Name: 알레르기성 접촉성 피부염 평가를 위한 마우스 귀 모델 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-03-24T14:55:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: 배우세요 DNFB를 이용한 마우스 귀 모델에서 알레르기성 접촉성 피부염을 유도하고 평가하는 방법을. 이 프로토콜은 ACD 발병기전 연구와 새로운 치료법 개발에 활용됩니다.

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이 작업은 중국 국립 자연 과학 재단 (NSFC)이 N.-N.에 지원했습니다. Y. (81904212); 장쑤 성 중국 전통 의학 과학 기술 프로젝트 (YB201995); 중국 박사후 연구원을 위한 특별 자금 지원 프로젝트(2020T130562).

생쥐의 모든 관리 및 치료는 Yangzhou University의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에서 수립한 지침에 따라 이루어졌으며 프로젝트 라이선스 SYXK(SU)2022-0044에 따라 기관 동물 관리 및 사용 위원회의 승인을 받았습니다. 이 연구에는 6-8주령의 BALB/c 수컷 및 암컷 마우스가 사용되었습니다. 각 그룹은 6마리의 마우스로 구성되었습니다( 재료 표 참조). 케이지는 음식과 물에 자유롭게 접근할 수 있는 온도 조절 챔버(22 ± 2 °C, 12시간 명암 주기)에 배치되었습니다. 실험 흐름도는 그림 1에 나와 있습니다.
1. 동물 준비
<ol><li>환경에 순응 한 지 1 주일 후에 모델링을 시작하십시오.</li>
	<li>마우스를 조작하기 전에 자외선 램프와 75% 알코올 소독제를 사용하여 환경과 조리대를 청소하고 소독하십시오. 알림: 외부 요인의 영향을 피하기 위해 마우스 귀에 식별을 위해 마우스를 표시할 수 없습니다. 뒷면이나 꼬리 부분의 얼룩을 대안으로 사용할 수 있습니다.</li>
	<li>작은 면봉을 사용하여 생쥐의 복부에 비눗물을 바릅니다 (약 1-2cm2 크기). 모델링 시작(0일)에 면도날이나 면도기( 재료 표 참조)로 모발이 자라는 방향으로 해당 부위를 면도합니다. 그림 2A). 알림: 제모를 위해 직선 면도날을 사용하려면 숙련된 작업자가 필요합니다. 올바르게 수행하지 않으면 피부에 자극을 줄 수 있습니다. 제모를 위해 제모 크림, 클리퍼 또는 안전 면도기를 사용하는 것이 좋습니다.</li>
	<li>마우스의 체중을 측정하고 각 그룹 간의 체중 변화를 비교합니다.</li>
</ol>2. 복부 감작 자극
<ol><li>면도로 인한 복부 피부의 경미한 손상이 완전히 회복되도록 하십시오. 면도 후 2 일 (2 일째)에 복부 감작을 적용하십시오.</li>
	<li>0.5% DNFB 용액 준비: DNFB를 아세톤:올리브 오일 혼합물로 4:1 비율로 희석합니다(예: 400μL의 아세톤과 100μL의 올리브 오일을 혼합, 표 참조). 피펫 건을 사용하여 불고 20회 혼합하여 DNFB 용액을 완전히 혼합합니다. DNFB 용액을 마우스에 투여하기 전에 3-5회 불어서 혼합한다. 알림: 사용하기 전에 용액을 준비하고 알루미늄 호일로 싸서 직사광선으로부터 보호하십시오.</li>
	<li>25μL의 0.5% DNFB 용액을 피펫터를 사용하여 생쥐 복부의 면도한 부위의 피부에 도포합니다(그림 2B).</li>
	<li>복부 면도 부위 중앙에 DNFB 용액을 드리블하고 피펫 팁의 매끄러운 면으로 가볍게 펴서 균일하게 분산시킵니다.</li>
	<li>DNFB 자극 후 30초에 마우스를 침구가 없는 빈 케이지에 넣어 DNFB 용액을 문지르지 않도록 합니다. DNFB 용액이 완전히 건조되면(약 2분) 마우스를 원래 케이지로 되돌립니다.</li>
	<li>DNFB 용액은 사람의 피부를 강하게 자극하므로 취급 시 장갑을 착용하십시오.</li>
</ol>3. 귀 감작 자극
<ol><li>위와 같이 0.2% DNFB 용액, 비히클 용액(아세톤과 올리브 오일의 4:1 혼합물) 및 순수한 물을 준비합니다.</li>
	<li>DNFB 자극 중에 용액이 외이도로 들어가는 것을 방지하기 위해 전체 수술 동안 마우스 몸체의 방향을 향하고 귓바퀴의 바깥쪽 경계가 아래를 향하도록 합니다.</li>
	<li>4일, 6일, 8일 및 10일에 피펫터를 사용하여 0.2% DNFB 용액 또는 비히클 용액 20μL를 마우스의 왼쪽 귓바퀴 내부 표면에 천천히 균일하게 도포합니다. DNFB 용액이 외이도로 들어가는 것을 방지하려면 피펫 팁의 매끄러운 면을 사용하여 투여 중에 DNFB 용액을 부드럽게 분배하십시오. 오른쪽 귀를 치료하지 않고 그대로 두십시오 (그림 2C).</li>
	<li>DNFB 용액이 마를 때까지 기다렸다가 마우스를 케이지에 다시 넣습니다 (약 30 초).</li>
	<li>DNFB 용액을 취급할 때는 장갑을 착용하십시오.</li>
</ol>4. 마우스 체중 및 ACD 증상 기록
<ol><li>매일 마우스의 무게를 측정하고 1일째부터 시작하여 0일째의 해당 체중과 비교합니다. 마우스의 체중에 대한 ACD의 효과를 체중 변화(g) ± 평균의 표준 오차(SEM)로 평가하였다.</li>
	<li>마우스 귀의 고해상도 사진을 찍어 1일째부터 2일마다 ACD 임상 증상을 기록합니다.</li>
</ol>5. 귓바퀴 두께 측정
<ol><li>1일째부터 2일마다 귓바퀴 두께를 측정합니다. 양쪽 귀를 자세히 측정하고 기록합니다.</li>
	<li>버니어 캘리퍼스( 재료 표 참조)를 사용하여 정확한 결과를 위해 매일 같은 시간에 귓바퀴 두께를 측정합니다(그림 3A). 버니어 캘리퍼스가 안쪽으로 계속 고정되는 것을 막으십시오.amp마우스 귀의 조직 손상을 방지하기 위해 약간의 막힘이 있을 때. 위치를 고정하고 데이터를 기록합니다.</li>
	<li>각 귓바퀴의 세 가지 다른 위치에서 두께를 수집합니다(그림 3B). 세 데이터의 평균을 유효한 값으로 기록합니다. 평균의 표준 오차(SEM)± 마이크로미터(μm) 단위로 귀 부종을 평가합니다.</li>
</ol>6. 염증성 부종 정도 평가
<ol><li>0.5% 에반스 블루 염료( 재료 표 참조) 용액 준비: 11일째에 에반스 블루 염료를 인산염 완충 식염수(PBS)로 희석합니다. 에반스 블루 염료는 인간에게 약간 독성이 있으므로 항상 실험복과 장갑을 착용하십시오.</li>
	<li>고정 장치로 마우스를 고정하십시오 : 고정 장치의 뚜껑을 열고 ( 재료 표 참조) 마우스 꼬리를 잡고 마우스 머리가 고정 장치를 향하게하고 마우스가 본능적으로 고정 장치에 올라 가게합니다. 뚜껑을 덮고 뚜껑의 구멍에서 마우스 꼬리가 나오도록 하고 고정 장치의 길이를 조정하여 마우스 꼬리 전체가 노출되도록 합니다.</li>
	<li>알코올 면봉으로 꼬리를 반복해서 닦거나 따뜻한 물에 30 초 동안 담가 두었다가 꼬리의 뿌리를 부드럽게 꼬집어 양쪽의 정맥을 채우고 확장하십시오. 차가운 광원을 조사하여 주입하십시오.</li>
	<li>1mm 인슐린 바늘을 사용하여 Evans blue 염료 용액을 마우스 꼬리 정맥에 천천히 주입합니다. 15분 동안 기다린 다음 마우스 귀 사진을 찍습니다. 알림: 마우스를 테이블 위에 놓고 부드럽게 잡고 이미지 획득을 위해 귀 영역이 노출되도록 합니다. Evans blue 염료 용액을 주사하고 해당 적응증을 관찰한 직후 자궁경부 탈구를 사용하여 마우스를 안락사시킵니다.</li>
</ol>

<ol><li>Neale, H., Garza-Mayers, A. C., Tam, I., Yu, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pediatric+allergic+contact+dermatitis.+Part+I%3A+Clinical+features+and+common+contact+allergens+in+children%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+the+American+Academy+of+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Pediatric allergic contact dermatitis. Part I: Clinical features and common contact allergens in children.</a> Journal of the American Academy of Dermatology. 84 (2), 235-244 (2021).</li>
<li>Koppes, S. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+knowledge+on+biomarkers+for+contact+sensitization+and+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Contact+Dermatitis%22%5BJournal%5D)">Current knowledge on biomarkers for contact sensitization and allergic contact dermatitis.</a> Contact Dermatitis. 77 (1), 1-16 (2017).</li>
<li>Martin, S. F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+chemical-induced+innate+immunity+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of chemical-induced innate immunity in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 66 (9), 1152-1163 (2011).</li>
<li>Kimber, I., Basketter, D. A., Gerberick, G. F., Dearman, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22International+Immunopharmacology%22%5BJournal%5D)">Allergic contact dermatitis.</a> International Immunopharmacology. 2 (2-3), 201-211 (2002).</li>
<li>Vocanson, M., Hennino, A., Rozieres, A., Poyet, G., Nicolas, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effector+and+regulatory+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis.</a> Allergy. 64 (12), 1699-1714 (2009).</li>
<li>Gamradt, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibitory+checkpoint+receptors+control+CD8%2B+resident+memory+T+cells+to+prevent+skin+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Inhibitory checkpoint receptors control CD8+ resident memory T cells to prevent skin allergy.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (6), 2147.e9-2157.e9 (2019).</li>
<li>Fraginals, R., Blasi, N. A., Lepoittevin, J. P., Benezra, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+successful+murine+model+for+contact+sensitization+to+a+sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone%3A+sensitization+to+alantolactone+in+four+strains+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">A successful murine model for contact sensitization to a sesquiterpene-alpha-methylene-gamma-butyrolactone: sensitization to alantolactone in four strains of mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 97 (3), 473-477 (1991).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Neumann, C., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanisms+in+allergic+contact+dermatitis%3A+5.+Evidence+that+inhibition+of+suppressor+T+lymphocytes+by+Corynebacterium+parvum+is+mediated+by+interferon%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanisms in allergic contact dermatitis: 5. Evidence that inhibition of suppressor T lymphocytes by Corynebacterium parvum is mediated by interferon.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (6), 385-388 (1982).</li>
<li>Polak, L., Scheper, R. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Antigen-specific+T-cell+lines+in+DNCB-contact+sensitivity+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Antigen-specific T-cell lines in DNCB-contact sensitivity in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 80 (5), 398-402 (1983).</li>
<li>Witten, V. H., March, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+of+the+mechanism+of+allergic+eczematous+contact+dermatitis.+II.+Use+of+C14+labelled+2%3A4-dinitrochlorobenzene+in+guinea+pigs%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Studies of the mechanism of allergic eczematous contact dermatitis. II. Use of C14 labelled 2:4-dinitrochlorobenzene in guinea pigs.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 31 (2), 97-102 (1958).</li>
<li>Knop, J., Riechmann, R., Macher, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modulation+of+suppressor+mechanism+in+allergic+contact+dermatitis.+IV.+Selective+inhibition+of+suppressor+T-lymphocytes+by+serum+obtained+from+Corynebacterium+parvum+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Modulation of suppressor mechanism in allergic contact dermatitis. IV. Selective inhibition of suppressor T-lymphocytes by serum obtained from Corynebacterium parvum treated mice.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 77 (6), 469-473 (1981).</li>
<li>Rubic-Schneider, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((GPR91+deficiency+exacerbates+allergic+contact+dermatitis+while+reducing+arthritic+disease+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy%22%5BJournal%5D)">GPR91 deficiency exacerbates allergic contact dermatitis while reducing arthritic disease in mice.</a> Allergy. 72 (3), 444-452 (2017).</li>
<li>Stampf, J. L., Benezra, C., Byers, V., Castagnoli Jr, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Induction+of+tolerance+to+poison+ivy+urushiol+in+the+guinea+pig+by+epicutaneous+application+of+the+structural+analog+5-methyl-3-n-pentadecylcatechol%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Induction of tolerance to poison ivy urushiol in the guinea pig by epicutaneous application of the structural analog 5-methyl-3-n-pentadecylcatechol.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 86 (5), 535-538 (1986).</li>
<li>Dhingra, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+profiling+of+contact+dermatitis+skin+identifies+allergen-dependent+differences+in+immune+response%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Allergy+and+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Molecular profiling of contact dermatitis skin identifies allergen-dependent differences in immune response.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 134 (2), 362-372 (2014).</li>
<li>Maguire Jr, H. C., Kaidbey, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Experimental+photoallergic+contact+dermatitis%3A+a+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Investigative+Dermatology%22%5BJournal%5D)">Experimental photoallergic contact dermatitis: a mouse model.</a> The Journal of Investigative Dermatology. 79 (3), 147-152 (1982).</li>
<li>Qiu, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+dysregulated+sebum-microbial+metabolite-IL-33+axis+initiates+skin+inflammation+in+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Experimental+Medicine%22%5BJournal%5D)">A dysregulated sebum-microbial metabolite-IL-33 axis initiates skin inflammation in atopic dermatitis.</a> The Journal of Experimental Medicine. 219 (10), e2021397(2022).</li>
<li>Kim, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anti-inflammatory+activities+of+Dictamnus+dasycarpus+Turcz.%2C+root+bark+on+allergic+contact+dermatitis+induced+by+dinitrofluorobenzene+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Anti-inflammatory activities of Dictamnus dasycarpus Turcz., root bark on allergic contact dermatitis induced by dinitrofluorobenzene in mice.</a> Journal of Ethnopharmacology. 149 (2), 471-477 (2013).</li>
<li>Zhou, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+6%27-acetylpaeoniflorin+on+dinitrochlorobenzene-induced+allergic+contact+dermatitis+in+BALB%2Fc+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Immunologic+Research%22%5BJournal%5D)">Effect of 6'-acetylpaeoniflorin on dinitrochlorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice.</a> Immunologic Research. 64 (4), 857-868 (2016).</li>
<li>Donglang, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparative+study+on+different+skin+pruritus+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Frontiers+in+Medicine%22%5BJournal%5D)">Comparative study on different skin pruritus mouse models.</a> Frontiers in Medicine. 8, 630237(2021).</li>
<li>Yang, N., Shao, H., Deng, J., Liu, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Network+pharmacology-based+analysis+to+explore+the+therapeutic+mechanism+of+Cortex+Dictamni+on+atopic+dermatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Ethnopharmacology%22%5BJournal%5D)">Network pharmacology-based analysis to explore the therapeutic mechanism of Cortex Dictamni on atopic dermatitis.</a> Journal of Ethnopharmacology. 304, 116023(2023).</li>
</ol>

저자는 이 작업에 대한 이해 상충이 없다고 보고합니다.

마우스의 귀에서 ACD 유사 증상을 유도하기 위해 여기에 설명된 프로토콜은 ACD의 병태생리학을 연구하고 신약 개발을 위한 스크리닝 도구로 사용할 수 있습니다.
ACD 모델을 확립하는 데는 초기 감작과 후속 자극의 두 가지 주요 단계가 있습니다. 복부는 일반적으로 초기 감작 부위이지만 후속 자극 부위는 약간 다르게 선택되었습니다. 이전 연구에 따르면 대부분의 학자들은 생쥐의 등이나 목에 ACD 모델을 설정하기 위해 DNFB/DNCB 또는 옥사졸론과 같은 화학 감작제를 사용하기로 선택했으며 생쥐의 모델링 영역을 제모하기 위해 블레이드 또는 트리머를 사용하는 것이 불가피합니다17,18,19. 그러나 이 단계는 피부 장벽을 쉽게 파괴하고 후속 실험에 영향을 줄 수 있습니다. 또한, 떨어지는 약물은 목덜미의 넓은 면적과 ...

알레르기성 접촉성 피부염(ACD)은 접촉 부위의 습진과 유사한 증상, 중등도의 경우 부종 및 홍반, 심한 경우 구진, 미란, 삼출 또는 다량의 흉터를 특징으로 하는 흔한 피부 질환입니다1. 인구의 최대 20%에 영향을 미치며 모든 연령대의 사람들에게 영향을 미칠 수 있습니다2. ACD는 알레르겐에 반복적으로 노출된 사람에게서 자주 발생하며, 가정이나 직장에서 하나 이상의 알레르겐에 대한 개인의 면역 반응으로 인해 발생할 수 있다3. IV형 지연성 과민증은 ACD4에서 주요 유형의 면역 반응으로 간주됩니다. 알레르겐에 반복적으로 노출된 피부 부위에서는 순환 기억 T 세포가 다량으로 축적되어 면역 및 염증 반응을 유도한다 3,5,6. 이 연구의 목적은 ACD 발병에서 면역학적 및 염증 반응에 대한 추가 조사를 위한 신뢰할 수 있는 실험실 기술을 제안하는 것입니다.
ACD의 발병은 일반적으로 화학 물질에 반복적으로 노출되어 발생하는 접촉 과민증으로 인한 것입니다. 많은 연구자들이 질병의 발병을 시뮬레이션하기 위해 지난 수십 년 동안 집 쥐 7,8, 기니피그 9,10 및 기타 동물에서 다양한 ACD 동물 모델을 개발했습니다. 대부분의 실험 방법은 복부 감작 (유도)과 등 또는 귓불에 자극 제공 (자극)의 두 단계로 구성됩니다. 일반적으로 사용되는 화학 물질은 주로 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)/1-클로로-2,4-디니트로벤젠(DNCB)8,9,11, 옥사졸론12, 우루시올 13 등을 포함합니다. 그 중 DNFB와 DNCB가 가장 널리 사용되며 1958년 10월10일에 처음 보고되었습니다. 니켈 감작 모델(14)과 광알레르기성 접촉 피부염 모델(15)도 자주 사용된다.
ACD 모델을 구축하기 위한 실험적 방법을 제시한다. 이 방법은 이전 연구 및 여러 실험과의 비교를 기반으로 요약되고 최적화됩니다. 다른 ACD 모델과 비교할 때 이 모델은 작은 개인차, 짧은 실험 기간, 소량의 화학적 자극 등과 같은 몇 가지 장점이 있습니다. 또한, 이 연구는 경제적일 뿐만 아니라 유전자 녹아웃 또는 형질전환 마우스 준비에 대한 더 많은 옵션을 가지고 있는 마우스에 적용할 수 있다16. 또한 귀 두께 측정, 염증 삼출물 측정을 위한 Evans blue 염료 사용 등과 같이 실험에서 ACD 진행을 모니터링하는 데 사용되는 다양한 방법을 설명합니다. 이 모델은 ACD의 발병기전을 탐색하기 위해 실험실 수단으로 마우스 귀, 혈액, 비장 및 기타 샘플을 분석할 수 있을 뿐만 아니라 특정 판촉 의미가 있는 새로운 치료 방법의 전임상 평가에도 적용할 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>1-플루오로-2,4-디니트로벤젠 (DNFB)</td><td>머크</td><td>200-734-3</td><td>1-플루오로-2,4-디니트로벤젠, &ge; 99%</td></tr><tr><td>Acetone</td><td>Sinopharm 화학 시약 Co. 주식 회사</td><td>10000418</td><td>&ge; 99.5%</td></tr><tr><td>알루미늄 호일&nbsp;</td><td>Cleanwrap</td><td>CF-2</td><td></td></tr><tr><td>Evans blue dye</td><td>Solarbio</td><td>314-13-6</td><td>염료 함량 약. 80%</td></tr><tr><td>마우스 고정제</td><td>ZHUYANBANG</td><td>GEGD-SM1830</td><td></td></tr><tr><td>올리브 오일</td><td>Solarbio</td><td>8001-25-0</td><td>500 ml</td></tr><tr><td>피펫 팁</td><td>Biofount</td><td>FT-200</td><td>10 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>피펫터</td><td>Eppendorf AG</td><td>3123000250</td><td>20 - 200 &mu; l</td></tr><tr><td>면도날</td><td>Shanghai Gillette Co. LTD</td><td>74-S</td><td></td></tr><tr><td>버니어 캘리퍼스</td><td>Delixi Electric</td><td>DECHOTVCS1200</td><td></td></tr></tbody></table>

알레르기성 접촉성 피부염 평가를 위한 마우스 귀 모델

A Mouse Ear Model for Allergic Contact Dermatitis Evaluation

피부는 인체의 첫 번째 방어선이며 환경 화학 물질에 가장 많이 노출되는 기관 중 하나입니다. 알레르기성 접촉 피부염(ACD)은 국소 발진, 발적 및 피부 병변으로 나타나는 흔한 피부 질환입니다. ACD의 발생과 발달은 유전적 요인과 환경적 요인의 영향을 받습니다. 최근 몇 년 동안 많은 학자들이 일련의 ACD 모델을 구축했지만 이러한 모델의 실험 프로토콜이 모두 다르기 때문에 독자가 잘 확립하기가 어렵습니다. 따라서 안정적이고 효율적인 동물모델은 아토피성 피부염의 발병기전을 더 연구하는데 큰 의미가 있다. 이 연구에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)을 사용하여 생쥐의 귀에 ACD 유사 증상을 유도하는 모델링 방법을 자세히 설명하고 모델링 중 피부염의 중증도를 평가하는 몇 가지 방법을 설명합니다. 이 실험 프로토콜은 일부 실험에 성공적으로 적용되었으며 ACD 연구 분야에서 특정 판촉 역할을 합니다.

반복적인 DNFB 자극 하에서 DNFB 그룹의 마우스 귀는 ACD에 필적하는 명백한 임상 증상을 보였으며 민감한 부위는 발적, 건조, 심지어 미란 및 삼출의 전형적인 증상을 보였습니다. 그러나 순수(대조군) 또는 용매 대조군(비히클 그룹)의 귀 투여는 유사한 증상을 나타내지 않았습니다(그림 4).
한편, DNFB 그룹에서는 치료되지 않은 오른쪽 귀에 비해 DNFB 자극 후 왼쪽 귀의 두께가 유의하게 증가한 반면(그림 5A), 대조군과 비히클 그룹에서는 큰 차이가 없었습니다(그림 5B). DNFB 그룹 마우스의 왼쪽 귀는 모델링 11일째에 에반스 블루 염료를 주입한 후 분명히 짙은 파란색으로 변했는데, 이는 오른쪽 귀와 시각적으로 달랐습니다. 그러나, 대조군 및 비히클 군에서 마우스의 왼쪽 및 오른쪽 귀는 거의 동일한 색이...

여기에서는 1-플루오로-2,4-디니트로벤젠(DNFB)에 의해 마우스 귀에 알레르기성 접촉성 피부염을 유도하는 방법과 알레르기성 접촉성 피부염의 중증도를 평가하는 방법을 설명합니다.

Skin is the human body&#39;s first line of defense and one of the most exposed organs to environmental chemicals. Allergic contact dermatitis (ACD) is a ...

이 모델은 ACD의 발병기전을 탐색하는 데 사용할 수 있을 뿐만 아니라 중요한 의미를 갖는 새로운 치료 방법의 전임상 진화에도 적용할 수 있습니다. 짧은 실험 기간, 쉬운 조작, 명백한 증상, 높은 성공률 등 많은 장점을 가진 안정적이고 효율적인 동물 모델입니다. 우리의 실험 프로토콜은 매우 상세하고 작동하기 쉽습니다.프로토콜의 각 단계를 올바르게 수행해야 합니다. 모델링을 시작하기 전에 생쥐를 음식과 물에 자유롭게 접근하여 일주일 동안 환경에 순응시킵니다. 모델링 당일에는 자외선 램프와 75% 알코올을 사용하여 환경과 조리대를 청소하고 소독합니다.면봉을 사용하여 생쥐의 복부에 비눗물을 바르고 면도날이나 면도기로 모발이 자라는 방향으로 면도하십시오. 마우스의 체중을 측정하고 각 그룹 간의 체중 변화를 비교합니다. 복부 감작 자극을 수행하기 전에, 면도에 의해 유발된 마우스 복부 피부에 대한 임의의 경미한 손상의 완전한 회복을 보장한다.0.5%DNFB 용액을 준비하고 아세톤과 올리브 오일 혼합물을 4:1의 비율로 희석합니다. 피펫 건을 사용하여 불고 20회 혼합하여 DNFB 용액을 완전히 혼합합니다. 25마이크로리터의 0.5%DNFB 용액을 피펫터로 복부 면도 부위 중앙에 바르고 피펫 팁의 매끄러운 면을 가볍게 펴서 균일하게 분산시킵니다.DNFB 자극 30초 후 마우스가 DNFB 용액을 문지르는 것을 방지하기 위해 침구가 없는 빈 케이지에 마우스를 넣습니다. 용액이 완전히 건조되면 마우스를 원래 케이지로 되돌려 음식과 물을 자유롭게 이용할 수 있습니다. 귀 감작 자극의 경우 DNFB 자극 중에 용액이 외이도로 들어가는 것을 방지하기 위해 마우스 몸의 방향을 향하고 귓바퀴의 바깥쪽 경계가 아래를 향하도록 합니다.4일째 및 10일째에, 피펫터를 이용하여, 20 마이크로리터의 비히클 또는 0.2%DNFB 용액을 좌측 귓바퀴의 내부 표면에 천천히 균일하게 도포하고, 피펫터의 매끄러운 면을 이용하여 용액을 부드럽게 분배한다. 오른쪽 귀는 치료하지 않고 그대로 두십시오. DNFB 용액이 마를 때까지 기다렸다가 마우스를 케이지에 다시 넣습니다.복부 및 귀 감작 자극 후, 첫날부터 이틀마다 마우스의 체중을 측정합니다. 각 마우스의 체중을 0일째와 비교하고, 체중 변화에 따른 마우스의 체중에 대한 ACD의 효과를 평가한다. 생쥐 귀의 고해상도 사진을 캡처하여 첫날부터 이틀에 한 번씩 ACD 임상 증상을 기록합니다.버니어 캘리퍼스를 사용하여 정확한 결과를 위해 매일 같은 시간에 귓바퀴 두께를 측정합니다. 마우스 귀의 조직 손상을 방지하기 위해 약간의 막힘이 있을 때 버니어 캘리퍼가 안쪽으로 계속 클램핑하는 것을 중지합니다. 위치를 고정하고 양쪽 귀의 데이터를 기록합니다.세 가지 데이터의 평균을 기록하고 귀 부종을 마이크로미터 단위로 평가합니다. 11일째 염증성 부종의 정도를 평가하기 위해 0.5%Evans Blue 염료 용액을 준비하고 PBS로 희석합니다. 고정 장치로 마우스를 고정하려면 뚜껑을 열고 마우스 꼬리를 잡고 마우스 머리가 고정 장치를 향하도록 하고 마우스가 본능적으로 고정 장치에 올라갈 수 있도록 합니다.뚜껑을 덮으십시오. 뚜껑의 구멍에서 마우스 꼬리가 나오도록 하고 고정 장치의 길이를 조정하여 마우스 꼬리 전체가 노출되도록 합니다. 알코올 면봉으로 꼬리를 반복해서 닦거나 따뜻한 물에 30 초 동안 담가 꼬리의 뿌리를 부드럽게 꼬집어 채우고 양쪽의 정맥을 확장하십시오.차가운 광원을 조사한 상태에서 1mm 인슐린 바늘을 사용하여 Evans Blue Dye 용액을 마우스 꼬리 정맥에 천천히 주입합니다. 마우스 귀 사진을 찍으려면 15분 동안 기다립니다. DNFB 그룹의 마우스 귀는 ACD에 필적하는 명백한 임상 증상을 보였으며 민감한 부위는 발적, 건조, 미란 및 삼출의 전형적인 증상을 보였습니다.그러나 순수 또는 용매 대조군의 귀 투여는 DNFB 그룹과 유사한 증상을 나타내지 않았다. DNFB 그룹에서는 치료하지 않은 오른쪽 귀에 비해 DNFB 자극 후 왼쪽 귀의 두께가 크게 증가했습니다. 대조군과 비히클 그룹에는 유의한 차이가 없었다.DNFB 그룹 마우스의 왼쪽 귀는 오른쪽 귀와 시각적으로 다른 Evans Blue 염료 주입 후 짙은 파란색으로 변했습니다. 대조군 및 비히클 군에서 마우스의 왼쪽 및 오른쪽 귀는 거의 동일한 색이었다. 마우스의 체중 증가는 DNFB 또는 단순 비히클 자극에 의해 약간 느려졌지만, 유의한 체중 감소를 초래하지는 않았다.마우스 귀에서 반복적인 DNFB 자극은 비장 비대와 비장 지수의 증가를 초래했습니다. 대조적으로, 비히클 군에서 마우스의 비장 지수는 유의하게 변화하지 않았다. DINFB 용액이 완전히 혼합되고 외이도로 흘러 들어가지 않고 마우스 귀에 고르게 도포되었는지 확인하십시오.이것이 모델링 성공의 열쇠입니다.

a-mouse-ear-model-for-allergic-contact-dermatitis-evaluation

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

알레르기 천식의 실험 마우스 모델은 질병 pathogenesis를 공부하고 새로운 치료제 개발에 새로운 가능성을 제공합니다. 이러한 모델은 잘 알레르기 면역 반응,기도 염증과 폐의 pathophysiology을 규제하는 측정 요소에 적합합니다.

알레르기 항원 유도 천식의 Murine 모델

이 비디오는 인간의 피부를 모방한 마우스 모델인 인간화 마우스 모델에서 UV 감도를 측정하는 방법을 설명합니다. 우리는 피부에 홍반 또는 부종을 유발할 수 있는 UV 방사선의 최소 홍반량(MED)을 결정합니다. 이 방법은 자외선 민감성을 줄이는 데 사용되는 약물의 효능을 알아내는 데 도움이 될 수 있습니다.

최소 홍반성 선량 분석: 마우스 모델에서 UV 감도를 측정하는 방법

이 동영상은 쥐 모델에서 피부 염증을 유발하여 테스트 항원을 평가하는 생체 내 기술을 보여줍니다. 오일/아세톤 용액에 함유된 합텐(hapten)인 테스트 항원을 마우스 귀 피부에 국소적으로 적용하고 적절한 기간 후에 피부의 염증을 평가합니다.

피부 염증을 유발하여 항원에 대한 면역 반응을 평가하는 기법

이 비디오는 쥐의 말라세지아로 인한 피부 감염을 보여줍니다. 말라세지아 오일 현탁액을 상처 입은 귀에 바르면 귀 조직의 염증과 부종을 유발합니다. 나중에, 귀는 절개되고, 균질화되고, 성장을 위해 한천 판에 퍼집니다. 군집의 수는 피부 염증으로 인한 곰팡이 부담을 나타냅니다.

쥐 모델에서 Malassezia-Induced Skin Inflammation and Fungal Burden Analysis (말라세지아에 의한 피부 염증 및 곰팡이 부담 분석)

비만 세포와 호염기구의 활성화를 특징으로 알레르기 반응은, IgE 항체의 가교 및 염증 매개 물질의 방출에 의해 구동된다. 알레르기 반응의 정량적 인 평가는 알레르겐 공격 후 혈관 투과성의 변화를 모니터하는 에반스 블루 염료를 사용함으로써 달성 될 수있다.

마우스에 현지 아나필락시스 측정

여기, 분기 morphogenesis 면역 세포 분포 뿐만 아니라 주변 신경 및 혈관의 패턴을 시각화 수 있습니다 전체 성인 마우스 귀 피부에 높은 해상도 전체 마운트 이미징 방법을 설명 합니다.

성인 귀 피부에 대 한 전체 실장 Confocal 현미경 검사 법: 신경-혈관 분기 Morphogenesis 및 면역 세포 분포를 연구 하는 모델 시스템

피부 부상에 타고 난 면역 반응의 실시간 탐지 및 쥐의 포도 상 구 균 감염에 대 한 접근 방식을 설명 합니다. 비교 LysM EGFP 여 쥐 (형광 neutrophils 보유) LysM EGFP와 잡종 immunodeficient 마우스 스트레인, 우리가 미리 감염에 대 한 우리의 이해 및 감염을 방지 하는 방법의 개발.

마우스 모델을 평가 타고 난 면역 반응 포도 상 구 균 감염

접촉 과민증 (CHS)은 알레르기 성 접촉 피부염 (ACD)의 뮤린 실험 모델입니다. CHS는 가슴과 복부의 면도 된 피부를 페인팅하여 반응성 합텐으로 감작을 기반으로하며, 희석 된 합텐으로 후속 귀 피부 챌린지를 통해 다양한 방법으로 평가되는 붓기 반응을 일으 킵니다.

알레르기 성 접촉 피부염의 뮤린 모델로서의 접촉 과민증

이 프로토콜은 올레산과 Cutibacterium 여드름으로 쥐 피부에 여드름 염증을 유도하는 절차를 설명합니다.

복합 여드름의 쥐 모델

이 연구는 표피(EC) 면역을 통해 생쥐의 면역 반응을 조절하는 피부의 역할을 보여줍니다. 단백질 항원을 사용한 EC 면역은 병원체 관련 분자 패턴과 결합할 때 접촉 과민증 또는 피부 유도 억제에서 면역 반응을 억제할 수 있습니다. EC 면역은 면역 요법에 대한 효과적이고 주사 바늘이 없는 접근 방식으로서 가능성을 보여줍니다.

표피 유도 면역조절의 쥐 모델(Murine Model of Epicutanely-Induced Immunomodulation)

배우세요 DNFB를 이용한 마우스 귀 모델에서 알레르기성 접촉성 피부염을 유도하고 평가하는 방법을. 이 프로토콜은 ACD 발병기전 연구와 새로운 치료법 개발에 활용됩니다.

알레르기성 접촉성 피부염 평가를 위한 마우스 귀 모델

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