참조 스펙트럼 설정 버튼을 클릭합니다.</li>
		<li>파라미터 설정 창에서 Chuanmutong의 정통 종의 참조 크로마토그래피 지문을 참조로 설정하고 제어 스펙트럼 생성 방법을 중앙값 방법으로 선택하고 시간 창 너비를 0.5로 설정합니다.</li>
		<li>메인 메뉴에서 다지점 보정을 클릭한 다음, 피크 매칭을 전체 스펙트럼 피크 매칭으로 선택합니다. </li>
		<li>마지막으로 유사 성 계산을 클릭하여 Chuanmutong의 참조 크로마토그램 지문을 기반으로 유사성을 계산합니다. 마지막으로 한약 크로마토그래피 지문 평가 시스템(2012년 버전)을 사용하여 지문의 유사성을 계산합니다. 알림: 특정 작업에 대해서는 한약 크로마토그래피 지문 평가 시스템(2012 버전)의 작동 사양을 참조하십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>3. 촨무통 지문의 다중 패턴 인식 분석
<ol><li>클러스터 분석(CA)<ol><li>실제 Chuanmutong 샘플 10 개 배치와 5 개 배치의 불순물 지문에서 12 개의 공통 피크의 피크 영역을 변수로 사용하고 체계적인 클러스터 분석 (CA)을 위해 통계 분석 소프트웨어에 입력하십시오.</li>
		<li>그룹 간 방법을 선택하고 Pearson 상관 계수를 분류 기준으로 사용하여 Chuanmutong 및 그 간 음 물질의 클러스터 분석 다이어그램을 그립니다. 구체적인 작업은 다음과 같습니다.<ol><li>통계 분석 소프트웨어에서 파일을 클릭하여 데이터를 가져옵니다.</li>
			<li>메뉴에서 분석을 클릭하고 분류에서 시스템 클러스터링을 클릭합니다.</li>
			<li>공통 피크 영역을 변수로 선택하고 군집 수를 4로 설정합니다.</li>
			<li>방법을 클릭하고 클러스터링 방법을 그룹 간 연결로 선택하고 측정 간격을 Pearson 상관 관계로 선택한 다음 확인을 클릭하여 CA 맵을 그립니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>주성분 분석 (PCA)<ol><li>실제 품종과 불순물의 상대적 공통 피크 영역을 PCA 분석을 위해 분석 소프트웨어로 가져오고 PCA 점수 맵을 사용하여 샘플 차이의 점수 매트릭스 맵을 평가합니다. 구체적인 작업은 다음과 같습니다.<ol><li>데이터 분석 소프트웨어를 열고 메뉴에서 파일을 클릭 한 다음 새 일반 프로젝트를 만듭니다. HPLC 시스템에서 스프레드시트(예: Excel 형식)로 12개의 공통 피크의 피크 영역을 가져옵니다. 그런 다음 마침 을 클릭하여 데이터 가져오기를 완료합니다.</li>
			<li>새로 만들기를 클릭하여 새 모델을 생성하여 PCA로 모델 유형을 설정합니다. 자동 맞춤 및 추가를 클릭하여 데이터를 맞춘 다음 점수를 클릭하여 PCA 점수 맵을 가져옵니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
	<li>직교 부분 최소제곱 판별 분석(OPLS-DA)<ol><li>감독 모드와 함께 직교 부분 최소 제곱 판별 분석 방법을 사용하여 실제 Chuanmutong 품종 및 불순물의 상대적 공통 피크 면적 피크를 추가로 분석하고 모든 샘플의 OPLS-DA 분류 점수 맵을 그립니다. 구체적인 작업은 다음과 같습니다.<ol><li>데이터 분석 소프트웨어의 메뉴에서 파일을 클릭하여 파일을 가져오고 새 일반 프로젝트를 만듭니다. HPLC 시스템에서 스프레드시트에 있는 12개의 공통 피크의 피크 영역을 가져온 다음 마침 을 클릭하여 데이터 가져오기를 완료합니다.</li>
			<li>새로 만들기를 클릭하여 새 모델을 생성하여 PCA로 모델 유형을 설정합니다. 자동 맞춤 및 추가를 클릭하여 데이터를 피팅합니다. 그런 다음 점수를 클릭하여 PCA 점수 맵을 가져옵니다.</li>
			<li>새로 만들기를 클릭하고 모델 1로 새로 만들기를 선택하여 OPLS-DA로 모델 유형을 설정합니다. </li>
			<li>스케일을 클릭하고 모두를 위한 파로 유형을 설정합니다. 먼저 자동 맞춤을 클릭한 다음 점수를 클릭하여 OPLS-DA 점수 맵을 가져옵니다.</li>
		</ol></li>
		<li>Chuanmutong의 각 공통 피크가 분류 결과에 미치는 영향과 정품 Chuanmutong 재료와 관련 불순물 간의 차이를 확인하려면 분석을 위해 투영 (VIP)의 변수 중요도를 사용하십시오.</li>
		<li>Chuanmutong의 다양한 구성 요소에 대한 VIP 맵을 그립니다. 결과 VIP 맵을 사용하여 분류에 대한 각 변수의 영향을 평가하고 그룹 간 차이에 크게 기여하는 성분을 선별합니다. 구체적인 작업은 다음과 같습니다.<ol><li>데이터 분석 소프트웨어의 메뉴에서 분석을 클릭하고 순열을 클릭하고 순열 수를 200으로 설정하고 OPLS-DA 점수 맵의 R 2 및 Q2를 가져옵니다.</li>
			<li>VIP를 클릭하고 VIP 예측을 선택하여 VIP 지도를 가져옵니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>4. HPLC에 의한 촨무통의 β-시토스테롤 측정
<ol><li>크로마토그래피 조건(1.1단계 참조)<ol><li>이동상을 준비하십시오 : 메탄올 - 물 (97 : 3).</li>
		<li>이동상의 유속을 1.0mL/분으로 설정합니다.</li>
		<li>30°C로 유지된 C18 컬럼(250 mm x 4.6 mm, 5 μm)에서 크로마토그래피 분리를 수행한다.</li>
		<li>주입량을 10μL로 설정합니다.</li>
		<li>204nm의 파장에서 성분을 검출합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>시료용액 준비<ol><li>β-시토스테롤(0.1mg/mL)의 스톡 표준물질을 정확하게 칭량된 양의 해당 표준물질을 메탄올에 용해시켜 준비합니다.</li>
		<li>분석 원료의 시료를 내경 180 μm ± 7.6 μm의 나일론 메쉬에 통과시켜 균일한 입자 크기로 분쇄한다.</li>
		<li>둥근 바닥 플라스크에 분쇄 된 원료 2g (정확하게 칭량)을 넣고 클로로포름 50mL를 첨가합니다.</li>
		<li>플라스크를 환류 응축기에 연결하고 끓는 수조 (적당한 끓임)에서 60 분 동안 가열합니다. 15-20 μm 여과지로 추출 용액을 여과하십시오.</li>
		<li>약 10분 동안 끓는 수조(적당한 끓임)에서 거의 건조될 때까지 여과액을 증발시킵니다.</li>
		<li>잔류물을 용해하고 메탄올을 사용하여 부피를 5mL로 구성한다. 마지막으로 상청액을 0.45μm 필터 멤브레인에 통과시키고 대기 상태로 둡니다.</li>
	</ol></li>
	<li>분석법 검증<ol><li>하위 단계 4.2.1에서 제조 된 β- 시토스테롤의 저장 용액을 취하여 100 % 메탄올로 희석하고 100 μg / mL, 80 μg / mL, 60 μg / mL, 50 μg / mL, 40 μg / mL, 30 μg / mL 및 20 μg / mL 농도의 용액을 준비합니다.</li>
		<li>단계 4.1에 설명된 크로마토그래피 조건에서 샘플을 주입하여 피크 면적을 결정하고, 주입 부피에 대한 피크 영역을 사용한 회귀 분석을 수행하고, 회귀 방정식 및 상관 계수를 얻어 선형성을 평가합니다.</li>
		<li>상기와 같이 샘플을 준비하고(단계 4.2) 이를 같은 날에 6회 HPLC 분석(단계 4.1)한다. 그런 다음 피크 영역의 RSD를 계산하여 정밀도를 평가합니다.</li>
		<li>단계 4.1에 설명된 대로 0, 2, 4, 6, 8, 12 및 24시간 동안 RT에 저장된 동일한 샘플 용액을 분석하여 샘플 용액의 안정성을 평가합니다. 그런 다음 1.3.5단계에서 설명한 대로 피크 영역의 RSD를 계산합니다.</li>
		<li>동일한 샘플 (CMT-4)을 단계 4.2에 기재된 바와 같이 제조된 육분투액에 용해시키고, 이를 단계 4.1에 기재된 바와 같이 HPLC 분석을 실시함으로써 반복성을 검사한다. 그런 다음 6 개의 샘플에서 β- 시토스테롤 함량의 RSD를 계산하십시오.</li>
		<li>표준 첨가 방법을 사용하여 방법의 정확도를 평가합니다. 이를 위해 β-시토스테롤 함량의 80%, 100% 및 120%에서 샘플에 β-시토스테롤 기준 용액을 추가하고 4.1단계에 설명된 대로 각 조건을 세 번 반복합니다. 평균 회수율과 RSD를 계산하여 방법의 정확도를 평가합니다. 참고: 회복률(RR)의 계산 공식은 다음과 같습니다. RR % = [(M t - M 0) / Ms] × 100 여기서 Mt는 표준물질을 첨가한 후의 β-시토스테롤의 품질, M0 = 시료 용액의 품질, 및Ms = 첨가된 β-시토스테롤의 품질이다. </li>
	</ol></li>
	<li>시료의 β-시토스테롤 함량 측정<ol><li>4.2 단계에 따라 샘플 용액을 준비하기 위해 정통 한약 재료 10 배치와 관련 불순물 5 배치를 취하십시오.</li>
		<li>그런 다음 각 샘플 용액과 β-시토스테롤 기준 용액을 주입하여 단계 4.1에 설명된 조건에서 피크 면적을 결정하고 외부 표준 원포인트 방법을 사용하여 각 샘플의 β-시토스테롤 함량을 계산합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>

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연구를 위한 샘플 수집은 중국 약재의 진위 여부를 식별하는 다중 패턴 인식을 구축하는 첫 번째 핵심 단계입니다. 시장 조사를 통해 우리는 쓰촨 야안, 량산, 러산이 촨무통의 야생 자원의 주요 생산 지역임을 발견했습니다. 같은 속의 관련 품종도 동일한 지리적 분포 6,20을 가지고 있습니다. CC, DC, DE, XS 및 SMT는 종종 Chuangmutong16,21; 따라서이 연구에서는 위에서 언급 한 원산지에서 정통 Chuanmutong 10 배치와 혼합 샘플 5 배치를 수집하고 품종의 정확성을 확인했습니다.
두 번째 핵심 단계는 화학 성분에 대해 가능한 한 많은 정보를 표시할 수 있는 HPLC 지문의 검출 조건을 선별하는 것입니다. 이 연구에서는 보충 그...

Chuanmutong, 클레 마티스 아르 만디 프란치의 마른 콜리스. 또는 클레 마티스 몬타나 Buch.-Ham.은 클리닉 1,2,3에서 일반적으로 사용되는 중국 전통 의학입니다. 비뇨기 문제, 부종, 혀와 입의 염증, 우유 분비 감소, 관절 경직, 습열로 인한 근육통치료에 사용됩니다 4. Chuanmutong은 항상 중국 남서부, 특히 최고의 품질을 찾을 수있는 쓰촨에 분포하는 야생 품종에서 항상 얻었습니다 5,6. 정통 품종과 밀접하게 관련된 간음제는 유사한 특성 7,8,9,10으로 인해 구별하기가 어렵습니다. 중국 약전 2020년판에서 Chuanmutong의 품질 표준은 내용물 결정 없이 특성, 현미경 식별 및 박층 식별만 규정하고 있어 불순물을 효과적으로 식별할 수 없으므로 잠재적인 위험이 있습니다. 또한 Chuanmutong과 관련 식물을 비교하고 식별하는보고는 거의 없습니다. 결과적으로 Chuanmutong의 진위를 보장하는 품질 관리 방법은 추가 연구가 필요합니다.
Chuanmutong의 화학 성분은 주로 올레아나난형 펜타사이클릭 트리테르페노이드와 그 배당체, 플라보노이드 및 유기산 11,12,13,14로 구성됩니다. 그 중 올레아놀산, β- 시토스테롤, 스티그마 스테롤 및 에르고 스테롤은 다양한 강도의 이뇨 효과를 가지며, 이는 이뇨를 촉진하고 stranguria15,16을 완화시키는 잠재적 인 약력학 물질 일 수 있습니다. 화학 지문은 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC), 가스 크로마토 그래피 (GC) 등으로 샘플에 포함 된 많은 화학 성분을 분리하고 검출하여 얻습니다. Chuanmutong의 특성을 분석하기 위해 적절한 통계 분석 방법을 채택하면 중국 전통 의학17,18,19의 전반적인 품질 관리 및 과학적 식별을 결정할 수 있습니다.
이 연구에서는 Chuanmutong 정통 품종 10 배치와 간음제 5 배치를 수집했습니다. 이들의 품질은 클러스터 분석 (CA), 주성분 분석 (PCA), 직교 부분 최소 제곱 차별 분석 (OPLS-CA) 및 약력학 성분의 함량 측정을 포함한 다중 패턴 인식과 결합 된 HPLC 지문 방법으로 비교 및 분석되었습니다. 이 프로토콜은 높은 특이성으로 정통 품종을 식별하는 방법, 정통 품종 및 한약 재료의 불순물을 과학적으로 식별하기위한 새로운 전략을 수립합니다.

<table><tbody><tr><td>아세트산</td><td>Zhiyuan 화학 시약 Co., Ltd., 톈진, 중국</td><td>2017381038</td><td></td></tr><tr><td>아세토니트릴</td><td>시그마-알드리치&nbsp; Trading Co., Ltd., 중국 상하이</td><td>WXBD5243V</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-Sitosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., 중국 충칭</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; C18 열</td><td>Yuexu Material Technology Co., Ltd., 중국 상하이</td><td>Welch Ultimate LP</td><td></td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., 중국 쓰촨성&nbsp;</td><td>19020103</td><td>CMT-1</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성&nbsp;</td><td>200701</td><td>CMT-2</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., 쓰촨성, 중국&nbsp;</td><td>200701</td><td>CMT-3</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성&nbsp;</td><td>200901</td><td>CMT-4</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., 쓰촨성, 중국&nbsp;</td><td>210701</td><td>CMT-5</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성&nbsp;</td><td>210401</td><td>CMT-6</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., 중국 쓰촨성&nbsp;</td><td>200901</td><td>CMT-7</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., 중국 쓰촨성&nbsp;</td><td>201201</td><td>CMT-8</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., 쓰촨성, 중국&nbsp;</td><td>201001</td><td>CMT-9</td></tr><tr><td>Chuanmutong</td><td>Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., 쓰촨성, 중국</td><td>210501</td><td>CMT-10</td></tr><tr><td>Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang</td><td>Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, China&nbsp;</td><td>-</td><td>CC</td></tr><tr><td>Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.</td><td>Heilin Village, Qiliping Township, Hongya County, 쓰촨성, 중국&nbsp;</td><td>-</td><td>DC</td></tr><tr><td>클레 마티스 peterae 손 .- Mazz.</td><td>황무 마을, 황무 향, 한위안 현, 쓰촨성, 중국&nbsp;</td><td>-</td><td>DE</td></tr><tr><td>Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils</td><td>Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, China&nbsp;</td><td>-</td><td>XS</td></tr><tr><td>Clematis finetiana Levl. et Vaniot.</td><td>Wannian Village, Huangwan Township, Emei County, 쓰촨성, 중국&nbsp;</td><td>-</td><td>SMT</td></tr><tr><td>전자 저울</td><td>Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., 상하이,&nbsp; 중국&nbsp;</td><td>FA1204</td><td></td></tr><tr><td>Ergosterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd, 충칭, 중국</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td><td>2021112602</td><td></td></tr><tr><td>Ethyl acetate</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>2017042043</td><td></td></tr><tr><td>Formic acid</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td><td>2016062901</td><td></td></tr><tr><td>고성능 액체 크로마토그래피</td><td>Agilent, 미국.</td><td>1260</td><td></td></tr><tr><td>IBM SPSS 통계 버전 26.0</td><td>International Business Machines Corporation, USA-Methanol</td><td></td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma-Aldrich&nbsp; Trading Co., Ltd., Shanghai, China</td><td>WXBD6409V</td><td></td></tr><tr><td>Methanol</td><td>Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, China</td><td>202010302</td><td></td></tr><tr><td>n-부틸 알코올</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>2020071047</td><td></td></tr><tr><td>석유 에테르</td><td>Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, China</td><td>2020090125</td><td></td></tr><tr><td>Phosphoric</td><td>acid Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., 톈진, 중국</td><td>20200110</td><td></td></tr><tr><td>SESCF-TCM 버전 2012</td><td>국가 약전 위원회, 중국</td> <td>http://114.247.108.158:8888/login</td><td></td></tr> <tr><td>Stigmasterol</td><td>Meisai Biological Technology Co., Ltd., 충칭, 중국</td><td>20210201</td><td></td></tr><tr><td>Trichloromethane</td><td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., 상하이, 중국</td><td>20200214</td><td></td></tr><tr><td>Umetrics SIMCA 버전 14.1.0.2047</td><td>Umetrics, 스웨덴</td><td>-</td><td>https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download</td></tr><tr><td>초순수 기계</td><td>Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., 쓰촨성, 중국</td><td>UPH-II-10T</td><td></td></tr><tr><td>초음파 세척기</td><td>Kunshan Hechuang 초음파 기기 Co., Ltd., 장쑤성, 중국</td><td>KH3200E</td><td></td></tr></tbody></table>

클레마티디스의 진위 여부를 식별하기 위한 다중 패턴 인식을 위한 화학적 지문과 결합된 hplc 아르 만디 콜리스

HPLC Coupled with Chemical Fingerprinting for Multi-Pattern Recognition for Identifying the Authenticity of Clematidis Armandii Caulis

중국 약재 및 관련 간음 물질을 식별하는 방법은 Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, 보편적으로 사용되는 중국 전통 의학)를 예로 들어 구성되었습니다. 클러스터 분석(CA), 주성분 분석(PCA) 및 직교 부분 최소 제곱 판별 분석(OPLS-DA)을 포함하여 화학 측정법과 결합된 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 지문을 기반으로 정품 Chuanmutong 품종 10개 배치와 관련 불순물 5개 배치를 분석하고 비교했습니다. 또한, β- 시토스테롤의 함량을 결정하였다. Chuanmutong의 대조 화학 지문이 확립되었고 12 개의 공통 피크가 확인되었습니다. 정품 Chuanmutong 품종 10 개 배치의 지문과 대조 지문 간의 유사성은 0.910-0.989 인 반면, 5 개 배치의 간음 자의 유사성은 0.133-0.720에 불과했습니다. 크로마토그램의 공통 피크를 기반으로 15개의 샘플 배치를 PCA에 의해 3가지 함량 수준으로 분류하고 CA에 의해 4가지 범주로 집계하여 정통 Chuanmutong과 Chuanmutong의 불순물을 명확하게 구분했습니다. 또한, OPLS-DA를 통해 진짜 촨무퉁과 촨무통의 불순물을 효과적으로 식별할 수 있는 7가지 차등 성분이 발견되었다. 정품 Chuanmutong 품종의 10 개 배치의 β- 시토스테롤 함량은 97.53-161.56 μg / g 인 반면, 5 개 배치의 β- 시토스테롤 함량은 크게 다양했으며, 그 중 클레 마티스 피터라 핸드의 β- 시토스테롤 함량. 그리고 클레 마티스 구 리아나 록스 브. Var. finetii Rehd. et 윌스. Chuanmutong의 정통 품종보다 현저히 낮았습니다. 본 연구에서 확립된 HPLC 지수 성분 함량 및 화학적 지문 다중 패턴 인식 방법은 정통 한약 재료 및 관련 불순물을 효과적으로 식별하기 위한 새로운 전략을 제공합니다.

촨무통의 크로마토그래피 지문 및 유사성 분석(SA) 정밀도, 반복성 및 안정성의 상대적 머무름 시간의 RSD 값은 각각 0.46%, 1.65% 및 0.53% 미만이었습니다. 상대 피크 영역의 RSD 값은 각각 4.23%, 3.56% 및 3.96% 미만이었다. 그림 1A, B에서 볼 수 있듯이 10개의 정통 Chuanmutong 샘플의 HPLC 지문에는 12개의 뚜렷한 공통 피크(피크 1에서 피크 12까지)가 있었습니다. 10 호의 피크 면적이 상대적으로 컸기 때문에 해상도가 좋았습니다. 각 샘플에 존재하는 성분이었기 때문에 지문의 안정성과 재현성을 조사하기 위한 기준 피크로 사용되었습니다. 이어서, 피크 번호 10을 기준 피크(S)로 취하고, 나머지 11번 피크의 상대 체류 시간을 계산하였다.
유사성 분석에서 상관 계수가 1에 가까울수록 표본 간의 유사성이 높아...

여기에서는 화학 지문 다중 패턴 인식과 결합 된 고성능 액체 크로마토 그래피 (HPLC)를 확립하기위한 프로토콜을 제시하여 클레 마티 디스 아르만디 콜리스 및 그 불순물의 진정한 품종을 효과적으로 식별하기위한 새로운 전략을 제공합니다.

클레마티디스의 진위 여부를 식별하기 위한 다중 패턴 인식을 위한 화학적 지문과 결합된 HPLC 아르 만디 콜리스

A method for identifying Chinese medicinal materials and their related adulterants was constructed by taking Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, a ...

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이 프로토콜은 클레마티디스 아르만디 콜리스와 그 간음제의 진짜 재료를 효과적으로 식별하기 위한 새로운 전략을 제공할 수 있습니다. 이 방법은 약재 품질 연구에 사용할 수 있으며 다른 중국 의약 재료의 품질 표준을 연구하기위한 참고 자료를 제공합니다. 샘플 준비를 시작하려면 적절한 내경을 가진 나일론 메쉬를 통과시켜 균일 한 입자 크기로 원료를 분쇄하십시오.플라스크에 메탄올 50ml를 첨가하기 전에 분쇄 된 원료 2g을 마개 50 밀리리터 원추형 플라스크에 정확하게 계량했습니다. 30 분 동안 600 와트 및 40 킬로 헤르츠로 가열 된 초음파로 플라스크에 마개를 놓습니다. 배양이 끝나면 여과지를 통해 약용 추출 용액을 변형시킵니다.변형시킨 후, 약용 추출물을 함유하는 메탄올 용액 4 밀리리터를 10 밀리리터의 부피 플라스크에 옮긴다. 그런 다음 6 밀리리터의 물을 넣고 용액을 혼합하십시오. 용액을 10 분 동안 가라 앉히십시오.샘플의 HPLC 분석을 위해. 이동상을 준비하는 것으로 시작하고 원고에 설명 된대로 HPLC 그래디언트 프로그램을 설정하십시오. 0.45 마이크론 마이크로 다공성 필터 멤브레인을 통해 샘플을 여과하고 HPLC 분석을 실시합니다.각 샘플에 대해 하루에 6 번 분석을 수행하십시오. 시료액의 안정성을 평가하려면 제조 후 0, 2, 4, 6, 8, 12 및 24시간 동안 실온에서 보관된 동일한 시료 용액을 분석합니다. 동일한 샘플의 6 회 반복을 취하고 HPLC에서 지문을 검출합니다.관련 데이터를 중국 전통 의학의 크로마토 그래피 지문의 유사성 평가 시스템 또는 SESCF TCM 버전 2012라는 소프트웨어로 가져옵니다. 분석을 위해 정통 Chuanmutong 샘플의 10개 배치와 불순물 5개 배치에 대한 머무름 시간과 피크 영역을 SESCF TCM으로 가져옵니다. 메인 메뉴에서 참조 스펙트럼 설정을 클릭하고 매개 변수 설정 창으로 이동하여 Chuanmutong의 정통 종의 참조 크로마토 그래피 지문을 참조로 설정합니다.다음으로, 제어 스펙트럼 생성 방법을 시간 창 너비가 0.5인 중앙값 방법으로 설정합니다. 그런 다음 기본 메뉴에서 다점 보정을 클릭하고 피크를 선택한 다음 피크 일치 옵션을 표시된 피크로 선택합니다. 마지막으로 유사성 계산을 클릭하여 Chuanmutong의 기준 크로마토그램 지문을 기반으로 샘플의 유사성 분석을 수행합니다.체계적인 클러스터 분석을 수행하려면 관련 통계 분석 소프트웨어를 열고 파일을 클릭하여 10 배치의 실제 샘플과 5 배치의 불순물 데이터를 소프트웨어로 가져옵니다. 메뉴의 분류 탭에서 분석 및 시스템 클러스터링을 클릭합니다. 10개의 정통 샘플 배치와 5개의 불순물 배치의 공통 피크 영역을 변수로 선택합니다.클러스터 수를 4로 설정합니다. 그런 다음 방법을 클릭하여 클러스터링 방법을 그룹 간 연결로 선택합니다. 측정 구간을 Pearson 상관 관계로 선택하고 확인 탭을 사용하여 군집 분석 맵을 그립니다.원리 성분 분석 또는 PCA의 경우 데이터 분석 소프트웨어를 엽니다. 메뉴에서 파일을 클릭하고 새 일반 프로젝트를 만듭니다. HPLC 시스템에서 Excel 또는 유사한 스프레드시트에 있는 12개의 공통 피크의 피크 영역을 가져옵니다.을 치다 마감재 버튼을 눌러 데이터 가져오기를 완료합니다. PCA로 모델 유형을 설정하려면 새로 만들기를 클릭하여 새 모델을 만든 다음 자동 맞춤 및 탭 추가를 사용하여 데이터를 피팅합니다. 점수로 이동하여 PCA 점수 맵을 가져옵니다.직교 부분 최소 제곱 판별 분석 또는 OPLSDA를 사용합니다. 앞에서 설명한 대로 PCA 점수 맵을 생성합니다. 새로 만들기 및 새로 만들기를 클릭하여 OPLSDA로 모델 유형을 설정합니다. 모델 1 모두에 대한 파를 선택하여 스케일링하기 전에 점수에서 자동 맞춤을 눌러 OPLSDA 점수 맵을 생성합니다.변수 중요도와 투영을 추정하려면 데이터 분석 소프트웨어 메뉴로 이동하여 분석으로 이동 한 다음 숫자를 돌연변이 당 200으로 설정하십시오. OPLSDA 점수에서 R 제곱 및 Q 제곱 값을 얻고 VIP 및 VIP 예측을 클릭하여 VIP 맵을 가져옵니다. 10개의 정통 Chuanmutong 샘플의 HPLC 지문은 12개의 뚜렷한 공통 피크를 보여주었으며 그 중 비교적 크고 잘 해결되었습니다.피크 번호 10은 나머지 피크의 상대적 머무름 시간을 추정하기 위해 기준 피크로 사용되었습니다. 실제 샘플은 양호한 일관성에서 높은 유사성을 암시하는 유사성 정도에 매우 가까운 유사성을 보여주었습니다. 그러나 5 개의 간음자 배치와 통제 Chuanmutong 사이의 유사도는 상당히 낮았습니다.5 개의 불순물의 HPLC 지문은 주로 28 분에서 55 분 범위의 머무름 시간을 갖는 영역에서 실제 샘플과 다른 것으로 관찰되었습니다. PCA는 불순물이 섞인 CC를 제외하고는 정통 품종과 간음 자와의 차이점 사이에 명백한 유사성을 보여주었습니다.분류 거리가 20 일 때 클러스터 분석에서도 유사한 결과를 얻었습니다. OPLSDA에서 생성된 스코어 매트릭스는 실제 샘플의 샘플 포인트와 불순물 사이에 교차점이 없음을 나타냅니다.다시 말하지만, 간음한 CC는 다른 간음자보다 정통 품종과 더 닮았습니다. VIP 맵에 따르면 1보다 큰 값을 갖는 피크가 실제 샘플과 불순물 간의 차이를 일으키는 주요 마커 구성 요소로 식별되었습니다. Chuanmutong에서 발견되는 활성 성분 인 베타-시토스테롤의 함량은 5 가지 불순물 배치에서 모두 검출되었지만 함량은 크게 달랐습니다.이 프로토콜은 다양한 분석 방법을 설정하여 약재에 대한 모든 정보를 여러 각도에서 반영하고 Chuanmutong 약재의 진위 여부를 추정하는 방법을 제공합니다.

hplc-coupled-with-chemical-fingerprinting-for-multi-pattern

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연구

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화학

타겟이 불분명 한 대사는 대사 프로파일의 스냅 샷을 생성하는 가설을 제공합니다. 이 프로토콜은 혈청 세포 또는 조직에서 대사 산물의 추출 및 분석을 보여줍니다. 대사 산물의 범위는 액체 - 액체 상 추출을 사용하여 조사하는, 마이크로 ultraperformance 액체 크로마토 그래피 / 차동 분석 소프트웨어에 결합 고해상도 질량 분석법 (UPLC-HRMS).

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이 프로토콜은 지문에 대한 접근 방식을 제시하고 질량 분석에 결합 된 포괄적 인 2 차원 가스 크로마토그래피에 의해 수집 된 다차원 데이터를 탐구합니다. 전용 패턴 인식 알고리즘(템플릿 매칭)은 엑스트라 버진 올리브 오일 휘발성 분수(즉, 화산술)에서 암호화된 화학 정보를 탐구하기 위해 적용됩니다.

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천연 제품은 신약 및 치료제 개발을 위한 유망한 출발점을 나타냅니다. 그러나, 높은 화학 다양성으로 인해, 식물에서 새로운 치료 화합물을 찾는 것은 도전적이고 시간이 많이 소요되는 작업입니다. 우리는 식물 추출물과 분획에서 항균 및 항바이오필름 분자를 식별하는 단순화된 접근법을 설명합니다.

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시아노균 꽃과 관련 시아노톡신의 조기 발견을 위한 빠른 종합 전략은 여기에서 기술된다. 그것은 24 시간에서 물 샘플 및 바이밸브 샘플과 같은 유기 매트릭스에서 시아노박테리아 및 관련 시아노톡신의 검출을 허용합니다.

빠른 검출 전략을 사용하여 시아노균 꽃과 관련 된 Cyanotoxins의 조기 발견

높은 표면적의 미세 다공성 배위 폴리머로 내부적으로 코팅된 거대 다공성 고분자 모놀리식으로 구성된 다공성 하이브리드 분리 매체의 준비 절차가 제시됩니다.

포스 포의 향상된 농축을위한 거대 다공성 고분자 모노리스에 다공성 조정 폴리머 코팅의 제조

N-아릴-N-하이드록시아세트아미드의 O-트리플루오로메틸화에 이어 열적으로 유도된 분자내 OCF3-이동의 2단계 서열을 통해 오르쏘-트리플루오로메톡실레이트 아닐린 유도체를 합성하기 위한 조작적으로 간단한 절차가 보고되었습니다.

의 합성을위한 프로토콜<em&gt; 직교</em&gt; -trifluoromethoxylated 아닐린 파생 상품

학습하세요 HPLC 화학적 지문과 다중 패턴 인식을 활용하여 클레마티디스 아르만디 콜리스의 진위 여부를 식별하는 방법을. 이 프로토콜은 한약재 품질 연구에 활용됩니다.

클레마티디스의 진위 여부를 식별하기 위한 다중 패턴 인식을 위한 화학적 지문과 결합된 HPLC 아르 만디 콜리스

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