Name: 인간 만능 줄기세포를 인슐린 생산 섬 클러스터로 분화(Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Insulin-producing Islet Clusters) (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-23T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 41 s
Description: 배우세요 정적 현탁 배양법을 이용해 췌장 전구세포를 인슐린 분비 섬 클러스터로 분화하는 방법을. 이 프로토콜은 세포 스트레스를 줄여 분화 성공률을 높이며, 당뇨병 연구와 치료를 위한 기능성 섬세포 생성에 활용됩니다.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

STEMCELL Technologies, Michael Smith Health Research BC, Stem Cell Network, JDRF 및 Canadian Institutes of Health Research의 지원에 감사드립니다. Jia Zhao와 Shenghui Liang은 Michael Smith Health Research BC Trainee Award를 수상했습니다. 미첼 J.S. 브람(Mitchell J.S. Braam)은 Mitacs Accelerate Fellowship의 수혜자입니다. Diepiriye G. Iworima는 Alexander Graham Bell Canada Graduate Scholarship과 CFUW 1989 Ecole Polytechnique Commemorative Award를 수상했습니다. Mel1 INS GFP/W 라인과 앨버타 당뇨병 연구소 아일렛 코어(Alberta Diabetes Institute Islet Core)를 공유해 주신 MCRI와 Monash University의 Edouard G. Stanley 박사님께 진심으로 감사드립니다. 또한 브리티시 컬럼비아 대학교(University of British Columbia)의 생명과학 연구소(Life Sciences Institute) 이미징 및 유세포 분석 시설의 지원에도 감사드립니다. 그림 1 은 BioRender.com 로 작성되었습니다.

<ol><li>Atkinson, M. A., Eisenbarth, G. S., Michels, A. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Type+1+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet%22%5BJournal%5D)">Type 1 diabetes.</a> Lancet. 383 (9911), 69-82 (2014).</li>
<li>Petersen, M. C., Shulman, G. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+insulin+action+and+insulin+resistance%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Reviews%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of insulin action and insulin resistance.</a> Physiological Reviews. 98 (4), 2133-2223 (2018).</li>
<li>Shapiro, A. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Islet+transplantation+in+seven+patients+with+type+1+diabetes+mellitus+using+a+glucocorticoid-free+immunosuppressive+regimen%5BTitle%5D)+AND+%22The+New+England+Journal+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen.</a> The New England Journal of Medicine. 343 (4), 230-238 (2000).</li>
<li>Gamble, A., Pepper, A. R., Bruni, A., Shapiro, A. M. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+journey+of+islet+cell+transplantation+and+future+development%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">The journey of islet cell transplantation and future development.</a> Islets. 10 (2), 80-94 (2018).</li>
<li>Pagliuca, F. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+functional+human+pancreatic+beta+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Generation of functional human pancreatic beta cells in vitro.</a> Cell. 159 (2), 428-439 (2014).</li>
<li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reversal+of+diabetes+with+insulin-producing+cells+derived+in+vitro+from+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Reversal of diabetes with insulin-producing cells derived in vitro from human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 32 (11), 1121-1133 (2014).</li>
<li>Jennings, R. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+the+human+pancreas+from+foregut+to+endocrine+commitment%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Development of the human pancreas from foregut to endocrine commitment.</a> Diabetes. 62 (10), 3514-3522 (2013).</li>
<li>Jorgensen, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+illustrated+review+of+early+pancreas+development+in+the+mouse%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrine+Reviews%22%5BJournal%5D)">An illustrated review of early pancreas development in the mouse.</a> Endocrine Reviews. 28 (6), 685-705 (2007).</li>
<li>Jensen, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+regulatory+factors+in+pancreatic+development%5BTitle%5D)+AND+%22Developmental+Dynamics%22%5BJournal%5D)">Gene regulatory factors in pancreatic development.</a> Developmental Dynamics. 229 (1), 176-200 (2004).</li>
<li>Hald, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+and+characterization+of+Ptf1a+antiserum+and+localization+of+Ptf1a+in+relation+to+Nkx6.1+and+Pdx1+during+the+earliest+stages+of+mouse+pancreas+development%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Histochemistry+and+Cytochemistry%22%5BJournal%5D)">Generation and characterization of Ptf1a antiserum and localization of Ptf1a in relation to Nkx6.1 and Pdx1 during the earliest stages of mouse pancreas development.</a> Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 56 (6), 587-595 (2008).</li>
<li>Villasenor, A., Chong, D. C., Henkemeyer, M., Cleaver, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epithelial+dynamics+of+pancreatic+branching+morphogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Epithelial dynamics of pancreatic branching morphogenesis.</a> Development. 137 (24), 4295-4305 (2010).</li>
<li>Rukstalis, J. M., Habener, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neurogenin3%3A+a+master+regulator+of+pancreatic+islet+differentiation+and+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Islets%22%5BJournal%5D)">Neurogenin3: a master regulator of pancreatic islet differentiation and regeneration.</a> Islets. 1 (3), 177-184 (2009).</li>
<li>Mastracci, T. L., Anderson, K. R., Papizan, J. B., Sussel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+Neurod1+contributes+to+the+lineage+potential+of+Neurogenin3%2B+endocrine+precursor+cells+in+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genetics%22%5BJournal%5D)">Regulation of Neurod1 contributes to the lineage potential of Neurogenin3+ endocrine precursor cells in the pancreas.</a> PLoS Genetics. 9 (2), e1003278(2013).</li>
<li>Balboa, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional%2C+metabolic+and+transcriptional+maturation+of+human+pancreatic+islets+derived+from+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Functional, metabolic and transcriptional maturation of human pancreatic islets derived from stem cells.</a> Nature Biotechnology. 40 (7), 1042-1055 (2022).</li>
<li>Du, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pluripotent+stem-cell-derived+islets+ameliorate+diabetes+in+non-human+primates%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Medicine%22%5BJournal%5D)">Human pluripotent stem-cell-derived islets ameliorate diabetes in non-human primates.</a> Nature Medicine. 28 (2), 272-282 (2022).</li>
<li>Hogrebe, N. J., Augsornworawat, P., Maxwell, K. G., Velazco-Cruz, L., Millman, J. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Targeting+the+cytoskeleton+to+direct+pancreatic+differentiation+of+human+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Targeting the cytoskeleton to direct pancreatic differentiation of human pluripotent stem cells.</a> Nature Biotechnology. 38 (4), 460-470 (2020).</li>
<li>Yoshihara, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immune-evasive+human+islet-like+organoids+ameliorate+diabetes%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Immune-evasive human islet-like organoids ameliorate diabetes.</a> Nature. 586 (7830), 606-611 (2020).</li>
<li>Mahaddalkar, P. U., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+pancreatic+beta+cells+from+CD177%28%2B%29+anterior+definitive+endoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Generation of pancreatic beta cells from CD177(+) anterior definitive endoderm.</a> Nature Biotechnology. 38 (9), 1061-1072 (2020).</li>
<li>Liang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differentiation+of+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+into+insulin-secreting+islet+clusters+in+a+multiwell-based+static+3D+culture+system%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Reports+Methods%22%5BJournal%5D)">Differentiation of stem cell-derived pancreatic progenitors into insulin-secreting islet clusters in a multiwell-based static 3D culture system.</a> Cell Reports Methods. 3, 10046(2023).</li>
<li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+beta-cell+function+reveals+glucose-mediated+heterogeneity+of+beta-cell+functional+development%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of beta-cell function reveals glucose-mediated heterogeneity of beta-cell functional development.</a> Elife. 8, e41540(2019).</li>
<li>Zhao, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+calcium+activities+from+pancreatic+beta-cells+in+zebrafish+embryos+using+spinning-disc+confocal+and+two-photon+light-sheet+microscopy%5BTitle%5D)+AND+%22Bio-protocol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of calcium activities from pancreatic beta-cells in zebrafish embryos using spinning-disc confocal and two-photon light-sheet microscopy.</a> Bio-protocol. 11 (23), e4245(2021).</li>
<li>Liang, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Carbon+monoxide+enhances+calcium+transients+and+glucose-stimulated+insulin+secretion+from+pancreatic+beta-cells+by+activating+phospholipase+C+signal+pathway+in+diabetic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Carbon monoxide enhances calcium transients and glucose-stimulated insulin secretion from pancreatic beta-cells by activating phospholipase C signal pathway in diabetic mice.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 582, 1-7 (2021).</li>
<li>Bruin, J. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Maturation+and+function+of+human+embryonic+stem+cell-derived+pancreatic+progenitors+in+macroencapsulation+devices+following+transplant+into+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetologia%22%5BJournal%5D)">Maturation and function of human embryonic stem cell-derived pancreatic progenitors in macroencapsulation devices following transplant into mice.</a> Diabetologia. 56 (9), 1987-1998 (2013).</li>
<li>Toyoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+aggregation+optimizes+the+differentiation+of+human+ESCs+and+iPSCs+into+pancreatic+bud-like+progenitor+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Cell aggregation optimizes the differentiation of human ESCs and iPSCs into pancreatic bud-like progenitor cells.</a> Stem Cell Research. 14 (2), 185-197 (2015).</li>
<li>Russ, H. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+induction+of+human+pancreatic+progenitors+produces+functional+beta-like+cells+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22EMBO+Journal%22%5BJournal%5D)">Controlled induction of human pancreatic progenitors produces functional beta-like cells in vitro.</a> EMBO Journal. 34 (13), 1759-1772 (2015).</li>
<li>Veres, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Charting+cellular+identity+during+human+in+vitro+beta-cell+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Charting cellular identity during human in vitro beta-cell differentiation.</a> Nature. 569 (7756), 368-373 (2019).</li>
<li>D'Amour, K. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Efficient+differentiation+of+human+embryonic+stem+cells+to+definitive+endoderm%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Efficient differentiation of human embryonic stem cells to definitive endoderm.</a> Nature Biotechnology. 23 (12), 1534-1541 (2005).</li>
<li>Jiang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+pancreatic+progenitors+from+human+pluripotent+stem+cells+by+small+molecules%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cell+Reports%22%5BJournal%5D)">Generation of pancreatic progenitors from human pluripotent stem cells by small molecules.</a> Stem Cell Reports. 16 (9), 2395-2409 (2021).</li>
<li>Tran, R., Moraes, C., Hoesli, C. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Controlled+clustering+enhances+PDX1+and+NKX6.1+expression+in+pancreatic+endoderm+cells+derived+from+pluripotent+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Scientific+Reports%22%5BJournal%5D)">Controlled clustering enhances PDX1 and NKX6.1 expression in pancreatic endoderm cells derived from pluripotent stem cells.</a> Scientific Reports. 10 (1), 1190(2020).</li>
<li>Mamidi, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanosignalling+via+integrins+directs+fate+decisions+of+pancreatic+progenitors%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanosignalling via integrins directs fate decisions of pancreatic progenitors.</a> Nature. 564 (7734), 114-118 (2018).</li>
<li>Rezania, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enrichment+of+human+embryonic+stem+cell-derived+NKX6.1-expressing+pancreatic+progenitor+cells+accelerates+the+maturation+of+insulin-secreting+cells+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Enrichment of human embryonic stem cell-derived NKX6.1-expressing pancreatic progenitor cells accelerates the maturation of insulin-secreting cells in vivo.</a> Stem Cells. 31 (11), 2432-2442 (2013).</li>
<li>Sander, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Homeobox+gene+Nkx6.1+lies+downstream+of+Nkx2.2+in+the+major+pathway+of+beta-cell+formation+in+the+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22Development%22%5BJournal%5D)">Homeobox gene Nkx6.1 lies downstream of Nkx2.2 in the major pathway of beta-cell formation in the pancreas.</a> Development. 127 (24), 5533-5540 (2000).</li>
</ol>

티모시 J. 키퍼(Timothy J. Kieffer)는 이 원고를 준비하는 동안 ViaCyte의 직원이었습니다. 다른 저자는 상충되는 이해관계가 없음을 선언합니다.

이 논문은 체외 배양 후 40일 이내에 포도당 챌린지 시 인슐린을 분비할 수 있는 hPSC 섬을 생성할 수 있는 7단계 하이브리드 프로토콜을 설명합니다. 이러한 여러 단계 중에서, 최종 내배엽의 효율적인 유도는 최종 분화 결과(18,27,28)를 위한 중요한 출발점을 설정하는 것으로 여겨진다. 제조업체의 프로토콜에서는 분화를 시작하기 위해 2.6 × 105/cm2의 파종 밀도를 권장하며 세포는 2일 동안 1단계 배지에 노출됩니다. 세포가 1일차(90%-100%)에 거의 근접하도록 하려면 최적의 파종 밀도가 다를 수 있으므로 새로운 hPSC 라인에서 작업할 때 파종 밀도를 테스트하는 것이 좋습니다. 예를 들어, 3개의 hPSC 라인을 모두 테스트한 결과, 2.60 × 105/cm2가 아닌 1...

췌장 베타 세포는 혈당 수치 상승에 반응하여 인슐린을 분비합니다. 제1형 당뇨병(T1D)1에서 베타세포의 자가면역 파괴로 인해, 또는 제2형 당뇨병(T2D)2에서 베타세포의 기능 장애로 인해, 인슐린 생산이 충분하지 않은 환자는 일반적으로 외인성 인슐린을 투여하여 치료합니다. 생명을 구하는 이 치료법에도 불구하고, 이 치료법은 선의의 베타 세포에서 역동적인 인슐린 분비에 의해 달성되는 혈당의 정교한 조절과 정확하게 일치할 수 없습니다. 따라서 환자는 종종 생명을 위협하는 저혈당 삽화 및 만성 고혈당 여행으로 인한 기타 합병증의 결과로 고통받습니다. 인간 사체 섬의 이식은 T1D 환자의 엄격한 혈당 조절을 성공적으로 회복시키지만, 섬 기증자의 가용성과 이식을 위한 건강한 섬을 정제하는 데 어려움이 있어 제한적이다 3,4. 이 문제는 원칙적으로 hPSC를 대체 출발 물질로 사용하여 해결할 수 있습니다.
in vitro에서 hPSC로부터 인슐린 분비 섬을 생성하는 현재의 전략은 종종 in vivo 5,6에서 배아 췌장 발달 과정을 모방하는 것을 목표로 합니다. 이를 위해서는 책임 있는 신호 전달 경로에 대한 지식과 발달 중인 배아 췌장의 중요한 단계를 모방하기 위해 해당 용해성 인자의 시간 제한 추가가 필요합니다. 췌장 프로그램은 전사 인자 포크헤드 박스 A2(FOXA2)와 성별 결정 영역 Y-박스 17(SOX17)7로 표시된 최종 내배엽에 대한 헌신으로 시작됩니다. 최종 내배엽의 연속적인 분화는 원시적인 장관의 형성을 포함하며, 췌장 및 십이지장 호메오박스 1(PDX1)7,8,9을 발현하는 후방 앞창자로의 패턴화, PDX1 및 NK6 호메오박스 1(NKX6.1)10,11을 함께 발현하는 췌장 전구세포로의 상피 확장을 포함합니다.
내분비 섬 세포에 대한 추가적인 노력은 내분비 마스터 조절인자인 neurogenin-3 (NGN3)12의 일시적인 발현과 주요 전사 인자인 neuronal differentiation 1 (NEUROD1) 및 NK2 homeobox 2 (NKX2.2)13의 안정적인 유도를 동반합니다. 인슐린 생산 베타 세포, 글루카곤 생성 알파 세포, 소마토스타틴 생산 델타 세포 및 췌장 폴리펩티드 생산 PPY 세포와 같은 주요 호르몬 발현 세포는 이후에 프로그래밍됩니다. 이러한 지식과 광범위한 고처리량 약물 스크리닝 연구의 발견을 통해 최근의 발전으로 인슐린 분비 14,15,16,17,18,19가 가능한 베타 세포와 유사한 세포를 가진 hPSC 섬을 생성할 수 있게 되었습니다.
포도당 반응성 베타 세포 6,14,18,19를 생성하기 위한 단계적 프로토콜이 보고되었습니다. 이러한 연구를 기반으로 구축된 본 프로토콜은 평면 배양에서 PDX1+/NKX6.1+ 췌장 전구 세포를 생성하기 위한 췌장 전구 세포 키트를 사용한 다음, 균일한 크기의 클러스터로 마이크로웰 플레이트 응집과 정적 3D 현탁 배양에서 R-프로토콜을 사용하여 인슐린 분비 hPSC 섬에 대한 추가 분화를 포함합니다. 유세포 분석, 면역염색 및 기능 평가를 포함한 품질 관리 분석은 분화 세포의 엄격한 특성 분석을 위해 수행됩니다. 이 백서는 유도 분화의 각 단계에 대한 자세한 설명을 제공하고 in vitro 특성화 접근법을 간략하게 설명합니다.

<table><tbody><tr><td>3,3',5-Triiodo-L-thyronine (T3)</td><td>Sigma</td><td>T6397</td><td>갑상선 호르몬</td></tr><tr><td>4% PFA 용액</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-281692</td><td>흄 후드</td></tr><tr><td>96-Well, Ultralow Attachment, Flat Bottom</td><td>Corning Costar (VWR)</td><td>CLS3474</td><td>Flat bottom에서 처리해야 합니다. 마지막 3단계의 정적 현탁액 배양을 위해</td></tr><tr><td>Accutase</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>07920</td><td>4기 세포용 해리 시약</td></tr><tr><td>Aggrewell400 플레이트</td>, <td>STEMCELL Technologies</td><td>34415</td><td>400 &micro; m 직경 마이크로웰 플레이트</td></tr><tr><td>Aggrewell800 플레이트</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>34815</td><td>800 &마이크로; m 직경 마이크로 웰 플레이트</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 염소 안티 휴먼 FOXA2 (염소 IgG)</td> <td>R & D Systems</td><td>IC2400G</td><td>1:100 in 유세포 분석; 1단계 세포 분석에 사용</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Goat IgG Isotype Control</td><td>R& D Systems</td><td>IC108G</td><td>1:100 in 유세포 분석</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Mouse anti-Human SST (mouse IgG2B)</td><td>BD Sciences</td><td>566032</td><td>1:250 in 유세포 분석; 7단계 세포 분석에 사용</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Mouse IgG2B Isotype Control</td><td>R& D Systems</td><td>IC0041G</td><td>1:500 in 유세포 분석</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 마우스 anti-Human C-peptide (mouse IgG1&kappa;)</td><td>BD Pharmingen</td><td>565831</td><td>1:2,000 in flow cytometry; 7단계 세포 분석에 사용됨</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Mouse anti-Human INS (mouse IgG1&kappa;)</td><td>BD Sciences</td><td>565689</td><td>1:2,000 in 유세포 분석</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 마우스 anti-Human NKX6.1 (마우스 IgG1&kappa;)</td><td>BD Sciences</td><td>563338</td><td>유세포 분석에서 1:33; 4 단계 세포</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 마우스 안티 휴먼 SOX17 (마우스 IgG1&kappa;)</td> 분석에 사용됩니다.<td>BD Sciences</td><td>562594</td><td>1:50 in flow cytometry; 1단계 세포 분석에 사용됨</td></tr><tr><td>Alexa Fluor 647 Mouse IgG1&kappa; 이소타입 컨트롤</td><td>BD 과학</td><td>557714</td><td>1:50 in flow cytometry</td></tr><tr><td>ALK5i II</td><td>Cayman Chemicals</td><td>14794</td><td>TGF-beta 신호 억제제</td></tr><tr><td>항부착 헹굼 용액&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>7010</td><td>마이크로웰 헹굼 용액</td></tr><tr><td>분석 챔버</td><td>Cellvis</td><td>D35-10-1-N</td><td>정적 GSIS 및 컨포칼 이미징 목적</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>BP1600-100</td><td>면역염색 절차용</td></tr><tr><td>CK19 항체</td><td>DAKO</td><td>M0888</td><td>1:50 전체 마운트 면역형광</td></tr><tr><td>D-포도</td>당 <td>시그마</td><td>G8769</td><td>중간 보충</td></tr><tr><td>DAPI</td><td>시그마</td><td>D9542</td><td>핵 counterstaining</td></tr><tr><td>DMEM / F12, HEPES</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11330032</td><td>매트릭스 희석 용액</td></tr><tr><td>당나귀 안티 염소 Alexa Fluor 555</td><td>Life technologies</td><td>A21432</td><td>1 : 500 전체 마운트 면역 형광</td></tr><tr><td>당나귀 안티 염소 Alexa Fluor 647</td><td>Life technologies</td><td>A21447</td><td>1:500 전체 마운트 면역 형</td></tr>광 <tr><td>당나귀 안티 마우스 Alexa Fluor 555</td><td>Life technologies</td><td>A31570</td><td>1:500 전체 마운트 면역 형광</td></tr><tr><td>당나귀 안티 마우스 Alexa Fluor 647</td><td>라이프 테크놀로지</td><td>A31571</td><td>1:500 전체 마운트 면역 형광</td></tr><tr><td>당나귀 안티 토끼 Alexa Fluor 555</td><td>라이프 테크놀로지</td><td>A31572</td><td>1:500 전체 마운트 면역 형광</td></tr><tr><td>당나귀 안티 토끼 Alexa Fluor 647</td><td>Life technologies</td><td>A31573</td><td>1:500 전체 마운트 면역 형광</td></tr><tr><td>당나귀 안티 양 Alexa Fluor 647</td><td>Life technologies</td><td>A21448</td><td>1:500 전체 마운트 면역 형광</td></tr><tr><td>DPBS</td><td>Sigma</td><td>D8537</td><td>Ca2+ 및 Mg2+</td></tr><tr><td>ELISA, 인슐린, 인간</td><td>Alpco</td><td>80-INSHU-E01.1</td><td>인체 인슐린 측정용</td></tr><tr><td>지방산이 없는 BSA</td><td>Proliant</td><td>68700</td><td>배지 보충제</td></tr><tr><td>고정 및 투과화 솔루션 키트</td>, <td>BD Sciences</td><td>554714</td><td>Fix/Perm 및 10x Perm/Wash 솔루션 포함</td></tr><tr><td>Gentle Cell Dissociation Reagent</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>7174</td><td>유지 배양 중 덩어리 패시징 hPSC용</td></tr><tr><td>글루카곤 항체</td><td>Sigma</td><td>G2654</td><td>1:400 전체 마운트 면역형광</td></tr><tr><td>GLUT1 항체</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>PA1-37782</td><td>1:200 전체 마운트 면역형광</td></tr><tr><td>GlutaMAX-I (100x)</td><td>Gibco</td><td>35050061</td><td>L-글루타민 보충제</td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>G33-4</td><td>조직 세척 및 장착용</td></tr><tr><td>GSi XX</td><td>Sigma Millipore</td><td>565789</td><td>Notch 억제제</td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sigma</td><td>H3149</td><td>중간 보충제</td></tr><tr><td>ITS-X (100x)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>51500056</td><td>인슐린-트랜스페린-셀레늄-에탄올아민; 중간 보충제</td></tr><tr><td>LDN193189&nbsp;</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72147</td><td>BMP 길항제</td></tr><tr><td>MAFA 항체</td><td>Abcam</td><td>ab26405</td><td>1:200 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>Matrigel, hESC 인증</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>08-774-552</td><td>혈관 표면 코팅용 세포 외 매트릭스</td></tr><tr><td>MCDB131 매체</td><td>Life Technologies</td><td>10372019</td><td>Base medium</td></tr><tr><td>mTeSR1 Complete Kit</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>85850</td><td>줄기 세포 배지 및 5x 보충제 포함</td></tr><tr><td>N-Cys (N-acetyl cysteine)</td> <td>Sigma</td><td>A9165</td><td>항산화</td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Sigma</td><td>S6297</td><td>배지 보충제</td></tr><tr><td>NEUROD1 항체</td><td>R & D Systems</td><td>AF2746</td><td>1:20 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>NKX6.1 항체</td><td>DSHB</td><td>F55A12-c</td><td>1:50 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>췌장 폴리펩티드 항체</td><td>R& D Systems</td><td>AF6297</td><td>1:200 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma</td><td>D8662</td><td>with ca2+ and Mg2+</td></tr><tr><td>PDX1 항체</td><td>Abcam</td><td>ab47267</td><td>1:200 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>PE Mouse anti-Human GCG (mouse IgG1&kappa;)</td><td>BD Sciences</td><td>565860</td><td>1:2,000 유세포 분석; 7단계 세포</td></tr><tr><td>PE 마우스 anti-Human NKX6.1 (마우스 IgG1k)</td> <td>BD Sciences</td><td>563023</td><td>1:250 in 유세포 분석</td></tr><tr><td>PE Mouse anti-Human PDX1 (mouse IgG1k)</td><td>BD Sciences</td><td>562161</td><td>1:200 in flow cytometry; 4단계 세포</td></tr><tr><td>PE Mouse IgG1&kappa 분석에 사용; Isotype Control</td><td>BD Sciences</td><td>554680</td><td>1:2,000 in 유세포 분석</td></tr><tr><td>PE mouse-Human Chromogranin A (CHGA, mouse IgG1k)</td><td>BD Sciences</td><td>564563</td><td>1:200 in flow cytometry</td></tr><tr><td>R428&nbsp;</td><td>Cayman Chemicals</td><td>21523</td><td>AXL 티로신 키나아제 억제제</td></tr><tr><td>레티노이드산, all-trans</td><td>Sigma</td><td>R2625</td><td>감광성</td></tr><tr><td>RIPA 용해 완충액, 호르몬 추출용 10x</td><td>Sigma</td><td>20-188</td><td></td></tr><tr><td>SANT-1</td><td>Sigma</td><td>S4572</td><td>SHH 억제제</td></tr><tr><td>SLC18A1 항체</td><td>Sigma</td><td>HPA063797</td><td>1:200 전체 마운트 면역형광</td></tr><tr><td>소마토스타틴 항체</td><td>Sigma</td><td>HPA019472</td><td>1:100 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>STEMdiff Pancreatic Progenitor Kit</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>05120</td><td>Basal media and supplements included</td></tr><tr><td>Synaptophysin antibody</td><td>Novus</td><td>NB120-16659</td><td>1:25 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td>For per메eabilization</td></tr><tr><td>트롤록스&nbsp;</td><td>Sigma Millipore</td><td>648471</td><td>비타민 E 아날로그</td></tr><tr><td>TrypLE Enzyme Express</td><td>Life 기술</td><td>12604-021</td><td>단일 세포 통과 hPSC용 세포 해리 효소 시약</td></tr><tr><td>Trypsin1/2/3 항체</td><td>R& D Systems</td><td>AF3586</td><td>1:25 in whole mount immunofluorescence</td></tr><tr><td>Y-27632</td><td>STEMCELL Technologies</td><td>72304</td><td>ROCK 억제제</td></tr><tr><td>황산아연</td><td>Sigma</td><td>Z0251</td><td>매체 보충제</td></tr></tbody></table>

인간 만능 줄기세포를 인슐린 생산 섬 클러스터로 분화(differentiation of human pluripotent stem cells into insulin-producing islet clusters)

Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Insulin-Producing Islet Clusters

인간 만능줄기세포(hPSC)를 인슐린 분비 베타세포로 분화하면 베타세포 기능 및 당뇨병 치료를 조사할 수 있는 자료가 됩니다. 그러나 인간 베타 세포를 적절하게 모방한 줄기 세포 유래 베타 세포를 얻는 데는 여전히 어려움이 있습니다. 이전 연구를 기반으로 hPSC 유래 섬세포를 생성하여 분화 결과와 일관성이 개선된 프로토콜을 만들었습니다. 여기에 설명된 프로토콜은 1-4단계에서 췌장 전구 키트를 활용한 후 5-7단계에서 2014년에 이전에 발표된 논문에서 수정된 프로토콜(이하 "R-프로토콜"이라고 함)을 사용합니다. 췌장 전구 세포 키트와 400μm 직경의 마이크로웰 플레이트를 사용하여 췌장 전구 세포 클러스터를 생성하는 자세한 절차, 96웰 정적 현탁액 형식의 내분비 분화를 위한 R-프로토콜, hPSC 유래 섬의 체외 특성 분석 및 기능 평가가 포함되어 있습니다. 전체 프로토콜은 초기 hPSC 확장에 1주일이 소요되고 인슐린 생산 hPSC 섬을 얻는 데 ~5주가 소요됩니다. 기본적인 줄기 세포 배양 기술과 생물학적 분석 교육을 받은 직원은 이 프로토콜을 재현할 수 있습니다.

우리는 줄기세포를 7단계로 인슐린 분비 hPSC-섬으로 분화하는 하이브리드 전략을 개발했으며, 평면 배양의 처음 4단계에서는 췌장 전구 키트를 활용한 다음, 마지막 3단계에서는 정적 현탁 배양에서 이전에 보고된 방법6을 기반으로 구축된 수정된 프로토콜을 사용합니다(그림 1). 이 프로토콜을 사용하면 세포 파종 후 24시간(0단계)에 거의 밀도(90%-100%) 배양을 보장하는 것이 대부분의 hPSC 라인에 대한 효율적인 분화를 시작하는 데 매우 중요합니다(그림 2A). 특정 세포주에 대한 최적의 조건을 결정하기 위해 다양한 파종 밀도를 테스트하는 것이 좋습니다. 1단계 배양 중에는 부유하는 죽은 세포로 인해 배지가 뿌옇게 보일 수 있으며, 이는 이 단계에서 일반적으로 관찰됩니다. 이것은 부착된 세포가 용기 표면을 완전히 덮는 한 키트의 분화 효율성을 손상시키지 않습니다. 2-4단계...

줄기세포를 섬세포로 분화하는 것은 기존의 당뇨병 치료 및 질병 모델링에 대한 대안을 제공합니다. 상용 분화 키트와 이전에 검증된 방법을 결합하여 접시에서 인슐린 분비, 줄기 세포 유래 섬을 생성하는 데 도움이 되는 자세한 줄기 세포 배양 프로토콜에 대해 설명합니다.

인간 만능 줄기세포를 인슐린 생산 섬 클러스터로 분화(Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Insulin-producing Islet Clusters)

Differentiation of human pluripotent stem cells (hPSCs) into insulin-secreting beta cells provides material for investigating beta cell function and ...

이 프로토콜은 췌장 전구세포를 섬 클러스터로 분화하기 위한 정적 현탁 배양 전략을 사용하고, 진탕 배양 중에 세포가 경험하는 스트레스를 줄이고, 분화 성공을 크게 향상시킵니다. 하드웨어 프로토콜은 초보자에게 친숙하며 처음 4단계의 최적화를 위한 시간을 절약합니다. 기본적인 줄기 세포 배양 기술을 가진 사람은 기능적인 섬과 같은 클러스터를 생성할 수 있는 좋은 기회로 이 프로토콜을 재현할 수 있습니다.먼저 얼음처럼 차가운 DMEM/F12에 희석한 hESC 인증 마트리겔로 배양제를 사전 코팅하고 플레이트를 가습된 섭씨 37도의 5% 이산화탄소 인큐베이터에 30분 동안 넣습니다. hPSC 배양액에서 사용한 배지를 흡인하고 DPBS로 한 번 헹굽니다. hPSC 배양액을 섭씨 37도에서 3-5분 동안 세포 해리 효소를 사용하여 단일 세포로 해리시킵니다.해리 후 따뜻한 DMEM/F12 배지를 추가하여 세포를 헹구고 15밀리리터 또는 50밀리리터 원추형 튜브로 옮깁니다. 세포 현탁액을 300G에서 5분 동안 원심분리하고 펠릿을 10마이크로몰 Y-27632를 함유하는 줄기세포 완전 배지에 재현탁시킵니다. 그런 다음 혈구계를 사용하여 살아있는 세포 계수를 수행합니다.흡입 후 희석된 마트리겔을 계산하고 즉시 살아있는 세포를 1.6 내지 1.8배의 10 내지 5제곱센티미터 밀도로 마트리겔 코팅된 웰에 파종합니다. 가습 인큐베이터에서 24시간 동안 세포를 배양합니다. 다음으로, 1 단계, 첫째 날, 1 단계 1A 매체를 준비합니다.사용한 배지를 스테이지 1A 배지로 교체하고 24시간 동안 배양합니다. 다음날 우물에서 사용한 배지를 새로 준비한 스테이지 1B 배지로 교체합니다. 2단계, 첫째 날에는 2A 단계 배지를 준비하고 웰의 배지를 2A 단계 배지로 교체합니다.2B 단계 배지를 웰에 추가하기 전에 24 시간 동안 배양하십시오. 3단계, 첫째 날, 우물에서 사용한 배지를 흡인한 다음 갓 준비한 3단계 배지를 추가하고 가습 인큐베이터에서 배양합니다. 첫째 날인 4단계에서는 사용한 배지를 새로 준비한 4단계 배지로 교체하고 가습 인큐베이터에서 배양합니다. 4단계, 5일차에는 웰당 500마이크로리터의 접착 방지 헹굼 용액으로 마이크로웰을 전처리합니다.마이크로웰 플레이트를 1, 300G에서 5분 동안 원심분리하고 현미경으로 관찰하여 기포가 마이크로웰에 갇히지 않도록 합니다. 그런 다음 우물에서 헹굼 용액을 흡인하고 DPBS 1밀리리터로 한 번 헹굽니다. 그런 다음 각 웰에 1밀리리터의 응집 매체를 추가합니다.췌장 전구 배양물에서 사용한 배지를 제거한 후, 섭씨 37도에서 10-12분 동안 해리 시약을 사용하여 단일 세포로 해리하기 전에 DPBS로 배양물을 한 번 세척합니다. 따뜻한 DMEM/F12로 세포를 헹구고 300G에서 5분 동안 원심분리를 위해 튜브에 옮깁니다. 펠릿을 응집 배지에 재현탁시키고 살아있는 세포 계수를 수행합니다.웰당 2.4 - 360만 개의 세포를 파종하고 각 웰에 응집 배지를 추가하여 웰당 2밀리리터의 최종 부피를 얻습니다. P-1000 피펫 팁을 사용하여 세포가 고르게 분포되도록 위아래로 부드럽게 피펫팅합니다. 세포 현탁액을 300G에서 5분 동안 원심분리하여 마이크로웰의 세포를 포획하고 가습 인큐베이터에서 24시간 동안 배양하여 응집을 시작합니다.응집 후 응집체를 위아래로 여러 번 부드럽게 피펫팅하여 응집되지 않은 세포를 띄웁니다. 응집체가 가라앉으면 흡인 응집체 없이 부유하는 응집되지 않은 세포가 들어 있는 사용된 배지를 조심스럽게 제거합니다. 새로운 스테이지 5 배지를 마이크로웰 플레이트 표면에 분사하여 마이크로웰에서 응집체를 제거하고 초저 부착 6웰 플레이트로 옮깁니다.초저 부착 6개의 웰에서 모든 골재를 수집한 후 5단계 배지에 다시 현탁시켜 밀도를 100마이크로리터당 20개의 클러스터로 조정합니다. 그런 다음 멀티채널 피펫을 사용하여 50마이크로리터의 스테이지 5 배지를 초저 부착 ULA 플랫 바닥 96웰 플레이트의 각 웰에 분주합니다. 모서리 및 가장자리 웰을 200마이크로리터의 DPBS로 채웁니다.분배하기 전에 매번 클러스터 재현탁액을 부드럽게 혼합하십시오. 그런 다음 100마이크로리터의 클러스터 재현탁액을 ULA 평평한 바닥 96웰 플레이트의 각 웰에 추가합니다. 배양 플레이트를 가습 인큐베이터의 평평한 표면에 24시간 동안 놓습니다.다음날 또는 5단계, 2일차에 다중 채널 피펫을 사용하여 각 웰에서 사용된 배지 90마이크로리터를 부드럽게 제거하고 5단계 배지 100마이크로리터로 리프레시합니다. 6단계, 첫째 날에는 우물당 90마이크로리터의 사용한 배지를 100마이크로리터의 6단계 배지로 교체합니다. 7단계, 첫째 날, 사용한 배지를 제거하고 웰당 100마이크로리터의 7단계 배지를 추가합니다.본 연구에서는 마이크로웰 플레이트를 이용하여 크기와 형태가 균일한 수천 개의 췌장 전구 군집을 한 번에 생성하였고, 평균 응집 효율은 약 74%였으며, 중요한 것은 이들 군집에서 PDX1 및 NKX6.1의 발현이 응집 후 높은 수준으로 유지되었다는 점이다. 인슐린 발현 세포는 시간이 지남에 따라 살아있는 배양에서 인슐린 GFP 신호가 증가한 것으로 표시된 바와 같이 내분비 클러스터 내에서 점차적으로 유도되었습니다. 클러스터 크기는 5단계와 7단계 사이에 평균 직경 150미크론에서 220미크론으로 증가합니다.세포 조성의 특성 분석은 하이브리드 프로토콜에 의해 생성된 7기 hPSC 섬이 주로 내분비이며 4개의 주요 섬 세포 유형으로 구성되어 있음을 보여줍니다. 이 하이브리드 프로토콜은 주로 단일 호르몬 섬 세포와 소수의 이중 호르몬 세포를 생성했습니다. 분화 베타 세포는 NKX6.1, MAFA, NEUROD1, PDX1 및 GLUT1을 발현합니다.또한, 7단계 배양에서 60%의 인슐린 및 PDX1 이중 양성 세포와 50%의 C-펩타이드 및 NKX6.1 이중 양성 세포를 유도했습니다. 시험관 내에서 정적 포도당 자극 인슐린 분비 분석은 7기 hPSC 섬이 높은 포도당 및 직접적인 탈분극에 반응하여 높은 인슐린 수치를 분비한다는 것을 입증했습니다. hPSC 섬의 총 인슐린 함량은 사체 섬의 약 절반입니다.줄기 세포 유래 섬을 생성하기 위한 다중 웰 기반 정적 배양 시스템은 다양한 in situ 분석을 용이하게 하며 프로토콜 개발 및 소규모 스크리닝 연구에 적합한 플랫폼 역할을 할 수 있습니다. 96웰 플레이트에서 정적 배양 중에 클러스터 융합을 최소화하려면 배지 교환을 수행할 때 플레이트를 기울이지 마십시오. 플레이트는 항상 평평한 표면에서 수평을 유지하십시오.

differentiation-human-pluripotent-stem-cells-into-insulin-producing

Research

연구

JoVE Journal

Developmental Biology

발생생물학

현재의 연구는 인간 배아 줄기 세포를 췌장 분화를 유도으로 이동 차별화 접근 방식에 대해 설명합니다. 큰 의미 중 인슐린을 표현하는 세포로 췌장 progenitors을 얻은​​ 인간 배아 줄기 세포를 찾는 것이 내피 세포 공동 배양 mediates의 성숙입니다.

인간 배아의 내피 세포 공동 배양 Mediates의 성숙은 감독 차별화 접근법에서 췌장 인슐린 생산 세포로 세포를 줄기

분리하는 프로토콜은, 인간 태아의 췌장 세포에서 파생 된 문화, 이미지 섬 세포 클러스터 (ICCS)를 설명한다. 이 방법은 조직, 문화, 단일 층으로 또는 집계 등의 현탁액 및 확산 마커와 췌장 세포의 운명 결정에 대한 이미지에서 ICCS을 생성하는 데 필요한 단계를 자세히 설명합니다.

인간의 태아 췌장 세포 클러스터의 분리, 문화, 및 이미징

여기서는 하류 어플리케이션 및 상기 분화의 개선을위한 결정적인 내배엽으로 분화 노력하고 인간 배아 줄기 세포의 정제를위한 방법을 설명한다.

인간 배아 줄기 세포로부터 생성 된 내배엽 세포의 정제를위한 신속하고 효율적인 방법

여기에서는 시험 관내 NKX6-1 + 췌장 전구 세포에 인간 배아 줄기 세포가 분화하는 4 단째의 프로토콜을 설명한다. 이 프로토콜은, 인간 다 능성 줄기 세포의 종류에 적용될 수있다.

능성의 효율적인 분화 NKX6-1에 줄기 세포<sup&gt; +</sup&gt; 췌장 전구 세포

여기, 우리 췌 장/십이지 homeobox 단백질 1+ 로 인간의 만능 줄기 세포 (hPSCs)를 차별화 하는 상세한 프로토콜을 제시 (PDX1+) 췌 장 계보의 세대에 대 한 셀의 비 식민지 유형 단층 성장에 따라 단일 세포를 해리 했다. 이 메서드는 생산 하는 동종 hPSC 파생 된 세포, 유전자 조작 및 심사에 적합 합니다.

효율적인 세대의 췌 장/십이지 Homeobox 단백질 1+ 뒤 Foregut/췌 장 창시자 접착 문화에 hPSCs에서

본 프로토콜은 평면 단일층에서 인간 만능 줄기 세포 (hPSC)로부터 유래된 췌장 전구세포에서 PDX1 및 NKX6.1 전사 인자의 동시 발현을 증가시키는 향상된 방법을 기술한다. 이것은 신선한 매트릭스를 보충하고, 세포 밀도를 조작하고, 내배엽 세포를 해리시킴으로써 달성됩니다.

2D 배양 시스템에서 인간 만능줄기세포를 췌장 베타세포 전구체로 분화

이 기사에서는 β-cell 유사 세포의 유도 분화 및 기능 분석을 위한 프로토콜을 제시합니다. 인슐린을 생산하는 췌장 세포를 생성하기 전에 인간 만능 줄기세포에 대한 최적의 배양 조건과 통로를 설명합니다. 6단계 분화는 최종 내배엽 형성에서 포도당에 반응하여 인슐린을 분비하는 세포와 같은 기능적 β세포로 진행됩니다.

인간 만능 줄기세포에서 기능성 췌장 인슐린 분비 세포를 생성하기 위한 최적화된 프로토콜

우리는 인간 줄기세포에서 유래한 췌장 줄기세포 섬을 면역결핍 쥐에 근육 내 이식하여 생체 내 이식과 후속 분석을 위한 최소 침습 프로토콜을 제공합니다.

쥐에서 인간 다능성 줄기세포 유래 췌장 내분비세포의 근육 내 이식

인간 만능 줄기 세포 (hPSCs)는 차별화 별개의 조직 패턴으로 자기 조직하는 고유 능력을 가지고; 이 공간 환경 그라데이션의 표현을 필요로하지만. 우리 hPSC 분화 패턴을 제어하기위한 생화학 적 및 기계적 그라디언트를 생성하는 간단하고 강력한 방법으로서 공판 미세 패턴을 제시한다.

차별화 운명의 공간 조직을 프로빙에 대한 인간 다 능성 줄기 세포의 스텐실 미세화

여기에서는 인간 만능 줄기세포(hPSC)를 위한 강력하고 빠르며 확장 가능한 심근세포 분화 프로토콜을 제시합니다. 이 대규모 방법을 사용하여 파생된 심근세포는 인간 심혈관 질환 모델링, 고처리량 약물 스크리닝 및 잠재적인 임상 응용 분야에서 효과적으로 사용할 수 있는 충분한 세포 수를 제공할 수 있습니다.

고도의 재현 작은 분자 기반의 차별화 프로토콜을 사용하여 인간 다 능성 줄기 세포로부터 심근 세포의 대규모 생산

배우세요 정적 현탁 배양법을 이용해 췌장 전구세포를 인슐린 분비 섬 클러스터로 분화하는 방법을. 이 프로토콜은 세포 스트레스를 줄여 분화 성공률을 높이며, 당뇨병 연구와 치료를 위한 기능성 섬세포 생성에 활용됩니다.

인간 만능 줄기세포를 인슐린 생산 섬 클러스터로 분화(Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells into Insulin-producing Islet Clusters)

더 많은 동영상 탐색