Name: 병아리 배아 뇌를 인간 교모세포종 세포 행동의 생체 내 및 생체 외 분석을 위한 모델로 사용 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-05-26T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 53 s
Description: 배우세요 병아리 배아 뇌를 이용한 교모세포종 세포 침윤 메커니즘 연구 방법입니다. 생체 내 및 생체 외 배양을 통해 실시간 종양 행동을 관찰하고 L1CAM 발현이 세포 침윤에 미치는 영향을 분석합니다.

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이 연구는 국립 암 연구소 (National Cancer Institute) (R03CA227312)의 DSG 보조금과 Lisa Dean Moseley Foundation의 관대 한 보조금으로 부분적으로 자금을 지원받았습니다. 살아있는 GBM 표본은 Helen F. Graham Cancer Center and Research Institute의 조직 조달 센터를 통해 환자의 동의하에 획득되었습니다. AR에 대한 자금은 국립 연구 자원 센터 (National Center for Research Resources)와 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 국립 중개 과학 발전 센터 (National Center for Advancing Translational Sciences, National Institutes of Health)에서 제공했습니다. N.P., A.L., Z.W. 및 KS에 대한 여름 학부 연구 펠로우십은 델라웨어 대학교 학부 연구 프로그램에서 제공했습니다.

병아리 배아 뇌를 모델로 사용하여 인간 교모세포종 세포 행동 연구

<ol><li>Cretu, A., Fotos, J. S., Little, B. W., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+and+rat+glioma+growth%2C+invasion%2C+and+vascularization+in+a+novel+chick+embryo+brain+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Human and rat glioma growth, invasion, and vascularization in a novel chick embryo brain tumor model.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 22 (3), 225-236 (2005).</li>
<li>Yang, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1+stimulation+of+human+glioma+cell+motility+correlates+with+FAK+activation%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuro-Oncology%22%5BJournal%5D)">L1 stimulation of human glioma cell motility correlates with FAK activation.</a> Journal of Neuro-Oncology. 105 (1), 27-44 (2011).</li>
<li>Mohanan, V., Temburni, M. K., Kappes, J. C., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((L1CAM+stimulates+glioma+cell+motility+and+proliferation+through+the+fibroblast+growth+factor+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">L1CAM stimulates glioma cell motility and proliferation through the fibroblast growth factor receptor.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 30 (4), 507-520 (2013).</li>
<li>Anderson, H. J., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Small-molecule+inhibitors+of+FGFR%2C+integrins+and+FAK+selectively+decrease+L1CAM-stimulated+glioblastoma+cell+motility+and+proliferation%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+Oncology%22%5BJournal%5D)">Small-molecule inhibitors of FGFR, integrins and FAK selectively decrease L1CAM-stimulated glioblastoma cell motility and proliferation.</a> Cellular Oncology. 39 (3), 229-242 (2016).</li>
<li>Pace, K. R., Dutt, R., Galileo, D. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Exosomal+L1CAM+stimulates+glioblastoma+cell+motility%2C+proliferation%2C+and+invasiveness%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Exosomal L1CAM stimulates glioblastoma cell motility, proliferation, and invasiveness.</a> International Journal of Molecular Sciences. 20 (16), 3982(2019).</li>
<li>Stoppini, L., Buchs, P. A., Muller, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+method+for+organotypic+cultures+of+nervous+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Neuroscience+Methods%22%5BJournal%5D)">A simple method for organotypic cultures of nervous tissue.</a> Journal of Neuroscience Methods. 37 (2), 173-182 (1991).</li>
<li>Ohnishi, T., Matsumura, H., Izumoto, S., Hiraga, S., Hayakawa, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+model+of+glioma+cell+invasion+using+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">A novel model of glioma cell invasion using organotypic brain slice culture.</a> Cancer Research. 58 (14), 2935-2940 (1998).</li>
<li>Humpel, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+cultures%3A+A+review%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice cultures: A review.</a> Neuroscience. 305, 86-98 (2015).</li>
<li>Aaberg-Jessen, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+of+primary+glioma-+and+cell+line-derived+spheroids+implanted+into+corticostriatal+slice+cultures%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Clinical+and+Experimental+Pathology%22%5BJournal%5D)">Invasion of primary glioma- and cell line-derived spheroids implanted into corticostriatal slice cultures.</a> International Journal of Clinical and Experimental Pathology. 6 (4), 546-560 (2013).</li>
<li>Matsumura, H., Ohnishi, T., Kanemura, Y., Maruno, M., Yoshimine, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+analysis+of+glioma+cell+invasion+by+confocal+laser+scanning+microscopy+in+a+novel+brain+slice+model%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">Quantitative analysis of glioma cell invasion by confocal laser scanning microscopy in a novel brain slice model.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 269 (2), 513-520 (2000).</li>
<li>Ren, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Invasion+and+anti-invasion+research+of+glioma+cells+in+an+improved+model+of+organotypic+brain+slice+culture%5BTitle%5D)+AND+%22Tumori%22%5BJournal%5D)">Invasion and anti-invasion research of glioma cells in an improved model of organotypic brain slice culture.</a> Tumori. 101 (4), 390-397 (2015).</li>
<li>Fayzullin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Time-lapse+phenotyping+of+invasive+glioma+cells+ex+vivo+reveals+subtype-specific+movement+patterns+guided+by+tumor+core+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Experimental+Cell+Research%22%5BJournal%5D)">Time-lapse phenotyping of invasive glioma cells ex vivo reveals subtype-specific movement patterns guided by tumor core signaling.</a> Experimental Cell Research. 349 (2), 199-213 (2016).</li>
<li>Jensen, S. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Establishment+and+characterization+of+a+tumor+stem+cell-based+glioblastoma+invasion+model%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Establishment and characterization of a tumor stem cell-based glioblastoma invasion model.</a> PloS One. 11 (7), e0158746(2016).</li>
<li>Marques-Torrejon, M. A., Gangoso, E., Pollard, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Modelling+glioblastoma+tumour-host+cell+interactions+using+adult+brain+organotypic+slice+co-culture%5BTitle%5D)+AND+%22Disease+Models+%26+Mechanisms%22%5BJournal%5D)">Modelling glioblastoma tumour-host cell interactions using adult brain organotypic slice co-culture.</a> Disease Models & Mechanisms. 11 (2), 031435(2018).</li>
<li>Tamura, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Visualization+of+spatiotemporal+dynamics+of+human+glioma+stem+cell+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Visualization of spatiotemporal dynamics of human glioma stem cell invasion.</a> Molecular Brain. 12 (1), 45(2019).</li>
<li>Yang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+slice+culture+based+on+in+ovo+electroporation+for+chicken+embryonic+central+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Cellular+and+Molecular+Medicine%22%5BJournal%5D)">Organotypic slice culture based on in ovo electroporation for chicken embryonic central nervous system.</a> Journal of Cellular and Molecular Medicine. 23 (3), 1813-1826 (2019).</li>
<li>Murrell, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expansion+of+multipotent+stem+cells+from+the+adult+human+brain%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+One%22%5BJournal%5D)">Expansion of multipotent stem cells from the adult human brain.</a> PloS One. 8 (8), e71334(2013).</li>
<li>Fotos, J. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Automated+time-lapse+microscopy+and+high-resolution+tracking+of+cell+migration%5BTitle%5D)+AND+%22Cytotechnology%22%5BJournal%5D)">Automated time-lapse microscopy and high-resolution tracking of cell migration.</a> Cytotechnology. 51 (1), 7-19 (2006).</li>
<li>Tufan, A. C., Akdogan, I., Adiguzel, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shell-less+culture+of+the+chick+embryo+as+a+model+system+in+the+study+of+developmental+neurobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroanatomy%22%5BJournal%5D)">Shell-less culture of the chick embryo as a model system in the study of developmental neurobiology.</a> Neuroanatomy. 3 (1), 8-11 (2004).</li>
<li>Shoin, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chick+embryo+assay+as+chemosensitivity+test+for+malignant+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Japanese+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">Chick embryo assay as chemosensitivity test for malignant glioma.</a> Japanese Journal of Cancer Research. 82 (10), 1165-1170 (1991).</li>
<li>Hagedorn, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accessing+key+steps+of+human+tumor+progression+in+vivo+by+using+an+avian+embryo+model%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences%22%5BJournal%5D)">Accessing key steps of human tumor progression in vivo by using an avian embryo model.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences. 102 (5), 1643-1648 (2005).</li>
<li>Balciūniene, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histology+of+human+glioblastoma+transplanted+on+chicken+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Medicina%22%5BJournal%5D)">Histology of human glioblastoma transplanted on chicken chorioallantoic membrane.</a> Medicina. 45 (2), 123-131 (2009).</li>
<li>De Magalhães, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Applications+of+a+new+In+vivo+tumor+spheroid+based+shell-less+chorioallantoic+membrane+3-D+model+in+bioengineering+research%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomedical+Science+and+Engineering%22%5BJournal%5D)">Applications of a new In vivo tumor spheroid based shell-less chorioallantoic membrane 3-D model in bioengineering research.</a> Journal of Biomedical Science and Engineering. 3 (1), 20-26 (2010).</li>
<li>Szmidt, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphology+of+human+glioblastoma+model+cultured+in+ovo%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Morphology of human glioblastoma model cultured in ovo.</a> Journal of Veterinary Research. 56 (2), 261-266 (2012).</li>
<li>Jaworski, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+tumor+morphology+and+structure+from+U87+and+U118+glioma+cells+cultured+on+chicken+embryo+chorioallantoic+membrane%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Veterinary+Research%22%5BJournal%5D)">Comparison of tumor morphology and structure from U87 and U118 glioma cells cultured on chicken embryo chorioallantoic membrane.</a> Journal of Veterinary Research. 57 (4), 593-598 (2013).</li>
<li>Yuan, Y. J., Xu, K., Wu, W., Luo, Q., Yu, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Application+of+the+chick+embryo+chorioallantoic+membrane+in+neurosurgery+disease%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Application of the chick embryo chorioallantoic membrane in neurosurgery disease.</a> International Journal of Medical Sciences. 11 (12), 1275-1281 (2014).</li>
<li>Urbańska, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+effect+of+silver+nanoparticles+%28AgNPs%29+on+proliferation+and+apoptosis+of+in+ovo+cultured+glioblastoma+multiforme+%28GBM%29+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Nanoscale+Research+Letters%22%5BJournal%5D)">The effect of silver nanoparticles (AgNPs) on proliferation and apoptosis of in ovo cultured glioblastoma multiforme (GBM) cells.</a> Nanoscale Research Letters. 10, 98(2015).</li>
<li>DeBord, L. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+chick+chorioallantoic+membrane+%28CAM%29+as+a+versatile+patient-derived+xenograft+%28PDX%29+platform+for+precision+medicine+and+preclinical+research%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Cancer+Research%22%5BJournal%5D)">The chick chorioallantoic membrane (CAM) as a versatile patient-derived xenograft (PDX) platform for precision medicine and preclinical research.</a> American Journal of Cancer Research. 8 (8), 1642-1660 (2018).</li>
<li>Han, J. M., Jung, H. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Synergistic+anticancer+effect+of+a+combination+of+berbamine+and+arcyriaflavin+A+against+glioblastoma+stem-like+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Synergistic anticancer effect of a combination of berbamine and arcyriaflavin A against glioblastoma stem-like cells.</a> Molecules. 27 (22), 7968(2022).</li>
<li>Ruiz-Ontañon, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cellular+plasticity+confers+migratory+and+invasive+advantages+to+a+population+of+glioblastoma-initiating+cells+that+infiltrate+peritumoral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Cellular plasticity confers migratory and invasive advantages to a population of glioblastoma-initiating cells that infiltrate peritumoral tissue.</a> Stem Cells. 31 (6), 1075-1085 (2013).</li>
<li>Cage, T. A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+patterns+of+human+medulloblastoma+dissemination+in+the+developing+chick+embryo+nervous+system%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+%26+Experimental+Metastasis%22%5BJournal%5D)">Distinct patterns of human medulloblastoma dissemination in the developing chick embryo nervous system.</a> Clinical & Experimental Metastasis. 29 (4), 371-380 (2012).</li>
<li>Darrigues, E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanked+glioblastoma+patient-derived+organoids+as+a+precision+medicine+model+to+study+inhibition+of+invasion%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Molecular+Sciences%22%5BJournal%5D)">Biobanked glioblastoma patient-derived organoids as a precision medicine model to study inhibition of invasion.</a> International Journal of Molecular Sciences. 22 (19), 10720(2021).</li>
</ol>

저자 중 누구도 이해 상충이 없습니다.

중뇌(시신경) 심실에 세포를 주입하기 위한 프로토콜의 중요한 단계에는 난자의 융모막 막에 있는 혈관을 손상시키지 않거나 주사 전과 주사 중에 배아를 둘러싸고 있는 혈관을 손상시키지 않는 것이 포함되지만, 배아를 바로 둘러싸고 있는 양막은 세포를 중뇌에 주입할 때 머리를 위치시키기 위해 부드럽게 당겨지고 유지될 수 있습니다. 양막은 비교적 단단하며 미세한 집게로 잡아당겨 머리를 배치하고 한 손으로 안정적으로 잡을 수 있으며, 다른 손으로 뇌 중앙에 있는 크고 둥근 구조인 시신경에 세포를 주입할 수 있습니다. 일반적으로 주입된 배아의 생존율은 알려지지 않은 요인에 따라 25%에서 75% 사이이며, 실제로 살아남은 모든 배아는 시신경에 적어도 작은 종양을 포함합니다. 생존 가능한 뇌 절편을 생성하는 중요한 단계에는 슬라이싱 중에 아가로스가 뇌에 달라붙도록 과잉 액체의 조직을 블로팅하고 멤브레인 삽입물에 놓일 때까지 조직과 슬라이스를 차갑게 유지하는 것이 포함됩니다. 서로 다른 세포 유형이 스페로이드를 다르게 형성하기 때문에(속도와 크기) poly-HEMA 플레이트에 도금된 세포 밀도와 스페로이드를 수확하기 전의 시간은 각 세포 유형에 맞게 최적화되어야 합니다.
여기에서의 연구는 뇌 절편 생존 가능성에 대한 공식적인 종단 연구의 대상이 아닙니다. Yang et al.은 여기에 사용된 것과 유사한 병아리 배아 뇌 절편 배양물을 사용하였고, 적어도 7일 동안 절편의 양호한 생존율을 보였다16. 이전 연구에서는 OT 조직이 최적이 아닌 배지에 보관되었을 때 많은 pyknotic 핵이 조직에 나타 났으며, 이는 여기 작업의 조각에서는 발생하지 않았습니다. 또한, 슬라이스가 최적이 아닌 조건에서 퇴화되면 혈관이 단편화되어 라미닌 양성 구체의 열로 나타납니다(표시되지 않음). 따라서, 여기서의 생존력은 전기생리학 또는 활성 카스파제-3 발현과 같은 방법에 의해 확인되지 않았지만, 최적이 아닌 배양 조건에서 관찰된 세포 사멸의 지표는 여기에 나타나지 않았다.
OT는 가장 큰 심실을 가진 가장 쉽게 주입되는 영역이기 때문에 생체 내 뇌종양 실험에 중점을 두었습니다. 배아가 노른자 위에 접근 할 수있을만큼 작은 가장 최근의 날인 E5에서는 모든 뇌 영역이 얇은 심실 영역에 지나지 않기 때문에 주사를 심실로 만들어야합니다. 그럼에도 불구하고 이러한 주사는 뇌 실질을 침범하는 세포가 있는 내장 종양을 성공적으로 초래합니다. 때로는 종양이 전뇌 또는 소뇌에서 발견되지만 흔하지는 않습니다. E15 시신경의 생체 외 절편은 주로 여기에서 실험에 사용되어 생체 외 공동 배양 결과가 생체 내 주입 실험 과 상관 관계가 있을 수 있습니다. 그러나 전뇌 절편도 적합하고 시신경에 비해 표면적이 더 크고 심실이 매우 얇기 때문에 전뇌가 생체 내 주사와 상관관계가 없는 생체 외 공동 배양에 더 적합할 수 있습니다.
여기에서 생체 내 주사, 조직 고정, 진동 조직 슬라이서 절편, 라미닌 및 기타 마커에 대한 면역염색이 혈관에 가까운 뇌 조직에서 GBM 세포 및 GSC의 고해상도 이미지를 생성한다는 것이 입증되었습니다. 종양 세포와 혈관 사이의 상호 관계를 결정하는 기능은 컨포칼 소프트웨어 및 제조업체의 지침을 사용하여 컨포칼 광학 섹션의 z 스택에서 3D 볼륨 렌더를 생성함으로써 크게 촉진되었습니다. GFP, mCherry 및 DiD 표지 세포의 광시야 형광 현미경을 사용한 타임랩스 이미징이 가능했습니다. 그러나 형광이 높은 스페로이드에 근접한 이동 세포는 때때로 스페로이드의 "빛"에 의해 가려졌습니다. 이러한 바람직하지 않은 효과는 광시야 이미지를 수집하기 위한 노출 시간을 신중하게 조정하여 다소 최소화할 수 있습니다. 시간 경과에 따른 컨포칼 z-스택(4D)을 사용한 타임랩스 이미징은 스페로이드에서 초점이 맞지 않는 빛을 제거하고 어두운 배경으로 이동하는 세포를 선명하게 정의했습니다. 이것은 프로토콜에 설명되지 않았지만 뇌 절편이 6웰 플라스틱 플레이트의 투명 막 삽입물에 있는 동안 수행된 광시야 타임랩스 이미징과 유사하게 수행되었습니다. 컨포칼 타임랩스 이미징을 통해 개별 세포와 그 행동의 이미지가 훨씬 더 선명해지지만, 20시간 동안 10분 간격으로 10개의 z-평면/포인트의 z-스택을 수집하는 다지점 타임랩스 실험은 스캔 헤드 검류계를 광범위하게 사용합니다. 이것은 검류계의 수명을 크게 단축시킬 수 있으므로 이 방법은 현명하게 사용됩니다.
병아리 배아 시스템은 GBM 세포 행동을 조사하는 생체 내 주사 및 생체 외 공동 배양 실험 모두에 매우 적합하지만 이 모델 시스템에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 다른 이종이식 시스템과 마찬가지로 인간 세포가 이식되는 환경은 인간의 뇌가 아니지만 GBM 세포 행동은 설치류 모델과 인간 환자에서 이를 모방하는 것으로 보입니다. E5에 대한 생체 내 주사 실험을 수행 한 후, 종양은 일반적으로 E15까지 10 일 동안 형성되도록 허용된다. 이것은 분명히 종양 형성과 세포 침습의 모든 측면을 연구하기에 충분한 시간이 아닙니다. 그러나 여기에서 뇌 실질에서 고형 종양이 형성되고 세포가 종양 내에서 상호 작용하고 재배열되며 상당한 뇌 침범이 혈관을 따라 그리고 이 비교적 짧은 기간 내에 확산적으로 발생한다는 것이 입증되었습니다. 생체 내 병아리 배아 시스템에 대한 또 다른 한계는 병아리 배아 발달 동안 작동하는 큰 난황 및 배아 외 순환계 때문에 약물 또는 기타 치료에 적합하지 않다는 것입니다. 국소 액체 약물 치료는 배아에서 훨씬 더 큰 난황 덩어리로 확산되기 때문에 뇌에서 매우 다양하고 알려지지 않은 농도를 초래할 것입니다. 유사하게, 매우 섬세한 배아 외 순환계에 약물을 정맥 주사하면 혈관에서 누출되거나 확산되어 뇌에서 알 수 없는 농도가 발생합니다. 이것이 생체 외 절편 배양 방법을 채택한 주된 이유 중 하나로, 타임랩스 현미경을 통해 세포 행동을 관찰하고 추적할 수 있을 뿐만 아니라 접시에서 GBM 세포 행동을 변경하는 데 성공한 치료법을 보다 관련성이 높은 뇌 조직 환경에서 테스트할 수 있습니다.4
병아리 배아 동소 뇌종양 모델 시스템의 개발은 GBM 종양 형성 및 침습성 세포 행동 연구에 사용할 수 있는 시스템 및 도구에 중요한 추가 사항으로 간주됩니다. 수정된 닭고기 달걀은 대부분의 지역에서 쉽게 구할 수 있고, 설치류에 비해 가격이 저렴하며, 동물 관리 비용이 없고, 배아는 매우 탄력 있고 감염에 대한 저항성이 있으며(즉, 대부분의 작업은 벤치 탑에서 수행됨), 배아는 조작이 매우 가능하며 껍질이 없는 배양에서 자랄 수 있으며19, 병아리 배아는 척추동물로 간주되지 않으므로 NIH 지침(기관 요구 사항)에 의한 IACUC 승인이 필요하지 않습니다 다를 수 있음). 따라서 이러한 여러 장점으로 인해 병아리 배아 시스템은 질문과 실험을 한계에 속하는 것으로 제한하는 경우 매우 매력적입니다. 병아리 배아를 사용하여 다른 사람들에 의해 여러 GBM 세포 연구가 수행되었지만 이들은 거의 독점적으로 배아 20,21,22,23,24,25,26,27,28,29 및 사지 새싹 30의 융모막 막(CAM)을 활용했습니다, 그리고 뇌가 아닙니다. E231에서 병아리 뇌에 수모세포종을 이식했다는 보고도 있었습니다. 의심할 여지 없이, 여기에 설명된 바와 같이 병아리 배아를 동소 이종이식 모델 시스템으로 사용하는 것은 CAM을 사용한 연구보다 인간 GBM 종양 생물학에 훨씬 더 의미 있는 결과를 산출해야 합니다.
이러한 연구는 인간 GBM 세포 및 GSC 행동 연구를 위해 병아리 배아 뇌종양 모델 시스템을 완전히 활용하기 시작했지만 다른 연구에서도 사용을 확장하고 더 많은 잠재적 응용 분야를 찾을 수 있기를 바랍니다. 이 시스템은 GBM 종양 형성 및 세포 행동을 조절하는 메커니즘을 밝힐 뿐만 아니라 특정 환자의 세포에서 특정 약물 및 물질에 대한 전임상 테스트를 허용할 것이라고 상상할 수 있습니다. 예를 들어, 뇌 절편 배양이 미리 설정된 경우, 종양 세포, 외과적 종양 절제술 조각 또는 환자 유래 GBM 오가노이드(32 )를 생체 외 공동 배양에 직접 배치할 수 있으며, 다양한 치료법을 며칠 만에 평가할 수 있습니다. 유사하게, 해리된 환자 세포는 종양을 형성하고 뇌 실질을 침범하는 능력을 평가하기 위해 ovo의 E5 중뇌에 직접 주입될 수 있습니다. 따라서 여기에 있는 방법과 대표적인 결과에 대한 설명이 뇌암 연구에 활용도가 낮은 이 시스템의 사용을 촉진하고 장려할 수 있기를 바랍니다.

암세포 행동에 대한 시험관 내 연구는 종종 생체 내 이종 이식 모델에서 종양 형성 및 세포 침습 동안 관찰되는 보다 복잡한 행동 동안 작동하는 잠재적 메커니즘을 해부하는 데 사용됩니다. 예를 들어, 교모세포종(GBM)의 경우 시험관 내 연구는 새로운 병아리 배아 이종이식 뇌종양 모델 1,2,3,4,5에서 종양 형성 및 뇌 침습 동안 L1CAM이 잠재적으로 어떻게 작동하는지에 대한 메커니즘을 밝혀냈습니다. 시험관 내 실험과 생체 내 실험은 유용한 방식으로 서로를 보완하지만 결과의 상관 관계를 어떻게 알 수 있는지에 상당한 격차를 남깁니다. 예를 들어, 접시에서 GBM 세포 운동성에 대한 기계론적 분석은 매우 인위적인 상황이며, 생체 내 이종이식 모델은 종양 형성 및 세포 거동에 대한 정적 시점 또는 종말점 분석만 나타낼 수 있습니다. 설치류 또는 병아리 배아를 사용한 생체 내 연구는 세포가 이러한 이종 이식 모델에서 뇌 조직을 침범하는 동안 세포 행동을 모니터링하는 데 쉽게 적합하지 않습니다. 그럼에도 불구하고, 병아리 배아 이종이식 모델은 부착 단백질 L1CAM이 인간 T98G GBM 세포의 침습 능력에서 자극 역할을 한다는 것을 입증하였다 2,5.
이 문제에 대한 적절한 해결책은 생체 외 모델이라고 하는 기관형 뇌 절편 배양 모델을 사용하여 생체 내 및 시험관 내 방법 모두를 연결함으로써 도달할 수 있습니다. 이 생체 외 모델에서 살아있는 뇌 조직은 최대 몇 주 동안 수백 미크론의 두께로 유지될 수 있으므로 암세포를 이식하고 시간이 지남에 따라 실제 조직에서 암세포의 행동을 관찰한 다음 실험 종점에서 보다 자세한 마커 분석을 수행할 수 있습니다.
널리 사용되는 기관형 절편 배양 방법은 반투명 또는 투명한 다공성 막 위에 수백 미크론 두께의 뇌 절편을 배양하여 조직을 공기에 노출시키면서도 영양 배지가 막 아래에서 조직을 지탱할 수 있도록 하는 것입니다(Stoppini et al.6 참조). 이 방법의 다양한 변형은 다른 매체 또는 다른 멤브레인 삽입물을 사용하는 것을 포함하여 다른 연구에 사용되었습니다. 다양한 멤브레인 삽입물에는 직경 30mm, 35mm배양 접시에 다공성(0.4μm) 멤브레인 삽입물(6), 6웰 플레이트용 세포 배양 삽입물(0.4μm)이 포함됩니다(7). 다른 배지에는 50% MEM/HEPES + 25% 열 비활성화 말 혈청 + 25% 행크스 균형 소금 용액(HBSS)8, 50% 감소 혈청 배지 + 25% 말 혈청 + 25% HBSS9 등이 있습니다. 반투명 또는 투명 멤브레인이 형광 표지된 GBM 세포와 함께 사용되는 경우, 이러한 배양물은 반전된 광시야 또는 공초점 형광 현미경10,11,12,13,14,15를 사용하여 아래에서 이미지화할 수 있습니다.
설치류를 사용하여 많은 생체 내 동소 뇌종양 이종이식 및 생체외 기관형 뇌 절편 배양 모델이 확립되었지만, 위에서 인용한 바와 같이 병아리 배아(Gallus gallus)는 이러한 목적에 충분히 활용되지 않았습니다. 그러나, 병아리 배아는 인간 및 래트 신경아교종 침윤 둘 다의 연구를 위한 생체내 동소성 이종이식 모델로서 사용될 수 있는 것으로 입증되었다 1,2,5. 병아리 배아 뇌에 이종 이식된 세포는 설치류 모델에서 관찰된 것과 유사한 침습 패턴을 나타내어 GBM 종양 세포 분석을 위한 생체 내 모델로 병아리 배아의 사용을 더욱 뒷받침합니다. 병아리 배아는 또한 저렴하고 설치류보다 더 쉽게 유지 관리할 수 있으며(즉, 실험실 인큐베이터의 달걀 껍질에서) 작업하기가 훨씬 쉬워 단기 생체 내 GBM 연구에 매력적인 옵션이 됩니다. 최근 논문에서는 병아리 배아 뇌 절편 배양을 정상적인 뇌 발달 동안 축삭의 형성과 성장에 사용하는 방법을 설명했으며, 이 배양액은 최소 7일 동안 생존할 수 있었다16. 그러나, 조직 환경에서 GBM 세포 행동의 생체 외 분석을 위한 이러한 병아리 배아 뇌 절편 배양물의 사용은 부족하다. 이 기사에서는 생체 내에서 초기 병아리 배아 뇌에 인간 GBM 세포와 GBM 줄기 세포(GSC)를 이식하는 것과 생체 외 살아있는 병아리 배아 뇌 조각 배양에 GBM 세포를 도입하는 방법을 모두 설명합니다. 이들 제제로부터 얻어진 종양 및 세포 침윤 패턴의 몇몇 대표적인 예가 또한 제공된다.

<table><tbody><tr><td>1cm x 1cm 정사각형 구멍 종이 펀치</td><td>Birabira</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>1mm 생검 펀치 펜</td><td>Robbins Instruments</td><td>20335</td><td></td></tr><tr><td>6웰 인서트 플레이트(Corning Transwell)</td><td>Millipore Sigma</td><td>CLS3450</td><td></td></tr><tr><td>9" 일회용 파스퇴르 피펫</td><td>Fisher Scientific</td><td>13-678-20C</td><td></td></tr><tr><td>15mL 원심분리기 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-12</td><td></td></tr><tr><td>24웰 플레이트</td><td>Corning Costar</td><td>3526</td><td></td></tr><tr><td>50mL 원심분리기 튜브</td><td>Fisher Scientific</td><td>05-539-9</td><td></td></tr><tr><td>Agar</td><td>Fisher BioReagents</td> 고정 <td>뇌 임베딩용</td><td>BP1423-500</td></tr><tr><td>Alexafluor 488-conjugated GAM IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-605-146</td><td></td></tr><tr><td>Alexafluor 647-conjugated GAM IgG</td><td>Jackson Immunoresearch</td><td>115-545-146</td><td></td></tr><tr><td>알루미늄 호일</td><td>ReynoldsWrap</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>암피실린</td><td>시그마 Aldrich</td><td>A-9518</td><td></td></tr><tr><td>항인테그린 알파-6 단클론 항체 GOH3</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-19622</td><td></td></tr><tr><td>anti-L1CAM 단클론 항체 UJ127</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-53386</td><td></td></tr><tr><td>항 라미닌 단클론 항체</td><td>개발 연구 Hybridoma Bank</td><td>3H11</td><td></td></tr><tr><td>항 네스틴 단클론 항체 10c2</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-23927</td><td></td></tr><tr><td>anti-Sox2 monoclonal 항체 E-4</td><td>Santa Cruz Biotechnology</td><td>sc-365823</td><td></td></tr><tr><td>B27 supplement without vitamin A</td><td>GIBCO</td><td>17504-044</td><td></td></tr><tr><td>bisbenzimide (Hoechst 33258)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B2883</td><td>핵 염색</td></tr><tr><td>세포 배양 인큐베이터</td><td>Forma</td><td></td><td>표준 가습 CO2 인큐베이터</td></tr><tr><td>원심분리기</td><td>Beckman Coulter</td><td></td><td></td></tr><tr><td>컨포칼 현미경</td><td>니콘 기기</td><td>C2si+</td><td>맞춤형 세포 배양기 챔버</td></tr><tr><td>포함 컨포칼 현미경 대물 렌즈</td><td>니콘 기기</td><td></td><td>Plan Apo 렌즈, S Plan Fluor ELWD 20x 0.45 NA 컨포칼 타임 랩스 이미징용 대물 렌즈</td></tr><tr><td>컨포칼 현미경 소프트웨어</td><td>Nikon Instruments</td><td>NIS Elements</td><td>버전 5.2</td></tr><tr><td>곡선 foreceps</td><td>세계 정밀 504478</td><td></td><td></td></tr><tr><td>곡선 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>곡선 주걱</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-375-20</td><td></td></tr><tr><td>시아노아크릴레이트 접착제</td><td>크레이지 접착제</td><td>KG-585 12R</td><td></td></tr><tr><td>D-글루코스</td><td>밀리포어 시그마</td><td>G8270</td><td></td></tr><tr><td>DiD 원적외선 형광 염료</td><td>Invitrogen</td><td>V22887</td><td>Vybrant</td></tr><tr><td>DiD DMEM</td><td>시그마 알드리치</td><td>D5671</td><td></td></tr><tr><td>DMEM/F12</td><td>시그마 알드리치</td><td>D8437</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>시그마 알드리치</td><td>D4540</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate buffered saline (PBS)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>egg incubator</td><td>Humidaire</td><td></td><td></td></tr><tr><td>electrical tape (10 mil thick/254 &micro; m)</td> <td>스카치</td><td>N / A</td><td></td></tr><tr><td>에탄올 200 증거</td><td>Decon Laboratories</td><td>2701</td><td></td></tr><tr><td>빠른 녹색 FCF 염료</td><td>아보카도 연구 화학 물질</td><td>16520</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>쌍둥이 자리 바이오 제품</td><td>900-108</td><td></td></tr><tr><td>여과지</td><td>피셔 사이언티픽</td><td></td><td></td></tr><tr><td>거즈</td><td>Dynarex</td><td>3353</td><td></td></tr><tr><td>유리 모세 혈관 마이크로 주입 용</td><td>World Precision Instruments</td><td>TW100-4</td><td></td></tr><tr><td>글리세롤</td><td>피셔 생물 시약</td><td>BP228-1</td><td>매체 장착 용</td></tr><tr><td>GSC (인간 교 모세포종 줄기 세포)</td> <td>해당 없음</td><td></td><td>GSC 배지의 갈릴레오 실험실의 환자 GBM 표본에서 분리 한 다음 GFP 인코딩 렌 티바이러스 벡터로 형질 주입. 사용된 셀은 10번 통로와 30번 사이였습니다.</td></tr><tr><td>Hanks Balanced Salt Solution (HBSS)</td><td>Corning</td><td>21-020-CV</td><td></td></tr><tr><td>Hemacytometer</td><td>Hausser scientific</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP2524-100</td><td></td></tr><tr><td>HEPES 버퍼</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H0887</td><td></td></tr><tr><td>Horse Serum (HI)</td><td>Gibco</td><td>26050-088</td><td></td></tr><tr><td>Human FGF-2</td><td>BioVision</td><td>4037-1000</td><td></td></tr><tr><td>인간 TGF-&알파;</td><td>BioVision</td><td>4339-1000</td><td></td></tr><tr>배<td>양 세포의 일상적인 관찰을 위한</td><td>도립 위상차 현미경</td><td>Nikon Instruments</td><td>TMS</td></tr><tr><td>KCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP366</td><td></td></tr><tr><td>KH2PO4</td><td>Fisher Scientific</td><td>P284</td><td></td></tr><tr><td>실험실 필름</td><td>Parafilm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Labquake Shaker</td><td>LabIndustries</td><td>T400-110</td><td></td></tr><tr><td>L-Glut:Pen:Strep</td><td>Gemini Bio-products</td><td>400-110</td><td></td></tr><tr><td>저용융 아가로스</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP1360</td><td>라이브 브레인 임베딩용</td></tr><tr><td>Matrix</td><td>Corning Matrigel</td><td>354234</td><td></td></tr><tr><td>Medium 199</td><td>GIBCO</td><td>11150-059</td><td></td></tr><tr><td>MEM</td><td>Corning</td><td>10-010-CV</td><td></td></tr><tr><td>금속 진동 블록</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫 팁 (20, 200, 1,000 &마이크로; L)</td><td>Fisherbrand</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마이크로피펫터(20, 200, 1,000 &마이크로; L)</td><td>Gilson</td><td></td><td></td></tr><tr><td>현미경 커버 글라스 (no. 1.5 두께)</td><td>Fisherbrand</td><td>12544A</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>S271</td><td></td></tr><tr><td>NaH2PO4 + H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>S369</td><td></td></tr><tr><td>NaHCO3</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP328</td><td></td></tr><tr><td>일반 염소 혈청</td><td>Millipore Sigma</td><td>526-M</td><td></td></tr><tr><td>N-프로필 갈레이트</td><td>시그마 Aldrich</td><td>P3130</td><td>장착 매체</td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>Parafilm</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyde</td><td>전자 현미경 과학</td><td>15710</td><td></td></tr><tr><td>PBS</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P5493-1L</td><td></td></tr><tr><td>연필</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>일반 현미경 슬라이드</td><td>Fisherbrand</td><td>12-550-A3</td><td></td></tr><tr><td>플라스틱 35mm 페트리 접시</td><td>Becton Dickinson</td><td>351008</td><td></td></tr><tr><td>공압 피코 펌프</td><td>World Precision Intruments</td><td>PV830</td><td></td></tr><tr><td>Poly(2-hydroxyethyl methacrylate)&nbsp; (폴리-HEMA)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P-3932</td><td></td></tr><tr><td>면도날-</td><td>고정 뇌 슬라이스 절단을 위한</td>양날<td></td><td></td></tr>, <tr><td>사파이어 나이프</td>, <td>델라웨어</td>, <td>라이브 뇌 슬라이스를 절단하기 위한</td>다이아몬드 나이프<td></td>,</tr><tr><td>Scalpel</td><td>TruMed</td><td>1001</td><td></td></tr>, <tr><td>나트륨 카코딜레이트 완충액, 0.2 M pH 7.4</td><td>전자 현미경 Sciences</td><td>11652</td><td></td></tr><tr><td>표본 챔버 vibratome</td><td>맞춤형</td><td></td><td></td></tr><tr><td>스테레오 해부 현미경</td><td>Nikon 기기</td><td>SMZ1500</td><td>epifluorescence</td></tr><tr><td>straight foreceps</td><td>장착 세계 정밀 Intruments</td><td>500233</td><td></td></tr><tr><td>스트레이트 가위</td><td>Fine Science Tools</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sucrose</td><td>Mallinckrodt</td><td>7723</td><td></td></tr><tr><td>Time-lapse fluorescence 현미경 (광시야 형광)</td><td>Nikon Instruments</td><td>TE2000-E</td><td>맞춤형 세포 배양 챔버 포함(Fotos et al., 2006 참조)</td></tr><tr>세포 <td>배양을 위한</td>조직 <td>배양 접시 폴리스티렌 100mm</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>130182</td> 세포 배</tr>양을 <tr>위한<td>조직 배양 접시 폴리스티렌 60mm</td><td>Becton Dickinson</td><td>353004</td>세포 <td>배양을 위한</td></tr><tr><td>피펫 American</td><td>Central Scientific Co.</td><td>FFP011</td><td></td></tr><tr><td>투명 테이프</td><td>스카치</td><td></td><td></td></tr><tr><td>트리톤 X-100</td><td>시그마 알드리치</td><td>T-8787</td><td></td></tr><tr><td>트립신(0.25%) + 2.21mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>U-118 MG 인간 GBM 세포주</td><td>ATCC</td><td>HTB-15</td><td>세포는 L1CAM 접착 단백질의 전체 엑토도메인 서열을 암호화하는 렌티바이러스 벡터로 형질전환한 다음 렌티바이러스 벡터로 형질전환되었습니다. p초고온 인코딩 mCherry.&nbsp; 통과 번호는 알 수 없습니다.</td></tr><tr><td>진공 펌프</td><td>Cole-Parmer</td><td>EW-07532-40</td> <td>"Air Cadet"</td></tr><tr><td>진동 조직 슬라이서</td><td>Vibratome</td><td>3000</td><td>라이브 및 고정 뇌 슬라이스 절단</td></tr></tbody></table>

병아리 배아 뇌를 인간 교모세포종 세포 행동의 생체 내 및 생체 외 분석을 위한 모델로 사용

Using the Chick Embryo Brain as a Model for In Vivo and Ex Vivo Analyses of Human Glioblastoma Cell Behavior

병아리 배아는 척추동물 발달 연구, 특히 실험적 조작을 위한 이상적인 모델 시스템이었습니다. 병아리 배아의 사용은 생체 내에서 인간 교모세포종(GBM) 뇌종양의 형성 및 주변 뇌 조직으로의 종양 세포의 침습성을 연구하기 위해 확장되었다. GBM 종양은 난소의 E5 중뇌(시신경) 심실에 형광 표지된 세포의 현탁액을 주입함으로써 형성될 수 있습니다. 
GBM 세포에 따라 조밀한 종양이 심실과 뇌벽 내에서 무작위로 형성되고 세포 그룹이 뇌벽 조직을 침범합니다. 종양이 있는 고정된 E15 tecta의 두꺼운 조직 절편(350μm)을 면역염색하여 공초점 z-스택 이미지의 3D 재구성으로 분석할 때 침입 세포가 종종 혈관을 따라 이동한다는 것을 밝힐 수 있습니다. 살아있는 E15 중뇌 및 전뇌 절편(250-350 μm)은 막 삽입물에서 배양할 수 있으며, 여기서 형광 표지된 GBM 세포를 비무작위 위치에 도입하여 약 1주일 동안 혈관을 따라 발생할 수 있는 세포 침습을 분석하기 위한 생체 외 공동 배양을 제공할 수 있습니다. 이러한 생체 외 공동 배양은 광시야 또는 컨포칼 형광 타임랩스 현미경으로 모니터링하여 살아있는 세포 거동을 관찰할 수 있습니다. 
그런 다음 공동 배양된 조각을 고정, 면역 염색 및 공초점 현미경으로 분석하여 침윤이 혈관 또는 축삭을 따라 발생했는지 여부를 결정할 수 있습니다. 또한 공동 배양 시스템은 서로 다른 정확한 위치에 서로 다른 세포 유형 및 색상의 응집체를 배치하고 세포 움직임을 관찰하여 잠재적인 세포-세포 상호 작용을 조사하는 데 사용할 수 있습니다. 약물 치료는 생체 외 배양에서 수행할 수 있지만 이러한 처리는 생체 내 시스템과 호환되지 않습니다. 이 두 가지 보완적인 접근 방식을 통해 고도로 조작 가능한 척추동물 뇌 환경에서 인간 GBM 세포 행동과 종양 형성에 대한 상세하고 정확한 분석이 가능합니다.

병아리 배아는 ovo에서 인간 교모세포종(GBM) 뇌종양을 연구하는 데 사용되며 생체 외 뇌 절편 공동 배양. GBM 세포 거동은 생체 외 공동 배양에서 타임랩스 현미경으로 기록할 수 있으며, 두 제제 모두 상세한 3D 공초점 분석을 통해 실험 종점에서 분석할 수 있습니다.

The chick embryo has been an ideal model system for the study of vertebrate development, particularly for experimental manipulations. Use of the chick ...

우리 연구의 범위는 뇌 조직에서 교모세포종 세포 확산을 촉진하는 메커니즘을 밝히는 것입니다. 구체적인 질문은 교모세포종 세포 유형 또는 상태의 차이와 이러한 세포가 고도로 침습적이도록 촉진하는 분자 메커니즘에 관한 것입니다. 예를 들어, L1CAM 발현은 어떻게 침습성을 촉진합니까?시험관내 및 생체내 모델 모두 교모세포종 세포 거동을 정확하게 분석하기에 불충분하다. 시험관 내 모델은 거의 확실하게 생체 내 세포 행동을 수정하고 지나치게 단순화합니다. 생체 내 모델은 행동이 발생할 때 쉽게 관찰할 수 없지만 대신 행동이 발생한 후 분석을 허용합니다.우리는 병아리 배아 뇌가 생체 내 및 생체 외 슬라이스 배양 모두에서 인간 뇌 암 세포 행동을 연구하는 데 좋은 모델임을 보여주었습니다. 우리는 또한 교모세포종 세포에 의한 L1CAM 발현이 종양 내 세포 증식, 침윤 및 배열에 중대한 영향을 미칠 수 있음을 확인했습니다. 병아리 배아 사용의 몇 가지 이점 외에도, 우리의 생체 외 스페로이드 프로토콜은 추가 손상 없이 살아있는 조각에 세포를 도입하는 반면, 다른 세포 도입 방법은 조직을 뚫고 세포를 이식하는 것을 포함합니다.또한 이 프로토콜은 생체 내 기술에서는 제공하지 않는 실시간 타임랩스 이미징을 허용합니다. 우리의 연구 결과에 따르면 병아리 배아는 암 연구, 특히 뇌암에 대한 좋은 모델이며 설치류 모델에 대한 자금, 시설 또는 전문 지식이없는 사람들이 훨씬 더 쉽게 이용할 수 있기 때문에 과학계에 매우 유익합니다. 우리는 뇌 조직, 특히 혈관을 따라 교모세포종 세포 침습성을 제어하는 분자 메커니즘에 계속 초점을 맞출 것입니다.또 다른 중요한 질문은 교모세포종 줄기 세포가 뚜렷하고 안정적인 표현형인지 아니면 필요할 때 채택할 수 있는 기능적 상태인지 여부입니다. 이는 치료에 큰 영향을 미칩니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

플록스, 조건부 발암성 대립유전자로 조작되고 바이러스 Cre 매개 재조합을 통해 형질전환된 마우스에서 채취한 표현형 야생형 성상세포와 신경 줄기세포는 syngeneic, immune-competent littermate의 뇌에 형질전환된 세포의 orthotopic 주입에 의해 in vitro 및 in vivo에서 성상세포종 발병기전을 모델링하는 데 사용할 수 있습니다.

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여기에서 우리는 유전자 조작 마우스 모델 종양에서 파생된 세포의 두개내 주입에 의해 확립된 GBM에 대한 전임상 동소 마우스 모델을 설명합니다. 이 모델은 인간 GBM의 질병 특징을 표시합니다. 중개 연구를 위해 마우스 뇌종양은 생체 내 MRI 및 조직병리학에 의해 추적됩니다.

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배우세요 병아리 배아 뇌를 이용한 교모세포종 세포 침윤 메커니즘 연구 방법입니다. 생체 내 및 생체 외 배양을 통해 실시간 종양 행동을 관찰하고 L1CAM 발현이 세포 침윤에 미치는 영향을 분석합니다.

병아리 배아 뇌를 인간 교모세포종 세포 행동의 생체 내 및 생체 외 분석을 위한 모델로 사용

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