Name: 골격근 흥분성을 연구하기 위한 천연 세포의 기능적 부위 지정 형광 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-06-02T13:50:00.000+00:00
Duration: 12 min 26 s
Description: 배우세요 기능적 부위 지정 형광 측정법을 이용하여 생쥐 골격근 섬유에서 Kv1.1 전압 센서의 실시간 운동을 추적하고 흥분-수축 결합 메커니즘을 규명하는 방법을. 이 기술은 근육 생리학 및 질병 연구에 중요한 통찰을 제공합니다.

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EGFP-CaV1.1(토끼) 야생형 플라스미드를 공유해 주신 J. Vergara 박사(University of California, Los Angeles)에게 감사드립니다. 트랙 앤 홀드 회로가 있는 포토다이오드의 설계 및 제작에 대해 Yale Department of Physiology Electronics Laboratory, 특히 Henrik Abildgaard에게 감사드립니다. 이 작업은 국립 보건원 (National Institutes of Health)의 보조금 R01-AR075726 및 R01-NS103777의 지원을 받았다

Native Skeletal Muscle Cells의 기능적 부위 지정 형광 측정법(Functional Site-Directed Fluorometry in native Skeletal Muscle Cells)

저자는 이해 상충이 없다고 보고합니다.

여기서, CaV1.1 채널에서 개별 전압 센서 운동의 연구를 위해 근섬유에서 FSDF를 수행하는 단계별 프로토콜이 설명됩니다. 이 기술에 결합된 단계의 수와 접근 방식의 다양성이 복잡해 보일 수 있지만 이러한 기술의 대부분은 종종 생물 물리학자/세포 생물학자 실험실에서 일상적으로 사용됩니다. 따라서 겉보기 복잡성은 주로 단일 통합 기술에서 모든 다양한 접근 방식의 조합에 있습니다. 종종 다단계 방법을 수행 할 때 처음에 수행 된 작은 수정의 영향은 다음 단계의 뒷부분에서만 감지 할 수 있습니다. 각 단계의 개발의 엄격함과 정확한 포함 및 제외 기준을 통해 동일한 준비 또는 동일한 섬유에서 여러 기록을 얻을 수 있습니다.
여기에 설명된 접근법은 심장 세포 및 뉴런을 포함한 다른 세포 유형에 적용될 수 있습니다. 또한 고속 카메라와 같은 다양한 감지 시스템을 사용할 수 있습니다. 현재, 전압 클램프(패치 클램프 또는 2-전극 전압 클램프)의 사용은 이들 기술(<s...

살아있는 세포에서 알려진 전기적 자극에 대한 반응으로 이온 채널 구조적 재배열을 추적하는 능력은 분자 생리학에 대한 귀중한 정보의 원천입니다1. 전압 개폐 이온 채널은 막횡단 전압의 변화를 감지하는 막 단백질이며, 그 기능도 전압 변화의 영향을 받습니다2. 지난 세기의 전압 클램프 기술의 발전으로 생리학자들은 막 탈분극에 반응하여 전압 개폐 이온 채널에 의해 전달되는 이온 전류를 실시간으로 연구할 수 있었습니다3. 전압 클램프 기술의 사용은 뉴런 및 근육과 같은 흥분성 세포의 전기적 특성을 이해하는 데 중요했습니다. 1970년대에는 전압 클램프 미세 조정을 통해 전압 개폐 칼슘(CaV) 및 나트륨(NaV) 채널 4,5에서 게이팅 전류(또는 전하 이동)를 감지할 수 있었습니다. 게이팅 전류는 세포막6을 가로지르는 전기장의 변화에 반응하여 전압 센서의 움직임에서 발생하는 비선형 용량성 전류입니다. 게이팅 전류는 이온 채널 개방7 이전 또는 수반되는 분자 재배열의 전기적 표현으로 간주된다. 이러한 전류 측정은 채널의 기능에 관한 귀중한 정보를 제공하지만, 이온 전류와 게이팅 전류는 모두 전압 개폐 채널7의 분자 간 및 분자 내 구조적 재배열에 대한 간접적인 판독값입니다.
1990년대 초반에 개발된 기능적 부위 지정 형광 측정법(FSDF, Voltage Clamp Fluorometry, VCF라고도 함)은8 처음으로 국소 구조적 변화와 채널 단백질의 기능을 실시간으로 직접 볼 수 있는 기능을 제공했습니다. 채널 돌연변이 유발, 전기생리학 및 이종 발현 시스템의 조합을 사용하여, 활성화 자극에 반응하여 특정 채널 또는 수용체의 움직이는 부분을 형광으로 태깅하고 추적할 수 있다(9,10). 이 접근법은 전압 개폐 이온 채널 8,10,11,12,13,14,15,16,17,18,19에서 전압 감지 메커니즘을 연구하기 위해 광범위하게 사용되었습니다. 권위 있는 리뷰는 10,20,21,22,23을 참조하십시오.
전기 신호의 개시 및 전파에 중요한 Ca V 및 NaV 채널은 중앙 기공과 4개의 동일하지 않은 전압 감지 도메인2을 가진 메인 α1 서브유닛으로 구성됩니다. 이들의 뚜렷한 1차 구조에 더하여, CaV 및NaV 채널은 보조 서브유닛(24)을 갖는 다중 서브유닛 복합체로서 표현된다. 전압 의존성 칼륨 채널(KV)은 NaV 또는CaV25의 단일 도메인처럼 보이는 4 개의 서브 유닛으로 구성됩니다. CaV 및NaV 채널의 기공 형성 및 전압 감지 α1 서브유닛은 6개의 고유한 막횡단 세그먼트의 4개의 개별 도메인을 암호화하는 단일 폴리펩티드에 의해 형성된다(S1-S6; 그림 1A) 24,26. S1 내지 S4 막횡단 세그먼트로 구성된 영역은 전압 감지 도메인(VSD)을 형성하고, S5 및 S6 막횡단 세그먼트는 공극 도메인(26)을 형성한다. 각 VSD에서 S4 α 나선에는 양전하를 띤 아르기닌 또는 라이신(그림 1A, B)이 포함되어 있으며, 이 아르기닌 또는 라이신은 멤브레인 탈분극에 반응하여 움직입니다7. 수십 년에 걸친 연구와 매우 다양한 실험적 접근 방식의 결과는 S4 세그먼트가 바깥쪽으로 이동하여 막 탈분극에 반응하여 게이팅 전류를 생성한다는 전제를 뒷받침합니다6.
FSDF는 막 탈분극 또는 다른 자극에 반응하여 채널이 기능함에 따라 부위 지정 돌연변이 유발을 통해 조작된 이온 채널 또는 기타 단백질의 특정 시스테인 잔기(즉, S4 α-나선)에 접합된 티올 반응성 염료의 형광 변화를 측정합니다10. 사실, FSDF는 원래 막전위 8,10의 변화에 반응하여 게이팅 전하가 이동할 때 채널의 주 전압 센서로 제안된 KV 채널의 S4 세그먼트가 이동하는지 여부를 조사하기 위해 개발되었습니다. 전압 개폐 이온 채널의 경우, FSDF는 채널 기능 측정과 동시에 4개의 VSD의 독립적인 구조적 재배열을 해결할 수 있습니다(주어진 시간에 하나의 VSD 추적). 실제로, 이러한 접근법을 사용하면, 개별적인 VSD가 채널 활성화 및 불활성화의 특정 양태에 차별적으로 관여하는 것으로 나타났다(12,27,28,29,30). 채널 기능에 대한 각 VSD의 기여도를 식별하는 것은 관련성이 높으며 채널 운영을 추가로 설명하고 잠재적으로 약물 개발을 위한 새로운 목표를 식별하는 데 사용할 수 있습니다.
이종 발현 시스템에서 FSDF의 사용은 환원주의적 관점에서 채널 기능에 대한 이해를 증진하는 데 매우 도움이 되었습니다10,23. 많은 환원주의적 접근 방식과 마찬가지로 장점이 있지만 한계도 있습니다. 예를 들어, 한 가지 주요 한계는 이종 시스템에서 채널 나노 환경의 부분적인 재구성입니다. 종종, 이온 채널은 수많은 부속 서브유닛 및 그 기능을 변형시키는 수많은 다른 단백질과 상호작용한다31. 원칙적으로, 상이한 채널 및 그들의 부속 서브유닛은 다수의 단백질 코딩 구축물 또는 폴리시스트로닉 플라스미드의 사용으로 이종 시스템에서 발현될 수 있지만, 이들의 본래 환경은 완전히 재구성될 수 없다30,32.
우리 그룹은 최근 근육 섬유의 전기 탈분극이 근육 수축의 활성화와 연결되는 과정인 여기-수축 커플링(ECC)33,34의 초기 단계를 연구하기 위해 천연 해리 골격근 섬유에서 FSDF의 변형을 발표했습니다35,36. 처음으로, 이 접근법은 성인 분화 근섬유의 본래 환경에서 전압-개폐 L형Ca2+ 채널(CaV1.1, DHPR로도 알려짐)로부터 개별적인 S4 전압-센서들의 모션 트래킹을 허용하였다37. 이는 빠른 자극 유도 자가 전파 탈분극을 허용하는 세포의 전기적 활성, 생체 내 전기천공을 통해 cDNA 플라스미드를 발현하는 능력, 세포 내 채널의 자연적인 높은 발현 및 구획 조직, 고속 이미징 및 전기생리학적 기록 장치와의 호환성을 포함하여 이 세포 유형의 여러 특성을 고려하여 달성되었습니다. 이전에는 고속 라인 주사 공초점 현미경을 검출 장치(37)로서 사용하였다. 이제 신호 수집을 위해 광 다이오드를 사용하여 기술의 변형이 제시됩니다. 이 포토다이오드 기반 검출 시스템은 다른 실험실에서 이 기술의 구현을 용이하게 할 수 있습니다.
여기에서는 CaV1.1에서 개별 전압 센서 이동을 연구하기 위해 천연 셀에서 FSDF를 활용하는 단계별 프로토콜이 설명되어 있습니다. CaV1.1 채널이 이 원고 전체에서 예로 사용되었지만 이 기술은 다른 이온 채널, 수용체 또는 표면 단백질의 세포 외 접근 가능한 도메인에 적용될 수 있습니다.

<table><tbody><tr><td>히알루로니다아제</td>, <td>SIGMA, ALDRICH</td><td>H3884-50mg</td><td></td></tr>, <tr><td>0.5mL Eppendorf 튜브</td>, <td>Millipore Sigma</td><td>EP022363719-500EA</td><td></td></tr>, <tr><td>1mL 주사기</td>, <td>Millipore Sigma</td><td>Z683531-100EA</td>, <td>튜버큘린 슬립 팁</td></tr>, <tr><td>1/2" 길이, 29게이지 멸균 인슐린 바늘 및 주사기,</td><td>Becton Dikinson</td><td>324702</td><td></td></tr><tr><td>35mm 비코팅 플라스틱 플레이트</td><td>Falcon, Corning</td><td>353001</td><td></td></tr><tr><td>60mm 비코팅 플라스틱 플레이트</td><td>Falcon, Corning</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>알코올 채찍</td><td>PDI</td><td>B60307</td><td></td></tr><tr><td>Alexa-533 cube LP</td><td>Chroma</td><td>49907</td><td>Ex: 530/30x; 학사 : 532; Em: 550lp</td></tr><tr><td>아크 램프</td><td>Sutter Instrumets</td><td>LB-LS 672</td><td></td></tr><tr><td>인공 눈물 크림</td><td>Akorn</td><td>NDC 59399-162-35</td><td></td></tr><tr><td>붕규산 유리 파스퇴르 피펫 5 3/4"</td><td>VWR</td><td>14672-200</td><td></td></tr><tr><td>BTS (N-benzyl-p-toluene sulphonamide)</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>203895</td><td></td></tr><tr><td>콜라겐 분해효소 I 유형</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>C0130-1G</td><td></td></tr><tr><td>면 팁</td><td>VWR</td><td>VWR-76048-960-BG</td><td></td></tr><tr><td>이중 전극 어레이&nbsp; (Electroporation를 위해)</td><td>BTX 하버드 장치</td><td>45-0120</td><td>10mm 2 바늘 배열 팁</td></tr><tr><td>EGFP 큐브</td><td>Chroma</td><td>39002AT</td><td>예: 480/30x; 학사 505; Em: 535/40m</td></tr><tr><td>전기천공법 장치 장치</td><td>BTX 하버드 장치</td><td>ECM 830</td><td></td></tr><tr><td>EPC10</td><td>HEKA Elektronik GmbH&nbsp; (하버드 바이오사이언스)</td><td>895000</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>바이오텍네,&nbsp; R& D Systems</td><td>RND-S11150H</td><td>태아 소 세럼 - 프리미엄, 열 비활성화</td></tr><tr><td>유리 커버슬립 35mm 접시</td><td>MatTek Life Science</td><td>P35G-1.5-14-C</td><td></td></tr><tr><td>이소플루란</td><td>플루리소(이소플루란) 액체 흡입용</td><td>502017-250ml</td><td></td></tr><tr><td>등온 가열 패드</td><td>Braintree scientific inc</td><td>39DP</td><td></td></tr><tr><td>라미닌</td><td>써모 피셔</td><td>INV-23017015</td><td>라미닌 마우스 단백질, 천연</td></tr><tr><td>라텍스 전구</td><td>VWR</td><td>82024-554</td><td></td></tr><tr><td>LED 530 nm</td><td>셔터 인스트루메트</td><td>5A-530</td><td></td></tr><tr><td>저결합 단백질 0.2 &mu; m 멸균 필터</td><td>Pall</td><td>FG4579</td><td>acrodisk&nbsp; 주사기 필터 0.2um supor membrane 저단백질 결합 비발열성</td></tr><tr><td>MEM</td><td>Invitrogen</td><td>INV-11380037</td><td></td></tr><tr><td>MTS-5-TAMRA</td><td>Biotium</td><td>89410-784</td><td>MTS-5-TAMRA</td></tr><tr><td>OriginPro 분석 소프트웨어</td><td>OriginLab Corporation</td><td>OriginPro 2022 (64비트) SR1</td><td></td></tr><tr><td>포토다이오드</td><td>맞춤 제작</td><td></td><td></td>NA</tr><tr><td>PlanApo 60x 오일&nbsp; 1.4 N.A/&infin;/0.17</td><td>Olympus</td><td>BFPC2</td><td></td></tr><tr><td>플래티넘 와이어 0.5 mm, 99.9 % 금속 기반</td><td>SIGMA</td><td>267228-1G</td><td>필드 자극 전극</td></tr><tr><td>펄스 발생기</td><td>WPI</td><td>Pulsemaster A300</td><td></td></tr><tr><td>셔터 드라이브 컨트롤러</td><td>Uniblitz</td><td>100-2B</td><td></td></tr><tr><td>셔틀 Uniblitz</td><td></td><td>VS2582T0-100</td><td></td></tr><tr><td>S-MEM</td><td>Invitrogen</td><td>INV-11380037</td><td></td></tr><tr><td>멸균 벤치 패드</td><td>VWR</td><td>DSI-B1623</td><td></td></tr><tr><td>멸균 식염수</td><td>SIGMA ALDRICH</td><td>S8776</td><td></td></tr><tr><td>Sylgard 184 실리콘 엘라스토머 키트</td><td>Dow Corning</td><td>1419447-1198</td><td></td></tr><tr><td>마취용 기화기</td><td>Parkland Scientific</td><td>V3000PK</td><td></td></tr><tr><td>전압 발생기</td><td>맞춤형</td><td>NA</td><td></td></tr></tbody></table>

골격근 흥분성을 연구하기 위한 천연 세포의 기능적 부위 지정 형광 측정

Functional Site-Directed Fluorometry in Native Cells to Study Skeletal Muscle Excitability

기능적 부위 지정 형광 측정법은 전압 개폐 이온 채널을 포함한 수많은 막 단백질의 구조-기능 관계를 조사하기 위해 선택되는 기술이었습니다. 이 접근법은 주로 이종 발현 시스템에서 멤브레인 전류, 채널 활동의 전기적 발현 및 형광 측정을 동시에 측정하여 로컬 도메인 재배열을 보고하는 데 사용되었습니다. 기능적 부위 지정 형광 측정법은 전기 생리학, 분자 생물학, 화학 및 형광을 형광 및 전기 생리학을 통해 실시간 구조 재배열 및 기능을 연구할 수 있는 광범위한 단일 기술로 결합합니다. 일반적으로 이 접근 방식에는 티올 반응성 형광 염료로 테스트할 수 있는 시스테인을 포함하는 엔지니어링된 전압 개폐 멤브레인 채널이 필요합니다. 최근까지 단백질의 부위 지향 형광 표지에 사용된 티올 반응성 화학은 Xenopus 난모세포 및 세포주에서만 수행되어 1차 비흥분성 세포에 대한 접근 범위를 제한했습니다. 이 보고서는 근육 섬유의 전기 탈분극이 근육 수축의 활성화와 연결되는 과정인 여기-수축 커플링의 초기 단계를 연구하기 위해 성인 골격근 세포에서 기능적 부위 지시 형광 측정법의 적용 가능성을 설명합니다. 본 프로토콜은 생체 내 전기천공을 사용하여 시스테인 공학 전압 개폐 Ca2+ 채널(CaV1.1)을 설계하고 성인 마우스의 굴근 손가락 브레비스의 근육 섬유로 형질감염시키는 방법론과 기능적 부위 지정 형광 측정 측정에 필요한 후속 단계를 설명합니다. 이 접근법은 다른 이온 채널과 단백질을 연구하는 데 적용할 수 있습니다. 포유류 근육의 기능적 부위 지정 형광 측정법의 사용은 특히 흥분성의 기본 메커니즘을 연구하는 것과 관련이 있습니다.

반복적인 자기장 자극에 대한 응답으로 전파 활동 전위가 트리거되면 특정 주파수의 탈분극에 대한 응답으로 특정 전압 센서 동작을 추적할 수 있습니다. 도 6A에 도시된 바와 같이, VSD-II-태깅된 나선의 움직임은 10Hz(즉, 100ms만큼 이격된)에서 인가된 2개의 연속적인 탈분극 각각에 응답하여 추적될 수 있다. 신호 표백은 트레이스에서 기준선을 빼서 수정할 수 있습니다(그림 6B). 첫 번째 및 두 번째 반응에 대한 추가 시간 배율(그림 6C)을 통해 빠르게 발전하는 VSD-II 나선 움직임을 정밀하게 관찰할 수 있습니다. 필드 자극 트리거의 시간 마커를 통해 10μs의 정밀도로 첫 번째 및 두 번째 응답의 상대적 시간 정렬이 가능합니다. 두 신호 모두 각각의 최소값(즉, 최소 피크)으로 정규화되어 두 응답 간의 동역학적 비교가 가능합니다(<strong class...

기능적 부위 지정 형광 측정법은 단백질 도메인 동작을 실시간으로 연구하는 방법입니다. 천연 세포에 적용하기 위해 이 기술을 수정하면 이제 쥐 격리 골격근 섬유의 전압 개폐 Ca2+ 채널에서 단일 전압 센서 동작을 감지하고 추적할 수 있습니다.

Functional site-directed fluorometry has been the technique of choice to investigate the structure-function relationship of numerous membrane proteins, ...

전압 개폐 이온 채널의 구성원인 CaV1.1에는 4개의 고유한 전압 센서가 있습니다. 증거에 따르면 일부 전압 센서는 리아노딘 수용체 활성화 또는 칼슘 전류에 더 많이 기여합니다. 우리는 여기-수축 커플링 및 칼슘 채널 활성화에서 각 전압 센서의 정확한 역할을 식별할 수 있는 것을 목표로 합니다.여기-수축 결합은 50년대 초반부터 연구되어 왔지만 이 과정이 어떻게 발생하는지에 대한 분자적 세부 사항은 아직 알려져 있지 않습니다. 채널의 사이로-전자 현미경 구조의 최근 발전, 새로운 CaV1.1 보조 단백질의 특성화, 채널 대체 스플라이싱 변이체의 발견 및 질병 유발 돌연변이의 식별이 이 분야에 대한 관심을 다시 불러일으켰습니다. 고전적인 전기 생리학 및 분자 생물학에서 초저온 전자 현미경, 분자 역학 시뮬레이션, 표적 단백질 분해, 기능적 부위 지정 형광 측정법, 조작된 세포 또는 동물 모델과 같은 보다 새로운 기술에 이르기까지 많은 기술이 우리 분야에서 사용됩니다.현재 연료는 몇 가지 실험적 과제에 직면 해 있습니다. 골격근에서 CaV1.1과 RyR1 사이의 적절한 트래피킹 및 통신은 많은 조절 단백질과 함께 여기-수축 결합을 지원하는 데 중요합니다. CaV1.1과 RyR1 사이의 이러한 단백질-단백질 상호작용을 직접 연구하는 방법은 누락되었거나 불완전합니다.마틴 슈나이더 박사(Dr.Martin Schneider)의 실험실은 수십 년 동안 여기-수축 커플링(excitation-contraction coupling)을 연구해 왔으며, CaV1.1의 전압 감지 메커니즘, 칼슘 방출 및 칼슘 스파크로 알려진 국부적인 칼슘 방출 이벤트를 특성화했습니다. 최근에, 우리 실험실은 기능하는 성인 근육 세포에서 여기-수축 커플 링 및 전압 센서 운동의 다양한 단계를 조사하기 위해 새로운 광학 기술을 구현하고 있습니다. 이것은 이전에 이종 발현 시스템에서 수행되었지만, 이제 우리의 프로토콜을 통해 CaV1.1 전압 센서의 구조적 변화를 그의 원래 환경에서 전파된 활동 전위 동안 추적할 수 있습니다.우리의 새로운 기술을 통해 여기-수축 커플링에 필요한 전압 센서의 정확한 움직임을 조사할 수 있습니다. 우리는 각 S4의 어떤 전하 잔류물이 그 기능에 중요한지, 또는 정확히 각 S4 전위가 CaV1.1 개방 또는 리아노딘 수용체 활성화와 연결되어 있는지 알고 싶습니다.

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Biology

생물학

우리는 electroporation과 형광 현미경을 사용하여 단백질 표현의 후속 시각화를 사용하여 라이브 생쥐의 발 근육의 섬유에 플라스미드 DNA의 transfection 효율에 대한 자세한 절차를 설명합니다.

사용 포유류 골격 근육의 유전자 Transfection VIVO에서 Electroporation

라이브 세포의 저장소로 작동하는 칼슘 항목의 형광 기반의 측정 : 교양 암 세포에서 골격근 섬유에

직접 칼슘 불꽃을 측정하는 방법이 여기에 설명, 칼슘 2 +의 기본 단위는 그대로 골격 근육 섬유의 근질 세망에서 놓습니다. 이 방법은 고립 된 근육 섬유의 ryanodine 수용체에서 칼슘 2 + 릴리스의 삼투 스트레스 매개 트리거를 사용합니다. 역학과 내 Ca 2 + 신호 전달의 항상성 용량은 건강과 질환에서 근육 기능을 평가하기 위해 사용될 수있다.

칼슘의 평가는 그대로 골격 근육 섬유에서 불꽃

이 프로토콜은 전기천공법을 사용하여 마우스 근육 섬유에 형광 표지된 단백질을 도입하고 발현합니다. 전기천공법 후 회복 후 섬유가 분리됩니다. 그런 다음 고해상도 컨포칼 현미경을 사용하여 개별 섬유를 이미지화하여 근육 구조를 시각화합니다.

DNA 일렉트로, 근섬유의 분리 및 이미징

여기, 우리는 성인 근육 조직에서 인간 myoblasts의 순수 인구를 얻기위한 방법을 설명합니다. 이 세포들은 생체 외 골격근 분화를 연구하고, 특히 Ca 2+ 신호 전달에 관여하는 단백질을 연구하는데 사용됩니다.

인간의 Myoblast의 분리, Myogenic 분화의 평가 및 저장 운영 칼슘 항목 측정

시냅스 전달에 필요한 세포하 이벤트를 시각화하기 위해 두 가지 관련 방법이 설명된다. 이들 프로토콜은 시험관내 배양된 뉴런의 라이브 세포 이미징을 사용하여 시냅스 전 칼슘 유입 및 시냅스 소포막 융합의 역학의 실시간 모니터링을 가능하게 한다.

근위축성 측삭 경화증 모델에서 시냅스 기능의 실시간 형광 측정

우리는 성인 마우스의 6개 근육에서 다양한 길이와 유형의 효소로 해리된 섬유를 얻기 위한 프로토콜을 설명합니다: 그 중 3개는 이미 설명되었고(flexor digitorum brevis, extensor digitorum longus, soleus) 그 중 3개는 처음으로 성공적으로 해리되었습니다(extensor hallucis longus, peroneus longus, peroneus digiti quarti).

생쥐의 6개 뒷다리 근육의 효소 해리로 얻은 온전한 짧은, 중간 및 긴 골격근 섬유: Beyond Flexor Digitorum Brevis

전체 plasmids의 사이트 이동 돌연변이 유발은 원래 플라스미드의 약간 다른 유사 콘텐츠를 작성하는 간단한 방법입니다. 여기서 우리는 플라스미드를 사용 표준 시약에 기본 재료를 소개하는 쉽고 비용 효과적인 방법을 보여줍니다.

전체 Plasmids의 수제 사이트 감독 돌연변이 유발

마이크로 해부 explants 기술은 골격 근육 줄기 세포의 원천으로 청소년, 성인이나 배아 근육에서 proliferative 골격근 세포를 분리를위한 강력하고 안정적​​인 방법입니다. 유니 클리,이 세포는 clonally 생체내 이식에 사용되는 골격 근육 줄기 세포 라인을 생산하기 위해 파생되었습니다.

성인 및 배아 골격근의 Microexplant 문화 및 골격 근육 줄기 세포의 분리

이 프로토콜은 골격 근육에서 격리 mitochondria의 호흡을 연구하는 절차를 설명합니다. 이 방법은 Scorrano에서...

골격근에서 Mitochondrial 절연

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