도립 컨포칼 현미경에서 상피 조직 역학의 장기 모니터링을 위한 간소화된 생체 내 이미징 접근 방식
June 30th, 2023
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이 프로토콜은 도립 컨포칼 현미경을 사용하여 생체 내 이미징을 단순화하는 새로운 도구를 제공합니다.
우리는 도립 컨포칼 현미경을 사용하여 살아있는 쥐에 대한 생체 내 이미징을 수행하는 도구를 개발했습니다. 이를 통해 항상성 전반에 걸쳐 피부 세포 역학을 추적하고 질병 발병 및 진행 중 세포 거동을 비교할 수 있습니다. 다광자 현미경은 생체 내 세포 추적을 달성하기 위해 적용되는 주요 접근 방식입니다.
그러나 이러한 현미경의 단점은 제한된 일상적인 이미징 다양성, 높은 비용 및 기술적 복잡성을 포함합니다. 당사의 새로운 도구를 사용하면 in vivo 생체 내 이미징을 위한 다용도 도립 컨포칼 현미경을 사용할 수 있습니다. 설계 파일을 수정하여 스테이지 인서트 치수를 모든 제조사의 도립 현미경에 맞게 사용자 지정할 수 있습니다.
대물렌즈 구멍은 선택한 동물 모델 및 조직에 맞게 크기를 조정하고 재배치할 수 있습니다.
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개요
이 연구는 생쥐에서 현미경을 통해 생체 내 영상을 얻는 새로운 도구를 소개하여, 연구자들이 항상성 및 질병 진행 중 피부 세포 동태를 추적할 수 있게 합니다. 새로운 도구는 다중 광자 현미경의 한계를 해결하여, 생체 내 영상을 더욱 접근 가능하고 다용도로 만듭니다.
주요 연구 구성 요소
연구 분야
- 생체 내 영상
- 피부 세포 동태
- 현미경 기법
배경
- 현재 다중 광자 현미경의 한계는 높은 비용과 기술적 복잡성을 포함합니다.
- 거꾸로 된 콘포컬 현미경은 생체 조직에 대한 다양한 영상 옵션을 제공합니다.
- 맞춤형 설계로 다양한 동물 모델에 적용할 수 있습니다.
사용된 방법
- 사용자 정의 3D 인쇄 삽입물이 있는 거꾸로 된 콘포컬 현미경
- 생물학적 시스템으로서의 생쥐
- 다양한 조직에 적용 가능한 사용자 정의 영상 설정
주요 결과
- 최소한의 드리프트로 형광 표지된 귀 조직의 Z-스택을 성공적으로 획득했습니다.
- 장기간에 걸쳐 피부 세포(mCherry 및 GFP 양성)의 지속적인 영상을 촬영했습니다.
- 안정적인 영상을 위한 3D 인쇄 생체 영상 삽입물의 효과를 검증했습니다.
결론
- 이 연구는 생체 내 영상 기능을 향상시키는 혁신적인 접근법을 보여줍니다.
- 이 도구는 생체 모델에서 세포 동태를 연구하는 능력을 향상시켜 세포 생물학 연구를 발전시킵니다.
자주 묻는 질문
새로운 도구의 주요 장점은 전통적인 방법과 비교했을 때 무엇인가요?
새로운 도구는 생체 내 영상 설정을 단순화하고, 다중 광자 현미경보다 더 다용도인 거꾸로 된 콘포컬 현미경을 사용합니다.
영상 삽입물은 어떻게 다양한 현미경에 적용됩니까?
스테이지 삽입물의 설계는 다양한 거꾸로 된 현미경 브랜드와 다양한 조직 유형에 맞게 수정할 수 있습니다.
이 방법으로 어떤 종류의 세포 행동을 관찰할 수 있나요?
이 방법은 항상성 중 및 질병 진행 과정에서의 피부 세포 동태 관찰을 가능하게 합니다.
이 연구에서는 어떤 생물학적 모델이 사용되었나요?
이 연구에서는 생체 내 영상 실험을 위한 생물학적 모델로 생쥐를 사용했습니다.
데이터 품질을 잃지 않고 영상 세션을 얼마나 오래 진행할 수 있나요?
시스템은 Z-스택 획득을 통한 장시간의 영상 세션을 지원하며, 여러 시간 동안 최소한의 드리프트를 검증합니다.
연구에서는 어떤 형광 마커를 사용했나요?
영상을 위해 생쥐 귀 조직을 표지하는데 mCherry 및 GFP 형광 마커를 사용했습니다.
이 연구는 미래 연구에 어떤 영향을 미치나요?
이 연구는 생체 내 영상을 위한 방법론적 도구 키트를 향상시켜, 세포 생물학 연구의 발전을 가속화할 가능성이 있습니다.
