DNA-단백질 가교 및 번역 후 변형의 정량적 검출

본 프로토콜은 토포이소머라제 억제제 및 포름알데히드에 의해 유도된 유비퀴틸화, SUMOylation 및 ADP-리보실화를 포함하여 DNA-단백질 가교결합(DPC) 및 번역 후 변형(PTM)을 검출하고 정량화하는 변형된 방법을 강조하여 DPC 및 그 PTM의 형성 및 복구에 대한 연구를 허용합니다.

글쎄요, 제 연구는 DNA 손상 복구에 중점을 둡니다. 특히, 토포이소머라제 억제제, PARP 억제제, 및 알데히드에 의해 유도된 DNA 손상의 복구. 나는 세포가 이러한 약물에 의해 유도된 DNA 단백질 가교결합을 복구하는 분자 메커니즘을 설명하려고 합니다.

DNA 단백질 가교 결합의 복구에 대한 최근의 발전에는 DNA 단백질 가교 결합에 대한 새로운 복구 경로의 식별 및 이러한 복구 경로를 조절하는 이식 후 변형 메커니즘이 포함됩니다. 효소 분석의 생체 내 복합체 및 DNA 부가물 회복 분석에 대한 신속한 접근은 DNA 단백질 가교결합을 측정하는 데 가장 많이 사용되는 방법이며 토포이소머라제 하나의 DNA 단백질 가교와 같은 특정 DNA 단백질 가교결합은 특정 항체를 사용하여 면역형광법으로 검출할 수 있습니다. 가장 큰 과제 중 하나는 DNA 단백질 가교결합의 복구에서 번역 후 변형의 역할에 대한 연구입니다.

매우 낮은 존재비로 인해 번역 후 변형자 접합 DNA 단백질 가교결합을 풍부하게 하고 검출하는 것은 매우 어려웠습니다. 이 프로토콜은 deubiquitylated, SUMOylated 및 ADP-ribosylated DNA 단백질 가교결합의 정량 검출에 대한 세부 정보를 제공하여 연구자들이 다양한 출처의 DNA 단백질 가교 복구에서 이러한 변형의 동역학 및 형성을 연구할 수 있도록 합니다. DNA 단백질 가교결합의 검출을 위한 다른 프로토콜은 이들의 번역후 변형의 검출을 설명하는 단계를 포함하지 않는다.

이 프로토콜은 변형을 유도하기 위한 약물 농도 및 시간 지속 시간과 같은 세부 정보를 제공하지만 변형을 분리 및 검출하는 방법과 변형을 안정화하는 방법. 따라서 DNA 단백질 가교결합의 복구에서 몇 가지 이식 후 변형이 확인되었습니다. 그들이 수리를 조정하는 방법은 거의 알려지지 않았습니다.

따라서 이러한 수정 사항 간의 상호 작용은 추가 조사가 필요합니다.