Name: Naive 및 Effector CD8 T 세포의 미토콘드리아 기능 측정 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 7 s
Description: 배우세요 CD8 T 세포의 미토콘드리아 기능을 Mito Stress Test로 측정하는 방법을. 리소포스파티딕산 처리가 대사 유연성과 세포독성에 미치는 영향을 실시간 분석으로 평가합니다.

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<table><tbody><tr><td>안티마이신 A</td><td>시그마-알드리치</td><td>A8674</td><td></td></tr><tr><td>안티-CD28</td><td>바이오레전</td><td>드 102116</td><td></td></tr><tr><td>안티-CD3/CD28 다이나비드</td><td>ThermoFisher</td><td>11456D</td><td></td></tr><tr><td>바이오티닐화 안티-CD3</td><td>바이오레전</td>드 <td>317320</td><td></td></tr><tr><td>소 혈청 알부민</td><td>시그마-알드리치</td><td>108321-42-2</td><td></td></tr><tr><td>CD8a+ T 세포 분리 키트</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-104-075</td><td></td></tr><tr><td>세포 여과기 (100 &micro; m)</td><td>CELL TREAT</td><td>229485</td><td></td></tr><tr><td>에틸렌디아민테트라아세트산</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E8008</td><td></td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>26873-85-8</td><td>밀도 구배 매체&nbsp;</td></tr><tr><td>FCCP ((4-(trifluoromethoxy) phenyl) carbonohydrazonoyl dicyanide)</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>C2920</td><td></td></tr><tr><td>포도</td>당 <td>Sigma-Aldrich</td><td>G-6152</td><td></td></tr><tr><td>글루타민</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G7513</td><td></td></tr><tr><td>LS 컬럼</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td>포지티브 선택 컬럼</td></tr><tr><td>자기 세포 분리 컬럼</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-301</td><td></td></tr><tr><td>마이크로플레이트</td><td>: 애질런트</td><td>102601-100</td><td></td></tr>, <tr><td>올리고마이신</td>, <td>시그마-알드리치,</td><td>75351</td><td></td></tr>, <tr><td>피루베이트</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>113-24-6</td><td></td></tr>, <tr><td>레코바이넌트, IL-2</td>, <td>페프로테크</td>, <td>200-02</td><td></td></tr>, <tr><td>로테논</td><td>, 시그마-알드리치</td>, <td>R8875</td><td></td></tr>, <tr><td>해마 매체</td>, <td>애질런트</td><td>103576-100</td><td></td></tr><tr><td>센서 카트리지</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9275</td><td></td></tr><tr><td>멸균 6웰 플레이트</td><td>CELL TREAT</td><td>230601</td><td></td></tr><tr><td>멸균 24웰 플레이트</td><td>CELL TREAT</td><td>229524</td><td></td></tr><tr><td>XF Calibrant</td><td>Agilent</td><td>102601-100</td><td></td></tr></tbody></table>

naive 및 effector cd8 t 세포의 미토콘드리아 기능 측정

Measuring Mitochondrial Function of Na&#239;ve and Effector CD8 T Cells

해당작용 및 산화 대사 능력은 특정 시점에서 전자 전달 사슬의 구성 요소를 표적으로 하여 용량을 평가하는 미토콘드리아 기능 분석을 사용하여 측정할 수 있습니다(그림 2A). 센서 카트리지 포트에 다양한 주입 방식을 로드하여 기존 분석을 수정하고 급성 TCR 자극을 평가할 수 있습니다(그림 2B,C). 결과를 해석하기 전에 다양한 세포 유형에 대한 세포 수와 약물 농도를 최적화해야 합니다. 여기에서 이 보고서는 비접촉 세포와 효과기 세포 모두에서 용량을 측정하도록 최적화된 전자 전달 사슬의 억제제와 함께 CD8 T 세포(그림 3A, B)에 최적화된 조건을 설명합니다(그림 4A, B). 중요한 것은 이 분석법을 수정하여 항원 특이적...

Naive 및 Effector CD8 T 세포의 미토콘드리아 기능 측정

Understanding how immunometabolism impacts the function, differentiation, and fate of lymphocytes has garnered significant interest and attention. ...

measuring-mitochondrial-function-of-nave-and-effector-cd8-t-cells

Research

연구

JoVE Journal

Immunology and Infection

면역학 및 감염학

셀 - 중재의 lymphocytotoxicity (CML) assays는 체외에서 autoreactive 반응 및 세포 사망의 학습 메커니즘을 테스트하는 데 사용할 수 있습니다. 그러나, 형광 염료, 타입 및 세포 죽음뿐만 아니라 활용 경로의 반응 속도론 살 세포 공촛점 미세한 이미징 기술을 사용하여 더 자세히 공부하실 수 있습니다.

세포 독성 T Lymphocytes에 의해 베타 세포 죽음의 중재를 평가하는 방법

이 비디오는 세포외 플럭스 분석을 사용하여 대뇌 혈관 내피(CVE) 세포의 미토콘드리아 기능을 평가하는 방법을 보여줍니다. CVE 세포는 세포외 플럭스 세포 배양 플레이트에 도금되어 있습니다. 세포 외 플럭스 센서는 bioanalyzer에 로딩 및 교정하기 전에 수화됩니다. 그런 다음 세포가 포함된 플레이트가 분석을 위해 로드됩니다.

대뇌 혈관 내피 세포의 미토콘드리아 기능 평가

이 프로토콜은 민감한 세포 기반 세포 독성 분석을 설명합니다. 이 분석은 effector CD8+ T 세포의 수가 증가할 때 살아있는 표적 CD4+ T 세포의 빈도 감소를 열거함으로써 항원 특이적 CD8+ T 세포의 세포 용해 활성을 직접 평가할 수 있습니다.

세포독성 활성을 측정하기 위한 세포 기반 유세포 분석 분석

여기서 설명하는 것은 감지하고 유세포 짐승 조직으로부터 분리 및 분석 미토콘드리아 immunolabeling 의해 미토콘드리아 외막 단백질을 정량하는 방법이다. 이 방법은 미토콘드리아 개체군의 기능적 측면을 평가하기 위해 확장 될 수있다.

고립 된 미토콘드리아의 유동 세포 계측법에 의해 외부 막 단백질의 면역

이 문서에서는 미토 콘 드리 아 또는 살아있는 세포에서는 리소좀을 계량 하는 강력한 방법을 보여 줍니다. 표면 표식에 놓여있는지 활용 된 항 체와 리소좀 또는 미토 콘 드리 아 특정 염료의 조합 사용 하 여 조직 샘플에서 수확 하는 1 차 셀 같은 혼합된 세포 인구에 이러한 세포의 부 량 수 다 색 cytometry입니다.

미토 콘 드리 아와 T 세포에서는 리소좀의 다 색 흐름 Cytometry 기반 정량화

여기에서는 종양 항 원에 대 한 세포 독성 T 림프 구 (CTL) 반응에서 면역 우세의 검사를 가능 하 게 하는 유 세포 분석 기반의 생체 사 멸 분석 법을 설명 한다. 이 우아한 분석을 기계 론 적 연구와 약물 효능 테스트에 사용 하는 방법의 예를 제공 합니다.

종양 특이 CD8+ T 세포 반응에서 면역 우세를 연구 하기 위한 생체 내 세포 독성 분석 법

여기서 우리는 생체배양조 조혈줄기세포 및 T세포에서 미토콘드리아 질량 및 막 전위를 측정하는 신뢰할 수 있는 방법을 설명한다.

유세포측정에 의한 조혈줄기세포 및 T세포의 미토콘드리아 질량 및 막 전위 측정

대사 적응은 분화, 지속성 및 세포 독성을 지시하기 때문에 T 세포의 기본입니다. 여기서, 생체외 사이토카인-분화된 인간 일차 T 세포에서 미토콘드리아 호흡을 모니터링하기 위한 최적화된 프로토콜이 제시된다.

사이토카인 분화된 인간 일차 T 세포에서 미토콘드리아 호흡의 실시간 모니터링

mtDNA 합성 및 분포를 검출하고 정량화하기 위해 다중 웰 플레이트 형식 및 자동화된 면역형광 이미징을 사용하여 세포에서 미토콘드리아 DNA(mtDNA) 대사의 역학을 연구하는 절차가 설명되어 있습니다. 이것은 mtDNA 대사에 대한 다양한 억제제, 세포 스트레스 및 유전자 침묵의 효과를 조사하는 데 추가로 사용될 수 있습니다.

미토콘드리아 DNA 합성 및 분포의 고처리량 이미지 기반 정량화

이 기술은 형광 기반 라이브 이미징을 사용하여 HeLa 세포 내의 미토콘드리아 막 전위와 과산화물 수준을 시각화하고 정량적으로 측정하는 효과적인 워크플로우를 설명합니다.

HeLa 세포에서 라이브 이미징을 사용한 미토콘드리아 막 전위 및 슈퍼옥사이드 수준의 형광 기반 정량화

면역 세포에서 생리학적으로 관련된 기질 농도 하에서 미토콘드리아 생체 에너지학을 연구하는 방법은 제한적입니다. 당사는 고분해능 폐활량 측정법을 사용하여 인간 T 세포, 단핵구 및 말초 단핵 세포의 에너지 수요에 대한 미토콘드리아 막 전위의 반응 변화를 평가하는 상세한 프로토콜을 제공합니다.

인간 면역 세포에서 미토콘드리아 막 전위의 동적 변화를 평가하기 위한 고분해능 폐활량 측정법

배우세요 CD8 T 세포의 미토콘드리아 기능을 Mito Stress Test로 측정하는 방법을. 리소포스파티딕산 처리가 대사 유연성과 세포독성에 미치는 영향을 실시간 분석으로 평가합니다.

Naive 및 Effector CD8 T 세포의 미토콘드리아 기능 측정

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