Name: 고품질 증분 코어를 사용하기 위한 고급 워크플로 - 새로운 기술 및 장치 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-10T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 40 s
Description: 배우세요 무선 드릴과 토크 증폭기를 활용한 고품질 증분 코어 채취법으로 나무 목재 해부학 연구의 정확성을 높이세요. 현장에서 코어 샤프너를 연마하는 방법과 미세 단면 제작 기술도 함께 익혀보세요.

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1. 수동 코어 링
<ol><li>증분 코어를 조립하고 연구 질문에 따라 나무 줄기의 코어 링 위치를 선택하십시오 (예 : 지형 재구성의 경우 기계적 응력 방향과 평행, 연령 결정의 경우 가능한 한 낮춤). 알림: 항상 각 스템에서 두 개의 코어를 가급적이면 반대 방향으로 가져옵니다.</li>
	<li>코어 링 위치를 선택한 후 줄기의 성장 방향에 대해 직각으로 corer를 놓습니다.</li>
	<li>드릴링하는 동안 고정하기 위해 코어의 뒤쪽 끝에 푸셔를 놓습니다.</li>
	<li>안정적인 위치를 확보하고 푸셔에 기대어 절삭날에 압력을 가하십시오.</li>
	<li>드릴의 나사산 부분이 줄기로 완전히 바뀔 때까지 양손으로 코러의 손잡이를 돌립니다.</li>
	<li>압력을 풀고 푸셔를 제거하십시오.</li>
	<li>corer가 pith에 도달하거나 구멍을 뚫을 때까지 양손으로 corer의 핸들을 돌리기 시작하십시오. 스템 옆의 손잡이에 있는 추출기(corer와 길이가 같음)를 잡고 이를 확인하십시오.</li>
	<li>열린 면이 위에 있는 추출기를 잡고 코러에 완전히 삽입합니다. 코어를 뒤로 돌리면 (한 바퀴 돌림) 줄기에서 코어가 끊어집니다. 추출기를 코어에서 빼냅니다.</li>
	<li>추출기에서 코어를 제거하고 종이 빨대에 보관하십시오.</li>
	<li>줄기에서 코러를 제거하고 손잡이에 보관하십시오.</li>
</ol>2. 무선 드릴로 코어 링
<ol><li>토크 부스터가 장착된 무선 드릴을 사용하고 WSL에서 개발한 증분용 특수 어댑터를 추가합니다.</li>
	<li>토크 부스터의 어댑터에 증분 코어를 놓고 연구 작업에 따라 나무 줄기의 코어링 위치를 선택합니다(1.1단계 참조).</li>
	<li>코어 링 위치를 선택한 후 줄기의 성장 방향에 대해 직각으로 corer를 놓습니다.</li>
	<li>안정적인 위치를 확보하고 무선 드릴을 단단히 잡고 절삭날에 압력을 가하십시오.</li>
	<li>무선 드릴을 시작하고 드릴의 나사산 부분이 스템에 완전히 코어가 들어갈 때까지 천천히 돌린 다음 코어가 속구멍에 도달하거나 드릴링할 때까지 속도를 높입니다. 알림: 깊이는 1.7단계에서 설명한 대로 확인할 수 있습니다.</li>
	<li>corer에서 무선 드릴을 제거하고 핸들을 그 위에 놓고 추출기를 사용하여 1.8단계에서 설명한 대로 코어를 제거합니다.</li>
	<li>증분 코어를 종이 빨대에 보관하십시오.</li>
	<li>손잡이를 제거하고 무선 드릴을 코러에 놓고 스템에서 코어를 제거합니다.</li>
</ol>3. 증분 코어의 절삭 날 날카롭게
<ol><li>WSL 선명하게 하기 지원 사용<ol><li>새로 디자인 된 홀더를 가져 와서 바닥에 놓습니다.</li>
		<li>증분 코어를 포함한 무선 드릴을 지정된 지지점에 놓고 장착 브래킷을 닫아 무선 드릴을 고정합니다.</li>
		<li>시동 버튼에 테프론 블록을 고정하여 무선 드릴을 시작하고 작동하도록 합니다. 원추형 숫돌을 가져 와서 절삭 날 내부를 연마하십시오. 참고: 접촉각은 절삭날 내부에 따라 다릅니다. 연삭 석재는 내부 측벽과 완전히 접촉하여 절삭 날에서 코러의 내부 넓어짐까지 도달해야합니다.</li>
		<li>직사각형 숫돌을 가져 와서 절삭 날의 바깥 쪽을 갈아서 버링을 제거합니다. 알림: 이것은 가장자리에 이전에 형성된 버를 내부에서 연마하여 제거하고 마지막으로 가장자리를 날카롭게하는 데 필요합니다.</li>
		<li>스타터 버튼에서 테프론 블록을 제거하여 드릴을 멈추고 장착 브래킷을 열어 무선 드릴을 분리한 다음 장치를 홀더에서 꺼냅니다.</li>
	</ol></li>
	<li>절삭날의 선명도 확인<ol><li>무선 드릴의 어댑터에서 증분 코어를 제거합니다.</li>
		<li>날카롭게하는 지지대의 나무 판에 종이 한 장을 놓습니다.</li>
		<li>corer를 수직으로 잡고 corer의 절삭 날을 용지에 놓습니다.</li>
		<li>코러에 압력을 가하지 않고 수직으로 잡고 코러를 돌리십시오-코러의 무게만 종이를 눌러야 합니다.</li>
		<li>코러를 들어 올리고 둥근 종이 조각이 코러의 절삭 날 내부에 남아 있는지 확인하십시오. 그렇다면 코러는 날카 롭습니다. 그렇지 않은 경우 선명하게 하기 절차를 반복합니다(3.1단계). 코어 외부가 매끄럽지 않은 경우 전체 절차(3.1단계 및 3.2단계)를 반복합니다.</li>
	</ol></li>
</ol>5. 수용성 테이프를 사용하여 전체 증분 코어의 미세 섹션 절단
<ol><li>마이크로톰 옆에 긴 유리 슬라이드를 놓고 전체 길이를 따라 슬라이드 중간에 약간의 물을 추가합니다.</li>
	<li>코어 마이크로톰의 샘플 홀더에 코어를 놓습니다. 알림: 단면을 실제 단면으로 자르려면 섬유의 방향이 똑바로 세워져 있는지 확인하십시오.</li>
	<li>코어가 블레이드 가장자리에 거의 닿을 때까지 샘플 홀더를 들어 올립니다. 블레이드를 코어 위로 당겨 상단을 자릅니다.</li>
	<li>코어의 시작 부분에 나이프를 다시 놓고 샘플을 약 10μm 들어 올린 다음 최소 2mm 너비의 평면 표면이 얻어 질 때까지 절단 절차를 반복합니다.</li>
	<li>브러시(21)를 사용하여 절단면에 옥수수 전분 용액을 첨가한다.</li>
	<li>천을 사용하여 코어 상단에서 잉여 용액을 제거하십시오.</li>
	<li>수용성 테이프 스트립을 코어와 같은 길이로 자릅니다. 테이프의 한쪽면을 코어의 시작 부분에 놓고 코어의 시작 부분이 마이크로톰의 블레이드를 향하도록 약 1cm의 겹침을 맞 춥니 다.</li>
	<li>손가락을 사용하여 표면의 테이프를 쓰다듬어 코어 표면에 테이프를 부착하십시오.</li>
	<li>마이크로톰의 샘플을 15-20μm 들어 올리고 테이프의 겹치는 부분을 약간 들어 올린 다음 마이크로톰 블레이드를 코어 가장자리에 놓습니다.</li>
	<li>테이프 끝을 잡고 섹션을 자릅니다.</li>
	<li>얇은 부분이 붙어있는 테이프를 잡고 5.1 단계에서 준비한 유리 슬라이드의 물 라인에 컷이 아래를 향하도록 놓습니다.</li>
	<li>약 10초 후, 핀셋을 사용하여 테이프를 한쪽으로 잡고 들어 올리면서 섹션이 유리 슬라이드에 남아 있도록 주의하면서 테이프 제거를 시작합니다.</li>
	<li>이 섹션의 영구 슬라이드를 생성하려면 표준 절차22를 따르십시오.</li>
</ol>

<ol><li>Büntgen, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Scrutinizing+tree-ring+parameters+for+Holocene+climate+reconstructions%5BTitle%5D)+AND+%22Wiley+Interdisciplinary+Reviews%3A+Climate+Change%22%5BJournal%5D)">Scrutinizing tree-ring parameters for Holocene climate reconstructions.</a> Wiley Interdisciplinary Reviews: Climate Change. , 778(2022).</li>
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</ol>

저자는 경쟁하는 재정적 이해 관계가 없다고 선언합니다.

수목 생태 학적 연구23,24에 목재 해부학이 크게 포함되고 나무 고리 연구를 전문으로하는 과학자들과 목재 해부학자 25 간의 활발한 교류가 과거 환경 조건에 대한 새롭고 심층적 인 분석의 광범위한 분야를 열었습니다. 이러한 새로운 연구는 새로운 가능성과 질문을 열었지만 새로운 문제를 야기했습니다.
이 새로운 시대의 "덴드로 해부학"의 빠른 개발에는 많은 수의 샘플이 필요하며, 이는 앞에서 설명한 것처럼 무선 드릴을 사용하여 확실히 지원됩니다. 드릴로 코어를 가져 오는 것이 전혀 소모되지 않는다는 사실 외에도 많은 시간을 절약 할 수 있습니다. 이 백서에 제시된 결과는 수동 코어 링보다 6 배 빠른 샘플링 가능성을 암시하지만 단일 코어에 대한 테스트입니다. 그럼에도 불구하고 정기적 인 샘플링 (한 사람이 코어 링, 한 사람이 코어를 코딩하고 저장)하는 동안 줄기 직경이 약 80cm 인 24 개의 가문비 나무 (각각 전체 길이의 코어 2 개)를 1.5 시간 이내에 코어링했습니다. 이것은 저장, 포장 및 다음 트리로의 이동을 포함하여 하나의 코어에 대해 평균 <2분입니다.
전체 프로세스의 빠른 처리는 증분 코어를 위해 새로 설계된 어댑터를 나사 또는 유사한 클로저로 어댑터 내부에 고정할 필요 없이 사용할 수 있다는 사실에 의해 뒷받침됩니다. 결과적으로 코어를 부수고 추출하기 위해 드릴을 corer의 핸들로 변경하는 것이 빠르고 쉽습니다. 어댑터는 스템이 썩은 경우 또는 (일부 증분 코어에서 흔히 볼 수 있듯이) 스템이 썩은 경우 드릴백하는 동안 코어를 빼낼 수 있도록 설계되었습니다.
그러나 스템에서 코어를 제거 할 때 드릴이 미끄러지지 않고 성공적으로 당겨 질 수 있도록 어댑터를 약간 기울여야합니다 (프로토콜 단계 2.8). 해부학적 프록시(19,26)를 기반으로 긴 연대기를 생성하기 위한 트리 링 연구에 대한 수요가 증가함에 따라 증분 코어에서 마이크로 섹션을 준비하거나 준비 전에 조각으로 절단하거나 전체 마이크로 섹션 22로 절단해야 했습니다. 최대 40cm 길이의 마이크로 섹션의 품질이 여전히 짧은 섹션과 항상 비교할 수는 없지만(예: 수직 확장에서 세포의 가변 각도는 종종 세포벽 측정을 방해함), 반응 목재 또는 파란색 고리(27)의 발생으로 특정 성장 반응을 식별하고 날짜를 지정하는 데 사용할 수 있습니다(그림 6).
결과적으로 샘플의 품질은 해부학적 구조의 성공적인 준비 및 추가 분석을 위한 기본 전제 조건입니다. 이 요구는 증분 코어를 사용할 때 샘플링 캠페인의 선명도에 대해 더 많은주의가 필요합니다. 결과적으로, 마이크로 섹션을 준비하는 것은 매우 시간이 많이 걸리고 노동 집약적 일 수 있으며 때로는 시편이 미리 매립되지 않은 경우 불가능할 수도 있습니다28.
증분 코어의 절삭 날을 손으로 날카롭게하려면 지지대없이 손으로 가장자리를 고르게 연마하기 위해 많은 연습과 경험이 필요합니다. 증분 코어를 연마하기 위해 새로운 드릴 마운트를 사용할 수 있는 기능을 통해 연마 경험이 없는 사용자도 현장에서 코어의 최첨단을 날카롭게 할 수 있습니다. 이제 이 작업을 신속하게 수행할 수 있다는 사실은 향후 채취한 샘플의 품질을 향상시킬 것입니다.
새로운 장비의 사용은 코어의 후속 처리에 분명한 이점을 보여 주지만 무선 드릴은 거의 40 년 전에 개발 및 발표 된 날카롭게하기 위해 소형 장치와 결합 될 수도 있습니다20. Maeglin20 은 목재와 금속29로 만든 "Goodchild의 천공 숫돌"의 수정 세부 사항을 제시했습니다. 요즘,이 장치는 아무런 문제없이 3D 프린터로 모델링하고 인쇄 할 수 있습니다30. 단일 부품을 인쇄하고 현장에서 사용하기 위해 조립하기 위해 숫돌의 상세한 3D 모델만 만들면 됩니다. 개선 가능성은 아직 소진되지 않았으며이 간행물이 많은 동료들이 여기에 제시된 도구를 더욱 개발하도록 영감을 줄 것이라고 확신합니다. 아직 해결되지 않은 장애물은 코어를 추출하기 위해 드릴을 제거하고 코어의 핸들을 추가해야한다는 사실입니다.
전체 증분 코어(22 )의 마이크로 섹션을 절단하는 최종 단계는 여전히 까다로운 문제이다. 앞에서 설명한 바와 같이 수용성 테이프의 적용은 절단시 섹션을 안정화하고 유리 슬라이드에 배치하여 공정을 지원합니다. 그럼에도 불구하고이 절차는 여전히 사용자에게 높은 수준의 경험을 요구합니다.

Dendroecological 연구는 연간 및 기타 나무의 성장 고리의 다양한 특성을 기반으로합니다. "Precursory"분야 dendrochronology는 고리 너비 변화를 매개 변수로 사용하여 단순히 고리의 연대를 측정하고 결과적으로 긴 연대기를 설정합니다. 따라서 밀도 변화, 동위 원소 농도 또는 목재 해부학 적 특성과 같은 다양한 다른 특성을 사용하여 단일 고리 또는 그 구조 및 내용을 환경 매개 변수와 연관시켜 환경 조건이 시간 경과에 따른 나무 성장에 미치는 영향을 더 잘 이해합니다.
수목 생태학뿐만 아니라 수목 기후학은 주로 과거의 기후 조건을 재구성하는 환경 연구에서 중요성이 커졌습니다 1,2,3. 이를 위해서는 수많은 나무의 고리를 자세히 분석해야합니다. 나무 고리 폭 및 밀도를 결정하기 위한 일부 기술(예를 들어, 음파 기술4 또는 드릴링 저항(5,6)에 의해)이 존재하지만, 현재까지 나무로부터 고리의 특성을 추출하는 신뢰할 수 있는 "비파괴적" 방법은 없다. 트리 내의 링 특성에 대한 매우 상세한 분석이나 기저 면적 증가를 추정하려면 관심 트리에서 디스크를 자르는 것이 가장 좋습니다7. 이를 위해서는 특정 분석을 위해 모든 잠재적 관심 트리를 잘라야 합니다. 매년 전 세계적으로 분석되는 엄청난 수의 나무를 염두에 두고이 샘플링 전략은 실용적이지 않습니다. 엄청난 양의 자원을 낭비하더라도 이 전략은 너무 비쌉니다. 이로 인해, 증분 코어의 사용은 트리 링 연구8에서 표준 샘플링 기술로 확립되었습니다. 증분 코어를 사용하면 나무 껍질에서시작하여 (최적의 경우) 나무 9의 속까지 도달하여 줄기에서 목재 코어를 최소 침습적으로 추출 할 수 있습니다.
코어 링은 줄기에 부상을 입히지 만 ~ 1cm 직경의 구멍은 코어 구멍 근처에서 증가 된 목재 형성을 통해이 상처를 닫을 수 있습니다. 구멍 자체를 제외하고 단점은 구멍(10,11)에서 시작하는 곰팡이의 잠재적 확산을 방지하기 위해 세포가 페놀로 채워지는 구멍 주변의 영역 인 "구획화 영역"의 발생입니다. 우리가 아는 한, 증분 코어 링이 적어도 방해받지 않은 고지대 산림에서는 Picea abies12와 온대림13의 여러 활엽수 종을 나타내는 나무 부패 빈도를 크게 증가 시킨다는 증거는 아직 없습니다.
이 샘플링 표준은 전 세계적으로 수십 년 동안 적용되었지만 여전히 몇 가지 문제가 남아 있습니다. 그 중 하나는 기계적 지지없이 코어를 손으로 가져와야하므로 시간이 많이 걸리고 잠시 후 상당히 피곤하다는 사실입니다. 샘플링을 용이하게하기 위해 체인14,15,16,17 대신 코어가 장착 된 전기 톱을 사용하는 것과 같은 몇 가지 (다소 실용적인) 전략이 테스트되었습니다. 전기 톱의 사용은 후자가 충분히 강력하지 않았기 때문에 드릴보다 선호되었습니다. 그러나이 아이디어는 전기 톱의 무게가 크고 연료가 필요하기 때문에 잡히지 않았습니다.
최근 몇 년 동안 목재 해부학 기술은 크게 발전하여 수목 생태 학적 연구18,19에 통합되었습니다. 그러나 증분 코어에서 마이크로 섹션을 절단하여 장기간에 걸쳐 목재 해부학 적 매개 변수를 분석하는 기능은 예기치 않은 문제를 초래했습니다. 종종 코어에서 가져온 마이크로 섹션이 작은 조각으로 부서져 일관된 절단을 생성할 수 없었습니다(그림 1). 이 문제는 나무와 언샵 코어를 코어링하는 수동 기술로 인해 발생했습니다. 코어 링 중에 목재에 가해지는 기계적 응력으로 인해 코어 내에 미세 균열이 발생했습니다. 이러한 미세 균열은 증분 코어의 거시적 검사 중에 발견되지 않았으므로 문제가 발생하지 않았습니다.
수동 코어 링은 핸들을 코러의 뒤쪽 끝에 놓고 스레드가있는 팁을 스템에 누른 다음 코러가 스템 직경의 절반을 약간 넘을 때까지 핸들을 돌리기 시작하여 수행됩니다. 이렇게 하는 동안 코러의 끝은 (분명히) 스템에 고정되지만 핸들로 회전한 코러의 뒤쪽 끝은 적어도 드릴 헤드가 트렁크에 완전히 나사로 고정될 때까지 항상 옆 또는 위아래로 움직여 코러에 더 많은 안내와 안정성을 제공합니다. 고압과 corer의 움직임으로 인해 증분 코어는 가장 바깥쪽 ~5cm에서 자주 왜곡됩니다(그림 1). 선회 중 마찰이 최소로 감소하더라도 다른 공정은 코러 내부의 증분 코어에 응력을 가하고 있습니다. 수동 코어 링은 스템 내부의 코러 절삭 날의 지속적인 움직임을 허용하지 않습니다. 그립을 변경하기 위해 멈추기 전에 최대 한 번 완전히 돌린 다음 드릴링을 계속할 수 있습니다. 회전이 다시 시작될 때마다 마찰이 극복되고 드릴이 다시 회전 할 때까지 코어가 약간 꼬입니다. 이러한 기계적 응력은 잠재적으로 코어 구조에 미세한 균열을 일으킬 수 있습니다.
이 기계적 응력은 코어의 절삭 날이 날카 롭지 않을 때도 증가합니다. 언샵 코어에 대한 가시적 인 표시는 고르지 않은 코어 표면으로, 전체 확장 (20)을 따라 많은 균열을 보여줍니다 (그림 2). 날카롭게하는 빈도는 코어 링 할 나무의 밀도와 코어 링 할 나무 껍질에 존재하는 미네랄 또는 모래에 따라 다릅니다. 일반적으로 새로운 corers가 날카 롭다고 가정해서는 안됩니다. 현재까지 corer를 날카롭게하는 것은 손으로 수행해야하고 많은 경험이 필요하기 때문에 어려움으로 인해 현장에서 거의 수행되지 않습니다11,20.
요약하자면, 수동 코어링과 언샵 절삭날은 모두 취해진 코어에서 미세 균열이 발생합니다. 현재까지 이러한 문제는 체계적으로 분석되지 않았으며 해결책을 찾으려는 시도도 없었습니다. 이 백서는 수동 코어 링 기술을 새로운 기술의 적용과 비교하여 이러한 장애물을 극복하기위한 프로토콜을 제시합니다. 증분 코어를위한 특수 어댑터가 장착 된 무선 드릴을 사용하는 것이 좋습니다. 우리는 나무를 코어 링 할 때 문제가 최소화되는 정도와 긴 마이크로 섹션의 준비에 대한 연속적이고 기계적인 코어 링의 영향을 제시합니다. 이 프로토콜에는 수용성 테이프를지지 보조제로 사용하는 긴 마이크로 섹션의 준비와 현장에서 코어를 날카롭게하는 절차가 포함됩니다.

<table><tbody><tr><td>BS 18 LTX-3 BL QI</td><td>Metabo</td><td></td><td>무선 드릴</td></tr><tr><td>Core-microtome</td><td>WSL</td><td></td><td>Microtome 증분 코어에서 마이크로 섹션 절단</td></tr> 증가 <tr><td>코어용 드릴 어댑터</td><td>무선 드릴의 증분 코어를 고정하기 위한</td><td>WSL</td><td></td> 어댑터</tr><tr><td>Increment corer</td><td>Hagl&ouml; </td><td></td> ff <td>40cm 증분 코어러</td></tr><tr><td>Power X3</td><td>Metabo</td><td></td><td>Torque Amplifyer</td></tr><tr><td>샤프닝 서포트 보드</td><td>WSL</td><td></td><td>보드는 코어의 절삭날을 날카롭게 하기 위해 무선 드릴을 부착합니다</td></tr><tr><td>수용성 테이프 5414, 긴 섹션 절단을 지원하는 투명 3/4IN</td><td>3M</td><td></td><td>투명 테이프</td></tr></tbody></table>

고품질 증분 코어를 사용하기 위한 고급 워크플로 - 새로운 기술 및 장치

Advanced Workflow for Taking High-Quality Increment Cores - New Techniques and Devices

수목 생태 학적 연구에서 각 단일 성장 고리의 정확한 연대 측정은 고리 너비 변화, 화학 또는 동위 원소 분석 또는 목재 해부학 적 연구에 초점을 맞춘 모든 연구의 기본 요구 사항입니다. 특정 연구(예: 기후학, 지형학)에 대한 샘플링 전략과 무관하게 샘플을 채취하는 방법은 성공적인 준비 및 분석에 매우 중요합니다.
최근까지는 추가 분석을 위해 샌딩할 수 있는 코어 샘플을 얻기 위해 (다소간) 날카로운 증분 코어를 사용하는 것으로 충분했습니다. 목재 해부학적 특성은 긴 시계열에 적용될 수 있기 때문에 고품질 증분 코어를 얻을 필요성이 새로운 의미를 갖게 되었습니다. 본질적으로, corer는 사용될 때 날카 로울 필요가 있습니다. 손으로 나무를 코어 링 할 때 코러를 취급하는 데 몇 가지 문제가있어 전체 코어를 따라 미세 균열이 숨겨져 있습니다. 손으로 드릴을 시작할 때 드릴 비트는 실이 트렁크에 완전히 들어갈 때까지 나무 껍질과 가장 바깥 쪽 링에 강하게 밀착됩니다. 동시에 드릴 비트는 위아래뿐만 아니라 옆으로도 움직입니다. 그런 다음 corer는 트렁크까지 뚫립니다. 그러나 매 회전 후에 멈추고 그립을 변경 한 다음 다시 회전해야합니다. 이러한 모든 움직임과 시동/정지 코어링은 코어에 기계적 스트레스를 가합니다. 결과적인 미세 균열은 이러한 모든 균열을 따라 떨어져 나가기 때문에 연속적인 미세 섹션을 만드는 것을 불가능하게 만듭니다.
우리는 나무를 코어링할 때 이러한 문제를 최소화하기 위해 무선 드릴을 사용하는 새로운 기술과 긴 마이크로 섹션 준비에 미치는 영향을 적용하여 이러한 장애물을 극복하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜에는 긴 마이크로 섹션의 준비와 현장에서 코어를 날카롭게하는 절차가 포함됩니다.

수동 코어 링 절차를 무선 드릴 사용과 비교할 때 후자의 장점은 분명합니다. 우리는 코어 링 가문비 나무 (Picea abies (L.) H. Karst.를 유방 높이 60-80cm의 줄기 직경과 비교했습니다. 우리는 모든 코어에 대해 길이가 40cm 인 5mm 코어를 사용하고 코러의 전체 길이를 줄기에 뚫었습니다. 코어를 수동으로 가져올 때 코어를 가져 와서 나무에서 corer를 다시 제거하는 전체 절차는 평균 ~ 6 분이 걸렸습니다. 토크 부스터가 장착 된 무선 드릴을 사용하여이를 반복 할 때 전체 절차는 평균 1 분 밖에 걸리지 않았습니다. 무선 드릴과의 코어 링이 전혀 소진되지 않는다는 사실 외에도 나사산이 스템 내부에 완전히 들어갈 때까지 드릴링의 첫 번째 단계에서 절삭 날에 가해지는 압력으로 인해 코어가 변형되지 않았습니다. 실이 줄기 내부에 들어가 자마자 corer가 다소 안정화되고 잠재적 인 상하 움직임이 최소화됩니다 (그림 3).
그림 2와 같이 첫 번째 코어가 더 이상 외부에서 매끄럽지 않고 긁힘과 균열이 보이면 절삭 날을 날카롭게해야했습니다. 무선 드릴은 코어링에 사용되기 때문에 고정될 수 있기 때문에(즉, 어댑터 및 증분 코어를 포함; 그림 4), 선명도 절차도 매우 빠릅니다. 약간의 연습으로 선명하게하는 데 5 분 이상 걸리지 않습니다. 절단 된 용지가 corer 내부에 붙어 자마자 샘플링을 계속할 수 있습니다. 결과 코어는 긁힘이나 균열없이 매끄 럽습니다. 무선 드릴의 도움으로 찍은 코어는 미세 균열을 보일 확률이 낮습니다. 이는 전체 증분 코어의 마이크로 섹션을 절단하기 위한 전제 조건입니다. 수용성 테이프(그림 5)를 적용하면 테이프가 얇은 부분을 칼날에서 떼어내어 유리 슬라이드 위에 놓을 때 찢어지지 않도록 보호하므로 길고 깨지기 쉬운 부분을 더 쉽게 처리할 수 있습니다. 이 절차는 테이프 접착제가 비 뉴턴 유체 (옥수수 전분 용액, 프로토콜 단계 5.5 참조) 외에 절단하는 동안 세포벽을 안정화시키기 때문에 실험실에서 시간을 절약하고 마이크로 섹션의 품질을 향상시킵니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64747/64747fig01.jpg"> 그림 1: 증분 코어. (A) 수동 코어링에 사용되는 증분 코어와 나사산과 절삭날의 확대 보기. (B) 수동 코어 링 시작시 목재에 가해지는 고압으로 인해 왜곡 된 증분 코어. (C) 마이크로 균열로 인해 단편화 된 증분 코어 일부의 마이크로 섹션. 스케일 바 = 0.5cm. (D-F) 무선 드릴을 사용할 때 코어 링 절차를 나타내는 사진. 코어 링 (D, E)을 시작하는 데 고압이 필요하지 않으며 핸들을 사용하여 코어 (F)를 쉽게 추출 할 수 있으며 드릴은 그 후 직접 추출됩니다 (G). <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64747/64747fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64747/64747fig02.jpg"> 그림 2: 언샵 코어의 사용으로 인한 외부의 긁힘과 균열을 보여주는 증분 코어. 스케일 바 = 0.5cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64747/64747fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64747/64747fig03.jpg"> 그림 3: 코어 및 관련 마이크로 섹션 증가 . (A) 날카로운 코어와 무선 드릴로 찍은 직선 코어. (B) 언샵 코어로 수동으로 찍은 왜곡 된 코어. (C) 날카로운 코어로 샘플링 된 Pinus 실베스트리스 코어의 연속 섹션. (D) 라릭스 데시두아 코어의 일부가 언샵 코러를 사용하여 조각으로 부러졌습니다. 스케일 바 = 0.5cm (A, B); 1cm (C) <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64747/64747fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64747/64747fig04.jpg"> 그림 4: 증분 코어의 절삭날을 날카롭게 하기 위해 설계된 홀더. (A) 증분 코어를 안내하고 안정화하는 테프론 블록. (B) 무선 드릴의 스타터를 고정하는 테프론 블록. (C) 사용되는 코어의 유형에 따라 보드의 다른 위치에 A를 고정하는 육각 렌치. (D) cl을 고정하는 클램프. (E) 원추형 숫돌을 절삭 날 내부에 배치합니다. (F) 직선 숫돌을 외부에 배치하여 절삭 날을 디버링합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64747/64747fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64747/64747fig05.jpg"> 그림 5: 수용성 테이프의 적용 . (A) 코어 표면을 덮는 데 필요한 길이로 테이프를 자릅니다. (B) 코어의 준비된 표면에 테이프를 놓습니다. (C) 테이프의 가장자리를 한 손으로 잡고 부분을 자릅니다. (D) 유리 슬라이드에 섹션이 아래를 향하도록 테이프를 놓고 물을 추가하여 테이프를 섹션에서 분리합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64747/64747fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/64747/64747fig06.jpg"> 그림 6: "파란색 고리"를 보여주는 침엽수의 미세 섹션. 늦은 나무 세포벽은 lignified되지 않았으며,이를 위해 파란색, 1974 년의 반지 (긴 섹션을 보여주는 슬라이드 위로 확대). 스케일 바 = 1cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/64747/64747fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

여기에서는 토크 배율기가있는 무선 드릴을 적용하여 나무를 코어 링할 때 문제를 최소화하여 증분 코어의 미세 균열을 방지하는 방법과 긴 마이크로 섹션 준비에 미치는 영향에 대한 프로토콜을 제시합니다. 이 프로토콜에는 현장에서 코어를 날카롭게하는 절차도 포함되어 있습니다.

In dendroecological research, precise dating of each single growth ring is a basic requirement for all studies, focusing on ring-width variations only, ...

대부분의 스트리밍 연구는 증분 코어 샘플에 의존하며, 특히 목재 해부학 분석의 경우 매우 높은 품질의 증분 코어에 의존합니다. 무선 드릴로 가져온 증분 코어는 기계적 부하가 낮아 손상이 적습니다. 연구 질문에 따라 증분 코어를 조립하고 나무 줄기의 코어 링 위치를 선택하여 시작하십시오.코어 링 위치를 선택한 후 스템의 성장 방향에 대해 직각으로 코러를 놓고 코어의 뒤쪽 끝에 푸셔를 놓아 드릴링하는 동안 안정화시킵니다. 안정적인 위치를 확보하고 푸셔에 기대어 절삭날에 압력을 가하십시오. 드릴의 나사산 부분이 스템으로 완전히 들어갈 때까지 양손으로 코러 핸들을 돌립니다.완료되면 압력을 해제하고 푸셔를 제거하십시오. 다음으로, corer가 pith에 도달하거나 구멍을 뚫을 때까지 양손으로 corer 핸들을 돌리기 시작합니다. 스템 옆의 손잡이에 추출기를 잡고 확인하십시오.열린 면이 위에 있는 추출기를 잡고 코러에 완전히 삽입합니다. 코어를 한 바퀴 뒤로 돌려 스템에서 코어를 분리하고 추출기를 코어에서 빼냅니다. 추출기에서 코어를 제거하고 종이 빨대에 보관한 후 줄기에서 코어를 제거하고 손잡이에 보관하십시오.토크 부스터가 장착된 무선 드릴에 WSL에서 개발한 증분용 특수 어댑터를 추가합니다. 코어 링 위치가 결정되면 줄기의 성장 방향에 대해 직각으로 코러를 놓습니다. 안정적인 위치를 확보하고 무선 드릴을 단단히 잡고 절삭날에 압력을 가하십시오.무선 드릴을 시작하고 드릴의 나사산 부분이 스템에 완전히 코어가 될 때까지 천천히 돌립니다. 그런 다음 corer가 속을 통과하거나 드릴링 할 때까지 속도를 높입니다. 완료되면 corer에서 무선 드릴을 제거하고 핸들을 그 위에 놓고 설명대로 추출기를 사용하여 코어를 제거합니다.증분 코어를 종이 빨대에 보관하십시오. 스템에서 코어를 제거하기 전에 손잡이를 제거하고 무선 드릴을 코러에 놓습니다. WSL 샤프닝 지지대를 사용하려면 새로 디자인된 홀더를 잡고 지면에 놓습니다.증분 코어를 포함한 무선 드릴을 지정된 지지점에 놓고 장착 브래킷을 닫아 충전 드릴을 고정합니다. 시동 버튼에 테프론 블록을 고정하여 무선 드릴을 시작하고 작동하도록 합니다. 원추형 연삭 돌을 가져 와서 절삭 날의 안쪽을 연마하십시오.다음으로, 직사각형 숫돌을 가져 와서 절삭 날의 바깥 쪽을 갈아서 버를 제거합니다. 스타터 버튼에서 테프론 블록을 제거하여 드릴을 중지합니다. 장착 브래킷을 열어 충전 드릴을 분리하고 홀더에서 장치를 꺼냅니다.절삭 날의 선명도를 확인하려면 무선 드릴의 어댑터에서 증분 코어를 제거하십시오. 샤프닝 지지대의 나무 판에 종이 한 장을 놓고 코러를 수직으로 잡고 코러의 절삭 날을 용지 위에 놓습니다. 코러에 압력을 가하지 않고 수직으로 잡고 코러를 돌립니다.코러를 들어 올려 절삭날 내부에 둥근 종이 조각이 있는지 확인합니다. 둥근 조각이 있으면 corer가 날카 롭습니다. 그렇지 않은 경우 선명하게 하기 절차를 반복합니다.코어 외부가 매끄럽지 않으면 전체 절차를 반복하십시오. 마이크로톰 옆에 긴 유리 슬라이드를 놓습니다. 전체 길이를 따라 슬라이드 중간에 약간의 물을 추가하십시오.그런 다음 코어 마이크로톰의 샘플 홀더에 코어를 놓습니다. 코어가 블레이드 가장자리에 거의 닿을 때까지 샘플 홀더를 들어 올리고 블레이드를 코어 위로 당겨 상단을 잘라냅니다. 칼을 코어의 시작 부분에 다시 놓습니다.샘플을 약 10 마이크로 미터로 들어 올리고 절단 절차를 반복하여 최소 2mm 너비의 평평한 표면을 얻습니다. 다음으로, 절단 된 표면에 옥수수 전분 용액을 닦고 천 조각을 사용하여 코어 상단에서 잉여 용액을 제거합니다. 수용성 테이프의 한쪽면을 코어의 시작 부분에 놓고 1cm의 겹침과 코어의 시작 부분이 마이크로 톰 블레이드를 향하도록합니다.손가락을 사용하여 표면의 테이프를 쓰다듬어 코어 표면에 테이프를 부착하십시오. 이어서, 테이프의 겹치는 조각을 사용하여 마이크로톰 내의 샘플을 15 내지 20 마이크로미터 내의 리프트하고, 마이크로톰 블레이드를 코어의 가장자리에 놓는다. 완료되면 테이프 끝을 잡고 섹션을 자릅니다.테이프에 붙어있는 얇은 부분을 가져 와서 컷이 아래를 향하도록 이전에 준비된 유리 슬라이드의 물 라인에 놓습니다. 약 10초 후 핀셋을 사용하여 섹션에서 테이프를 제거하기 시작하면서 섹션이 유리 슬라이드에 남아 있는지 확인합니다. 무선 드릴을 사용하여 코어링하는 동안 드릴링의 첫 번째 단계에서 절삭날에 가해지는 압력으로 인해 코어가 변형되지 않았습니다.매끄러운 표면과 긁힘 및 균열이없는 코어는 절삭 날을 날카롭게 할 필요가 있음을 나타냅니다. 이 프로토콜은 실험실에서 시간을 절약하고 마이크로 섹션의 품질을 개선했습니다. 무선 드릴을 사용하더라도 고품질 코어의 샘플링을 보장하기 위해 정기적으로 코어를 날카롭게하십시오.코어 링하는 동안 기계적 응력을 줄이면 코어에 미세 균열이 발생할 위험이 줄어 듭니다. 이를 위해 마이크로 섹션을 준비하기위한 실험실 작업이 최소한으로 줄어 듭니다. 전체 증분 코어의 마이크로 섹션을 준비하는 기능을 통해 목재 해부학 분석을 위한 단순화된 시계열 분석이 가능합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Environment

환경

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고처리량 대규모 시료 검사를 위한 Quattro-Parallel Cantilever 어레이를 사용한 Active Probe Atomic Force Microscopy

우리는 3D 프린팅 마운트를 사용하여 목재 마운트에 포장을 풀고 붙일 필요 없이 현장에서 증분 코어를 고정하는 프로토콜을 제시합니다. 새로운 GSC 홀더를 사용하면 코어 마이크로톰에 코어를 배치하여 표면을 절단하고 디지털 이미지 캡처로 직접 전송할 수 있습니다.

Increment Cores의 샘플링 및 디지털화를 위한 새로운 워크플로우 

IBEX(Iterative-bleaching-extends-multiplexity)와 상용 뉴클레오티드 표지 분석(Click-iT EdU)의 조합은 고정된 냉동 쥐 조직 절편에서 매우 역동적인 과정에서 분열하는 세포 유형을 검출하고 분류할 수 있습니다. 또한 새로운 오픈 소스 이미지 처리 파이프라인은 처리량이 많은 이미지 획득 및 분석을 제공합니다.

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수동 IBEX 방법을 사용하여 저비용의 다목적 광조사 기술을 구현하면 상당한 네이티브 자가형광으로 인체 조직을 최적으로 이미징할 수 있습니다. 이 프로토콜은 도립 현미경, 널리 사용 가능한 시약 및 이미지 정렬 및 처리를 위한 오픈 소스 소프트웨어를 사용하여 보관된 임상 샘플에서 다중화된 전체 슬라이드 이미지를 얻는 방법을 자세히 설명합니다.

반복적인 표백을 위해 최적화된 워크플로우는 고도의 자가형광 임상 샘플의 멀티플렉시티 이미징을 확장합니다.

이 워크플로우는 극저온 삼중 일치 이미징 플랫폼을 사용하여 작고(축 범위 &lt;1μm) 희귀한(세포당 1개 사본) 형광 표지된 생물학적 구조를 표적으로 하는 라멜라 생산을 가능하게 합니다. 이 플랫폼은 형광 현미경, 집중 이온 빔 밀링 및 스캐닝 전자 현미경을 단일 초점 위치에 통합하고 밀링 중 동시 형광 현미경을 가능하게합니다.

세포의 표적 밀링을 위한 극저온 일치 형광, 전자 및 이온빔 현미경을 사용한 워크플로

배우세요 무선 드릴과 토크 증폭기를 활용한 고품질 증분 코어 채취법으로 나무 목재 해부학 연구의 정확성을 높이세요. 현장에서 코어 샤프너를 연마하는 방법과 미세 단면 제작 기술도 함께 익혀보세요.

고품질 증분 코어를 사용하기 위한 고급 워크플로 - 새로운 기술 및 장치

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