단일 핵 멀티옴 분석을 위한 고품질 뇌 및 골수 핵 준비
December 22nd, 2023
single-cell/single-nuclei transcriptomics 및 multi-omics의 성공은 세포/핵의 품질에 크게 좌우됩니다. 따라서 조직에서 세포/핵을 분리하고 정제하는 것은 고도로 표준화되어야 합니다. 이 프로토콜은 다운스트림 단일 핵 다중체 분석을 위해 뇌와 골수에서 핵을 준비하는 방법을 설명합니다.
세포분석 및 바이오마커 기술 부서는 단일 세포 분해능을 갖춘 세포 표현형 분석 및 분자 프로파일링을 위한 최첨단 기술과 파이프라인을 통해 생물의학 프로젝트를 지원합니다. 이러한 맥락에서 우리는 건강과 질병의 유전자 발현 및 유전자 조절에 대한 통찰력을 얻기 위해 단일 세포 멀티오믹 분석을 위한 다양한 도구를 사용합니다. 유세포 분석은 고유한 특성을 기반으로 개별 세포를 식별하고 소싱합니다.
최근에는 고처리량 이미지 기반 스펙트럼 분류기가 발전했으며, 이러한 기술은 패널 설계에 유연성을 제공하고 유사한 염료를 동시에 사용하며 자가형광을 관리할 수 있습니다. 최첨단 단일 세포 기술을 사용할 때 주요 실험 과제는 특히 취약하거나 희귀한 세포 집단을 다루는 것입니다. 각 조직 또는 세포 유형은 고품질 염기서열 분석 데이터로 변환되는 생존율이 높은 세포를 충분히 얻기 위해 미세 조정된 프로토콜 최적화를 거쳐야 합니다.
당사의 수정된 단일 핵 준비 프로토콜은 핵 회수율을 개선하고 핵에 가해지는 스트레스를 최소화합니다. 특히 뇌 및 골수 조직에 최적화되어 있으며 시료 해리에서 핵 정제에 이르는 모든 단계를 다룹니다.
개요
이 연구는 하위 단계의 단일 핵체 다중체 분석을 위한 뇌 및 골수 조직에서의 핵체 분리 최적화에 초점을 맞추고 있습니다. 단일 세포 전사체학 및 다중체 분석에 미치는 영향 때문에 고품질 핵체 추출의 중요성이 강조되고 있습니다.
주요 연구 구성요소
연구 영역
- 단일 세포 전사체학
- 다중체
- 핵체 분리 기술
배경
- 전사체학의 성공은 분리된 세포/핵체의 순도 및 품질에 의존합니다.
- 유세포 분석 및 이미지 기반 기술의 최근 발전으로 세포 분류 능력이 향상되었습니다.
- 깨지기 쉽거나 희귀한 세포 집단에 대해서는 최적화된 프로토콜이 필요하므로 특별한 고려가 필요합니다.
사용된 방법
- 뇌 및 골수 조직을 위한 수정된 핵체 준비 프로토콜
- 마우스 모델 시스템
- 유세포 분석 및 자동화된 세포 계수 기술 포함
주요 결과
- 준비 중 스트레스를 최소화하여 핵체 회수율을 개선했습니다.
- 분류 후 뇌 핵체의 순도는 36%에서 거의 100%로 증가했습니다.
- 고품질 시퀀싱 데이터를 위한 핵체를 준비하는 신뢰할 수 있는 워크플로를 확립했습니다.
결론
- 이 연구는 특정 조직에서 고순도 핵체를 분리하기 위한 효과적인 프로토콜을 입증합니다.
- 이 연구 결과는 건강 및 질병 연구에서 단일 세포 다중체 분석을 향상시키는 데 중요한 영향을 미칩니다.
