Name: 복합 염분 응력이 종자 발아 및 내염성에 미치는 영향 분석 후추 분석 (고추 연감 L.) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2022-11-30T15:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: 배우세요 복합 염분 응력 조건에서 고추 종자 발아 및 묘 생장을 평가하는 방법을. Hongtianhu 101과 Xinxiang 8 품종의 내염성 차이를 분석하여 염분 토양에서 작물 육종에 활용할 수 있는 통찰을 제공합니다.

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이 작업은 장시성 과학 기술부 (20203BBFL63065)와 장시 교육부 과학 기술 연구 프로젝트 일반 프로젝트 (GJJ211430)의 지원을 받았습니다. 영어 편집을 해주신 Editage (www.editage.cn)님께 감사드립니다.

참고 : 여기에서는 종자 염 내성 평가를위한 참조 방법으로 사용할 수있는 다양한 혼합 염 스트레스 하에서 고추 종자 발아 및 묘목 성장의 반응 특성 및 내부 메커니즘을 평가하기위한 프로토콜을 제시합니다.
1. 실험 준비
<ol><li>내염성이 강한 품종 인 Hongtianhu 101과 내성이 낮은 Xinxiang 8에 대한 작물 종자를 준비하십시오.</li>
	<li>종자 소독 시약으로 0.2 % KMnO4 용액을 준비하십시오. 먼저 KMnO 4 4.0g의 무게를 측정 한 다음 증류수 2,000mL를 첨가하십시오. 알림: 과망간산 칼륨은 일반적으로 강한 산화로 인해 불안정합니다. 따라서 사용 직전에 준비됩니다.</li>
	<li>탄산나트륨, 중탄산나트륨, 염화나트륨, 염화칼슘, 염화마그네슘, 황산마그네슘 및황산나트륨 13을 포함하는 7가지 염을 사용하여 혼합염을 제조한다. 각각 동일한 몰량을 첨가하고, 이는 각각 혼합염의 총 질량비의 14.8%, 11.7%, 8.2%, 15.5%, 13.3%, 16.7%, 및 19.8%를 연속적으로 차지한다.</li>
	<li>직경 9cm의 페트리 접시 (일회용)와 여과지 (중간 속도 정성 여과지)를 준비하십시오. 알림: 페트리 접시의 재질은 변경할 수 있습니다. 그러나 페트리 접시와 여과지의 직경은 동일해야합니다.</li>
</ol>2. 종자 담그기 및 발아 준비
<ol><li>종자 최적화를 위해 Hongtianhu 101 및 Xinxiang 8 종자의 평균 직경이 각각 4.2mm 및 3.7mm 인 각 품종에서 일관된 크기와 전체 입자를 가진 고추 종자를 선택하십시오. 테스트 작업량에 따라 선택한 총 시드 수를 계산합니다.</li>
	<li>종자 소독을 위해 선택한 고추 종자를 0.2 % KMnO4 용액에 15 분 동안 담근 다음 증류수로 5 회 헹굽니다.</li>
	<li>종자 담그기의 경우 멸균 된 씨앗을 증류수에 옮기고 24 시간 동안 담가 두십시오. 증류수로 씨앗을 여러 번 헹구고 나중에 사용하기 위해 건조시킵니다. 알림: 다른 작물에 대한 씨앗의 담그는 시간은 다를 수 있습니다.</li>
</ol>3. 종자 발아 및 묘목 성장
<ol><li>혼합 염의 6가지 농도를 준비합니다: 0(대조군), 3, 5, 10, 15 및 20g/L. 전도도 측정기를 사용하여 염 용액의 전도도를 측정합니다. 용액 전도도 EC 값은 각각 0.092, 3.05, 4.73, 8.33, 11.53 및 15.22ms/cm입니다.</li>
	<li>종자 준비를 위해 40 개의 고추 씨앗을 두 층의 여과지가있는 페트리 접시에 골고루 놓습니다. 6 개의 실험 처리를 위해 시드를 준비하고 각 처리를 5 회 반복하십시오.</li>
	<li>종자 발아를 위해 여과지가 촉촉하게 유지되도록 페트리 접시에 6 가지 혼합 소금 농도를 적당량 첨가하십시오. 어둠 속에서 발아를 위해 28 ° C 및 80 % 공기 습도의 공기 인큐베이터에 씨앗을 놓습니다.</li>
	<li>종자 발아 후, 파종 후 450 일 동안 인큐베이터에서 묘목이 빛 (약 12 Lux의 광도, 12/12h의 광주기)에서 계속 자라도록합니다. 묘목 성장 단계의 온도 및 습도는 발아 단계에서 사용되는 온도와 습도와 동일해야합니다.</li>
	<li>촉촉한 여과지를 유지하기 위해 12 시간마다 배양 접시에 용액을 보충하고 페트리 접시에 일정한 혼합 염 농도를 유지하기 위해 혼합 염 용액의 해당 농도로 24 시간마다 여과지를 완전히 씻으십시오. 알림: 젖은 종자에 첨가되는 소금 용액의 양은 종자 발아 및 성장 단계에 따라 조정할 수 있습니다. 배양 접시에서 일정한 농도의 소금 용액을 유지하기 위해 많은 방법을 사용할 수 있습니다. 이 실험에 기재된 방법 이외에, 증류수를 중량으로 첨가하는 전략이 사용될 수있다.</li>
</ol>4. 지표의 측정 및 계산
<ol><li>종자 발아 지수의 결정<ol><li>파종 후 매일 발아율을 결정하고, 방사형 파괴 종자 코트가 발아 마커로 종자 직경 길이의 절반에 도달합니다.</li>
		<li>다음 공식을 사용하여 발아율, 발아 잠재력, 상대 염분율, 발아 지수 및 종자 발아 활력 지수를 계산합니다. 발아율(%) = (파종 후 7일째 정상 발아종자수/시험종자수) × 100 발아 잠재력 (%) = (파종 후 3 일째에 정상적인 발아 종자 수 / 시험 종자 수) × 100 상대 염율(%) = (대조 발아율 - 처리 발아율)/대조 발아율 × 100 파종 후 7일째의 종자 발아율을 사용하여 계산 발아 지수 (GI) = ∑ [gt / dt] 여기서 Gt는 파종 후 일정 기간 (t)의 종자 발아 수를 나타내고 Dt는 해당 발아 일을 나타냅니다. 종자 발아 활력 지수 (VI) = GI x S 여기서 S는 루트 길이입니다.</li>
	</ol></li>
	<li>묘목 성장 지수의 결정<ol><li>파종 후 14 일째에 각 페트리 접시에서 10 개의 대표 묘목을 무작위로 선택하고 뿌리 길이와 배축 길이를 측정합니다.</li>
		<li>칼을 사용하여 후추 묘목을 방사형과 지상 부분의 두 부분으로 나눕니다. 닦아서 묘목에서 물을 제거하고 묘목의 무게를 별도로 측정하여 신선한 무게를 결정하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>고추의 항산화 효소 활성, 말론 디 알데히드 (MDA) 수준 및 프롤린 (Pro) 함량을 다음과 같이 결정하십시오.<ol><li>고추 묘목을 보존하려면 파종 후 14 일째에 각 처리에서 대표적인 전체 고추 묘목 (약 24.0g)을 선택하십시오. 지표수를 제거한 후 즉시 묘목을 액체 질소에 1 분 동안 얼리고 초저온 (-80 ° C)의 냉장고에 보관하십시오. 알림: 초저온 냉장고에 보관된 고추 묘목의 샘플 수는 일부 지표를 다시 테스트해야 하는 경우를 대비하여 충분해야 합니다.</li>
		<li>삼중으로 수집 된 각 처리에서 약 1.0g의 묘목 샘플을 회수합니다. 묘목 샘플을 원심 분리 튜브에 넣고 액체 질소를 첨가 한 다음 연삭 막대를 사용하여 샘플을 분쇄하여 묘목의 생리적 지수를 결정합니다. 결정된 지수와 측정 방식은 다음과 같습니다.</li>
		<li>각인자에 대해 상용 키트(분광광도계 기반)를 사용하여 묘목 보호 효소 활성(퍼옥시다아제[POD], 카탈라아제[CAT], 슈퍼옥사이드 디스뮤타제[SOD]), 말론디알데히드(MDA) 및 프롤린(Pro) 함량을 결정합니다. 알림: 이전 관찰에서는 15와 20 g / L 혼합 염 농도 사이의 염분 스트레스에 차이가 없음을 보여주었습니다. 결과적으로 5가지 염 농도(0, 3, 5, 10 및 15g/L)만 측정됩니다.</li>
	</ol></li>
	<li>회원 기능 방법을 사용한 내염능의 종합 평가 참고: 멤버쉽 함수는 염분 손상에 의해 영향을 받는 다양한 생리적 지수를 평가하기 위해 정성적 평가를 정량적 평가(15)로 변환하는 퍼지 수학 방법을 사용한다.<ol><li>Zhoubin Liu et al.15의 다음 공식을 사용하여 멤버십 함수의 값을 계산합니다. 리 = (Xi - Xmin)/(Xmax - Xmin) 특성이 염분 내성과 음의 상관 관계가 있는 경우 다음을 사용하여 역 멤버쉽 함수를 계산합니다. 리 = 1 - (Xi - Xmin)/(X최대 - Xmin) 각 생리적 지수의 멤버쉽 값을 누적하며, 여기서 Xi는 특정 트레이트의 측정값이고, Xmax와 Xmin은 각각 Xi의 최대값과 최소값이며, Ri는 해당 트레이트의 멤버쉽 값입니다.</li>
		<li>종자 발아 특성 (발아 잠재력, 발아율, 발아 지수 및 종자 발아 활력 지수), 발아 단계에서의 묘목 성장 특성 (뿌리 길이, 배축 길이, 뿌리 신선한 무게 및 지상 신선한 무게), MDA, Pro 및 회원 기능 값 계산을위한 보호 효소 활성 (CAT, POD, SOD). 멤버십 함수 값은 각 지표에서 가져옵니다.</li>
	</ol></li>
	<li>스프레드시트 및 SPSS 소프트웨어(버전 22.0)를 사용하여 테스트 데이터를 분석 및 처리하고 다중 비교에 LSD(최유의한 차이) 방법을 적용하여 유의한 차이를 식별합니다. Pearson의 상관 분석을 사용하여 복합 염분 응력 하에서 고추의 종자 발아와 묘목 생리학적 지수 간의 상관 관계를 조사합니다.</li>
</ol>

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</ol>

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

이 연구 방법은 실험 결과의 정확성에 영향을 미치는 네 가지 주요 단계로 구성됩니다. 첫째, 높은 염 농도 용액에서 용질 함량이 증가하여 혼합 염이 잘 용해되지 않고 물에 용해되기 더 어려운 염화칼슘과 같은 시약의 용해도가 낮기 때문에 계량 된 시약은 모르타르에서 완전히 분쇄해야합니다. 또한, 시약은 용량을 결정하기 전에 초음파를 통해 용해되어야합니다. 둘째, 구성된 소금 용액을 매번 완전히 흔들어 페트리 접시에 첨가하여 사용해야합니다. 셋째, 페트리 접시는 소금 용액을 첨가 한 후 적절한 수층을 유지해야하며 각 페트리 접시의 물 상태는 비교적 일정해야합니다. 마지막으로, 종자 발아 후 조명 조건이 일정해야합니다.
이 연구에서는 선택한 페트리 접시의 직경을 변경하여 단일 페트리 접시의 테스트 시드 수를 조정할 수 있습니다. 다른 재배 지역에서 토양 염분 스트레스의 특정 상황에 따라, 각 단일 소금 첨가의 비율은 지역 토양의 염분 스트레스의 실제 상황과 일관성을 유...

염분은 전 세계적으로 작물 생산성의 주요 제한 요소입니다1. 현재 세계 관개 토지의 거의 19.5 %와 마른 토지의 2.1 %가 염분의 영향을 받고 있으며 농경지의 약 1 %가 매년 염분 알칼리 토지로 퇴화합니다. 2050 년까지 경작지의 50 %가 염분 2,3의 영향을받을 것으로 예상됩니다. 해안 근처 또는 주변의 자연 암석 풍화 및 염분 빗물과 같은 자연적 요인 외에도 빠른 표면 증발, 낮은 강우량 및 불합리한 농업 관리 방법은 토양 염화 과정을 악화 시켰습니다. 토양 염화는 식물 뿌리의 성장을 억제하고 식물 뿌리에서 잎으로 물과 영양분의 흡수 및 수송을 감소시킵니다. 이러한 억제는 생리적 물 부족, 영양 불균형 및 이온 독성을 초래하여 작물 생산성을 감소시키고 작물 수확량을 완전히 손실시킵니다. 경작지의 염분화는 점차 세계 농업 식량 생산에 영향을 미치는 가장 중요한 비 생물 적 스트레스 요인 중 하나가되고 있습니다4. 소금 스트레스는 농업에 사용할 수있는 경작지를 감소시켜 미래 농산물의 수요와 공급간에 상당한 불균형을 초래할 수 있습니다. 따라서 토양 염분이 작물 성장 및 생리 학적 및 생화학 적 메커니즘에 미치는 영향을 탐구하는 것은 내염성 품종의 육종, 염분 토양의 지속 가능한 이용 및 농산물의 안전성에 도움이됩니다.
후추 (고추 annuum L.)는 높은 영양 및 약용 가치로 인해 전 세계적으로 심어 져 있습니다. 예를 들어, 캡사이신은 후추의 매운 맛을 담당하는 알칼로이드입니다. 캡사이신은 통증 완화, 체중 감소, 심혈관, 위장관 및 호흡기 시스템 개선 및 기타 여러 응용 분야에서 사용할 수 있습니다5. 후추는 또한 생리 활성 물질, 특히 다양한 항산화 화합물(카로티노이드, 페놀, 플라보노이드)과 비타민 C6가 풍부합니다. 현재 고추는 중국에서 재배 면적이 가장 큰 채소 작물로 연간 재배 면적이 1.5 x 106 헥타르 이상으로 중국 전체 채소 재배 면적의 8 % -10 %를 차지합니다. 후추 산업은 중국에서 가장 큰 채소 산업 중 하나가되었으며 가장 높은 생산량을 가지고 있습니다7. 그러나 고추 재배는 종종 다양한 생물학적 (해충 및 곰팡이) 및 비 생물 적 스트레스, 특히 염분 스트레스에 노출되어 종자 발아, 성장 및 발달에 직접적인 부정적인 영향을 미쳐 고추 열매 수확량과 품질을 감소시킵니다8.
종자 발아는 식물과 환경 간의 상호 작용의 첫 단계입니다. 종자 발아는 주변 배지의 변동, 특히 토양 염분 스트레스에 매우 민감하여 생리학 및 신진 대사에 역전 된 영향을 미치고 결국 작물의 정상적인 성장, 발달 및 형태 형성을 방해 할 수 있습니다9. 이전 연구에서는 염분 스트레스 하에서 고추 종자 발아 및 묘목 성장을 광범위하게 조사했습니다. 그러나 대부분의 연구에서는 스트레스 유도를 위한 유일한 염으로 NaCl을 사용했습니다10,11,12. 그러나 토양 염 손상은 주로 나트륨, 칼슘 및 마그네슘 염의 해리에 의해 생성 된 Na +,Ca 2+, Mg2+, Cl-, CO3 2- 및 SO42- 이온 독성으로 인한 것입니다. 이온 간의 시너지 효과와 길항 작용으로 인해 혼합 염과 단일 염이 작물 성장 및 발달에 미치는 영향은 상당히 다를 수 있습니다. 그러나 고추 종자 발아 및 혼합 소금의 성장에 해당하는 특성은 여전히 불분명합니다. 따라서 내염성에 현저한 차이가있는 두 가지 고추 품종이이 연구의 재료로 사용됩니다. 7 가지 염의 등몰 혼합 후 고추 종자 발아, 성장 및 생리 학적 및 생화학 적 지수에 대한 다양한 염분 농도의 영향을 분석하면 염분 스트레스에 대한 고추 종자 발아의 반응 메커니즘을 밝힐 수 있습니다. 또한 강한 고추 묘목을 재배하기위한 이론적 근거를 제공 할뿐만 아니라 식염수 경작지에서 높은 수확량과 고품질 재배를 제공 할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>염화칼슘</td><td>Shanghai Experiment Reagent Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>원심 분리기 기계</td><td>Shanghai Luxianyi Centrifuge Instrument Co., Ltd., 중국</td><td>TGL-16M</td><td></td></tr><tr><td>원심 분리기 튜브</td><td>없음</td><td></td><td></td></tr><tr><td>전도도 측정기</td><td>Shanghai Instrument& Electronics Science Instrument Co., Ltd., 중국</td><td>DDSJ-308F</td><td></td></tr><tr><td>항온 항습 상자</td><td>Ningbo Laifu Technology Co., Ltd., 중국</td><td>PSX-280H</td><td></td></tr><tr><td>디지털 디스플레이 버니어 캘리퍼스</td><td>델리 그룹 Co., Ltd., 중국</td><td>DL90150</td><td></td></tr><tr><td>전자 저울</td><td>Mettler Toledo Instruments (Shanghai) Co., Ltd., 중국</td><td>ME802E/02</td><td></td></tr><tr><td>여과지</td><td>Hangzhou Fuyang North Wood Pulp and Paper Co., Ltd., China</td><td>GB/T1914-2017</td><td></td></tr><tr><td>그라인딩 로드</td><td>없음</td><td>없음</td><td></td></tr><tr><td>Hongtianhu&nbsp; 101</td><td>Seminis Seed (Beijing) Co., Ltd., China</td><td>11933955/100147K1-137</td><td></td></tr><tr><td>Ice machine</td><td>Shanghai Kehuai Instrument Co., Ltd., China</td><td>IM150G</td><td></td></tr><tr><td>액체 질소</td><td>없음</td><td>없음</td><td></td></tr><tr><td>염화마그네슘</td><td>Tianjin Kermel 화학 시약 Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>황산 마그네슘</td><td>Tianjin Kermel 화학 시약 Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>페트리 접시</td><td>Jiangsu Yizhe Teaching Instrument Co., Ltd., 중국</td><td>I-000163</td><td></td></tr><tr><td>포켓 나이프</td><td>없음</td><td></td><td></td></tr><tr><td>없음 과망간산 칼륨 (KMnO4</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>순수 장비</td><td>Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., 중국</td><td>UPT-I-20T</td><td></td></tr><tr><td>중탄산 나트륨</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>탄산나트륨</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>나트륨 염화물</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>황산나트륨&nbsp;</td><td>Xilong Scientific Co., Ltd., 중국</td><td>분석 시약</td><td></td></tr><tr><td>테스트 키트</td><td>Suzhou Keming, Biotechnology Co., Ltd, Suzhou., 중국</td><td>분광 광도계 방법</td><td></td></tr><tr><td>초저온 냉동고</td><td>SANYO Techno Solution TottoriCo., Ltd.</td><td>MDF-382</td><td></td></tr><tr><td>자외선 가시광선 분광 광도계</td><td>Shanghai Precision Scientific Instrument Co., Ltd., 중국</td><td>&nbsp; 760CRT</td><td></td></tr><tr><td>Xinxiang 8</td><td>Jiangxi Nongwang High Tech Co., Ltd., 중국</td><td>GPD 고추 2017(360013)</td><td></td></tr></tbody></table>

복합 염분 응력이 종자 발아 및 내염성에 미치는 영향 분석 후추 분석 (고추 연감 l.)

Analysis of Effect of Compound Salt Stress on Seed Germination and Salt Tolerance Analysis of Pepper (Capsicum annuum L.)

발아 단계에서 고추 (Capsicum annuum L.)의 내염성과 생리적 메커니즘을 결정하기 위해 내염성에 큰 차이가있는 Hongtianhu 101 및 Xinxiang 8 품종이 연구 자료로 사용됩니다. Na2CO3, NaHCO3, NaCl, CaCl2,MgCl2, MgSO4 및 Na2SO4의 등가 몰비를 사용하여 유도된 0, 3, 5, 10, 15 및 20g/L의 6가지 혼합염 농도가 사용된다. 그 효과를 결정하기 위해 종자 발아, 묘목 성장 및 생리학의 관련 지수를 측정하고 회원 기능 분석을 사용하여 염분 내성을 종합적으로 평가합니다. 결과는 혼합 염 농도가 증가함에 따라 두 품종의 발아 잠재력, 발아 지수, 발아율, 종자 발아 활력 지수, 뿌리 길이 및 뿌리 신선한 무게가 크게 감소하는 반면 상대 염 비율은 점차 증가하는 것으로 나타났습니다. 배축 길이와 지상의 신선한 무게는 먼저 증가한 다음 감소하는 반면, 말론 디 알데히드 (MDA), 프롤린 (Pro) 함량, 카탈라아제 (CAT), 퍼 옥시 다제 (POD) 및 슈퍼 옥사이드 디스 뮤타 제 (SOD) 활성은 감소 한 다음 증가합니다. Hongtianhu 101 종자의 발아 잠재력, 발아 지수, 발아율, 종자 발아 활력 지수, 뿌리 길이, 뿌리 신선한 무게, MDA 및 Pro 함량 및 CAT 활성은 여기에 사용 된 모든 염 농도에 대해 Xinxiang 8보다 높습니다. 그러나 배축 길이, 지상 신선한 무게 및 상대 염분 비율은 Xinxiang 8보다 Hongtianhu 101에서 더 낮습니다. 염분 내성에 대한 포괄적 인 평가는 두 회원 함수 지수의 총 가중 값이 먼저 증가한 다음 혼합 염 농도가 증가함에 따라 감소한다는 것을 보여줍니다. 회원 기능 값이 가장 높은 5g / L와 비교하여 3g / L, 10g / L 및 15g / L의 염 농도에서 지수는 각각 4.7 % -11.1 %, 25.3 % -28.3 % 및 41.4 % -45.1 % 감소합니다. 이 연구는 내염성 고추의 육종에 대한 이론적 지침과 내염성 및 내염성 재배와 관련된 생리적 메커니즘의 분석을 제공합니다.

종자 발아 특성 혼합 염 농도가 증가함에 따라 Hongtianhu 101 및 Xinxiang 8의 발아 잠재력과 발아 지수가 크게 감소합니다. 두 품종 모두 소금 농도가 0-3g/L에서 급격히 감소하고 소금 농도가 3-20g/L에서 느리고 꾸준히 감소합니다(그림 1A,B). 두 품종의 발아율은 혼합 염 농도가 증가함에 따라 점차 감소하고 품종에 대한 상대 염율은 점차 증가합니다. 3-15g/L의 염 농도에서 발아율과 상대 염분율에는 큰 차이가 없습니다. 그러나 그 차이는 다른 모든 염 농도에서 중요합니다 (그림 1C, D). 두 품종 사이의 염분 내성과 관련하여 혼합 염 농도가 증가하는 Hongtianhu 101 종자의 발아 잠재력, 발아 지수 및 발아율은 Xinxiang 8보다 높지만 상대 염분 비율은 Xinxiang 8보다 ...

아래 논문은 6 가지 혼합 염 농도에 대한 염분 내성 차이가있는 두 고추 품종의 종자 발아, 묘목 성장 및 생리 학적 지수를 측정하는 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜은 후추 품종의 내염성을 평가하는 데 사용할 수 있습니다.

복합 염분 응력이 종자 발아 및 내염성에 미치는 영향 분석 후추 분석 (고추 연감 L.)

To determine the salt tolerance and physiological mechanism of pepper (Capsicum annuum L.) at the germination stage, the Hongtianhu 101 and Xinxiang 8 ...

이 연구는 염분 내성 고추 품종을 육종하고 염분 알칼리 토양에서 높은 수율과 품질을 보정하기위한 이론적 지침을 제공합니다. 실험 기간은 고효율, 빠른 속도, 우수한 반복성 및 정확한 결과로 15일입니다. 이 기술은 다른 작물의 내염성 평가를위한 기술 참조 및 이론적 지침을 제공 할 수 있습니다.예비 전문가가 씨앗의 내염성을 평가하기를 원합니다. 내염성이 강한 Hongtianhu 101 품종과 내성이 낮은 Xinxiang 8 품종의 작물 종자를 준비하는 것으로 시작하십시오. 사용 직전에 종자 소독 시약으로 0.2 % 과망간산 칼륨 용액 2000 밀리리터를 준비하십시오.탄산나트륨, 중탄산나트륨, 염화나트륨, 염화칼슘, 염화마그네슘, 황산마그네슘 및 황산나트륨을 포함하는 7가지 염을 사용하여 혼합염 용액을 제조한다. 그런 다음 일회용, 9cm 페트리 접시 및 9cm 중간 속도 정성 여과지를 준비하십시오. Hongtianhu 101의 경우 평균 직경이 4.2mm, Xinxiang 8 종자의 경우 평균 직경이 3.7mm인 각 품종에서 일관된 크기와 전체 입자를 가진 고추 씨앗을 선택하십시오.테스트 작업량에 따라 선택한 총 시드 수를 계산합니다. 종자 소독을 위해 선택한 고추 씨앗을 0.2 % 과망간산 칼륨 용액에 담그십시오. 15 분 후 증류수로 씨앗을 5 번 헹굽니다.멸균 된 씨앗을 증류수에 24 시간 동안 담근다. 완료되면 나중에 사용하기 위해 건조하기 전에 증류수로 씨앗을 여러 번 헹굽니다. 6가지 농도의 혼합염을 준비하고 전도도 측정기를 사용하여 염 용액의 전도도를 측정한다.두 층의 여과지가있는 페트리 접시에 40 개의 고추 씨앗을 골고루 놓습니다. 6 개의 실험 처리와 5 개의 반복을 위해 씨앗을 준비하십시오. 발아를 위해 6 가지 혼합 소금 농도의 적절한 양을 페트리 접시에 추가하여 여과지가 촉촉한지 확인하십시오.씨앗을 섭씨 28도, 공기 습도 80%어둠 속에서 발아를 위해 공기 인큐베이터에 넣습니다. 종자 발아 후 묘목이 약 14lux의 광도로 450일 동안 자라도록 합니다. 인큐베이터에서 12 시간의 어둠과 12 시간의 광주기.촉촉한 여과지를 유지하기 위해 12 시간마다 배양 접시에 용액을 보충하고 24 시간마다 여과지를 해당 혼합 염 용액 농도로 완전히 씻어 페트리 접시에 일정한 혼합 염 농도를 유지하십시오. 종자 발아 지수의 경우, 종자 코트를 급진적으로 파괴하여 파종 후 발아 마커로 종자 직경 길이의 절반에 도달하여 매일 발아율을 결정하십시오. 묘목 성장 지수를 결정하려면 파종 후 14 일째에 각 페트리 접시에서 10 개의 대표 묘목을 무작위로 선택하고 뿌리 길이와 배축 길이를 측정합니다.칼을 사용하여 고추 묘목을 급진적 인 부분과 지상 부분으로 나눕니다. 닦아서 묘목에서 물을 제거하고 묘목의 무게를 별도로 측정하여 신선한 무게를 결정하십시오. 고추 묘목을 보존하려면 파종 후 24 일째에 각 처리에서 약 14g의 대표적인 전체 후추 묘목을 선택하십시오.지표수를 제거한 후 즉시 모종을 액체 질소로 1 분 동안 동결시킵니다. 그리고 섭씨 영하 80 도의 냉장고에 보관하십시오. 삼중으로 수집 된 각 처리에서 약 1 그램의 묘목 샘플을 회수하십시오.즉시 묘목 샘플을 원심 분리기 튜브에 넣으십시오. 액체 질소를 첨가하고 분쇄 막대를 사용하여 샘플을 분쇄하여 묘목 보호 효소 활성, 말론 디 알데히드 및 프롤린 함량을 포함한 묘목의 생리적 지수를 결정합니다. 혼합 염 농도가 증가함에 따라 Hongtianhu 101 및 Xinxiang 8의 발아 잠재력과 발아 지수가 크게 감소했습니다.혼합 염 농도가 증가함에 따라 두 품종의 발아율이 점차 감소하고 품종에 대한 상대적 염분 손상률이 증가했습니다. Hongtianhu 101의 종자 발아 활력 지수는 각 혼합 염 농도 수준에서 Xinxiang 8의 종자 발아 활력 지수보다 높았습니다. 리터당 15g 혼합 농도에서 Hongtianhu 101과 Xinxiang 8의 뿌리 길이는 대조군에 비해 각각 89.4%와 91.1% 감소했으며 뿌리 신선한 무게는 각각 81.7%와 71.2% 감소했습니다.품종 차이에 따라 Xinxiang 8의 배축 길이와 지상 신선한 무게는 각 염 농도에서 Hongtianhu 101보다 높았습니다. 리터당 5 그램과 3 그램의 말론 디 알데히드와 프롤린 함량은 각각 가장 낮은 값에 도달했습니다. 리터당 3-15 그램의 염 농도에서 Xinxiang 8의 프롤린 함량은 천천히 증가하고 비교적 안정적으로 유지되는 반면 Hongtianhu 101의 프롤린 함량은 빠르게 증가했습니다.혼합 염 농도가 증가함에 따라 Hongtianhu 101 및 Xinxiang 8 묘목의 카탈라아제, 과산화 효소 및 슈퍼 옥사이드 디스 뮤타 아제 활성이 감소한 다음 증가하여 리터당 3g에서 가장 낮은 값을 얻었습니다. Hongtianhu 101의 카탈라아제 및 과산화 효소 활성은 Xinxiang 8보다 높았으며 그 차이는 점차 증가했습니다. 촉촉한 여과지를 유지하고 여과지를 완전히 세척하여 페트리 접시에 혼합 염 농도를 일정하게 유지하십시오.연구원은 보다 광범위하고 심층적인 결과를 얻기 위해 다양한 혼합 염의 비율을 변경하는 것과 같은 이 실험을 기반으로 혁신할 수 있습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

내생 박테리아는 식물 조직에 서식하고 식물 성장을 촉진합니다.염분 스트레스 하에서 토마토 식물 성장에 미치는 영향을 연구하려면 잎과 뿌리가 발달하는 무균 묘목부터 시작하십시오.실험 묘목의 뿌리를 내생 박테리아의 현탁액에 담그십시오. 대조군은 접종하지 않은 상태로 두십시오.외부 미생물 간섭을 방지하기 위해 두 그룹을 멸균된 토양으로 옮기고 성장 챔버에서 배양합니다.토양에서 박테리아는 일시적인 뿌리 구멍을 통해 들어가 내부 조직에 식민지를 형성하고 다른 식물 부분으로 퍼집니다. 집락화를 강화하기 위해 박테리아 현탁액을 다시 바르십시오.두 그룹 모두에서 점진적인 염분 스트레스를 유도하기 위해 격일로 염화나트륨 용액을 적용합니다.염분 스트레스는 식물 세포를 손상시키는 활성 산소종(ROS) 생성을 유발합니다.내생균은 ROS 소거 효소를 생산하고 식물 성장을 위한 식물 호르몬과 미량 영양소를 공급하여 스트레스를 완화합니다.배양 후 실험 묘목은 성장을 유지하는 반면 대조군은 발달이 멈춥니다.

내생 박테리아 집락화를 통한 토마토 식물의 염분 스트레스 내성 향상

우리는 애기 장대 씨앗에서 씨앗 코트 침구 분석 (SCBA)를 조립하는 절차를 제시한다. SCBA는 유전자와 체외에서 탐색 할 수있는 강력한 도구가 될 수 있도록 표시 방식 휴면 종자의 빛 신호에 대한 응답으로 배유 컨트롤 종자 발아. SCBA는 배유가 배아의 성장에 영향을 미칠 것으로 의심되는 모든 상황에서 적용 할 수있는 원리입니다.

유전자 탐구하는 종피 침구 분석<em&gt; 체외</em&gt; 어떻게 배젖 컨트롤 종자 발아에<em&gt; 애기 장대</em

칼슘 신호는 식물에서 다양한 생물학적 과정을 조절한다. 여기에 우리가 공간과 시간 칼슘에 의한 비 생물 적 스트레스를 모니터링하기위한 방법을 제시 애기 세포와 유전자 인코딩 칼슘 지표 애큐 오린 또는 Case12를 사용하여 조직에 2 + 신호.

측정 공간적 칼슘 2 + 신호

여기에서 우리는 장사 표시 씨 스트립 및 테트라 졸륨 클로라이드 (TZ) 생존 능력 테스트를 사용하여 필드 조건에서 종자 생존, 발아 및 휴면을 평가하기위한 프로토콜을 제시한다.

이 필드 조건에서 종자 발아, 휴면 및 사망률을 평가하기위한 신뢰할 수있는 방법

여기에서 우리는 스트레스 고립 된 엽록체로 단백질 가져 오기를 연구하는 새로운 방법을 설명합니다. 상기 방법은 신속하고 간단하고 엽록체 단백질 가져올 다른 스트레스 조건의 결과 및 대응하는 조절 메커니즘을 연구에 적용 할 수있다.

스트레스 식물에서 분리 된 엽록체로 단백질 가져 오기의 분석

검은 후추 식물의 기저 머리를 핀찌르는 것은 그것을 손상시키는 간단하고 시간을 절약 할 수있는 방법입니다. 여기에서는 검은 후추 식물을 감염시키기위한 비디오와 함께 자세한 단계를 제공했습니다.

검은 후추 식물에 대한 Phytophthora capsici에 대한 효과적인 접종 방법

이 논문은 기공 발달을 제어하는 유전자를 특성화하기 위해 표피 껍질을 사용하지 않는 두 가지 표현형 방법을 설명합니다. 첫 번째 방법은 톨루이딘 블루 O-염색 식물 표피를 사용하여 기공 표현형을 분석하는 방법을 보여줍니다. 두 번째 방법은 기공 리간드를 식별하고 생물학적 활성을 모니터링하는 방법을 설명합니다.

표피 표현형 점수를 통한 기공 발달에 관여하는 유전자 식별

이 문서에서는 벼의 AM 강화 염분 스트레스 내성을 조사하기 위해 수목 균근(AM) 곰팡이 접종물을 생성하는 프로토콜에 대해 설명합니다.

수목 균근(AM) 곰팡이 접종물 생산 및 식염수 조건에서 쌀과 AM 공생의 표현형 평가

이 문서는 소설 프로토콜 및 시약 높은 컨텐츠 분석을 사용하여 뉴런과 astrocytes의 공동 문화 화합물과 치료의 neurotoxic 효과 민감한 측정을위한 설정에 대해 설명합니다. 결과는 높은 컨텐츠 분석 neurotoxicity 평가에 대한 흥미 진진한 소설 기술을 대표하는 것을 보여줍니다.

Neurotoxicity 높은 컨텐츠 분석의 연결 및 Astrocyte 공동 문화 분석

여기서 우리는 히스톤 바인딩 도메인에 차이가 단백질 isoforms의 게놈 차원 위치 분석을 위해 염색질의 immunoprecipitation (칩) 프로 시저를 발표하고 있습니다. 우리는 KDM5A/JARID1A/RBP2 히스톤 demethylase의 목표물을 식별 칩 Seq 분석에 적용됩니다.

이소형 특정 유전자 목표를 식별 칩을 사용하여 게놈 차원의 분석

배우세요 복합 염분 응력 조건에서 고추 종자 발아 및 묘 생장을 평가하는 방법을. Hongtianhu 101과 Xinxiang 8 품종의 내염성 차이를 분석하여 염분 토양에서 작물 육종에 활용할 수 있는 통찰을 제공합니다.

복합 염분 응력이 종자 발아 및 내염성에 미치는 영향 분석 후추 분석 (고추 연감 L.)

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