Name: 머드 크랩의 난소 성숙을 증가시키는 눈썹 절제 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-31T13:30:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: 배우세요 머드 크랩의 눈썹 절제 기술을 활용한 난소 성숙 유도 방법을. 소각 및 수술 기법으로 수컷 생존률 저하 없이 30일 내 완전 성숙 단계까지 도달시킬 수 있습니다.

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이 연구는 말레이시아 테렝가누 대학교(Universiti Malaysia Terengganu)의 열대 양식 및 수산 연구소(Institute of Tropical Aquaculture and Fisheries)의 인증을 받은 말레이시아 HICoE(Higher Institution Centre of Excellence) 프로그램에 따라 말레이시아 교육부의 지원을 받았습니다(투표 번호 63933 및 투표 번호 56048). 우리는 Universiti Malaysia Terengganu 및 Sayap Jaya Sdn. Bhd. 민간 파트너십 연구 보조금 (Vot. No. 55377)을 통해 . Universiti Sains Malaysia에서 Khor Waiho 및 Hanafiah Fazhan에 이르는 겸임 학술 펠로우 직책도 인정됩니다.

이 프로토콜은 말레이시아 실험동물과학협회(Laboratory Animal Science Association of Malaysia)에서 규정한 과학적 목적을 위한 동물 관리 및 사용에 대한 말레이시아 실행 강령을 따릅니다. 실험 샘플의 희생은 National Institutes of Health Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (NIH Publications No. 8023, revised 1978)에 따라 수행되었다. 성적으로 미성숙한 암컷 머드 크랩(오렌지 머드 크랩 S. olivacea)은 말레이시아 세티우 습지의 현지 시장(5°66′62′′N, 102°72′33′′E)에서 수집되었습니다. 머드 크랩 종은 형태학적 특성에 기초하여 확인되었다1.
1. 시료 채취 및 소독
<ol><li>건강하고 활동적이며 미숙한 암컷 머드 크랩을 수집합니다(그림 1). 참고: 미숙아 암컷 게는 80-85mm의 CW 범위와 함께 삼각형 및 밝은 색상의 복부 플랩을 가지고 있습니다.</li>
	<li>게를 염소 처리 된 수돗물 (담수)로 씻어 파편과 삼투 성 기생충을 제거하십시오.</li>
	<li>게를 150ppm 포름알데히드에 20ppt 염분과 함께 30분 동안 담급니다.</li>
	<li>포름알데히드 처리 동안 에어스톤으로 지속적이고 부드러운 통기를 유지하십시오. 폭기 소스는 중앙 폭기 라인 또는 수족관 폭기 펌프에서 나올 수 있습니다.</li>
	<li>흐르는 바닷물로 게를 씻어 잔류 포름알데히드를 제거합니다.</li>
</ol><img alt="미숙아와 성숙한 암컷 게 형태 비교; 크기 척도 참조 포함; 해양 생물학." class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65039/65039fig01.jpg" data-altupdatedat="1754922859000" data-alt="Figure 1"> 그림 1: 성적 성숙 단계를 식별하는 데 사용되는 암컷 머드 크랩의 복부 형태. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65039/65039fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
2. 순응
<ol><li>소독 된 각 암을 별도의 32L 원형 탱크에 옮깁니다.</li>
	<li>20 ppt 염분에서 3 일 동안 암컷을 키우고 게 체중의 약 4 % -5 %에서 잘게 잘린 해양 물고기로 하루에 두 번 (아침 09:00 오전 및 저녁 20:00 오후) 계속 먹이십시오.</li>
	<li>아침 먹이기 전에 사이펀으로 과잉 사료와 먹지 않은 사료를 제거하십시오.</li>
	<li>게 사육 바닷물 (20 ppt)의 10 %를 매일 교환하십시오.</li>
</ol>3. 성적 성숙을 위한 유도 탈피
<ol><li>멸균 된 가위를 사용하여 수영 다리를 제외한 모든 다리를 자릅니다.<ol><li>스쿱 그물로 게를 잡고 게를 조심스럽게 잡습니다. 먼저 두 cheliped를 자른 다음 가위를 사용하여 두 번째 관절에서 걷는 다리를 자릅니다. 게는 손상된 부속물을 자동으로 자동 조정합니다. 사지 자율절제술에는 마취가 필요하지 않습니다.</li>
	</ol></li>
	<li>사지 자율절제술 직후 민물에서 게를 씻으십시오.</li>
	<li>사지가 자율적으로 절단된 게를 구멍이 뚫린 플라스틱 바구니(28cm L x 22cm W x 7cm H)에 개별적으로 옮기고 유리 섬유 탱크(305cm L x 120cm W x 60cm H)에 넣습니다. 알림: 두 개의 바구니를 묶고 함께 고정할 수 있습니다. 상단 바구니는 게가 바구니에서 빠져 나올 수 없도록 덮개로 사용됩니다.</li>
	<li>염도가 20ppt이고 수심이 10cm 이상인 재순환 양식 시스템(RAS)을 사용하여 전체 플라스틱 바구니가 잠기도록 합니다.</li>
	<li>사지가 자율적으로 조절된 암컷 게에게 게 체중의 5%-7%로 하루에 두 번 잘게 잘린 해양 물고기를 계속 먹이십시오.</li>
	<li>털갈이를 통해 성적으로 성숙할 때까지 게를 키웁니다(35일). 참고: 유도 탈피는 상업적 난소 성숙 및 야생 성숙 암컷 진흙 게로 종자 생산을 위해 건너뛸 수 있습니다. 야생에서 수확 된 성숙한 암컷은 순응해야하며 냉담한 마취와 후속 안구 절제를 직접 받아야합니다.</li>
</ol>4. 마취
<ol><li>CW &gt;86 mm의 짙은 색의 타원형 복부 플랩이있는 성적으로 성숙한 여성을 선택하십시오 (그림 1).</li>
	<li>국자 그물로 게를 잡아 마취를 위해 작은 수족관에 개별적으로 보관하십시오.</li>
	<li>순응 기간 5분 후 각 수족관에 2mL/L의 2-페녹시에탄올(2-PE)을 넣고 15분간 마취 치료를 합니다.</li>
	<li>게가 자발적인 움직임의 부족으로 완전히 마취되었는지 확인하십시오.</li>
</ol>5. 눈썹 절제
<ol><li>소작 기술<ol><li>테이블 위와 열린 공간에서 모든 절차를 수행하십시오.</li>
		<li>나무 또는 플라스틱 손잡이가 있는 납작한 머리 니켈-강철 금속 막대(예: 드라이버)를 잡고 젖은 면 수건으로 손잡이를 덮습니다.</li>
		<li>오토클레이브에서 두 개의 스테인리스 수술용 집게를 소독합니다.</li>
		<li>스프레이 병에 70% 에탄올을 준비하고 토치 및 빨간색 뜨거운 드라이버와 같은 화재 관련 소스에서 멀리 두십시오. 티슈 페이퍼를 사용할 수 있도록 준비하십시오. 알림: 에탄올은 가연성이 높습니다. 화기로부터 안전 거리를 유지하십시오.</li>
		<li>토치를 가스 실린더(부탄)에 단단히 연결합니다. 주의 : 토치와 가스 실린더의 지침을 따르십시오. 가스 실린더와 연결할 때 토치가 꺼져 있는지 확인하십시오. 가스 실린더에 언급된 모든 화재 안전 예방 조치를 읽고 따르십시오.</li>
		<li>뜨거운 물체로 인한 부상을 방지하기 위해 두꺼운 면장갑을 착용하십시오.</li>
		<li>금속 막대가 밝은 빨간색이 될 때까지 금속 막대의 끝을 토치의 불에 가두십시오.</li>
		<li>마취 된 게를 젖은 면수건으로 덮으십시오. 알림: 불필요한 손상을 방지하기 위해 게의 안테나를 덮으십시오.</li>
		<li>멸균 된 집게로 게의 한쪽 눈을 잡으십시오. 알림: 처음 사용할 때는 오토클레이브에서 집게를 소독하고 다른 게에 사용할 때는 70% 에탄올을 사용하여 소독합니다.</li>
		<li>빨갛게 달궈진 금속 납작한 끝을 게의 눈에 대고 눈줄기가 주황색 또는 붉은 주황색으로 변할 때까지 약 10-15초 동안 약간 누릅니다. 이 단계를 수행할 때 인접 구조물의 손상을 방지하기 위해 주의하십시오. 참고: 소작 방법에 따라 안자 절제술을 시행하려면 두 사람이 필요합니다: 한 사람은 게를 잡고 다른 한 사람은 절제 절차를 수행합니다.</li>
		<li>게 사이에 교차 오염이 없도록 70% 에탄올 스프레이로 집게를 소독하십시오. 알림: 잠재적인 화재 위험을 방지하기 위해 5% 에탄올을 사용하여 소독하기 전에 겸자가 냉각되었는지 확인하기 위해 안자 절제 절차 후 최소 70분 동안만 이 단계를 수행하십시오.</li>
		<li>모든 게에 대해 눈썹 절제를 수행한 후 뜨거운 니켈강 금속 막대(드라이버)를 수돗물에 담그십시오.</li>
		<li>재사용하기 전에 수건을 소독하십시오. 시간을 절약하기 위해 여러 수건을 사용할 수 있습니다. 알림: 수건을 수돗물로 씻고 30ppm의 염소 처리된 물에 5분 동안 담그십시오. 그런 다음 수건을 다시 수돗물로 씻고 1g/L 티오황산나트륨 용액에 담근다.</li>
		<li>토치를 끈 후 안전한 장소에 보관하고 환경 온도(약 30분)로 돌아올 때까지 기다렸다가 분리하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>수술 기법<ol><li>환기가 잘되는 곳에서 절차를 수행하십시오.</li>
		<li>오토클레이브에서 두 개의 수술용 가위와 집게를 소독합니다.</li>
		<li>70% 에탄올 50mL를 100mL 유리 비커에 붓습니다.</li>
		<li>두꺼운 면장갑을 착용하십시오.</li>
		<li>마취 된 게를 잡고 젖은 면수건으로 덮으십시오.</li>
		<li>멸균 된 집게로 게의 한쪽 눈을 잡으십시오.</li>
		<li>멸균 된 수술 용 가위를 사용하여 눈썹을 신속하게 잘라냅니다. 참고: 게의 상처 부위에서 체림프가 손실될 수 있습니다.</li>
		<li>사용 후 가위와 집게를 70% 에탄올에 담그고 티슈 페이퍼로 건조시킨 후 재사용하십시오.</li>
	</ol></li>
</ol>6. 마취 후 관리
<ol><li>20 ppt 여과 된 바닷물을 준비하고 연속 통기로 오버 헤드 탱크에 보관하십시오.</li>
	<li>중력 물 흐름을 위해 오버 헤드 탱크와 유연한 파이프를 연결하십시오.</li>
	<li>눈썹 절제 직후 게를 바구니에 넣고 게를 오버헤드 탱크에서 흐르는 바닷물(주변 수온: 28°C)에 노출시킵니다.</li>
	<li>바닷물이 계속 흐르도록 하고 게가 자발적으로 움직일 수 있을 때까지 모니터링하여 마취에서 회복되었음을 나타냅니다. 알림: 해수는 지하 탱크에서 준비할 수 있으며 물의 흐름을 위해 수중 워터 펌프를 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>추가 관찰을 위해 30 분 동안 수족관에 통기가있는 20 ppt 바닷물에 게를 개별적으로 보관하십시오. 참고: 회수된 게는 후속 어미 배양 과정에서 개별적으로 배양됩니다.</li>
</ol>7. 난소 성숙 관찰
<ol><li>어미의 가축 사육<ol><li>다 자란 게를 개별 32L 원형 탱크로 옮깁니다.</li>
		<li>잘게 잘린 해양 물고기 (-20 ° C에서 냉동)를 하루에 두 번 (아침 09:00 오전 및 저녁 20:00 pm) 계속 먹이고 아침 먹이기 전에 먹지 않은 사료를 제거하십시오.</li>
		<li>20 ppt 염분으로 30 일 동안 개별적으로 새끼를 낳습니다.</li>
		<li>대변을 제거하고 매일 바닷물 (20 ppt)의 10 %를 교환하십시오.</li>
	</ol></li>
	<li>해부<ol><li>해부 트레이, 가위, 집게를 70% 에탄올로 청소합니다.</li>
		<li>2-PE 침지 마취 방법으로 여성을 개별적으로 마취합니다.</li>
		<li>생식선 단계를 확인하기 위해 안자 절제술을 거치지 않은 새로 성숙한 암컷(미숙아 암컷을 털갈이 후)을 무작위로 선택합니다.</li>
		<li>눈줄기가 절제된 모든 실험 암컷을 개별적으로 희생하고 생식선 성숙 단계를 식별합니다. 날카로운 멸균 송곳을 사용하여 게의 흉부 신경절을 파괴하십시오. 먼저 갑각을 제거한 다음 난소가 보이도록 간췌장을 제거합니다. 난소 색을 관찰하고 난소 성숙 단계를 확인합니다(그림 2).</li>
	</ol></li>
	<li>난소 성숙 단계 식별<ol><li>육안으로 또는 실체 현미경으로 난소 색을 관찰하십시오.</li>
		<li>착색에 기초한 난소 성숙 단계확인 30: 미성숙(단계-1)은 반투명 또는 크림색의 백색을 나타내고; 초기 성숙 (2 단계)은 옅은 황색을 띤다. (iii) 성숙 전 (3 단계)은 황색 내지 밝은 주황색을 나타낸다. (iv) 완전히 성숙한(4단계) 짙은 주황색 내지 붉은색을 나타낸다.</li>
	</ol></li>
</ol>

저자 중 누구도 이해 상충이 없습니다.

이 프로토콜은 머드 크랩 Scylla spp.의 안구 절제를 위해 개발되었으며 생식선 성숙을 유도하는 효율적인 방법으로 적용할 수 있습니다. 이 프로토콜은 머드 크랩의 상업적 난소 성숙을 위해 쉽게 복제할 수 있으며 머드 크랩 종자 생산에서 잠복기(산란에서 다른 산란까지의 시간)를 줄이기 위해 구현할 수 있습니다.
갑각류(즉, 민물 새우, 해양 새우)의 눈썹 절제는 일반적으로 생식선 성숙과 비계절 산란을 유도하기 위해 수행됩니다11,12,13. 브라츄란 게의 안구 절제술은 탈피 25,32,33, 호르몬 조절 18, 생식선 성숙 34, 유도 번식 및 번식 능력 35,36,37,38,39<...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65039">Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs</a>. The Introduction, Protocol, Discussion and References were&#160;updated.

Erratum: Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

Scylla 속에 속하는 4 종의 머드 크랩 종은 모두 양식업에서 상업적으로 중요한 갑각류 종입니다 1,2. 진흙 게를 포함한 갑각류의 성장과 미숙 (아성체 또는 사춘기) 단계에서 성적으로 성숙한 (성체) 단계로의 전환은 오래되고 작은 외골격을 주기적으로 흘리는 탈피 과정을 통해 발생합니다. 갑각 너비(CW), chelipeds 및 복부 플랩 형태는 Scyll a spp.의 성적 성숙도를 결정하는 데 널리 사용됩니다. 3,4,5. 털갈이 과정은 다양한 호르몬의 작용에 의해 조절되며 엄청난 양의 에너지가 필요합니다6. 정상적인 털갈이 과정 외에도, 자발적으로 또는 외부 요인에 의해 유발 된 팔다리의 손실은 생존율에 영향을 미치지 않으면 서 게의 털갈이를 촉진합니다 7,8,9. 따라서 사지 자율절제술은 연질 껍질 머드 크랩 양식 산업 7,9에서 털갈이 유도에 일반적으로 사용됩니다.
일방적 또는 양측 눈썹 절제술은 생식선 성숙 및 종자 생산을 위해 민물 새우와 해양 새우에서 주로 인기가 있습니다10,11,12,13. 갑각류의 일반적인 안자 절제 기술은 다음을 포함한다: (i) 끈을 이용한 안자 기저부에서의 결찰14,15; (ii) 고온 집게 또는 전기 소작 장치(16)를 사용한 안자의 소작; (iii) 열린 상처를 남기기 위해 눈썹을 제거하거나 직접 꼬집는 단계(12); 및 (iv) 면도칼로 눈의 말단부를 절단한 후 절개를 통해 안자 내용물을 제거하는 단계(17). 눈썹 X 기관은 갑각류 고혈당 호르몬 (CHH), 털갈이 억제 호르몬 (MIH) 및 vitellogenes-inhibiting hormones (VIH)를 조절하기 때문에 갑각류의 중요한 내분비 기관입니다 6,18,19,20,21,22. 눈줄기 X-기관(또는 부비동 샘 복합체)은 신경펩티드 호르몬 계열에 속하는 성선 형성 억제 호르몬(VIH)이라고도 하는 생식선 억제 호르몬(GIH)을 합성하고 방출한다6. 편측성 또는 양측성 안켠 절제술은 GIH 합성을 감소시켜 자극 호르몬(즉, 생식선 자극 호르몬, GSH)의 우세와 갑각류의 난소 성숙 과정을 가속화한다23,24,25,26. 눈 줄기 절제 후 GIH의 영향이 없는 암컷 갑각류는 난소 발달에 에너지를 쏟는다27. 일방적인 안대 절제술은 갑각류의 난소 성숙을 유도하기에 충분하며11 새우와 게의 절제된 안자즙은 여러 번의 탈피 후에 재생될 수 있음이 밝혀졌다28. Scylla spp.에는 4개의 난소 발달 단계가 기록되어 있습니다: i) 미성숙(1기), ii) 조기 성숙(2기), iii) 미성숙(3단계), iv) 완전 성숙(4단계)29,30. 미성숙 난소 단계는 미성숙 여성에서 발견됩니다. 사춘기 털갈이와 짝짓기 후, 미성숙 난소는 발달을 시작하고 산란하기 전에 마침내 성숙 (4 단계)31.
눈썹 절제 프로토콜은 머드 크랩 어미의 발달과 종자 생산에 필수적입니다. 세계 식품 시장에서는 근육 함량이 높은 게보다는 완전히 성숙한 난소 (4 단계)를 가진 성숙한 머드 크랩이 소비자에 의해 선호되므로 큰 수컷보다 상업적 가치가 높습니다. 진흙 게의 눈썹 절제에 대한 완전한 프로토콜은 없습니다. 이 작업의 안자 절제 프로토콜은 완전히 마취된 게를 사용하여 스트레스를 최소화하고 게에 물린 사람의 신체적 부상을 최소화합니다. 이 프로토콜은 쉽고 비용 효율적입니다. 여기에서 우리는 생식선의 성숙을 유도할 수 있는 Scylla spp.의 안자 절제에 대한 프로토콜을 제시합니다. 두 가지 안자 절제 기술(소작 및 수술)을 테스트하고 암컷 진흙 게의 생식선 발달 속도를 기반으로 효율성을 비교했습니다.

<table><tbody><tr><td>폭기 튜브&nbsp;</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>수족관 및 애완동물 가게</td></tr><tr><td>Airstone</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>수족관 및 애완동물 가게</td></tr><tr><td>오토클레이브 기계</td><td>HIRAYAMA MANUFACTURING CORPORATION</td><td>N/</td><td>A 일본 제조</td></tr><tr><td>Bleaching Powder (Hi-Chlon 70%)</td><td>Nippon Soda Co.Ltd, Japan</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 블로우 토치&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>해당 없음</td><td>원형</td></tr><tr><td>탱크(32L)</td><td>BEST PLASTIC INDUSTRY SDN. BHD.&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 코튼 핸드 장갑 (두꺼운)&nbsp;</td><td>MR D.I.Y. 그룹 Berhad</td><td>해당</td><td>없음</td></tr><tr><td>없음 면 타월</td><td>MR D.I.Y. 그룹 Berhad</td><td>해당</td><td>없음 해당 없음</td></tr><tr><td>디지털 온도계</td><td>Hanna Instrument</td><td>HI9814</td><td>Hanna&nbsp; 악기&nbsp; GroLine 수경법 방수 pH/EC/TDS/임시 휴대용 미터 HI9814</td></tr><tr><td>디지털 방식으로 버니어 캘리퍼스</td><td>INSIZE Co., 주식 회사.</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>해부 트레이</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td>N<td>/A</td><td>말레이시아 Universiti 연구 센터 Terengganu</td></tr><tr><td>드로퍼 병/플라스틱 피펫 드로퍼</td><td>Shopee 말레이시아</td><td>N/</td><td>A N/A</td></tr><tr><td>에탄올 70%</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>033361.M1</td><td>이중 증류수를 사용하여 70%로 희석</td></tr><tr><td>섬유유리 탱크 (1 톤)</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>Research Center of Universiti Malaysia Terengganu</td></tr><tr><td>고운 모래</td><td>N</td><td>/A</td><td>말레이시아 Universiti Terengganu</td></tr><tr><td>First Aid Kits</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td> N<td>/A</td></tr><tr><td>플랫 헤드 니켈강 금속 막대(스크류 드라이버)</td><td>MR D.I.Y. Group Berhad</td><td>해당 없음</td><td>포</td></tr><tr><td>름알데히드</td><td>Thermo Scientific Chemicals</td><td>119690010</td><td></td></tr><tr><td>가스 실린더 (부탄 가스) 블로우 &nbsp; 토치</td><td>MR D.I.Y. 그룹 Berhad</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 가스 라이터 건 (긴 머리)</td><td>MR D.I.Y. 그룹 Berhad</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 유리 비커 (100 mL))</td><td>Corning Life Sciences</td><td>1000-100</td><td></td></tr><tr><td>아이스 백&nbsp;</td><td>Watsons Malaysia</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 펀칭 플라스틱 바구니&nbsp;</td><td>에코 숍 마케팅 Sdn. Bhd.</td><td>해당 없음</td><td>: 해당 없음</td></tr><tr><td>PVC 파이프 15mm</td><td>Bina Plastic Industries Sdn Bhd (HQ)</td><td>해당 없음</td><td>: 해당 없음</td></tr> : <tr><td>굴절계</td><td>ATAGO CO., LTD.</td><td></td><td></td></tr><tr><td>냉장고</td><td>Sharp Corporation 일본</td><td>N/A</td><td>체스트 프리저 SHARP 110L - SJC 118</td></tr><tr><td>스쿱 넷</td><td>MR D.I.Y. 그룹 버하드</td><td></td><td>N/A</td></tr><tr><td>해수</td><td>해수 해체 AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>말레이시아 대학 연구 센터 테렝가누</td></tr><tr><td>사이펀 파이프</td><td>MR D.I.Y. 그룹 버하드</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 스프레이 병</td><td>Mr. DIY Sdn Bhd</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 스테인리스 수술용 펜치&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 스테인리스 수술용 가위&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td>N/</td></tr><tr><td>A 잠수 펌프&nbsp;</td><td>AS</td><td>N/A</td><td>모델: Astro 4000</td></tr><tr><td>요오드 용액의 팅크&nbsp; (포비돈 요오드)</td><td>파마시 Fajr Sdn Bhd</td><td>해당 없음</td><td></td></tr><tr><td>티슈 페이퍼&nbsp;</td><td>N/A</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>투명 플라스틱 수족관</td><td>Ming Yu Three</td><td>N/A</td><td>수족관 및 애완동물 가게</td></tr><tr><td>방수 테이블</td><td>Hatcheri AKUATROP&nbsp;</td><td>N/A</td><td>말레이시아 테렝가누 대학교 연구 센터</td></tr></tbody></table>

머드 크랩의 난소 성숙을 증가시키는 눈썹 절제

Eyestalk Ablation to Increase Ovarian Maturation in Mud Crabs

머드 크랩(Scylla spp.)은 인도-서태평양 지역에서 볼 수 있는 상업적으로 중요한 갑각류 종입니다. 배양 중에 난소 성숙의 유도는 성숙한 머드 크랩에 대한 소비자 수요를 충족시키고 종자 생산을 촉진하는 데 중요합니다. 눈썹 절제술은 진흙 게의 난소 성숙을 향상시키는 효과적인 도구입니다. 그러나 진흙 게의 눈웍 절제에 대한 표준 프로토콜은 없습니다. 이 연구에서는 소작(마취된 게의 눈줄기를 제거하기 위해 뜨거운 금속을 사용하는 것)과 수술(수술용 가위를 사용하여 눈줄기를 제거하는 것)의 두 가지 안자 절제 기술에 대해 설명합니다. 안자 절제 전에 성적으로 성숙한 여성(CW > 86mm)을 바닷물과 함께 얼음 주머니(-20°C)를 사용하여 마취했습니다. 수온이 4°C에 도달했을 때, 얼음 주머니를 물에서 제거하였다. 흐르는 바닷물(주위온도: 28°C)은 안쌥절제 직후 마취 회복을 위해 사용하였다. 사망률은 안구 절제 과정 중 또는 이후에 발생하지 않았습니다. 여기에 제시된 안대 절제 프로토콜은 진흙 게의 난소 성숙을 가속화했습니다.

생식선 성숙 크림색의 흰색 난소 조직(미성숙 난소, 1기)은 안자 절제술을 수행하기 전에 해부된 암컷(n = 6)의 100%에서 발견되었습니다(그림 2). 눈썹 절제술을 받은 암컷 게(n=63; 소작 기법을 적용한 암컷 31마리, 수술 기법을 사용한 암컷 32마리)의 생식선 성숙률은 개별 사육 30일 후 안대 절제술을 받지 않은 암컷 게(n=31)에 비해 더 높았다(그림 3). 미성숙 난소의 가장 높은 비율(3단계)은 눈썹이 절제된 암컷 게에서 발견되었으며(그림 3; 소작 및 수술 기술 모두), 일원 분산 분석(ANOVA)은 실험 암컷 게의 난소 성숙 단계 간에 상당한 차이(p &lt; 0.05)를 보여주었습니다(표 1). 대조군은 소작 및 수술 치료군에 비해 미성숙 암컷 게의 유병률이 더...

마취된 암컷 게에 대해 두 가지 안구 절제 프로토콜(즉, 소작 및 수술 접근법)을 수행했습니다. 진흙 게의 눈썹 절제는 생존율을 감소시키지 않으면서 난소의 숙성을 앞당겼습니다.

Mud crabs (Scylla spp.) are commercially important crustacean species that can be found throughout the Indo-West Pacific region. During culture, the ...

설명된 프로토콜은 진흙 게의 안자 절제 중 스트레스를 최소화하여 안자 절제로 인한 사망 발생을 줄입니다. 시간 효율성은 동물에 대한 스트레스를 최소화하는 열쇠입니다. 절차를 수행하기 전에 모든 것이 준비되었는지 확인하십시오.건강하고 활동적이며 조산한 암컷 머드 크랩을 염소 처리된 수돗물로 세척하여 파편과 기생충을 제거하는 것으로 시작하십시오. 게를 포름알데히드에 30분 동안 담가둡니다. 포름알데히드 처리 동안 공기 돌로 지속적이고 부드러운 통기를 보장합니다.다음으로, 흐르는 바닷물을 사용하여 게를 씻어 잔류 포름알데히드를 제거합니다. 게 눈썹의 소작을 수행하려면 막대가 밝은 빨간색이 될 때까지 토치로 금속 막대의 끝을 가열하여 시작하십시오. 마취 된 게를 젖은 면수건으로 덮고 멸균 된 집게로 게의 한쪽 눈을 잡습니다.눈썹이 주황색 또는 붉은 주황색으로 변할 때까지 약 10-15초 동안 붉고 뜨거운 금속 끝을 게의 눈에 대십시오. 집게를 70 % 에탄올로 소독하고 멸균 티슈 페이퍼로 청소하여 게 사이의 교차 오염이 없도록합니다. 모든 게에 절제를 한 후 금속 막대를 수돗물에 담그십시오.외과 적 절제술을 수행하려면 두꺼운면 장갑을 사용하여 마취 된 게를 잡고 젖은 면 타월로 덮으십시오. 멸균 집게를 사용하여 게의 한쪽 눈을 잡고 수술 용 가위로 눈썹을 재빨리 자릅니다. 수술 후, 지속적인 폭기를 통해 20ppm의 여과 된 바닷물로 오버 헤드 탱크를 준비하십시오.중력 물 흐름을 위해 유연한 파이프를 탱크와 연결하십시오. 게를 바구니에 넣고 머리 위 탱크에서 흐르는 바닷물에 담가둡니다. 게가 자발적으로 움직일 수 있을 때까지 흐르는 바닷물 아래에서 게를 모니터링합니다.추가 관찰을 위해 게를 바닷물이있는 다른 수족관에 30 분 동안 개별적으로 놓습니다. 눈썹 절제술을 받지 않은 새로 성숙한 암컷을 무작위로 선택합니다. 갑각과 간췌장을 제거한 후 게 난소의 성숙 단계를 관찰하고 확인합니다.난소 성숙 단계는 착색에 따라 식별 할 수 있으며, 미성숙 단계 1은 반투명 또는 크림색의 흰색, 초기 성숙 단계 2는 옅은 노란색에서 밝은 노란색, 성숙 전 단계 3은 노란색에서 밝은 주황색, 완전히 성숙한 단계 4는 짙은 주황색에서 붉은 색입니다. 생식선 성숙률은 절제되지 않은 여성에 비해 눈썹이 절제된 여성에서 더 높았습니다. 3기 난소의 가장 높은 비율은 눈썹이 절제된 암컷 게에서 발견되었습니다.분산의 일원 분석은 실험적인 암컷 게의 난소 성숙 단계 간에 유의한 차이를 보였다. 대조군은 절제된 그룹에 비해 미성숙 암컷 게의 유병률이 더 높았습니다. 절제된 그룹만이 처리 후 30일 동안 미성숙 단계에서 4단계 암컷 게를 생산할 수 있었습니다.진흙 게의 눈썹이 소작 또는 수술 기술에 따라 완전히 제거되었는지 확인하는 것이 중요합니다. 눈썹 절제술을 통해 갑각류 농부들은 난소 성숙과 털갈이를 쉽게 유도할 수 있습니다. 또한 연구자들은 머드 크랩 번식을 조절하는 데 눈썹의 역할을 더 자세히 조사할 수 있습니다.

eyestalk-ablation-to-increase-ovarian-maturation-in-mud-crabs

Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

의 수정 Xenopus의 oocytes 호스트 전송 방법을 사용하여

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Amphipod 갑각류의 여덟 세포 배아에서 단일 셀의 절제<em&gt; Parhyale hawaiensis</em

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조작 및<em&gt; 체외</em의&gt; 성숙<em&gt; 아프리카 발톱 개구리 laevis의</em세포질 내 정자 주입에 이어&gt; 난 모세포, 배아 발달을 연구하는

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를 사용하여 기능성 복제<em&gt; Xenopus의</em&gt; 난자 발현 시스템

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여기에서는 모델 선충 C. elegans의 생식계에서 발현되는 유전적으로 암호화된 칼슘 리포터를 사용하여 수정 및 초기 배발생 중 칼슘을 시각화하기 위한 프로토콜과 도구를 제시합니다.

In vivo Visualization of calcium Transients during fertilization and Early Development in C. elegans(예쁜꼬마선충의 수정 및 초기 발달 중 칼슘 과도 현상의 생체 내 시각화)

배우세요 머드 크랩의 눈썹 절제 기술을 활용한 난소 성숙 유도 방법을. 소각 및 수술 기법으로 수컷 생존률 저하 없이 30일 내 완전 성숙 단계까지 도달시킬 수 있습니다.

머드 크랩의 난소 성숙을 증가시키는 눈썹 절제

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