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행동하는 성인 제브라피쉬의 전뇌 활동에 대한 Two-Photon Calcium Imaging
행동하는 성인 제브라피쉬의 전뇌 활동에 대한 Two-Photon Calcium Imaging
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JoVE Journal Neuroscience
Two-Photon Calcium Imaging of Forebrain Activity in Behaving Adult Zebrafish

행동하는 성인 제브라피쉬의 전뇌 활동에 대한 Two-Photon Calcium Imaging

Full Text
3,712 Views
07:21 min
July 28, 2023

DOI: 10.3791/65526-v

Jose Sandino Bandonil*1,2, Yi-Hsuan Liao*1, Amir Fathi1, Kuo-Hua Huang1,2

1Institute of Molecular Biology,Academia Sinica, 2Molecular and Cell Biology, Taiwan International Graduate Program, Academia Sinica and Graduate Institute of Life Sciences,National Defense Medical Center

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a protocol for two-photon calcium imaging to investigate brain activity in the dorsal forebrain of adult zebrafish. The approach allows researchers to examine the effects of sensory information on neuronal activity associated with complex behaviors, overcoming limitations faced in larval studies.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Imaging Techniques
  • Behavioral Neuroscience

Background

  • The zebrafish forebrain has regions homologous to mammalian areas involved in behavior.
  • Previous research primarily focused on larval stages, leaving adult complexities underexplored.
  • This protocol aims to fill knowledge gaps regarding adult zebrafish brain activity.

Purpose of Study

  • To develop an efficient method to study brain activity in adult zebrafish.
  • To facilitate the simultaneous examination of sensory information impact on behavior.
  • To reduce surgery time and enhance imaging capabilities.

Methods Used

  • Two-photon calcium imaging using a head-restrained adult zebrafish model.
  • Head restraint enabled imaging of up to 200 microns deep in the dorsal forebrain.
  • Steps included anesthesia, head bar attachment, and surgical preparation for imaging.
  • Behavioral recording was integrated with calcium imaging during experiments.

Main Results

  • The method allows visualization of individual neuronal activity in complex behavioral contexts.
  • Key findings include enhanced access to pallial areas of the zebrafish brain.
  • Simultaneous imaging and recording reveal neuronal correlates of motor outputs.

Conclusions

  • This study enables more in-depth investigation of adult zebrafish brain activity during behavior.
  • The protocol contributes to understanding sensory-motor processing and neuronal mechanisms.

Frequently Asked Questions

What is the advantage of using adult zebrafish over larvae?
Adult zebrafish exhibit more complex behaviors that are essential for understanding certain neurobiological processes, which are not fully developed in larvae.
How is the head restraint method implemented?
The method involves surgical attachment of a head bar to immobilize the fish, which allows for precise imaging techniques while minimizing surgery time.
What type of data is obtained from this imaging technique?
The two-photon calcium imaging provides real-time recordings of neuronal activity in response to sensory stimuli and during behavioral assays.
How can this protocol be adapted for other studies?
This imaging technique can be integrated with optogenetic manipulation or other imaging methods to study different aspects of brain function and behavior.
What are the critical steps of the surgical procedure?
Critical steps include anesthesia, head bar attachment, and preparation of the skull for optimal imaging access.
Are there any limitations to this method?
The protocol may require significant technical skill and careful handling of the fish to avoid distress during surgery.

여기에서는 성인 제브라피쉬의 등쪽 전뇌에서 이광자 칼슘 이미징을 수행하는 프로토콜을 제시합니다.

물고기의 전뇌는 복잡한 행동에 관여하는 포유류의 뇌 영역과 상동성으로 의심되는 영역을 숙주합니다. 여기에는 해마, 피질, 편도체가 포함됩니다. 우리는 현재 감각 정보가 이러한 뇌 영역의 활동에 미치는 영향을 이해하려고 노력하고 있습니다.

제브라 피쉬 신경 과학의 현재 연구는 고정된 유충의 두 광자 칼슘 이미징을 사용합니다. 가상 현실 기반 행동 에세이와 결합하여 뇌의 감각 운동 처리를 연구합니다. 얼룩말 물고기의 뇌에 대한 대부분의 연구는 유충에 대해 수행되지만 물고기의 일부 복잡한 행동은 성충이 될 때까지 완전히 발달하지 않습니다.

우리의 프로토콜은 행동 중 성인의 뇌 활동을 연구할 수 있도록 합니다. 이 프로토콜은 이전 방법에 비해 수술 시간을 50% 단축했습니다. 더 나은 이미지를 위해 성인 얼룩말 물고기의 머리를 구속하는 보다 효율적인 접근 방식입니다.

이 머리 구속 프로토콜은 성인 얼룩말 물고기 뇌에 대한 생체 내 실험을 수행할 수 있는 기회를 열었습니다. 이광자 칼슘 이미지 외에도 머리 지지대는 잠재적으로 광유전학적 조작, 전기 생리학 및 살아있는 물고기의 초음파 이미징을 가능하게 합니다.

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신경 과학 197호 성체 제브라피시 행동 인지 기능 광학 이미징 방법 뇌 활동 기록 등쪽 전뇌 머리 구속 수술 뉴런 기록 몰입형 시각 환경 시각적으로 촉발된 행동

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