2023년 6월 30일
광학 밀도 기반 마이크로플레이트 방법은 방선균 및 기타 느리게 성장하는 박테리아에 적합한 박테리오파지가 있는 상태에서 장기간 박테리아 성장을 정량화하는 데 설명됩니다. 이 방법에는 증발 및 뚜껑 응축을 줄이기 위한 수정과 곡선 아래 면적, 성장 최대 및 상대적 독성을 포함한 바이러스 감염 메트릭을 계산하기 위한 R 코드가 포함됩니다.
궁극적으로 우리는 박테리오파지-숙주 상호 작용에 관심이 있습니다. 이 프로토콜을 사용하면 느리게 성장하는 박테리아에서 파지 감염을 측정하여 설명적인 감염 메트릭을 생성할 수 있습니다. 이 방법론은 느리게 성장하는 방선균 박테리아에서 박테리오파지-숙주 공진화를 연구하는 데 중요한 역할을 합니다.
신속한 마이크로플레이트 방법은 빠르게 성장하는 박테리아 숙주에 대해 우수한 결과를 제공하지만 방선균과 같이 느리게 성장하는 박테리아 숙주에서 박테리아-파지 감염 진행을 보여주기에는 너무 짧습니다. 당사의 방법은 느리게 성장하는 박테리아에 적용되어 박테리오파지 감염 역학을 특성화하는 데 필요한 며칠 동안 박테리아와 파지를 공동 배양할 수 있습니다. 당사의 프로토콜을 사용하면 더 큰 배양 플라스크에서 하위 샘플링을 요구하지 않고 마이크로플레이트에서 느리게 성장하는 박테리아에 대해 박테리오파지-숙주 상호 작용을 평가할 수 있습니다.
이 프로토콜은 쉽게 구할 수 있는 재료를 사용하여 배양 시간 연장에 적응하고 단일 마이크로플레이트에 여러 복제물을 도금할 수 있습니다.
본 연구는 박테리오파지가 존재하는 환경에서 박테리아의 장기 성장을 정량화하기 위한 새로운 광학 밀도 기반 마이크로플레이트 방법을 제시하며, 특히 액티노미세스(actinomycetes)와 같이 느리게 성장하는 박테리아에 맞게 조정되었습니다. 이 프로토콜은 이러한 박테리아 숙주에서 박테리오파지 감염 역학을 측정할 때 발생하는 문제점을 해결하여, 장기간의 공동 배양이 가능하게 하고 상세한 감염 지표 분석을 용이하게 합니다.
느리게 성장하는 방선균(actinomycetes)의 박테리오파지 감염 역학을 정량화하는 것은 숙주-병원체 상호작용을 이해하고 항균제 R&D의 초기 발견 단계에서 리스크를 줄이는 데 매우 중요합니다. 이 최적화된 광학 밀도 기반 마이크로플레이트 분석법은 장기간에 걸쳐 감염 지표를 고처리량으로 재현성 있게 측정할 수 있게 하여, 표적 검증 및 메커니즘 연구에서 예측 신뢰도를 높여줍니다. 본 프로토콜의 확장성과 정량적 결과물은 파지-박테리아 시스템의 포트폴리오 전반에 걸친 평가를 위한 재사용 가능한 자산으로서 가치를 가집니다.
이 분석법은 느리게 성장하는 세균 모델에서 가설 검증, 경로 규명 및 감염 지표 정량화를 가능하게 함으로써, 발견 단계부터 전임상 단계까지의 연속 과정에 통합됩니다.