Name: 오십견 쥐 모델의 Tuina: 효율적이고 재현 가능한 프로토콜 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-07-21T13:10:00.000+00:00
Duration: 4 min 28 s
Description: 배우세요 쥐 오십견 모델에서 효율적이고 재현 가능한 Tuina 요법 프로토콜을 개발하는 방법을. 이 방법은 어깨 관절 기능을 개선하고 캡슐 섬유화를 감소시켜 전통 중국 치료법의 임상 효과를 입증합니다.

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이 작업은 지난시 2020년 과학기술발전계획(보조금 번호 202019059), 산둥성 한의학 과학기술 프로젝트(보조금 번호 2021Q080), 치루 전통 한의학 학교 상속 프로젝트(보조금 번호[2022]93)의 지원을 받았습니다.

이 연구는 Shandong University of Traditional Chinese Medicine 부속병원 윤리위원회의 승인을 받았습니다(번호: AWE-2022-023).
1. 실험동물
<ol><li>20마리의 수컷 Sprague-Dawley(SD) 쥐(생후 7주, 250-280g)를 표준 조건(실온[RT] 20-24°C, 습도 40%-60%, 12시간/12시간 명암주기)에 수용했습니다.</li>
</ol>2. 그룹화 방법
<ol><li>SD 랫트를 각각 5마리의 랫트로 구성된 대조군(C), FS 모델 대조군(M), FS 모델 투이나 치료군(MT) 및 FS 모델 경구 치료군(MO)으로 그룹화합니다. 케이지 당 5 마리의 쥐를 유지하십시오 (같은 그룹).</li>
	<li>7일간의 적응 후, 다음 섹션에 설명된 대로 FS를 모방하기 위해 3주 동안 석고 캐스트 고정을 사용하여 M, MT 및 MO 그룹의 쥐의 한쪽 어깨를 고정합니다.</li>
	<li>섹션 4(그림 1)에 설명된 대로 MT 그룹의 쥐에게 2주 동안 Tuina 요법을 투여합니다.</li>
	<li>성체 투여량(0.0675mg/일)과 인체 표면적(0.018)에 대한 쥐의 비율(0.018)을 기준으로 쥐 1kg당 덱사메타손의 필요한 투여량을 계산합니다.</li>
	<li>2주 동안 오전 0.067시에 오전 00시에 MO 그룹의 쥐에게 매일 위내 덱사메타손 용액을 투여합니다. 참고: 이 그룹화 방법을 사용하여 이 연구에서 Tuina 프로토콜의 효과를 확인합니다. 다른 연구에서 실험 목적에 따라 그룹화 방법을 수행합니다.</li>
</ol>3. FS 모델 개발
<ol><li>트리브로모에탄올(250mg/kg, 복강내 주사)을 사용하여 쥐를 마취합니다.11. 참고: 기관 윤리 위원회의 요구 사항에 따라 트리보모에탄올(10g)과 tert-아밀 알코올(10mL)로 구성된 원액을 4°C에서 보관했습니다.  사용하기 전에 증류수로 2 %로 희석했습니다.</li>
	<li>쥐의 오른쪽 어깨와 가슴에 석고를 적신 붕대를 붙이고 오른쪽 앞다리를 어깨 관절의 내부 회전 90°로 3주 동안 유지합니다(그림 2)12. 알림: 쥐를 모니터링하여 걷기, 먹기, 마시는 것과 같은 정상적인 생리적 활동을 수행할 수 있는지 확인합니다. 쥐가 정상적인 생리 활동을 수행할 수 없는 경우 석고 붕대를 다시 고정하십시오.</li>
	<li>쥐에서 오른쪽 어깨 관절의 경직, 오른쪽 상지의 수축, 근육 위축, 절뚝거림과 같은 증상의 발달을 관찰하여 FS 모델의 성공적인 확립을 확인한다13.</li>
</ol>4. 투이나 방법
알림: 절차 전반에 걸쳐 조사관은 개인 보호 장비를 착용해야 합니다. 단 한 명의 전문 Tuina 의사만이 모든 조작을 수행해야 합니다(그림 3, 그림 4 및 그림 5).
<ol><li>기계 수용기와 컴퓨터를 포함하는 지능형 마사지 기술 파라미터 결정 시스템으로 훈련합니다(그림 3A).<ol><li>메카노레수용체(mechanoreceptor)에 대한 조작을 수행하고 소프트웨어를 통해 표시되는 세 방향의 힘 파라미터를 수행합니다(그림 3B).</li>
		<li>엄지 손가락을 사용하여 0.5kg의 강도와 100-120회/분의 빈도로 회전 운동에서 회전 반죽 방법을 수행합니다(그림 3C).</li>
		<li>엄지 손가락 끝을 사용하여 0.5kg의 강도로 포인트 프레싱 방법을 수행합니다(그림 3D).</li>
		<li>4.1.2 및 4.1.3 단계에서 언급 한 기계식 디스플레이를 1 분 동안 유지하여 쥐에 대해 Tuina를 수행합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>쥐가 진정될 때까지(~2분) 쥐를 잡습니다. 그런 다음 조작을 수행합니다. 쥐를 옆으로 누운 자세로 놓지만 다른 조작 방법에 따라 위치가 바뀔 수 있습니다.</li>
	<li>오른쪽 검지와 중지를 사용하여 쥐의 오른쪽 앞다리를 고정하고 여러 번 구부리고 펴서 쥐의 어깨 관절, 팔꿈치 관절 및 상완골의 위치를 결정합니다.</li>
	<li>쥐의 오른쪽 어깨, 앞다리 및 등을 0.5kg의 강도와 100-120회/분의 빈도로 3분 동안 시계 방향으로 돌려 반죽합니다(그림 4A-C).<ol><li>옆으로 누운 자세에서 앞다리 근육을 조작합니다.</li>
		<li>엎드린 자세에서 어깨와 등 근육을 조작합니다.</li>
	</ol></li>
	<li>엄지 손가락 끝으로 엄지 손가락 끝으로 경혈 LI15(Jianyu), SI11(Tianzong), HT01(Jiquan) 및 LI11(Quchi)을 0.5kg의 강도로 경혈당 30회 수직으로 누릅니다(그림 4D-G).<ol><li>rat-acupoint 아틀라스를 사용하여 각 경혈의 위치를 정의합니다(그림 5)14,15.</li>
		<li>엎드린 자세에서 견봉 끝의 앞쪽 아래쪽 함몰부에 위치한 LI15를 누릅니다.</li>
		<li>엎드린 자세에서 견갑골 척추의 중간 지점에 있는 극하외근(infraspinatus fossa)의 함몰부에 위치한 SI11을 누릅니다.</li>
		<li>겨드랑이 중앙에 위치한 HT01을 누운 자세로 누릅니다.</li>
		<li>측면 누운 위치에서 입방체 주름의 측면 끝에 있는 신근 carpi radialis의 내측 함몰부에 위치한 LI11을 누릅니다.</li>
	</ol></li>
	<li>왼쪽 엄지와 중지로 어깨 관절을 잡고 내전, 외전, 전방 신전 및 후방 신전 위치에서 앞다리를 10초 동안 스트레칭합니다(그림 4H-K). 알림: 이 스트레칭 방법은 쥐에서 저항 없이 수행해야 합니다.</li>
	<li>쥐가 동요하면 Tuina 절차를 일시 중지하십시오. 쥐를 10초 동안 쓰다듬어 진정시킨 다음 시험을 진행합니다.</li>
	<li>2주 동안 매일 시술을 수행하십시오.</li>
</ol>5. 상완골 ROM 측정
알림: 관절낭 조직의 변성을 방지하기 위해 가능한 한 빨리 측정 프로세스를 완료하는 것이 중요합니다.
<ol><li>견갑골의 아래쪽 가장자리를 노출시킨 후 트리브로모에탄올(복강 내 주사에 의한 초기 용량의 3배)을 과도하게 투여하여 쥐를 희생한 후 견갑골과 상완골 근위 2/3를 제거합니다.</li>
	<li>주사 바늘(1.2cm x 0.45mm)을 상완골 샤프트를 따라 상완골두에 삽입합니다.</li>
	<li>멸균 수술 시트로 감싼 플라스틱 폼에 견갑골의 상하 모서리에 두 개의 주사 바늘을 수직으로 삽입합니다.</li>
	<li>상완골축의 주입 바늘에 가는 실을 붙이고 반대쪽 끝을 5g의 힘으로 당겨 상완골축과 평행이 되도록 합니다. 견갑골의 아래쪽 가장자리와 상완골 축(humeral shaft) 사이의 각도를 측정합니다(그림 6). 알림: 신뢰할 수 있는 결과를 얻으려면 별도의 조사관이 측정을 수행하도록 하십시오.</li>
	<li>통계 분석 소프트웨어 응용 프로그램을 사용하여 평균 ± 표준 편차(SD)로 데이터를 보고합니다. 참고: 여기서는 SPSS 소프트웨어(SPSS, 버전 25.0)가 사용되었습니다.</li>
	<li>일원 분산 분석(ANOVA)을 사용하여 그룹 간의 차이를 분석합니다.</li>
	<li>적절한 소프트웨어를 사용하여 막대 그래픽을 얻습니다. 참고: 여기서는 GraphPad Prism 8을 사용했습니다.</li>
	<li>측정 후 H&E 및 Masson 염색을 사용하여 캡슐 병리를 평가합니다.</li>
</ol>6. 섹션 준비
<ol><li>상완골 ROM을 평가한 후 전체 샘플을 4% PFA에 3일 동안 고정한 다음 EDTA(pH 7.2) 용액에서 추가로 2개월 동안 석회질을 제거합니다.</li>
	<li>탈수 후 샘플이 포함된 임베디드 조직 블록을 5μm 슬라이스16로 자릅니다.</li>
	<li>슬라이스를 65°C에서 60분 동안 건조시킵니다.</li>
	<li>슬라이스를 왁스를 제거합니다.</li>
	<li>슬라이스를 크실렌 I, 크실렌 II 및 크실렌 III에 7분 동안 담근 다음 하강 에탄올 시리즈(무수 에탄올, 5분, 95% 에탄올, 2분, 80% 에탄올, 2분 및 70% 에탄올, 2분)를 넣고 마지막으로 초순수에 2분 동안 담그십시오.</li>
</ol>7. H&E 염색
<ol><li>헤마톡실린을 사용하여 섹션을 5분 동안 염색하고 1% 염산 에탄올로 3초 동안 헹구고 흐르는 물로 5분 동안 세척합니다.</li>
	<li>에오신으로 부분을 3분 동안 얼룩지게 하고 수돗물로 씻습니다.</li>
	<li>섹션을 에탄올 시리즈(95% 에탄올 I, 3초, 95% 에탄올 II, 3초, 무수 에탄올 I, 3초 및 무수 에탄올 II, 1분)에 담근 다음 크실렌 시리즈(크실렌 I, 1분, 크실렌 II, 1분)에 담근다.</li>
	<li>각 샘플에 중성 껌 실런트 한 방울을 떨어뜨립니다. 커버 유리로 각 샘플을 밀봉합니다.</li>
	<li>도립 형광 현미경(스케일 바 = 100μm)을 사용하여 이미지를 수집합니다.</li>
</ol>8. 메이슨 염색
<ol><li>면역조직화학 펜을 사용하여 절편 주위에 원을 그린 다음 절편을 37°C에서 2시간 동안 Bouin의 용액에서 매염제로 배양합니다. 그런 다음 노란색이 사라질 때까지 섹션을 물로 씻으십시오.</li>
	<li>샘플을 청금석 파란색 염료로 3분 동안 처리한 다음 증류수로 세척합니다.</li>
	<li>절편을 헤마톡실린(Mayer)으로 2분 동안 염색한 후, 산성 에탄올 분화 용액에서 절편을 3초 동안 처리한다. 그런 다음 흐르는 물에 10분 동안 섹션을 씻습니다.</li>
	<li>ponceau 마젠타 염료 용액으로 섹션을 10분 동안 염색한 다음 물로 씻습니다.</li>
	<li>섹션을 포스 몰리브딕 산 용액에 10 분 동안 담그십시오.</li>
	<li>아닐린 블루 염색 용액을 섹션에 5분 동안 첨가한 다음 약산성 작업 용액으로 2분 동안 세척합니다.</li>
	<li>7.3단계에서 설명한 대로 섹션을 탈수하고 투명하게 만듭니다.</li>
	<li>각 부분에 중성 껌 밀봉제를 한 방울 떨어뜨리고 커버 유리로 덮습니다. 섹션을 흄 후드에 넣어 건조시키십시오.</li>
	<li>7.5단계에 설명된 대로 이미지를 수집합니다.</li>
</ol>

쥐 모델의 오십견에 대한 Tuina 요법

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</ol>

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첫 번째 중요한 단계는 모델 선택입니다. 1차 FS 모델을 구현하기 어렵기 때문에 캐스트 고정 및 외과적 내부 고정은 FS 쥐 모델 9,12을 설정하는 데 자주 사용됩니다. 캡슐의 어깨 이동성 및 섬유화의 가장 심각한 제한은 3주 동안 캐스트 고정화에 의해 확립된 FS 모델에서 관찰되었다12,20. 이 연구에서 FS 모델의 성공률은 100%로 우수했습니다.
두 번째 중요한 단계는 이 프로토콜에서 사용되는 조작입니다. 이 연구에서는 세 가지 조작(주무르기, 누르기, 스트레칭)이 사용되었습니다. 연조직 주무르는 조작을 어깨, 견갑골 및 팔뚝에 적용하여 근육을 이완시켰습니다. 압착 조작은 FS 5,21에 대한 임상 실습에서 가장 일반적으로 사용되는 LI15, SI11, HT01 및 LI11과 같은 경혈에 압력을 가하여 수행되었습니다. LI15, SI11 및 HT01은 어깨 캡슐 주변의 위치에 위치하며, ROM 및 어깨 기능을 개선하는데 효과적일 수있다 22. LI11은 상지 운동 장애에 자주 사용되며 LI15와 같은 경락에 위치합니다. 이 경혈 매칭 방법은 LI1523의 효능을 향상시키는 데 도움이 됩니다. 완전한 이완 후 스트레칭 기술을 사용하여 기능적 활동을 회복했습니다.
이 프로토콜에서 가능한 문제는 쥐가 투이나에서 강렬한 저항을 보인다는 것인데, 이는 쥐의 내성을 초과하기보다는 두려움으로 인해 발생할 수 있습니다. 이 시점에서 쥐가 진정될 때까지 조작을 중지해야 합니다(10초 동안 쓰다듬으면 쥐가 진정됨). 또한 스트레칭의 정도는 쥐의 증상에 따라 조정해야 합니다. 처음에는 어깨 관절의 한계가 분명했고 스트레칭 진폭이 작았습니다. 중재와 함께 쥐의 어깨 관절 기능이 점차 회복되고 스트레칭의 진폭이 점진적으로 증가했습니다. 쥐가 저항 없이 스트레칭 방법을 받아들일 수 있다는 것이 표준입니다. 마지막으로 쥐는 어느 정도의 공격성을 가지고 있으며 Tuina는 쥐와 장기간 접촉해야 하므로 개인 보호 장비를 착용하는 것이 중요합니다.
조작의 정량적 제어는 Tuina 실험에서 가장 어렵습니다. 마사지 조작 시뮬레이터는 단일 조작의 강도와 빈도를 제어하는 데 사용될 수 있지만, 이 방법은 여러 조작 및 치료 부위가 관련된 경우 제한된다24,25. 임상에서 투이나는 일반적으로 의사가 직접 수행하는데, 이 연구에서는 의료 장비로 개입하기 어려웠다. 자극을 제어하기 위해 지능형 마사지 기술 매개 변수 결정 시스템을 사용하여 Tuina의 훈련을 표준화 할 수 있습니다. 훈련 후 조사관은 각 쥐에게 어느 정도 동일한 힘을 가할 수 있습니다. 이 프로토콜의 주요 제한 사항은 조작을 완전히 제어할 수 없다는 것입니다.
TCM Tuina 요법은 중국 전역에서 사용되어 온 풍부한 역사를 가지고 있으며, 병원의 다양한 의사가 다양한 조작 및 치료 부위 조합을 사용합니다. 따라서 동물 실험과 임상 연구 모두에 대해 재현 가능하고 효과적인 프로토콜을 수립하는 것이 중요합니다. 이 연구에서 사용된 조작 및 경혈은 우리 팀의 이전 연구를 기반으로 하여 임상 경험과 FS 동물 모델21의 특성을 결합했습니다. 이 연구는 FS 쥐의 어깨 관절 기능을 개선하고 캡슐 섬유증을 줄이는 데 개발된 Tuina 프로토콜의 효과를 입증했습니다. 이러한 발견은 투이나 치료의 기저에 있는 메커니즘에 대한 추가 조사를 위한 토대를 제공합니다. 또한, 이 프로토콜은 FS에 대한 대체 의학적 치료의 효능을 탐구하는 데 관심이 있는 연구자들에게 유용할 수 있습니다.
이전 연구에서는 섬유증에 대한 Tuina 중재 메커니즘이 MMP-1/TIMP-1의 균형을 조절하면서 TGF-β 및 CTGF의 하향 조절과 관련이 있을 수 있음을 발견하여 세포외 기질(ECM)의 생성을 완화할 수 있습니다26. 어깨 캡슐의 섬유증에 대한 Tuina의 효과는 다양한 메커니즘의 조절을 통해 달성 될 수 있습니다. 그러나 이 개선과 관련된 메커니즘을 완전히 이해하려면 추가 연구가 필요합니다.

오십견(FS)은 어깨 유착성 관절낭염으로도 알려져 있으며, 어깨 통증과 이동성 장애를 특징으로 하는 자가 제한 질환입니다. 일반적으로 30세에서 70세 사이의 사람들에게 영향을 미치며, 평균 연령은 50세이며, 중국 인구에서 약 5%의 유병률을 보입니다1. 여성은 남성에 비해 FS 발병률이 1.6배 더 높은 것으로 보고되고있다 2. FS의 유병률은 당뇨병, 포도당 및 지질 대사 장애 또는 기타 관련 질병이 있는 사람에서 10%에서 36% 사이로 더 높습니다2,3. FS의 현재 임상 치료에는 물리 치료, 스테로이드 약물 및 수술 치료가 포함됩니다4.
중국 전통 의학(TCM) 요법인 투이나(Tuina)는 FS 환자의 어깨 통증을 효과적으로 완화하여 삶의 질을 향상시키는 것으로 나타났습니다 5,6. 그러나 이 치료법의 근본적인 메커니즘은 잘 알려져 있지 않습니다. 따라서 FS 치료에 대한 Tuina의 효과와 메커니즘을 연구하기 위해 동물 모델을 사용하는 것이 중요합니다.
쥐 어깨 관절은 인간의 어깨와 유사한 복잡한 구조를 가지고 있으며 FS7의 기계론적 연구에 자주 사용됩니다. FS 랫트 모델은 상완골 ROM과 캡슐 섬유증의 감소를 특징으로 한다8. 또한, 이 모델은 어깨 캡슐의 관찰을 가능하게 하고 부상을 치료하는 동안 병리학적 연구를 가능하게 한다9. 또한, 경구용 코르티코스테로이드는 FS 치료 연구에서 대조군으로 자주 사용된다10. 본 연구는 FS 랫트 모델에 대한 투이나 프로토콜을 개발하는 것을 목표로 하며, 투이나 요법과 경구용 덱사메타손의 효능을 비교하여 투이나 연구에서 동물실험 수행의 타당성을 입증하는 것을 목표로 한다.

<table><tbody><tr><td>4% 파라포름알데히드</td><td>Solarbio</td><td>P1110</td><td></td></tr><tr><td>임베딩 기계</td><td>Changzhou Paisijie Medical Equipment Co., Ltd</td><td>BM450A</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌 디아민 테트라아세트산(EDTA)</td><td>Solarbio</td><td>E1171</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin eosin(HE) 염색 키트</td><td>Sparkjade</td><td>EE0012</td><td></td></tr><tr><td>지능형 마사지 기술 매개변수 결정 시스템</td><td>Shanghai Dukang Intrument Equipment Co. Ltd</td><td>ZTC-<img alt="방정식 1" src="/files/ftp_upload/65440/65440eq01.jpg" style="여백: 자동; "></td><td></td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica</td><td>531CM-Y43</td><td></td></tr><tr><td> Modified Masson Trichrome Staining Solution</td><td>Shanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd</td><td>R20381-8</td><td>Bouin 50 mL, 청금석 블루 염료 50 mL, Hematoxylin (Mayer) 50 mL, 산성 에탄올 분화 용액 50 mL, ponceau 마젠타 염료 용액 50 mL, 포스포몰리브딕산 용액 50 mL, 아닐린 블루 염색 용액 50 mL;   약산성 50mL</td></tr><tr><td>트리브로모에탄올</td><td>맥클린</td><td>T903147-5</td><td></td></tr></tbody></table>

오십견 쥐 모델의 tuina: 효율적이고 재현 가능한 프로토콜

Tuina in a Frozen Shoulder Rat Model: An Efficient and Reproducible Protocol

오십견(FS)은 최적의 치료법이 정의되어 있지 않은 흔한 질환입니다. 중국 병원에서 FS 환자를 치료하는 데 사용되는 전통 한의학(TCM) 기술인 투이나 요법은 우수한 결과를 보였지만 그 메커니즘은 완전히 이해되지 않았습니다. 이전 연구를 기반으로 한 이 연구는 FS 쥐 모델을 위한 Tuina 프로토콜을 개발하는 것을 목표로 했습니다. 무작위로 20마리의 SD 쥐를 대조군(C; n=5), FS 모델(M; n=5), FS 모델 투이나(Tuina) 치료군(MT; n=5), FS 모델 경구치료(MO; n=5) 그룹으로 나눴다. 본 연구는 캐스트 고정화 방법을 사용하여 FS 랫트 모델을 확립하였다. Tuina와 경구용 덱사메타손이 상완골 운동 범위(ROM)에 미치는 영향을 평가하고 조직학적 소견을 평가했습니다. 본 연구는 투이나와 경구용 덱사메타손이 어깨 활성 ROM을 개선하고 캡슐의 구조를 보존할 수 있음을 보여주었으며, 투이나 요법이 경구용 덱사메타손보다 더 효과적인 것으로 입증되었습니다. 결론적으로, 본 연구에서 확립된 Tuina 프로토콜은 FS에 매우 효과적이었습니다.

FS 모델의 성공 또는 실패를 평가하기 위해 쥐의 신체 활동을 관찰했습니다. 이전 연구에서는 깁스 고정이 일반 쥐에 비해 이동 거리와 보행 속도를 현저히 감소시키는 것으로 나타났다17. 또 다른 연구에서는 FS가 이동 거리에 영향을 미치지 않았으며, 절뚝거림이 가장 흔한 증상이었다고 한다13. 이 연구는 모델링 후 쥐에서 오른쪽 어깨 관절의 뻣뻣함, 오른쪽 상지의 수축, 근육 위축 및 절뚝거림을 보여주었습니다. MT 및 MO 그룹의 이러한 병변은 중재 2주에 의해 완전히 해결되었습니다. 그러나 M 그룹에서는 큰 변화가 없었습니다.
FS에서 Tuina의 효과를 평가하기 위한 주요 기준은 상완골 ROM18의 측정입니다. 우리는 사각 상완골 ROM의 평균값이 C 그룹에서 149.3° ± 5.9°, M 그룹에서 111.1° ± 3.9°, MT 그룹에서 128.5° ± 2.8°, MO 그룹에서 119.56° ± 2.9°임을 관찰했습니다. 그림 7에 묘사된 바와 같이, M 그룹의 쥐의 상완골 ROM은 C 그룹의 그것보다 현저히 낮았다(P &lt; 0.0001). 또한, MT 그룹 및 MO 그룹의 ROM은 M 그룹보다 유의하게 높았습니다(P &lt; 0.05, P &lt; 0.0001). 그러나 MO 그룹의 ROM은 MT 그룹보다 현저히 낮았습니다(P &lt; 0.0001). 이 발견은 Tuina가 FS 쥐의 어깨 관절 기능을 크게 향상시킬 수 있음을 시사합니다.
또한 H&amp;E 염색 및 Masson 염색은 캡슐의 구조를 보존하고 섬유화를 줄이는 Tuina의 효과를 추가로 입증할 수 있습니다. 관찰을 용이하게 하기 위해, 상완골 관절의 캡슐을 조직학적 소견에 사용하였다. 어깨관절낭은 활막층과 섬유층(19)을 포함한다. H&amp;E 염색은 FS의 전형적인 특징인 M군에서 활막세포 증식, 평평한 활막 주름, 적혈구 정체 및 혈관 증식을 나타냈습니다(그림 8A,B). 이러한 특징은 투이나(Tuina)와 경구용 덱사메타손(dexamethasone) 요법 후에 어느 정도 감소하였다(그림 8C,D). MT 그룹에 비해 MO 그룹은 활막 세포도 많이 보였다. Masson 염색은 각 그룹의 섬유 다발의 배열을 보여주었습니다 (노란색 화살표). 캡슐은 깔끔한 방향으로 배열된 섬유 다발이 있는 망상 섬유의 느슨한 네트워크로 구성됩니다(그림 8E). M 그룹에서는 섬유 다발이 무질서하게 배열되어 캡슐 섬유증을 나타냅니다(그림 8F). MT 그룹의 쥐 캡슐은 섬유 다발이 깔끔하고 명확하게 층화되어 있지만 MO 그룹에서는 약간 무질서한 상태로 남아 있음을 보여주었습니다(그림 8G,H).
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig01.jpg"> 그림 1: FS 모델 및 Tuina 개입을 설정하기 위한 프로토콜. 쥐는 7일 동안 적응 섭식, 21일 동안 FS 모델 확립, 14일 동안 매일 투이나 요법을 수행했습니다. 36일째 되는 날, 모든 쥐가 희생되었다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig02.jpg"> 그림 2: FS의 쥐 모델을 확립하기 위한 캐스트 고정. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig02large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig03.jpg"> 그림 3: 조작의 정량적 제어 . (A) 지능형 마사지 기술 매개변수 결정 시스템. (B) 세 가지 힘은 X 방향을 따라 평행력, Y 방향을 따라 종력, Z 방향을 따라 수직력으로 측정할 수 있습니다. (C) 회전 반죽 방법의 강도. 빨간색 곡선은 안정화된 수직력(0.5kg)을 나타냅니다. 주황색 곡선은 규칙적인 평행력을 나타냅니다. 흰색 곡선은 규칙적인 세로력을 나타냅니다. (D) 포인트 프레싱 방법의 강도. 빨간색 곡선은 수직력(0.5kg)을 나타냅니다. 주황색과 흰색 곡선은 평행하지 않은 힘과 종방향 힘을 나타냅니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig03large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig04.jpg"> 그림 4: 투이나 치료에 사용된 조작. (A-C) 오른쪽 어깨, 앞다리, 등의 근육을 주무릅니다. (디지) LI15, SI11, HT01 및 LI11을 포인트 누름. (H-K) 앞다리를 내전, 외전, 전방 확장 및 후방 확장 위치에서 스트레칭합니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig04large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig05.jpg"> 그림 5: 쥐의 LI15, SI11, HT01 및 LI11의 해부학적 위치. ● 측면, ○ 내측 표면. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig05large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 6" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig06.jpg"> 그림 6: 상완골 ROM의 측정. 상완골축에 삽입된 주입 바늘에 가는 실을 부착하고 반대쪽 끝을 5g의 힘으로 당겨 상완골축과 평행하게 합니다. 견갑골의 아래쪽 가장자리와 상완골 축 사이의 각도는 상완골 ROM으로 측정됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig06large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 7" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig07.jpg"> 그림 7: 세 그룹의 쥐에 걸친 글레노상완 ROM. 값은 평균 ± S.D., n = 5입니다. 유의한 차이는 일원 분산 분석(a P &lt; 0.001 및 bP &lt; 0.0001)으로 표시됩니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig07large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
<img alt="Figure 8" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65440/65440fig08.jpg"> 그림 8: 어깨 캡슐의 조직학적 소견. (A,E) 대조군은 정상적인 캡슐 구조(H&amp;E 및 Masson 염색)를 포함합니다. (나,에프) FS 모델 그룹은 캡슐 구조의 변화를 다음과 같이 보여줍니다: 평평한 활막 주름, 캡슐 섬유증 및 교란된 섬유 다발(H&amp;E 및 Masson 염색). (C,G)입니다. Tuina 그룹과 결합된 FS 모델은 캡슐의 구조가 정상에 가깝고 섬유화가 분명하지 않음을 보여줍니다(H&amp;E 및 Masson 염색). (디,H) 경구용 덱사메타손과 결합된 FS 모델은 캡슐의 구조가 정상에 가깝고 섬유화가 명백하다는 것을 보여줍니다(H&amp;E 및 Masson 염색). 척도 막대 = 100μm. HH: 상완골의 머리; 검은 화살표 : 활막 주름; 빨간색 화살표: 적혈구 정체 및 혈관 증식; 노란색 화살표: 섬유 묶음. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65440/65440fig08large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>

이 연구는 쥐 모델에서 확립된 오십견 치료를 위한 효율적이고 재현 가능한 Tuina 프로토콜을 개발합니다. 이 접근법은 오십견에 대한 투이나 요법 치료 방법을 연구하는 데 도움이 될 것입니다.

오십견 쥐 모델의 Tuina: 효율적이고 재현 가능한 프로토콜

Frozen shoulder (FS) is a common condition with no defined optimal therapy. Tuina therapy, a traditional Chinese medicine (TCM) technique used to treat FS ...

본 연구는 투이나 요법의 기전과 임상적 효과를 이해하는 것을 목표로 한다. 이전 연구를 바탕으로 우리는 오십견 쥐 모델을 위한 Tuina 프로토콜을 개발하고 있습니다. 이 연구는 영향을 받은 쥐의 어깨 관절 기능을 개선하고 캡슐 섬유증을 줄이는 데 개발된 Tuina 프로토콜의 효과를 입증했습니다.Tuina는 어깨 캡슐의 섬유화에 영향을 미치기 위해 다양한 메커니즘을 조절할 수 있습니다. 이 연구의 결과는 투이나 치료와 관련된 메커니즘에 대한 추가 연구의 토대를 마련했습니다. 앞으로도 이 프로토콜을 사용하여 쥐의 오십견을 치료하고 단백질체학 기술을 사용하여 이 쥐의 캡슐 섬유증 치료와 관련된 메커니즘을 조사할 것입니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

이 프로토콜에는 vivo에서 쥐의 모델을 접착성 capsulitis 선물 한다. 모델 모션 (ROM)와 증가 관절 경직의 감소 회전 범위에 오랜된 시간 동안 여분 관절 봉합 고정으로 갑 공동의 내부 고정 포함 되어 있습니다.

어깨의 접착성 Capsulitis의 쥐 모델

우리는 석고로 고정된 무릎 골관절염 쥐에 대해 수행되는 Tuina 조작에 대한 프로토콜을 제시합니다. 예비 결과에 기초하여, 상기 방법의 효능은 염증 및 연골 손실의 감소에 의존한다는 것을 시사하였다.

무릎 골관절염 쥐의 염증과 연골 손실을 줄이기 위한 Tuina 조작

이 논문은 Tuina 요법을 사용하여 쥐의 등쪽 뿌리 신경절의 만성 압박을 치료하기 위한 조작과 통증 행동 및 조직 병리학적 결과를 기반으로 효과를 평가하는 방법을 제시합니다.

등쪽 뿌리 신경절 통증의 압축이 있는 쥐 모델에 대한 Tuina의 진통 효과

경미한 만성 수축 손상 쥐에 대해 "Three-Manipulation and Three-Acupoint" tuina 요법을 수행하기 위해 tuina 조작 시뮬레이터를 사용하여 프로토콜을 제시하고, 행동 분석을 통한 통증 변화와 효소 결합 면역 흡착 분석을 사용하여 염증 인자 발현의 변화를 테스트하여 24시간 이내에 tuina의 효과적인 진통 시점을 평가합니다.

신경 손상이 있는 쥐의 통증 변화의 특성: 1회 Tuina 중재 후 24시간 이내

이 프로토콜은 무릎 골관절염(KOA)의 모노요오드아세트산 나트륨 주사 유도 쥐 모델에 대한 Tuina 개입 방법을 설명하며, 이는 KOA 동물 모델에서 Tuina의 적용에 대한 참조를 제공합니다. 이 프로토콜은 또한 KOA에 대한 Tuina의 효과적인 메커니즘을 연구하며, 그 결과는 그 적용을 촉진하는 데 도움이 될 것입니다.

무릎 골관절염의 나트륨 모노요오드아세트산 주사 유도 쥐 모델에 대한 Tuina 개입

이 프로토콜의 목표는 구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하는 것입니다. 생쥐 교근과 경골 전방 근육 간의 조직학을 비교한 결과, 동결 손상 후 교근 섬유화가 확인되었습니다. 이 모델은 구강 안면 근육 섬유증의 기저에 있는 메커니즘에 대한 추가 연구를 용이하게 할 것입니다.

구강 안면 근육 섬유증 모델을 확립하기 위해 마우스 교근의 동결 손상

여기에 제시된 프로토콜은 자세한 수술 방법을 설명하고 오십견 치료에 작은 바늘 칼의 효과를 증명합니다.

I-II 오십견에 대한 작은 바늘 칼 요법의 임상적 효능

역방향 총 어깨 arthroplasty은 기존 arthroplasty 또는 기타 절차를 취급 수없는 조건의 치료에 표시됩니다. 이들은 주로 어깨의 정상적인 biomechanical 커플링의 돌이킬 회전 수갑을 채워 손실과 퇴행성 및 incapacitating 조건을 포함합니다.

총 숄더 Arthroplasty를 역방향

병아리 융모대질막(CAM)은 면역결핍이며 혈관화가 심하여 종양 성장 및 혈관 신생의 자연스러운 생체 내 모델입니다. 이 프로토콜에서는 CAM 분석을 사용하여 3차원, 혈관화된 간세포 암종(HCC) 종양을 성장시키는 신뢰할 수 있는 방법을 설명합니다.

<em&gt; 비켜에서</em간세포 암의 효율적인 이종 이식 모델로&gt; 병아리 융모 막 (CAM) 분석

녹내장은 망막 신경절 세포의 손상이 특징입니다. 동물 모델에서 녹내장을 유도하면 이 질병에 대한 연구에 대한 통찰력을 제공할 수 있습니다. 여기에서는 생체 내 쥐 모델에서 망막 신경절 세포의 소실을 유도하고 분석을 위한 전체 마운트 망막의 준비를 보여주는 절차를 간략하게 설명합니다.

녹내장 유도 절차<em&gt; 생체</em&gt; 쥐 모델 및 전체 마운트 망막 준비

배우세요 쥐 오십견 모델에서 효율적이고 재현 가능한 Tuina 요법 프로토콜을 개발하는 방법을. 이 방법은 어깨 관절 기능을 개선하고 캡슐 섬유화를 감소시켜 전통 중국 치료법의 임상 효과를 입증합니다.

오십견 쥐 모델의 Tuina: 효율적이고 재현 가능한 프로토콜

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