Name: 마우스 등쪽 뿌리 신경절 냉동 절제술을 위한 절차 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-09T13:50:00.000+00:00
Duration: 4 min 20 s
Description: 배우세요 마우스 등쪽 뿌리 신경절(DRG) 냉동 절제술을 통해 고품질의 평평한 단면을 얻는 방법을. 이 기술은 면역조직화학 연구를 위한 조직 완전성을 보장하여 신경과학 연구의 정확성을 높입니다.

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본 연구의 경우 동물 실험은 UCSF Institutional Animal Care and Use Committee의 승인을 받았으며 NIH Guide for the Care and Use of Laboratory Animals에 따라 수행되었습니다. 성체, 8-12주 된 C57BL/6 수컷 및 암컷 마우스(자체 사육)를 여기에 사용하였다.
1. DRG 시료 전처리
<ol><li>2.5% 아베르틴으로 마우스를 마취합니다(재료 표 참조). 고통스러운 자극에 대한 반응 부족으로 적절한 마취를 보장합니다. 앞서 기술한바와 같이 1x 인산염-완충 식염수(PBS)에 이어 4% 포름알데히드를 동물에 심 경관류한다 14,15,16.</li>
	<li>앞서 설명한 바와 같이 척수에서 DRG 조직을 절개합니다14,15,16.</li>
	<li>해부된 DRG를 실온에서 3시간 동안 4% 포름알데히드에 사후 고정합니다.</li>
	<li>DRG를 PBS의 30% 자당에 넣고 밤새 4°C에서 가열합니다.</li>
	<li>베이스 최적 절삭 온도(OCT) 준비<ol><li>OCT 화합물( 재료 표 참조)을 추가하여 알루미늄 블록의 상단 표면을 덮고 -20°C에서 5-10분 동안 얼립니다(그림 1A).</li>
		<li>표면이 기본 OCT처럼 평평해질 때까지 30μm 두께의 저온 유지 장치( 재료 표 참조)를 사용하여 OCT의 상단을 잘라냅니다(그림 1B).</li>
		<li>저온 유지 장치에서 알루미늄 블록을 제거하기 전에 기본 OCT의 하단(6시 위치)에 표시를 하여 방향을 표시합니다(그림 1C).</li>
		<li>다음 단계에서는 동일한 방향을 유지하기 위해 표시를 6시 위치에 유지하여 DRG 샘플의 더 많은 섹션을 얻을 수 있습니다. 참고: 방향이 손실되고 DRG 샘플이 다른 각도로 절단되면 DRG 샘플을 위에서 아래로 완전히 절단할 수 없으므로 DRG 샘플을 절단하려고 시도하는 동안 기본 OCT가 발생하기 때문에 일부 샘플이 기본 OCT에 남겨져 낭비됩니다(그림 1C).</li>
	</ol></li>
	<li>DRG의 OCT 임베딩 수행<ol><li>OCT에 바르기 전에 DRG 조직을 건조시키십시오.<ol><li>DRG를 블록에 추가하기 전에 샘플 주변의 30% 자당/PBS 용액을 제거해야 합니다.</li>
			<li>DRG 샘플을 마른 페트리 접시에 놓고 마른 핀셋으로 한 위치에서 다른 위치로 두세 번 이동하여 건조시킵니다(그림 2B).</li>
			<li>다른 DRG 샘플을 이동하기 전에 보푸라기가 없는 조직으로 핀셋을 건조시킵니다(그림 2C).</li>
		</ol></li>
		<li>드라이 DRG를 베이스 OCT에 놓습니다.<ol><li>마른 핀셋을 사용하여 마른 DRG를 12시 방향의 베이스 OCT에 놓습니다(그림 1D).</li>
			<li>DRG의 상단 가장자리와 베이스 OCT의 상단 가장자리 사이에 최소 5mm를 유지하십시오.</li>
			<li>DRG의 등쪽 부분을 12시 방향에, 복부 부분을 6시 방향에 놓습니다(그림 1D).</li>
		</ol></li>
		<li>OCT로 DRG 조직을 삽입합니다.<ol><li>OCT를 더 추가하여 DRG가 중앙에 오도록 전체 DRG 샘플을 원형 또는 타원형으로 덮습니다(그림 1E).</li>
			<li>OCT의 상단 가장자리가 베이스 OCT의 상단 가장자리에 있는 DRG를 덮도록 합니다(그림 1F). 이렇게 하면 섹션을 유리 슬라이드로 쉽게 옮길 수 있습니다(그림 3A). 참고: 덮개 OCT가 베이스 OCT의 중간에 있는 경우 베이스 OCT의 위쪽 가장자리가 유리 슬라이드를 막아 섹션을 모을 수 있습니다(그림 3B).</li>
			<li>덮개 OCT 및 DRG 샘플을 -20°C에서 5분 더 얼립니다(그림 1G). DRG 샘플 주위의 OCT를 트리밍하지 마십시오.</li>
			<li>DRG가 보일 때까지 30μm 두께로 덮개 OCT의 상단을 자릅니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>2. DRG의 냉동 절편
<ol><li>저온 유지 장치 섹션 두께를 12μm로 변경하여 DRG 섹션을 슬라이드로 절단합니다(그림 1H).</li>
	<li>-20 °C로 냉각된 작은 붓으로 바닥의 OCT 섹션을 잡습니다. 알림: 전체 섹션을 완전히 자르지 말고 1-3mm를 자르지 않은 상태로 두는 것이 중요합니다(그림 1I).</li>
	<li>실온 핀셋 끝을 사용하여 섹션의 바닥(6시 위치)을 부드럽게 터치하여 플랫폼 표면에 달라붙도록 합니다(그림 1J). 이렇게 하면 단면이 롤에서 뒤로 구부러지는 것을 방지하여 슬라이드에서 단면을 수집하기 어렵게 만듭니다. 참고: 섹션의 하단이 플랫폼 표면에 달라붙고 섹션의 상단이 여전히 커버 OCT와 연결되면 섹션이 평평한 모양이 되므로(그림 1K) 슬라이드에서 섹션을 훨씬 쉽게 수집할 수 있습니다.</li>
	<li>충전된 유리 슬라이드( 재료 표 참조)를 가져다가 슬라이드를 섹션 위에 천천히 놓습니다. 섹션이 슬라이드에 달라붙기 시작하면 슬라이드를 뒤로 부드럽게 당깁니다(그림 1L).</li>
	<li>동일한 프로세스를 수행하여 섹션이 겹치지 않고 더 많은 DRG 섹션을 슬라이드에 가져옵니다(그림 1M). 새 DRG 절편이 다른 DRG 절편의 OCT 위에 놓이지 않도록 하십시오(그림 4).</li>
</ol>3. 유리 슬라이드의 DRG 섹션의 Nissl 염색
<ol><li>PBS에 0.1% Triton X-10을 더한 상태에서 10분 동안 섹션을 세척합니다. 그런 다음 PBS로 섹션을 두 번 세척하십시오.</li>
	<li>슬라이드에 1:300 Nissl 염색( 재료 표 참조)을 바르고 실온에서 20분 동안 배양합니다.</li>
	<li>PBS 플러스 0.1% Triton X-100으로 섹션을 세척합니다. 그런 다음 PBS로 5분 동안 섹션을 두 번 세척한 다음 실온에서 2시간 동안 세척합니다.</li>
	<li>4′,6-diamidino-2-phenylindole(DAPI) fluoromount-G( 재료 표 참조)를 적용하여 커버슬립으로 섹션을 덮습니다.</li>
</ol>

Mouse Dorsal Root Ganglion Cryosectioning

<ol><li>Guan, Z., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Injured+sensory+neuron-derived+CSF1+induces+microglial+proliferation+and+DAP12-dependent+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Injured sensory neuron-derived CSF1 induces microglial proliferation and DAP12-dependent pain.</a> Nature Neuroscience. 19 (1), 94-101 (2016).</li>
<li>Yu, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dorsal+root+ganglion+macrophages+contribute+to+both+the+initiation+and+persistence+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Dorsal root ganglion macrophages contribute to both the initiation and persistence of neuropathic pain.</a> Nature Communications. 11 (1), 264(2020).</li>
<li>Costa, F. A. L., Moreira Neto, F. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Satellite+glial+cells+in+sensory+ganglia%3A+its+role+in+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Brazilian+Journal+of+Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Satellite glial cells in sensory ganglia: its role in pain.</a> Brazilian Journal of Anesthesiology. 65 (1), 73-81 (2015).</li>
<li>Noguri, T., Hatakeyama, D., Kitahashi, T., Oka, K., Ito, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Profile+of+dorsal+root+ganglion+neurons%3A+study+of+oxytocin+expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Brain%22%5BJournal%5D)">Profile of dorsal root ganglion neurons: study of oxytocin expression.</a> Molecular Brain. 15 (1), 44(2022).</li>
<li>Su, P. P., Zhang, L., He, L., Zhao, N., Guan, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+neuro-immune+interactions+in+chronic+pain%3A+implications+for+clinical+practice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Pain+Research%22%5BJournal%5D)">The role of neuro-immune interactions in chronic pain: implications for clinical practice.</a> Journal of Pain Research. 15, 2223-2248 (2022).</li>
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<li>Guan, Z., Hellman, J., Schumacher, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contemporary+views+on+inflammatory+pain+mechanisms%3A+TRPing+over+innate+and+microglial+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22F1000Research%22%5BJournal%5D)">Contemporary views on inflammatory pain mechanisms: TRPing over innate and microglial pathways.</a> F1000Research. , (2016).</li>
<li>Boadas-Vaello, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroplasticity+of+ascending+and+descending+pathways+after+somatosensory+system+injury%3A+reviewing+knowledge+to+identify+neuropathic+pain+therapeutic+targets%5BTitle%5D)+AND+%22Spinal+Cord%22%5BJournal%5D)">Neuroplasticity of ascending and descending pathways after somatosensory system injury: reviewing knowledge to identify neuropathic pain therapeutic targets.</a> Spinal Cord. 54 (5), 330-340 (2016).</li>
<li>Guha, D., Shamji, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dorsal+root+ganglion+in+the+pathogenesis+of+chronic+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Neurosurgery%22%5BJournal%5D)">The dorsal root ganglion in the pathogenesis of chronic neuropathic pain.</a> Neurosurgery. 63, 118-126 (2016).</li>
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<li>Sleigh, J. N., West, S. J., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+video+protocol+for+rapid+dissection+of+mouse+dorsal+root+ganglia+from+defined+spinal+levels%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Research+Notes%22%5BJournal%5D)">A video protocol for rapid dissection of mouse dorsal root ganglia from defined spinal levels.</a> BMC Research Notes. 13 (1), 302(2020).</li>
<li>Sleigh, J. N., Weir, G. A., Schiavo, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple%2C+step-by-step+dissection+protocol+for+the+rapid+isolation+of+mouse+dorsal+root+ganglia%5BTitle%5D)+AND+%22BMC+Research+Notes%22%5BJournal%5D)">A simple, step-by-step dissection protocol for the rapid isolation of mouse dorsal root ganglia.</a> BMC Research Notes. 9, 82(2016).</li>
<li>Perner, C., Sokol, C. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protocol+for+dissection+and+culture+of+murine+dorsal+root+ganglia+neurons+to+study+neuropeptide+release%5BTitle%5D)+AND+%22STAR+Protocols%22%5BJournal%5D)">Protocol for dissection and culture of murine dorsal root ganglia neurons to study neuropeptide release.</a> STAR Protocols. 2 (1), 100333(2021).</li>
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<li>Pokhilko, A., Nash, A., Cader, M. Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Common+transcriptional+signatures+of+neuropathic+pain%5BTitle%5D)+AND+%22Pain%22%5BJournal%5D)">Common transcriptional signatures of neuropathic pain.</a> Pain. 161 (7), 1542-1554 (2020).</li>
<li>Martin, S. L., Reid, A. J., Verkhratsky, A., Magnaghi, V., Faroni, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Gene+expression+changes+in+dorsal+root+ganglia+following+peripheral+nerve+injury%3A+roles+in+inflammation%2C+cell+death+and+nociception%5BTitle%5D)+AND+%22Neural+Regeneration+Research%22%5BJournal%5D)">Gene expression changes in dorsal root ganglia following peripheral nerve injury: roles in inflammation, cell death and nociception.</a> Neural Regeneration Research. 14 (6), 939-947 (2019).</li>
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</ol>

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이 프로토콜은 마우스 DRG의 저온 유지 장치 절편을 위한 쉬운 단계별 절차를 제공하여 슬라이드에서 고품질 DRG 절편을 안정적으로 얻을 수 있습니다. 이 프로토콜에는 네 가지 중요한 단계가 있습니다. 먼저, DRG 샘플을 기본 OCT에 넣기 전에 DRG 샘플과 핀셋을 건조시켜야 합니다. DRG 샘플을 둘러싼 모든 액체는 그 주위에 얼음 껍질을 형성하여 DRG 섹션이 OCT에서 분리되고 위로 구부러집니다. 둘째, 알루미늄 블록에 표시가 없거나 베이스 OCT가 마크를 덮는 경우 베이스 OCT의 하단(6시 위치)에 표시를 하고 프로세스 전반에 걸쳐 이 표시를 6시 위치에 유지하는 것이 중요합니다. 일정한 방향을 유지하면 DRG를 위에서 아래로 완전히 절단할 수 없고 일부 DRG 샘플이 누락되어 낭비되기 때문에 더 많은 DRG 섹션을 얻는 데 도움이 됩니다. 셋째, 베이스 OCT와 커버 OCT의 상단 가장자리는 알루미늄 블록의 상단 가장자리에 있어야 합니다. 이러한 방식으로 알루미늄 블록의 상단 가장자리는 유리 슬라이드가 DRG 섹션...

등뿌리신경절(dorsal root ganglion, DRG)은 일차 감각 뉴런, 조직 대식세포, 일차 감각 뉴런 1,2,3,4를 둘러싸고 있는 위성 세포를 포함합니다. 무해하고 유해한 신호를 처리하는 데 중요한 해부학적 구조이며 통증, 가려움증 및 다양한 말초 신경 장애 5,6,7,8,9,10,11,12,13에 중요한 역할을 합니다. 마우스 척수(14,15,16)로부터 DRG 조직을 해부하기 위한 몇 가지 방법이 개발되었지만, DRG 조직이 매우 작고, DRG 샘플의 냉동 유지 장치 절편이 롤로 구부러지는 경향이 있어 냉동 유지 장치 절편을 유리 슬라이드 상으로 적절하게 이송하는 것이 어렵기 때문에 DRG 조직의 동결 절제술은 여전히 어려운 과제로 남아 있다. 그러나 DRG 조직의 적절한 동결 절제는 면역조직화학 연구와 DRG 감각 뉴런 17,18,19,20,21,22,23의 구조에 매우 중요합니다. 더욱이, 단세포 RNA 염기서열분석 결과가 인간(24)과 마우스(25) 모두에서 DRG 감각 뉴런의 현저한 이질성을 밝혀냈기 때문에, DRG 조직의 적절한 동결절제는 다양한 생리학적 및 병리학적 조건에서 상이한 DRG 세포의 기능적 역할을 조사하는 데 중요하다.
DRG 동결 절제술의 대체 기술로서 DRG26 의 3D 재구성을 조사하기 위해 조직 투명화 기술이 적용되었지만, 조직 투명화 기술은 시간과 노동력이 많이 소요됩니다. 이에 비해 DRG의 동결 절제술은 빠르고 비교적 쉽게 수행할 수 있으므로 DRG 및 중추 신경계의 다른 영역에 대한 면역조직화학 및 구조 연구의 핵심 기술로 남아 있습니다. 그러나 DRG 및 특정 뇌 영역과 같은 조직의 샘플 크기가 작기 때문에 유리 슬라이드에 고품질의 온전하고 평평한 냉동 유지 장치 절편을 얻는 것은 신경 과학 연구에서 여전히 어려운 과제로 남아 있으며, 현재 마우스 DRG와 같은 작은 조직 샘플을 동결 절제하기 위한 최적의 프로토콜을 설명하는 논문은 없습니다.
이 프로토콜은 마우스 DRG의 저온 유지 장치 절편을 위한 쉽고 단계적인 기술을 제공하여 후속 DRG 연구를 위해 슬라이드에서 고품질 DRG 절편을 최대한 많이 안정적으로 얻을 수 있습니다. DRG 시료를 동결 절제하기 위해 특별히 고안된 이 기법은 시료 크기가 작은 다양한 다른 조직을 동결 절제하는 데 잠재적으로 사용될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>Avertin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T48402-25G</td><td>마취 동물</td></tr><tr><td>Epredia&nbsp; 극저온 투구 크라이오스탯 크라이오스탯, 25 mm dia. 크로스해치드</td><td>피셔브랜드</td><td>1910</td><td>하단의 OCT 섹션을 잡아라&nbsp;</td></tr><tr><td>Ergo 핀셋</td><td>Fisherbrand</td><td>S95310</td><td>핀셋 끝을 사용하여 바닥(6 o' clock)을 사용하여 섹션이 롤에서 뒤로 구부러지는 것을 방지하기 위해 플랫폼 표면에 달라붙</td></tr>도록 합니다.<tr><td>피셔브랜드&nbsp; Superfrost Plus 현미경 슬라이드</td><td>Fisherbrand</td><td>1255015</td><td>DRG 섹션을 수집하려면&nbsp;</td></tr><tr><td>마킹 펜</td><td>Fisherbrand</td><td>133794</td><td>&nbsp; 베이스 OCT Scigen의 방향 표시</td></tr><tr><td>&nbsp; 티슈-플러스 O.C.T. 컴파운드</td><td>Fisherbrand</td><td>&nbsp; 23730571</td><td>최적의 절단 온도(O.C.T.)를 보장하기 위해 냉동 조직 표본을 위한 내장 배지.</td></tr></tbody></table>

마우스 등쪽 뿌리 신경절 냉동 절제술을 위한 절차

A Procedure for Mouse Dorsal Root Ganglion Cryosectioning

고품질 마우스 배근 신경절(DRG) 냉동 유지 장치 절편은 염증성 및 신경병증성 통증, 가려움증 및 기타 말초 신경학적 상태 연구에서 적절한 면역화학 염색 및 RNAscope 연구에 매우 중요합니다. 그러나 DRG 조직의 샘플 크기가 작기 때문에 유리 슬라이드에서 고품질의 온전하고 평평한 저온 유지 장치 절편을 일관되게 얻는 것은 여전히 어려운 과제입니다. 지금까지 DRG 동결 절제술을 위한 최적의 프로토콜을 설명하는 논문은 없습니다. 이 프로토콜은 DRG 동결 절제술과 관련하여 자주 발생하는 어려움을 해결하기 위한 단계별 방법을 제시합니다. 제시된 기사에서는 DRG 조직 샘플에서 주변 액체를 제거하고, DRG 섹션을 동일한 방향을 향하도록 슬라이드에 배치하고, 유리 슬라이드의 섹션을 구부리지 않고 평평하게 만드는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은 DRG 샘플의 냉동 절편을 위해 개발되었지만, 샘플 크기가 작은 다른 많은 조직의 냉동 절제에 적용할 수 있습니다.

이번 연구에서는 마우스 L4 DRG 한 마리에서 약 16개의 연속적인 고품질 DRG 절편을 수집했습니다. 얻어진 부분은 왜곡이 없었습니다. 그림 1 은 동결 절제술을 위한 단계별 절차를 보여줍니다. 조직 절편에서 여분의 액체를 제거하는 방법은 그림 2에 나와 있습니다. 조직의 OCT 포매 과정은 그림 3에 강조되어 있습니다. 그림 4 는 유리 슬라이드에 DRG 섹션이 올바르게 배치된 것을 보여줍니다. 그림 5 는 마우스 DRG 절편의 생리학적 구조에 대한 컨포칼 형광 현미경 이미지를 보여줍니다. Nissl 염색은 다양한 크기의 DRG 감각 뉴런을 보여주고, DAPI 염색은 뉴런을 둘러싼 세포를 보여줍니다. 이 이미지는 이 프로토콜로 ...

여기에 제시된 것은 고품질의 등뿌리 신경절 냉동 유지 장치 절편을 지속적으로 획득하기 위한 개발입니다.

High-quality mouse dorsal root ganglion (DRG) cryostat sections are crucial for proper immunochemistry staining and RNAscope studies in the research of ...

고품질의 온전하고 편평한 쥐 등뿌리 신경절 냉동 유지 장치 절편을 지속적으로 얻는 것은 여전히 어려운 과제입니다. 이 연구는 이상적인 쥐 등뿌리 신경절 냉동 유지 장치 절편을 얻는 방법에 답하는 것을 목표로 합니다. 이 프로토콜은 마우스 DRG의 저온 유지 장치 절편에서 고품질의 온전한 평판 마우스 DRG 저온 유지 장치 절편에 대한 쉬운 단계별 기술을 제공합니다.이 논문은 마우스 DRG 샘플 조직에서 주변 액체를 제거하고, DRG 절편을 슬라이드에 동일한 방향을 향하게 배치하고, DRG 절편을 구부리지 않고 평평하게 만드는 방법을 설명합니다. 한 가지 주요 문제는 마우스 DRG의 OCT 섹션이 롤 모양으로 구부러지는 경향이 있어 유리 슬라이드에 놓기가 어렵다는 것입니다. 또한 마우스 DRG의 크기가 작기 때문에 하나의 샘플에서 충분한 절편을 획득하는 것도 어렵습니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Neuroscience

신경과학

우리는 axonal 부상 다음 지느러미 루트 신경 조직에서 염색질 immunoprecipitation을위한 방법을 제시한다. 접근 방식은 특정 전사 인자 바인딩 사이트와 주변 및 중추 신경계 모두에서 부상을 axons의 재생을위한 히스톤 및 DNA의 중요한 epigenetic 수정을 식별하는 데 사용할 수 있습니다.

Axonal 상해 다음 도설 루트 신경 조직에서 염색질의 Immunoprecipitation

이 비디오는 기계적 해리 기술을 사용하여 쥐의 등뿌리 신경절(DRG)에서 대식세포를 분리하는 효소가 없는 프로토콜을 보여줍니다. 새로 채취한 DRG 조직의 균질화가 완료되면 대식세포의 세포 표면 수용체에 대한 항체를 사용하여 세포를 형광으로 라벨링한 다음 유세포 분석을 수행하여 샘플에 대식세포의 존재를 확인합니다.

기계적 해리를 이용한 마우스 등뿌리 신경절에서 대식세포의 격리(Isolation of Macrophages from Mouse Dorsal Root Ganglion Using Mechanical Dissociation)

이 비디오는 배측근신경절(dorsal root ganglia, DRG)에서 뉴런을 채취하는 방법을 보여줍니다. 쥐의 척추에서 채취한 DRG를 분리하고 효소로 처리한 다음 기계적으로 해리하여 단세포 현탁액을 얻습니다. 뉴런은 밀도 구배 원심분리를 사용하여 신경교세포에서 분리되고 성장 배지에서 배양됩니다.

A Techniques for Haulsal Root Ganglia for Neuronal Cultures(신경 세포 배양을 위한 등뿌리 신경절의 수확 및 해리)

여기에서는 척수의 수압압출과 동일한 설치류에서 특정 등뿌리 신경절(DRG)의 식별 및 격리를 위한 프로토콜을 제시합니다. 표준 척수 분리 방법과 비교하여 이 방법은 훨씬 빠르고 조직 손상 위험을 줄입니다.

설치류의 등쪽 뿌리 신경절의 척수 및 절연의 유압 압출

여기서 우리는 표현형 및 기능 분석을 위해 등쪽 뿌리 신경절에서 대식세포를 신속하게 분리하는 기계적 해리 프로토콜을 제시합니다.

등갈 뿌리 신경절 대식세포의 신속한 절연

마우스 중추 신경계의 조직학적 분석을 위한 편리한 중력 공급 관류 방법이 제시된다. 인산화된 α시누클레인의 면역형광 검출은 파킨슨병의 마우스 모델에서 입증된다. 이 연구는 또한 심질 관류, 해부, 조직 동결 / 임베딩 및 냉동 절개 단계를 포괄적으로 설명합니다.

마우스 중추 신경계의 조직학적 분석을 위한 중력 공급 심질 관류 방법

이 논문은 성인 마우스 후근 신경절에 대한 면역 패닝 프로토콜을 설명합니다. 배양 플레이트에 항체를 부착함으로써 비신경 세포를 음성으로 선택하고 제거할 수 있습니다. 우리는 이 프로토콜을 사용하여 뉴런에 대한 배양이 풍부해짐을 보여주며, 조작에 대한 뉴런 반응에 대한 심층 연구를 가능하게 합니다.

면역패닝에 의한 성체 마우스 배근 신경절 뉴런 배양의 농축

이 프로토콜은 후근 신경절(DRG)에 이어 GCaMP3(유전적으로 인코딩된Ca2+ 지표; 녹색 형광 단백질-칼모듈린-M13 단백질 3) 동측 뒷발에 다양한 자극을 가하면서 Pirt-GCaMP3 마우스를 사용하여 신경 앙상블의Ca2+ 이미징.

생체 내 온전한 등근 신경절에 있는 일차 감각 뉴런 네트워크에서 뉴런 앙상블의 칼슘 이미징

이 논문은 Tuina 요법을 사용하여 쥐의 등쪽 뿌리 신경절의 만성 압박을 치료하기 위한 조작과 통증 행동 및 조직 병리학적 결과를 기반으로 효과를 평가하는 방법을 제시합니다.

등쪽 뿌리 신경절 통증의 압축이 있는 쥐 모델에 대한 Tuina의 진통 효과

본 프로토콜은 염료 및 동결 절편을 사용하여 바이러스 추적을 수행하기 전에 입체탁 주입 좌표의 검증 단계를 신속하게 처리하기 위한 실용적인 전략을 설명합니다.

Preliminary Validation of Stereotaxic Injection Coordinates via Cryosectioning

등근 신경절(DRG)은 1차 감각 신경세포체를 포함하며 주변 감각 신호를 척수로 전달합니다. 이 프로토콜은 구조적으로 온전한 신경절의 표준화된 분리, 해부학적 분절 식별, 초보자를 위한 직관적 안내, 그리고 시술 조직 손상 감소를 지원하는 마우스 DRG 해리 방법을 설명합니다.

쥐 등근 신경절의 해리 및 분리

배우세요 마우스 등쪽 뿌리 신경절(DRG) 냉동 절제술을 통해 고품질의 평평한 단면을 얻는 방법을. 이 기술은 면역조직화학 연구를 위한 조직 완전성을 보장하여 신경과학 연구의 정확성을 높입니다.

마우스 등쪽 뿌리 신경절 냉동 절제술을 위한 절차

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