Analysis of Fluorescent-Stained Lipid Droplets with 3D Reconstruction for Hepatic Steatosis Assessment

Karina Garcia; Andr&#233; Alves; Teresa M. Ribeiro-Rodrigues; Fl&#225;vio Reis; Sofia Viana

doi:10.3791/65206

JoVE Journal
Biochemistry

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JoVE Journal Biochemistry

Analysis of Fluorescent-Stained Lipid Droplets with 3D Reconstruction for Hepatic Steatosis Assessment

간 지방증 평가를 위한 3D 재구성을 통한 형광 염색 지질 방울 분석

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07:12 min

June 2, 2023

DOI: 10.3791/65206-v

Karina Garcia^1,2,3,4, André Alves^1,2,3, Teresa M. Ribeiro-Rodrigues^1,2,3, Flávio Reis^1,2,3, Sofia Viana^1,2,3,4

¹Institute of Pharmacology & Experimental Therapeutics & Coimbra Institute for Clinical and Biomedical Research (iCBR), Faculty of Medicine,University of Coimbra, ²Center for Innovative Biomedicine and Biotechnology (CIBB),University of Coimbra, ³Clinical Academic Center of Coimbra (CACC), ⁴Polytechnic Institute of Coimbra,Coimbra Health School

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여기에서 우리는 간 조직의 지질 액적 특성 분석을 위해 최적화된 BODIPY 493/503 형광 기반 프로토콜을 입증합니다. 직교 투영 및 3D 재구성의 사용을 통해 형광단은 미세소포와 대소포성 지방증 사이의 성공적인 구별을 가능하게 하고 간 지방증 평가를 위한 고전적인 조직학적 프로토콜에 대한 보완적인 접근 방식을 나타낼 수 있습니다.

이 이미징 접근법은 간 지질 액적 침착의 3차원 재구성을 가능하게 하고 미세 및 거대 소포성 지방증 사이의 성공적인 구별을 좁힌 고전적인 조직학적 염색의 주요 단점을 극복합니다. 미세소포성 지방증의 평가는 천연 지질 방울의 파괴 및 간헐적인 융합으로 인해 금본위제 조직학적 염색과 Oil Red 모두를 사용하는 경우입니다. pro-BODIPY는 지질 방울의 빠른 흡수와 효과적인 태깅을 위한 올바른 소수성으로 인해 미세소포성 간 지방증 평가를 위한 일상적인 프로토콜에 대한 대안을 제공하며, 환경 극성에 둔감할 뿐만 아니라 매우 선택적입니다.

이 이미징 접근 방식은 면역 화학 기술과 함께 더 광범위한 응용 분야를 포괄하여 미세 및 대수포성 간 지방증을 뒷받침하는 지질 방울의 생물 발생 및 역학 연구를 발전시킬 수 있는 다른 세포내 항원의 동시 검출을 가능하게 합니다.

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