2023년 6월 2일
우리는 프로테옴 규모에서 단백질 발견 및 정량화와 호환되는 고품질 미토콘드리아 분리를 위한 2단계 프로토콜을 제시합니다. 우리의 프로토콜은 유전 공학을 필요로하지 않으므로 모든 일차 세포와 조직에서 미토콘드리아를 연구하는 데 적합합니다.
우리 연구실은 미토콘드리아와 에너지 대사의 변화와 이것이 면역 활성화, 암 또는 대사 장애와 같은 건강하고 병리학적인 과정에 어떻게 영향을 미치는지 연구합니다. 우리의 목표는 미토콘드리아 기능과 에너지 대사에 대한 더 나은 이해를 제공함으로써 다양한 장애에 대한 새로운 치료법을 개발하는 데 도움을 주는 것입니다. 질량분석법 기반 단백질체학, 대사체학 및 CRISPR-Cas9 유전자 스크리닝과 같은 도구는 특정 세포 유형 및 환경에서 미토콘드리아 기능과 에너지 대사 모두에서 분자 메커니즘을 식별하는 데 점점 더 대중화되고 있습니다.
다른 방법과 달리, 당사의 프로토콜은 미토콘드리아 분리를 위한 차등 원심분리와 면역 포획의 두 가지 정제 단계를 사용합니다. 이것은 오염 물질 제거 개선과 같은 몇 가지 이점을 제공하며 새로운 미토콘드리아 단백질을 식별하는 강력한 도구이기도 합니다. 우리의 프로토콜은 구성에 대한 통찰력을 제공하므로 다양한 세포 유형 및 환경에서 미토콘드리아 기능을 수행합니다.
이것은 면역 활성화와 같은 정상적인 과정뿐만 아니라 암과 같은 병리학적 과정을 더 잘 이해하는 데 도움이 될 수 있습니다. 우리는 미토콘드리아 대식세포에 초점을 맞출 것입니다. 우리는 미토콘드리아의 기능을 더 잘 이해하기 위해 면역 반응 동안 미토콘드리아의 구성이 어떻게 변하는지 테스트할 것입니다.
우리의 연구 결과는 예를 들어 항 염증 효과가있는 약물 개발로 이어질 수 있습니다.
본 연구는 면역 활성화 및 암을 포함한 다양한 생물학적 상황에서 미토콘드리아 기능과 에너지 대사에 대한 이해를 높이기 위해, 고순도 미토콘드리아 분리를 위한 2단계 프로토콜을 제시합니다. 이 방법은 일차 세포 및 조직과 호환되어 단백질 발견 및 정량 분석 분야에서 폭넓게 활용될 수 있습니다.
고충실도 미토콘드리아 분리는 질환 관련 시스템에서 정확한 단백질 발견 및 정량을 위해 매우 중요합니다. 이 2단계 태그 프리(tag-free) 프로토콜은 일차 세포 및 조직으로부터 미토콘드리아 단백질체의 견고한 특성 분석을 가능하게 하여, 초기 발견 및 중개 연구의 예측 신뢰도를 높여줍니다. 향상된 순도와 정량적 질량 분석 결과는 다양한 치료 영역에 걸쳐 표적 검증 및 기전적 위험 제거에 직접적인 정보를 제공합니다.
이 프로토콜은 초기 가설 검증부터 리드 화합물 발굴 및 전임상 연구에 이르는 발견 연속체에 통합되어, 각 단계에서 견고한 미토콘드리아 분석을 가능하게 합니다.