Name: 개선된 샘플링 기법 및 조직학적 특성 분석을 통한 전립선 종양 바이오뱅킹 신뢰성 향상 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-11-17T14:30:00.000+00:00
Duration: 7 min 34 s
Description: 학습하세요 전립선암 조직 샘플링 및 바이오뱅킹 방법론을 통해 종양 내 이질성과 다발성 문제를 해결하고 정밀 분자 특성화를 위한 고품질 조직 확보 기술을 습득하세요.

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AL은 "Margarita Salas" 박사후 계약 (번호 21-076) 및 MAM-T는 'Maria Zambrano' 연구 계약(번호 MAZ/2021/03 UP2021-021)을 인정합니다. 두 계약 모두 유럽연합(EU)-차세대 유럽연합(EU)의 자금 지원을 받았다.

이 방법은 다양한 임상 서비스(비뇨기과, 병리학 및 La Fe Hospital Biobank)와 관련된 협업 노력을 통해 개발되었습니다. 이 연구는 인간 복지에 대한 제도적, 국가적, 국제적 지침에 따라 수행되었으며, 스페인 발렌시아 La Fe Universitario y Politécnico Hospital Instituto de Investigación Sanitaria Hospital의 생물의학 연구 윤리 위원회의 승인을 받았습니다. 모든 샘플은 La Fe Hospital Biobank(PT13/0010/0026)에 보관되었습니다. 전체 절차는 그림 1에 자세히 설명되어 있습니다.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/65635/65635fig01.jpg"> 그림 1: 전체 절차 체계. 프로토콜 섹션에 설명된 단계별 절차의 개략도입니다. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65635/65635fig01large.jpg" target="_blank">이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.</a>
1. 종양 표적화
<ol><li>수술 전에 다중 파라메트릭 또는 바이파라메트릭 자기 공명 영상(mpMRI 또는 bpMRI)17,18을 사용하여 종양의 위치를 찾고 전립선 내 위치를 매핑합니다. MRI에서 얻은 정보를 경직장 초음파 또는 직장 검사의 결과와 결합하여 후자가 불일치하는 결과를 산출하는 경우 결합합니다.</li>
	<li>종양 국소화를 강화하려면 수술 전 초음파 유도 및 MRI 유도 경직장 전립선 생검 결과를 검토하십시오. 참고: 전립선암 진단 절차에서 생검은 경직장 접근을 통해 전립선에서 직접 채취합니다. 이러한 생검에는 전립선의 체계적인 샘플링(분비샘 전체에 분포된 실린더 포함)과 MRI에서 의심스러운 소견을 직접 대상으로 하는 실린더가 포함됩니다. 이러한 샘플의 회수를 목표로 하기 위해 경직장 초음파가 사용되며, 이는 인지 방식("인지 융합")으로 MRI 결과와 결합되거나 사용 가능한 경우 "실제 MRI-초음파 융합 소프트웨어"와 결합됩니다.</li>
</ol>2. 근치적 전립선 절제술과 전립선 채취
<ol><li>Huynh et al.19에 설명된 단계에 따라 경복막 접근법을 통해 표준화된 로봇 보조 근치적 전립선 절제술을 수행합니다.<ol><li>복부 접근, 삽입 및 카메라 포트 배치로 시작합니다( 재료 표 참조). 나머지 5개의 포트를 직접 볼 수 있는 곳에 놓습니다. 폐복막을 12mm로 설정합니다.</li>
		<li>복막을 절개하여 방광을 풀어주고 직장 주위 공간을 절개합니다.</li>
		<li>양쪽의 골반 근막을 엽니다.</li>
		<li>전립선과 방광의 전방 및 외측 측면을 완전히 절제합니다.</li>
		<li>방광 경부의 개구를 수행하고 근위 요도를 식별하고 절제하여 전립선과 방광의 후방 측면에 접근할 수 있도록 합니다.</li>
		<li>정낭과 직장 공간 절개19.</li>
		<li>전립선의 측면 측면을 절개하고 신경 혈관 다발을 보존합니다.</li>
		<li>후치골 공간에서 혈관의 지혈을 보장합니다.</li>
		<li>정점을 절개하고 원위 요도를 절제합니다.</li>
		<li>수포 문합을 완료합니다.</li>
		<li>전립선을 적출하고 절개 부위의 봉합을 시행한다19.</li>
	</ol></li>
	<li>신선한 전립선을 건조한 용기에 담습니다. 샘플 표본을 고정하거나 파라핀으로 삽입하지 않는 것이 중요합니다.</li>
	<li>전립선 전체를 포함하는 신선한 수술 검체를 검체 처리를 위해 Biobank로 운반합니다.</li>
</ol>3. 전립선 처리 및 검체 채취
<ol><li>수술 전 mpMRI, 수술 전 생검 결과 및 직접 전립선 절제술 표본 촉진에서 검색한 종양 위치 정보를 기반으로 샘플링을 위한 표적 전립선 영역을 선택합니다. 환자 식별 데이터, 최종적으로 샘플링된 전립선 영역 및 수집된 샘플 수가 포함된 양식에 이 정보를 기록합니다. 참고: MRI 소견, 수술 전 생검 결과 및 직접 전립선 절제술 표본 촉진이 일치하면 모든 샘플을 해당 위치 또는 해당 위치(4-6 실린더)로 표적으로 삼습니다. 불일치가 있는 경우 실린더 수를 늘리고 이러한 방법의 영향을 받는 것으로 의심되는 모든 영역을 개별적으로 대상으로 지정합니다.</li>
	<li>일회용 자동 바늘(외과 의사)을 사용하여 선택한 영역에서 원통형 샘플을 검색합니다(1.1단계). 그런 다음 실린더의 외부 영역을 식별(병리학자)하고 조직 집게로 실린더를 고정하고 슬라이드에 놓고 외부 영역을 조직 잉크로 표시합니다. 가져온 모든 실린더에 대해 이 과정을 반복합니다.</li>
	<li>수집된 실린더를 저온 유지 장치 매매 매체로 채워진 샘플 홀더 디스크( 재료 표 참조)에 수평으로 놓고 절단을 위해 마이크로톰 냉각 플래튼으로 옮깁니다.</li>
	<li>플래튼에 놓으면 샘플 홀더 디스크를 샘플 척에 부착하고 다음 단계에 따라 휠을 조심스럽게 움직여 절단합니다.<ol><li>최적의 절단 온도 화합물(OCT 화합물, 재료 표 참조)을 사용하여 마이크로톰 저온 유지 장치에 동결 절편하기 전에 조직 샘플을 매립합니다.</li>
		<li>그런 다음 -25°C에서 cryostat-microtome을 사용하여 샘플을 절단합니다. 얇은 원통 모양의 조직 부분(10μm)을 처리된 현미경 슬라이드에 수집합니다. Biobank에 보관할 수 있는 적절한 양의 온전한 종양 조직을 보장하기 위해 몇 미크론의 조직만 수집해야 합니다.</li>
		<li>슬라이드당 2개 또는 3개의 얇은 섹션을 모으고 수동으로 염색하여 최종 착색을 제어합니다. 기술자의 눈은 최적의 염색을 보장하며 필요한 모든 재염색을 수행할 수 있습니다. 다음 단계를 수행합니다<ol><li>96% 에탄올로 슬라이드를 고정하고 증류수에 수화한 다음 Harris hematoxylin( 재료 표 참조)으로 1분 동안 염색하여 핵을 염색합니다. 슬라이드를 증류수로 헹구어 과도한 헤마톡실린을 제거합니다.</li>
			<li>슬라이드를 30% 수산화암모늄으로 처리하여 헤마톡실린을 파란색으로 바꿉니다. 증류수를 헹구어 과도한 용액을 제거하십시오.</li>
			<li>30초 동안 에오신( 재료 표 참조)으로 슬라이드를 염색합니다.</li>
			<li>다음으로, 알코올의 적정을 증가시켜 슬라이드를 탈수하고 자일렌(100%)으로 투명하게 한 다음 DPX(가소제인 디스티렌과 자일렌을 대체하는 합성 수지 장착 매체로 사용되는 자일렌의 혼합물, 재료 표 참조)로 장착합니다. 이 단계에서 슬라이드를 Coplin 용액 병에 담그고 제거합니다.</li>
			<li>마지막으로, 염색된 조직 위에 커버슬립을 놓고 현미경으로 볼 수 있도록 적절한 굴절률( 재료 표 참조)이 있는 매체를 사용합니다.</li>
		</ol></li>
	</ol></li>
</ol>4. 시료 특성화
<ol><li>광학 현미경(병리학자)으로 샘플을 분석하여 암종 영역을 구별하고 종양의 Gleason 점수를 결정합니다. 이러한 모든 데이터를 문서화하고 슬라이드에 정확한 종양 영역을 표시하십시오.</li>
	<li>이 단계에서 슬라이드에 종양의 정확한 위치와 각각의 Gleason Score20을 레이블을 지정합니다. 또한 형태학적 식별을 기반으로 PIN(Prostatic Intraepithelial Neoplasm)의 위치를 표시합니다.</li>
</ol>5. 표본 micro-macro-dissection 및 저장
<ol><li>슬라이드에 뚜렷한 마커를 사용하여 다양한 조직학적 구성 요소를 명확하게 표시하고(병리학자) 디스크의 동결 조직과 직접 연관시킵니다.</li>
	<li>그런 다음 수술용 칼날을 사용하여 OCT 디스크 내 슬라이드에 표시된 샘플 영역을 매크로 마이크로 절개하여 종양, 종양 주위, PIN 및 정상 전립선 조직으로 나눕니다.</li>
	<li>매립 매체가 해동되기 시작하면 조직을 겸자로 다루고 올바르게 라벨이 부착된 cryotube에 넣습니다. 참고: cryo slices의 조직학적 진단에 따라 절개된 각 단편을 해당 튜브 내에 조심스럽게 보관하십시오.</li>
	<li>완전히 특성화된 조직학적 샘플과 함께 라벨링된 cryotubes를 -80°C의 Biobank에 보관하여 후속 연구에 사용할 수 있습니다. 알림: 이 섹션에 설명된 단계는 병리학자의 감독하에 숙련된 기술자가 수행할 수 있습니다. 수술 검체는 조직 및 핵산 분해를 방지하기 위해 가능한 한 빨리 Biobank로 운송해야 합니다. 참조 가이드에 따르면 허혈 시간이 연장되지 않도록 노력해야 합니다(&gt;30분)21. 시료는 시료 품질 원칙이 유지되는 한 Biobank에 무기한 보관할 수 있습니다.</li>
</ol>

전립선 절제술 표본 매핑 및 해부를 위한 프로토콜

<ol><li>Rawla, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Epidemiology+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22World+Journal+of+Oncology%22%5BJournal%5D)">Epidemiology of prostate cancer.</a> World Journal of Oncology. 10 (2), 63-89 (2019).</li>
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<li>Zhang, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intratumor+heterogeneity+and+clonal+evolution+revealed+in+castration-resistant+prostate+cancer+by+longitudinal+genomic+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Translational+Oncology%22%5BJournal%5D)">Intratumor heterogeneity and clonal evolution revealed in castration-resistant prostate cancer by longitudinal genomic analysis.</a> Translational Oncology. 16, 101311(2022).</li>
<li>Haffner, M. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Genomic+and+phenotypic+heterogeneity+in+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews+Urology%22%5BJournal%5D)">Genomic and phenotypic heterogeneity in prostate cancer.</a> Nature Reviews Urology. 18 (2), 79-92 (2021).</li>
<li>Woodcock, D. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+cancer+evolution+from+multilineage+primary+to+single+lineage+metastases+with+implications+for+liquid+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">Prostate cancer evolution from multilineage primary to single lineage metastases with implications for liquid biopsy.</a> Nature Communications. 11 (1), 5070(2020).</li>
<li>Heo, Y. J., Hwa, C., Lee, G. H., Park, J. M., An, J. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Integrative+multi-omics+approaches+in+cancer+research%3A+from+biological+networks+to+clinical+subtypes%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules+and+Cells%22%5BJournal%5D)">Integrative multi-omics approaches in cancer research: from biological networks to clinical subtypes.</a> Molecules and Cells. 44 (7), 433-443 (2021).</li>
<li>Menyhárt, O., Győrffy, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-omics+approaches+in+cancer+research+with+applications+in+tumor+subtyping%2C+prognosis%2C+and+diagnosis%5BTitle%5D)+AND+%22Computational+and+Structural+Biotechnology+Journal%22%5BJournal%5D)">Multi-omics approaches in cancer research with applications in tumor subtyping, prognosis, and diagnosis.</a> Computational and Structural Biotechnology Journal. 19, 949-960 (2021).</li>
<li>Annaratone, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Basic+principles+of+biobanking%3A+from+biological+samples+to+precision+medicine+for+patients%5BTitle%5D)+AND+%22Virchows+Archiv%22%5BJournal%5D)">Basic principles of biobanking: from biological samples to precision medicine for patients.</a> Virchows Archiv. 479 (2), 233-246 (2021).</li>
<li>King, C. R., Long, J. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+biopsy+grading+errors%3A+A+sampling+problem%5BTitle%5D)+AND+%22International+Journal+of+Cancer%22%5BJournal%5D)">Prostate biopsy grading errors: A sampling problem.</a> International Journal of Cancer. 90 (6), 326-330 (2000).</li>
<li>Jayadevan, R., Zhou, S., Priester, A. M., Delfin, M., Marks, L. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+MRI-ultrasound+fusion+to+achieve+targeted+prostate+biopsy%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Use of MRI-ultrasound fusion to achieve targeted prostate biopsy.</a> Journal of Visualized Experiments. 146, e59231(2019).</li>
<li>Heavey, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+magnetic+resonance+imaging+and+biopsy+data+to+guide+sampling+procedures+for+prostate+cancer+biobanking%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Use of magnetic resonance imaging and biopsy data to guide sampling procedures for prostate cancer biobanking.</a> Journal of Visualized Experiments. 152, 60216(2019).</li>
<li>Panach Navarrete, J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPanach+Navarrete%2C+J+%22Estudio+metabol%C3%B3mico+en+tejido+prost%C3%A1tico+y+orina+para+el+diagn%C3%B3stico+y+pron%C3%B3stico+del+c%C3%A1ncer+de+pr%C3%B3stata%22">Estudio metabolómico en tejido prostático y orina para el diagnóstico y pronóstico del cáncer de próstata</a>. , https://roderic.uv.es/handle/10550/81853 (2022).</li>
<li>Bertilsson, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+to+provide+a+fresh+frozen+prostate+slice+suitable+for+gene+expression+study+and+MR+spectroscopy%5BTitle%5D)+AND+%22The+Prostate%22%5BJournal%5D)">A new method to provide a fresh frozen prostate slice suitable for gene expression study and MR spectroscopy.</a> The Prostate. 71 (5), 461-469 (2011).</li>
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<li>Dagher, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quality+matters%3A+International+standards+for+biobanking%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Proliferation%22%5BJournal%5D)">Quality matters: International standards for biobanking.</a> Cell Proliferation. 55 (8), e13282(2022).</li>
<li>Yüzbaşıoğlu, A., Özgüç, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanking%3A+sample+acquisition+and+quality+assurance+for+%26%2334%3Bomics%26%2334%3B+research%5BTitle%5D)+AND+%22New+Biotechnology%22%5BJournal%5D)">Biobanking: sample acquisition and quality assurance for &#34;omics&#34; research.</a> New Biotechnology. 30 (3), 339-342 (2013).</li>
<li>Carpagnano, F. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiparametric+MRI%3A+local+staging+of+prostate+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Current+Radiology+Reports%22%5BJournal%5D)">Multiparametric MRI: local staging of prostate cancer.</a> Current Radiology Reports. 8 (12), 27(2020).</li>
<li>Christophe, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Prostate+cancer+local+staging+using+biparametric+MRI%3A+assessment+and+comparison+with+multiparametric+MRI%5BTitle%5D)+AND+%22European+Journal+of+Radiology%22%5BJournal%5D)">Prostate cancer local staging using biparametric MRI: assessment and comparison with multiparametric MRI.</a> European Journal of Radiology. 132, 109350(2020).</li>
<li>Huynh, L. M., Ahlering, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Robot-assisted+radical+prostatectomy%3A+a+step-by-step+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Endourology%22%5BJournal%5D)">Robot-assisted radical prostatectomy: a step-by-step guide.</a> Journal of Endourology. 32 (S1), S28-S32 (2018).</li>
<li>van Leenders, G. J. L. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+2019+International+Society+of+Urological+Pathology+%28ISUP%29+consensus+conference+on+grading+of+prostatic+carcinoma%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+Surgical+Pathology%22%5BJournal%5D)">The 2019 International Society of Urological Pathology (ISUP) consensus conference on grading of prostatic carcinoma.</a> The American Journal of Surgical Pathology. 44 (8), e87-e99 (2020).</li>
<li>Liu, A., Collins, C. C., Diemer, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biobanking+metastases+and+biopsy+specimens+for+personalized+medicine%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biorepository+Science+for+Applied+Medicine%22%5BJournal%5D)">Biobanking metastases and biopsy specimens for personalized medicine.</a> Journal of Biorepository Science for Applied Medicine. 3, 57-67 (2015).</li>
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</ol>

저자는 이해 상충이 없음을 선언합니다.

모든 연구에서 양질의 샘플을 얻는 것은 체계적 편향을 줄이고 신뢰할 수 있는 결과를 얻기 위한 필수 요건입니다22. 따라서 시료가 처리 및 보관되는 온도, 시료 채취에서 보관까지 경과된 시간, 멸균 물질의 사용 또는 방부제 또는 기타 첨가제의 첨가가 시료에 미칠 수 있는 영향과 같은 사전 분석 변수의 제어는 생물학적 시료와 관련된 모든 프로토콜에서 고려되어야 합니다. 이 열쇠뿐만 아니라 샘플의 정확한 식별 및 코드화, 병리학적 특성 분석도 중요합니다. 그렇지 않으면 많은 수의 고품질 샘플이 저장되어 있지만 사용되지 않은 상태로 남아 있을 수 있습니다.
Biobank에 보관하기 전에 종양 및 비종양 샘플의 수집 및 유형화는 PC의 맥락에서 매우 중요하기 때문에 이 프로토콜의 주요 초점입니다. 연구를 위해 새로운 PC 조직을 확보하는 것은 성공적인 종양 샘플링의 어려움으로 인해 방법론적 관점에서 상당히 어려운 과제가 된다<sup class=...

전립선암(PC)은 전 세계적으로 남성에서 2번째로 흔한 암이며 5번째 주요 사망 원인입니다1. 환자의 치료 및 예후는 종양의 병기 및 등급(Gleason 점수)에 따라 달라지며, 이는 국소 및 저등급 종양(Gleason 등급 6)의 5년 생존율(99%)이 높은 Gleason 등급 및 전이성 종양(31%)에 비해 더 높다는 사실에서 입증되었습니다2.
PC 국소 재발 및 치료 실패는 이 종양 유형3의 특징적인 높은 유전적 종양 내 이질성과 관련이 있습니다. 또한, PC는 다양한 형태학적, 조직학적, 분자적 특성을 보이는 여러 종양 병소를 가진 다초점 질환으로 간주되며4, 이는 독립적으로 발생하거나 공통 종양 세포 조상에서 유래할 수 있다5. 이전 연구에서는 전이를 촉진하거나 세포 계통을 전립선에 국한시킬 수 있는 특정 유전적 요인에 따라 환자마다 종양 진화가 다르다는 것을 보여주었다5. 따라서 다양한 종양 병소의 분자 특성 분석은 보다 정확한 진단과 예후를 제공하는 것뿐만 아니라 환자를 위한 효과적이고 개인화된 치료를 맞춤화하는 데 매우 중요합니다.
이러한 맥락에서 생물의학 연구 및 통합적 다중 오믹스 접근 방식은 암을 다양한 하위 유형으로 분류하고, 진단 및 예후 바이오마커를 식별하고, 치료 반응과 관련된 마커를 발견할 수 있는 전례 없는 기회를 제공하고 있습니다. 또한, 이러한 접근법은 이 질병의 생물학을 더 잘 이해하는 데 기여한다 6,7. 조직이든 생체액이든 생물학적 시료는 다양한 다중 오믹스 플랫폼(유전체학, 전사체학, 단백질체학, 대사체학 등)을 사용하여 분석하여 암 병태생리학의 기저에 있는 생물학적 특징을 밝혀냄으로써 유전 및 표현형 이질성과 관련된 현재의 한계를 해결할 수 있습니다6. 그러나 오믹스 연구에서 도출된 데이터의 품질은 종양에서 수집된 샘플의 품질, 정확한 특성화, 후속 처리 및 보관에 따라 달라진다는 점을 고려하는 것이 중요하다8.
이러한 맥락에서, 연구를 위해 새로운 PC 조직을 얻는 것은 성공적인 종양 샘플링의 어려움으로 인해 방법론적 도전을 제시한다9. 이전의 방법은 근치적 전립선 절제술 후 무작위 표본 추출을 포함했는데, 결과가 좋지 않았다10. 그러나 최근의 접근법은 자기공명영상(MRI)과 생검 데이터를 기반으로 하는 표적 프로토콜을 통합하여 종양 검체 채취의 효능을 개선했다11.
다른 한편으로는, 중요한 조직 변화 없이 보관하기 전에 샘플의 조직병리학적 특성을 분석하는 것도 흥미로운 도전 과제입니다. 결과적으로, 많은 경우에, 샘플의 조직병리학적 측정은 분석 후에 수행된다(예: HR 1H NMR 대사체 분석)12. 이러한 관행은 불필요한 비용, 시간 소비 및 결국 분석에서 제외되는 상당한 수의 샘플(예: 조직 병리학적 분석 후 종양 샘플이 아닌 것으로 판명된 샘플)의 손실을 수반합니다. 다른 경우에는 분석 전에 샘플의 조직 병리학적 특성 분석이 수행됩니다. 실제로, 일부 선행 연구에서는 근치적 전립선 절제술 검체로부터 유전체학 및 대사체학을 위한 대표적인 고품질 연구 샘플을 제공하는 방법을 표준화하려고 시도하였다 13,14. 그럼에도 불구하고, 검체 채취 효율은 조직을 파괴하는 조직학적으로 이미 확인된 절편(88%)에서 수행할 때 확인되지 않은 절편(45%)에서 수행한 경우보다 훨씬 높습니다1.
여기에서는 이러한 한계를 극복하기 위한 새로운 방법론을 제시하며, 바이오뱅크에 보관하기 전에 신선하고 잘 특성화된 PC 샘플을 얻는 것을 목표로 합니다. 이 방법은 다양한 임상 서비스(비문과, 병리학 및 La Fe Hospital Biobank) 간의 협력 노력을 통해 개발되었습니다. 바이오뱅크는 생물학적 시료의 수집, 처리, 보존 및 보관에 필수적인 역할을 하는 동시에 시료 및 데이터의 고품질을 보장하고 윤리적 및 법적 요구 사항 8,15,16을 준수한다는 점을 강조하는 것이 중요합니다.

<table><tbody><tr><td>Cadiere 집게</td><td>직관적인</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>부품 번호: 471049. 18회 사용.</td></tr><tr><td>기존 슬라이드</td><td>Knittel Glass</td><td>2021</td><td>Ground/Frosted end</td></tr><tr><td>Cryostat microtome</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>---</td><td>Criostato CryoStar NX50</td></tr><tr><td>Cryotubes</td><td>Greiner Bio-One GmbH</td><td>Ref.: 122280.</td><td>CRYO S. PP, 나사 캡 포함, 멸균.&nbsp;</td></tr><tr><td>Da Vinci 수술 시스템</td><td>직관적인</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>XI 모델</td></tr><tr><td>해부 기구</td><td>Bayer</td><td>---</td><td>두 개의 핀셋과 수술용 칼날&nbsp;</td></tr><tr><td>DPX 유킷&nbsp;</td><td>Medizin- und Labortechnik GmbH</td><td>6.00.01.0001.06.01.01</td><td></td></tr><tr><td>Eosin</td><td>Agilent</td><td>157252</td><td></td></tr><tr><td>Fenestrated bipolar forceps</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>부품 번호: 471205. 14 lives.</td></tr><tr><td>Force bipolar</td><td>Intuitive</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>부품 번호: 471405. 12 용도.</td></tr><tr><td>냉동고</td><td>Thermo Scientific</td><td></td><td>MODEL 907. -80 &ordm; C</td></tr><tr><td>Hematoxylin</td><td>Agilent</td><td>157251</td><td></td></tr><tr><td>Inmunohistochemistry Slides</td><td>Agilent-Dako</td><td>K802021-2</td><td></td></tr><tr><td>대형 니들 드라이버</td><td>직관적인</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>부품 번호: 471006. 15회 사용.</td></tr><tr><td>메릴랜드 바이폴라 펜치</td><td>직관적인</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>부품 번호: 471172. 14회 사용.</td></tr><tr><td>현미경</td><td>Olympus</td><td>---</td><td>Olympus cx40</td></tr><tr><td>마이크로톰 블레이드</td><td>PFM Medical</td><td>a35</td><td></td></tr><tr><td>단극 곡선 가위</td><td>직관적인</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>부품 번호: 470179. 10회 사용.</td></tr><tr><td>OCT 컴파운드</td><td>NEG-50</td><td>LOT.117340</td><td></td></tr><tr><td>PlusSpeed S 일회용 생검 장치와 베벨 팁</td><td>Peter Pflugbeil GmbH&nbsp;</td><td>PSS-1825-S</td><td></td></tr><tr><td>ProGasp 집게</td><td>직관적인</td><td>PN1052082-US 10/2021</td><td>부품 번호: 471093. 18회 사용.</td></tr><tr><td>샘플 홀더 디스크</td><td>Davidson Cryo Chuck. 브래들리제품</td><td></td><td>30 mm&nbsp;</td></tr><tr><td>티슈 잉크</td>, <td>Pelikan</td><td>2021</td>, <td>Ink 4001, brilliant black, (301168)</td></tr><tr><td>Xylol</td><td>Quimipur</td>, <td>Ref. 169</td><td></td></tr></tbody></table>

개선된 샘플링 기법 및 조직학적 특성 분석을 통한 전립선 종양 바이오뱅킹 신뢰성 향상

Enhancing Prostate Tumor Biobanking Reliability with Improved Sampling Technique and Histological Characterization

신선하고 특성이 잘 규명된 종양 조직 샘플을 획득하는 것은 고품질 "오믹스" 연구를 수행하는 데 매우 중요합니다. 그러나 전립선암(PC)의 경우 이 장기의 고유한 특성과 이 종양과 관련된 높은 이질성으로 인해 특히 어려울 수 있습니다. 다른 한편으로는, 중요한 조직 변화를 일으키지 않고 보관하기 전에 샘플을 조직병리학적으로 특성화하는 것도 흥미로운 도전입니다. 이러한 맥락에서 우리는 해부병리학적 기준에 따라 절제된 전립선 조직을 획득, 매핑, 특성화 및 미세 절제하는 새로운 방법을 제시합니다.
이전에 발표된 프로토콜과 달리 이 방법은 전립선 표본의 구조를 손상시키지 않으면서 전립선 표본의 조직 병리학적 분석에 필요한 시간을 줄여주며, 이는 수술 마진을 평가하는 데 중요합니다. 또한 Gleason 점수, 전구체 병변(고급 전립선 상피내 종양 - PIN) 및 염증성 병변(전립선염)과 같은 병리학적 기준에 의해 정의된 조직학적 종양 영역에 중점을 두고 새로운 전립선 조직 샘플의 묘사 및 미시적 거시적 해부를 가능하게 합니다. 그런 다음 이 샘플은 후속 연구 분석을 위해 바이오뱅크에 저장됩니다.

그 결과, 이 기법은 연구된 증례의 61%(41례 중 25례)에서 종양 물질을 얻을 수 있게 해주었다는 것을 보여준다(표 1).
표 1: 연구 샘플의 조직병리학적 데이터. 연구에 사용된 샘플에 대한 조직 병리학적 데이터 요약. 진단 실린더는 진단 목적으로 얻은 전립선 생검 샘플을 의미하며, 가공된 실린더는 연구 목적으로 전립선 절제술 샘플에서 얻은 실린더에 해당합니다. ND: 데이터 없음; LL : 왼쪽 소엽; RL: 우측 소엽; TTB: 총 종양 부담. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/65635/65635_Table%201.xlsx" target="_blank">이 표를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오.</a>
이 분석을 위해, 각 소엽의 근치적 전립선 절제술 표본에서 얻은 실린더에서 얻은 종양이 있는 샘플의 수를 ...

이 프로토콜은 근치적 전립선 절제술 표본에서 샘플 수집을 용이하게 하는 방법을 설명합니다. 목표는 해부병리학적 기준에 따라 표본의 조직 샘플을 Biobank에 저장하기 전에 매핑, 특성화 및 미시적 매크로 절개하는 것입니다.

Acquiring fresh and well-characterized tumor tissue samples is critical for conducting high-quality &#34;omics&#34; studies. However, it can be ...

우리의 연구는 고품질의 전립선암 조직 샘플을 얻기 위한 방법론을 강화하는 데 중점을 둡니다. 전립선암 연구에서 유전적 종양 내 이질성, 다초점성 및 종양 병소의 정확한 분자 특성화와 같은 문제를 해결합니다. 바이오뱅킹은 생물학적 샘플을 체계적으로 수집, 처리 및 저장하는 기술 주도 관행입니다.이러한 기술을 통합하면 잘 특성화된 전립선암 샘플에서 광범위한 데이터 세트를 생성할 수 있어 협업을 촉진하고 연구와 신뢰성을 개선하며 전립선암 환자를 위한 맞춤형 의학 및 전략 개발을 지원할 수 있습니다. 병리학은 종양 내 이질성, 조직 병리학적 표준화, 분자 데이터 통합, 실험실 집약적 프로세스, 자동화된 e-이미지 분석을 위한 기후 정량 분석을 포함한 여러 실험적 변화에 직면해 있습니다. 이러한 문제를 해결하려면 지속적인 기술 발전, 표준화 이니셔티브, 학제 간 협력, 개선된 실험 및 계산 방법이 필요합니다.이 프로토콜은 종양 샘플링을 효율적이고 정확하게 처리합니다. 정확한 위치 파악을 위해 이미징 및 생검 데이터를 통합합니다. 실시간 조직병리학적 통찰력을 제공하고, 비용과 시간을 줄이고, 시료 품질을 개선하고, 모든 허혈 시간을 최소화합니다.이는 전립선암 조직병리학 연구의 중요한 과제를 해결합니다. 당사의 프로토콜은 조직 병리학적 데이터를 모두 이해하고, 바이오뱅킹을 강화하고, 협업을 촉진하고, 맞춤형 의학을 가능하게 함으로써 전립선암 연구를 변화시킬 수 있습니다. 종단적 바이오뱅크는 시간적 변화를 보여주고, 질병 진행 및 치료 반응을 명확히 하고, 다중 데이터를 상호 작용하고, 분자 신경 및 전립선암에 대한 새로운 바이오마커를 발견합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Cancer Research

암 연구

이 비디오는 샘플링을 위해 전립선 조직의 특정 종양 함유 영역을 표적으로 하는 MRI 데이터 기반 기술을 보여줍니다. 수집된 생검 검체는 바이오뱅킹 목적으로 보관하거나 후속 다운스트림 분석에 사용할 수 있습니다.

바이오뱅킹을 위한 전립선암 조직 샘플링: 신선한 종양 조직에서 생검 펀치를 제거하기 위한 MRI 유도 표적 기술

인간 게놈의 8 %를 차지 인간 내인성 레트로 바이러스 (HERV)는, 부족한 코딩 능력 만 십만 긴 터미널 반복 (LTR에 의해 둘러싸) 유지. 사용자 지정 Affymetrix의 마이크로 어레이는 개별 HERV의 궤적 표현을 식별하도록 설계되었으며, 향후 임상 연구에 대한 개념의 증거로 전립선 암 조직에 사용되었다.

전립선 암의 바이오 마커 발견에 신청 : 개인 HERV 궤적 발현 마이크로 어레이 기반의 식별

피부 종양은 모스 (Mohs) 현미경 수술 후 폐기됩니다. 임상 지원 직원이 임상 작업을 방해하지 않고 하류 실험실 응용을위한 피부 종양 ( 예 : 편평 세포 암종, 기저 세포 암종 및 흑색 종) 샘플을 효과적으로 처리하고 저장할 수있는 프로토콜이 여기에 설명되어 있습니다.

클리닉 기반 생물 저장소의 설립

이 방법은 급진적 인 전립선 절제술을 따르는 바이오 뱅킹 조직이 샘플링 절차를 안내하기 위해 전립선 암 환자에 대한 임상 진단 데이터를 활용하는 것을 포함합니다. 이것은 다운스트림 응용의 넓은 범위에 대한 새로운 조직의 효율성과 가용성에 관한 이전에 게시 된 방법과 문제를 극복한다.

전립선암 바이오뱅킹을 위한 샘플링 절차를 안내하기 위해 자기 공명 영상 및 생검 데이터 사용

다음 작업에서는 대장암과 췌장암의 대형 바이오뱅크 설립에 필요한 연속적인 단계를 설명합니다.

살아있는 바이오 뱅크의 창조 및 유지 보수 - 우리가 그것을 하는 방법

바이오뱅크는 생물의학 연구를 위한 중요한 자원이며 유럽 종양학 연구소의 중개 및 디지털 의학 부서를 위한 바이오뱅크는 이 분야의 모델입니다. 여기에서는 다양한 유형의 인간 생물학적 샘플 관리를 위한 바이오뱅크의 표준 운영 절차에 대한 자세한 설명을 제공합니다.

중개 의학을 위한 바이오뱅크: 최적의 시료 관리를 위한 표준 운영 절차

이 기사에서는 바이오뱅킹, 맞춤형 의학 및 기타 연구 응용 분야에 대한 유용성을 최적화하도록 설계된 유방암 샘플 수집을 위한 자세한 프로토콜을 제시합니다. 유방 생검 및 유방 절제술 절차를 포함한 샘플 수집 작업 흐름은 조직 손상을 최소화하고 샘플 품질을 극대화하는 데 중점을 두고 자세히 설명합니다.

바이오뱅킹, 맞춤형 의학 및 연구 응용을 위한 유방 생검 및 유방 절제술 샘플 수집 절차의 최적화

이 연구는 원뿔 모양의 이중 구멍 방법과 이중 평면 프로브 가이드를 사용하여 향상된 경회음부 전립선 생검 기술을 제시합니다. 이러한 수정은 외상을 줄이고, 환자 회복을 향상시키며, 생검 정확도를 개선하여 전립선암 진단을 위한 신뢰할 수 있고 최소 침습적인 접근 방식을 만듭니다.

Dual-plane probe guidance와 함께 원뿔 모양의 이중 구멍 방법을 사용한 경회음부 전립선 생검

여기에서는 기존 조직병리학에 비해 장점이 있어 생검 샘플에 대해 자극 라만 조직학(SRH)을 사용하여 전립선암을 검출하기 위한 표준화된 프로토콜을 제시하며, 암 대 조직 비율을 개선하기 위해 샘플 준비, 이미징 및 인공 지능에 중점을 둡니다. 또한 전사체학, 오가노이드 또는 이종이식 모델, 수술 중 수술 마진 식별을 위한 바이오뱅킹을 지원합니다.

Detection and Isolation of Cancer in Prostate Biopsies Using Stimulated Raman Histology and Artificial Intelligence

전립선암 이질성과 치료 저항성은 여전히 과제로 남아 있습니다. 우리는 주요 부모 종양 특성을 보존하는 환자 유래 오가노이드(PDO)를 생성하기 위한 프로토콜을 설명합니다. 이 표준화된 모델은 약물 스크리닝 및 정밀 의학 발전을 지원합니다.

환자 유래 전립선암 오가노이드의 확립 및 유지: 상세한 실험 프로토콜

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개선된 샘플링 기법 및 조직학적 특성 분석을 통한 전립선 종양 바이오뱅킹 신뢰성 향상

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