Name: 두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2023-10-13T13:10:00.000+00:00
Duration: 5 min 44 s
Description: 배우세요 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 유도 프로토콜을 통해 수컷과 암컷 C57BL/6J 마우스에서 다발성 경화증 모델링 방법을 익히세요. 임상 점수 평가와 로타로드 테스트를 활용하여 신경염증 및 탈수초 과정을 정량적으로 분석하는 기법을 습득하세요.

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이 작업은 Ministero dell'Istruzione, dell'Università e della Ricerca - MIUR project Dipartimenti di Eccellenza 2018-2022 및 2023-2027에서 신경과학과 Rita Levi Montalcini의 지원을 받았습니다. Cavalieri-Ottolenghi 재단, 오르바사노, 이탈리아. BB는 INFRA-P, Piedmont Region(n.378-35)(2022-2023) 및 PRIN 2020-20203AMKTW의 펠로우였습니다. 지원을 해주신 Fondazione per la Ricerca Biomedica Onlus(FORB)에 감사드립니다. 출판비는 2031 디스트레토 로타랙트, 특히 토리노 노르-에스트 로타랙트클럽의 기부금으로 충당되었다. 원고를 교정해 주신 Elaine Miller에게 감사드립니다.

Induction and Evaluation of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mouse(마우스에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 평가)

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<li>Procaccini, C., De Rosa, V., Pucino, V., Formisano, L., Matarese, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+of+Multiple+Sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Animal models of Multiple Sclerosis.</a> Eur J Pharmacol. 759, 182-191 (2015).</li>
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<li>Kipp, M., Nyamoya, S., Hochstrasser, T., Amor, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multiple+sclerosis+animal+models%3A+a+clinical+and+histopathological+perspective%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Pathol%22%5BJournal%5D)">Multiple sclerosis animal models: a clinical and histopathological perspective.</a> Brain Pathol. 27 (2), Zurich, Switzerland. 123-137 (2017).</li>
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<li>Hofstetter, H. H., Shive, C. L., Forsthuber, T. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pertussis+toxin+modulates+the+immune+response+to+neuroantigens+injected+in+incomplete+Freund%27s+adjuvant%3A+induction+of+Th1+cells+and+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+presence+of+high+frequencies+of+Th2+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Pertussis toxin modulates the immune response to neuroantigens injected in incomplete Freund's adjuvant: induction of Th1 cells and experimental autoimmune encephalomyelitis in the presence of high frequencies of Th2 cells.</a> J Immunol. 169 (1), 117-125 (2002).</li>
<li>Maria, Z., Turner, E., Agasing, A., Kumar, G., Axtell, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pertussis+toxin+inhibits+encephalitogenic+T-cell+infiltration+and+promotes+a+B-cell-driven+disease+during+Th17-EAE%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Mol+Sci%22%5BJournal%5D)">Pertussis toxin inhibits encephalitogenic T-cell infiltration and promotes a B-cell-driven disease during Th17-EAE.</a> Int J Mol Sci. 22 (6), 2924(2021).</li>
<li>Krementsov, D. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Studies+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+do+not+support+developmental+bisphenol+a+exposure+as+an+environmental+factor+in+increasing+multiple+sclerosis+risk%5BTitle%5D)+AND+%22Toxicol+Sci%22%5BJournal%5D)">Studies in experimental autoimmune encephalomyelitis do not support developmental bisphenol a exposure as an environmental factor in increasing multiple sclerosis risk.</a> Toxicol Sci. 135 (1), 91-102 (2013).</li>
<li>Kummari, E., Nichols, J. M., Yang, E. -J., Kaplan, B. L. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuroinflammation+and+B-cell+phenotypes+in+cervical+and+lumbosacral+regions+of+the+spinal+cord+in+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+the+absence+of+pertussis+toxin%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroimmunomodulation%22%5BJournal%5D)">Neuroinflammation and B-cell phenotypes in cervical and lumbosacral regions of the spinal cord in experimental autoimmune encephalomyelitis in the absence of pertussis toxin.</a> Neuroimmunomodulation. 26 (4), 198-207 (2019).</li>
<li>Huntemann, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+optimized+and+validated+protocol+for+inducing+chronic+experimental+autoimmune+encephalomyelitis+in+C57BL%2F6J+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">An optimized and validated protocol for inducing chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in C57BL/6J mice.</a> J Neurosci Methods. 367, 109443(2022).</li>
</ol>

저자 중 누구도 이 논문의 연구, 저자 및/또는 출판과 관련하여 선언할 이해 상충이 없습니다.

우리가 기술한 MOG35-55-유도 EAE 프로토콜은 C57BL/6J 마우스 7,8,13에서 만성 형태의 MS를 개발하게 했다. 이러한 대표적인 결과에서, 우리는 예방접종 절차를 거친 암수 동물이 만성적인 형태의 질병을 발병시켰다고 보고했다(즉, 질병 발병 후 완전히 회복되지 않고, 결핍이 누적되며, 만성 단계에서 CS가 1.5 이상을 유지함).
많은 연구에서 이 모델에서 남성과 여성 사이에 차이가 없다고 보고하더라도14, 남녀 모두를 고려한 연구는 소수에 불과하다. 그러나, MS2에서 나타난 상당한 성적 이형성을 감안할 때, 두 성별의 질병 결과를 연구하는 것이 우선적으로 관련성이 있어야 한다. 남녀 모두를 ...

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65778">Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis</a>. The Authors section was updated. An additional affiliation (School of Pharmacy, Pharmacology Unit, University of Camerino) was added for author Antonino Casile.

An erratum was issued for:&#160;<a href="https://www.jove.com/t/65778">Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis</a>. The Authors section was updated.

Erratum: Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

다발성 경화증(MS)은 중추신경계(CNS)에 영향을 미치는 만성 자가면역 염증성 질환입니다. 염증 세포의 혈관 주위 침윤, 탈수초화, 축삭 손실 및 신경교증의 존재를 보여준다1. 이 병의 원인은 아직 밝혀지지 않았으며, 임상적 측면, 방사선 및 병리학적 특징은 이 질병의 현저한 이질성을 시사한다2.
원인이 불분명하고 복잡하기 때문에 현재로서는 인간 MS 3,4에서 나타나는 모든 임상 및 방사선학적 특징을 요약하는 동물 모델이 없습니다. 그러나 MS 3,4의 다양한 측면을 연구하기 위해 다양한 동물 모델이 사용됩니다. 이러한 모델에서 질병 시작은 일반적으로 극도로 인위적이며, 임상 징후의 발병 기간은 인간과 생쥐 간에 다릅니다. 예를 들어, 인간의 경우 질병의 기저에 있는 병태생리학적 과정은 임상 증상이 시작되기 전 수년 동안 감지되지 않습니다. 반대로, 실험자는 다발성경화증 유도 후 몇 주 또는 며칠 이내에 동물 모델에서 증상을 감지할 수 있다4.
세 가지 기본 동물 모델은 다발성경화증의 특징인 탈수초화의 특징을 나타내는데, 바이러스에 의해 유도되는 것(예: Theiler's murine encephalomyelitis virus), 독성 물질에 의해 유도되는 것(예: cuprizone, lysolecithin), 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)의 다양한 변이입니다5. 각 모델은 질병의 특정 측면을 연구하는 데 도움이 되지만 MS6의 모든 기능을 복제하는 모델은 없습니다. 따라서 특정 실험 요구 사항과 해결해야 할 과학적 질문을 고려하여 올바른 모델을 선택하는 것이 중요합니다.
미엘린 유래 항원에 대한 면역 절차 덕분에 EAE는 감수성 쥐의 CNS 구성 요소에 대한 자가 면역 반응을 유발하여 유도됩니다. 광범위한 면역병리학적 및 신경병리학적 메커니즘 사이의 상호작용은 면역된 마우스에서 다발성경화증의 주요 병리학적 특성(즉, 염증, 탈수초화, 축삭 손실 및 신경교증)의 발달을 유발합니다 7,8. 생쥐는 면역 접종 후 2주쯤 되면 임상 증상을 보이기 시작하며 일반적으로 꼬리에서 사지, 앞다리까지 상행 마비를 보입니다. 임상 점수(즉, 질병 관련 결손의 누적 정량화)는 일반적으로 5점 척도7를 사용하여 평가된다.
단백질 펩티드를 가진 능동적 면역 또는 뇌 생성 T 세포의 수동적 전달은 다른 유전적 배경을 가진 마우스(예: SJL/J, C57BL/6 및 비만-당뇨병(NOD) 마우스)에서 EAE를 유도하는 데 사용할 수 있습니다. 미엘린 단백질지질 단백질(PLP), 미엘린 염기성 단백질(MBP) 및 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질(MOG)은 일반적으로 면역원이 생성되는 자가 CNS 단백질의 예입니다. 특히, PLP의 면역우성 항원결정기(PLP139-151)로 면역된 SJL/J 마우스는 재발-완화(RR) 질병 경과를 보이는 반면, 면역우성 MOG35-55 펩타이드로 면역된 C57BL/6J 마우스는 만성 성질의 EAE를 나타낸다1. 다발성경화증 진행, 질병에서 B 세포의 역할, 내부 메커니즘 또는 재수초화 연구의 어려움에 대한 정보를 거의 제공하지 않는 것과 같은 몇 가지 한계에도 불구하고 EAE 모델은 자가면역 및 신경염증 과정의 이해에 크게 기여하여 다발성경화증 분야의 지식을 증가시켜 이 질병에 대한 새로운 치료 접근법을 개발할 수 있도록 했습니다4, 6.
본 연구에서 우리는 특정 형태의 활성 EAE, 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드 35-55(MOG35-55) 유도 형태 9,10,11,12에 초점을 맞췄습니다. MOG35-55 유도 EAE는 만성 형태의 다발성경화증을 모델링합니다. 면역 접종 후, 마우스는 면역 후 첫 주 이내에 무증상 단계를 거친 다음 일반적으로 면역 후 두 번째 주에 질병이 발생하는 반면, 면역 후 3주에서 4주 사이에는 질병이 만성화되어 누적된 결핍에서 완전히 회복될 가능성이 없습니다 7,8,13. 흥미롭게도, 남성과 여성의 질병을 비교한 연구가 더 적음에도 불구하고, 문헌14에 제시된 대부분의 연구에서 발병률, 질병 발병, 경과 또는 진행에 있어 남성과 여성의 차이가 관찰되지 않았다.
대조적으로, 인간의 경우, 이러한 매개변수는 성적으로 매우 이형적인 것으로 알려져있다 2. 다발성경화증은 남성보다 여성에게 더 많이 발생합니다. 그러나 남성은 일반적으로 더 공격적인 형태의 질병을 앓게 된다2. 이 증거는 생식선 호르몬의 본질적이면서도 복잡한 역할을 시사한다15; 그럼에도 불구하고 병리학에서 성 호르몬의 역할과 작용 메커니즘은 여전히 불분명합니다. 더욱이, 동물 모델의 데이터는 에스트로겐과 안드로겐이 성별에 따라 병리학의 다른 부위에 긍정적인 영향을 미친다는 아이디어를 뒷받침합니다16,17.
일부 연구에서는 프로게스테론의 신경보호, 프로수초화 및 항염증 효과가 있다고 제안하고있으며 , 다발성경화증 환자에 대한 근거는 부족하지만18 신경활성 스테로이드(즉, 프레그네놀론, 테트라하이드로프로게스테론, 디하이드로프로게스테론과 같은 신경계에 의한 새로운 합성 스테로이드)도 병리학적 경과에 영향을 미칠 수 있다19. 종합적으로, 이러한 데이터는 말초신경계와 중추신경계 내부에서 생성되는 성 호르몬이 질병의 발병과 진행에 중요하고 성별에 따라 달라지는 역할을 한다는 생각을 뒷받침합니다. 따라서 본 연구에서는 수컷과 암컷 동물 모두로부터 별도의 데이터를 수집할 것을 촉구합니다.
조직병리학적 관점에서 척수의 백질은 이 모델에서 중추신경계 손상의 주요 부위 역할을 하며, 단핵 염증 침윤 및 탈수초화의 다초점, 합류 영역을 특징으로 한다8. 따라서 C57BL/6J 마우스에서 MOG35-55-유도 EAE 유도를 위한 이 프로토콜을 설명할 때 두 성별의 질병 결과를 고려하고 척수에 관한 몇 가지 조직병리학적 통찰력을 제공할 것입니다.

<table><tbody><tr><td>18 G x 1 &frac12; &ldquo; 유리 주사기용 1.2 x 40mm 바늘&nbsp;</td><td>Terumo</td><td>TER-HYP-18G-112-PIN</td><td></td></tr><tr>광학 현미경 <td>NIKON DS-U1 디지털 카메라</td><td>에 연결된 디지털 카메라</td><td></td><td></td></tr><tr><td>전자 정밀 저울</td><td>Merck</td><td>Mod. Kern-440-47N, 해상도 0.1g</td><td></td></tr><tr><td>Eosin Y</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>HT110216</td><td></td></tr><tr><td>유리 주사기 피펫 " 울트라 어셉트" 10 ml</td><td>Sacco 시스템&nbsp;</td><td></td><td></td>L003465</tr><tr><td>유리 그릇 (즉, 에멀젼을 제조하기 위한 becker)</td><td>VWR</td><td>213-1170, 213-1172</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxylin (Mayer' s)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>MHS32</td><td>필터를 사용하기 전에 사용하십시오.&nbsp;</td></tr><tr><td>이미지 분석 소프트웨어</td><td>Fiji</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Incomplete Freund' s adjuvant (IFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>F5506</td><td>Store at +4 &deg;C.&nbsp;</td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Wellona Pharma</td><td></td><td>이 약물은 흡입 마취제로 사용됩니다.</td></tr><tr><td>수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스</td><td>Jackson Laboratory, Envigo</td><td></td><td>연령 8-10주, 최적 체중 ~20 g.&nbsp;</td></tr><tr><td>Microtome</td><td>Leica HistoCore BIOCUT R</td><td></td><td></td></tr><tr><td>마운팅 미디엄&nbsp;</td><td>머크</td><td>107961</td><td></td></tr><tr><td>마우스 로타로드</td><td>우고 바실레&nbsp;</td><td>#47600</td><td></td></tr><tr><td>Mycobacterium tuberculosis (MT), 균주 H37Ra&nbsp;</td><td>Difco Laboratories Inc.&nbsp;</td><td>231141</td><td>+4 &deg;C에 보관하십시오.</td></tr><tr><td>미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩티드 35-55 (MOG35-55)</td><td>Espikem</td><td>EPK1</td><td>-80 &deg; 생리학적 용액에 희석된 C(2mg/mL); 가능한 한 변경이나 오염을 피하기 위해 예방 접종 당일에 준비하십시오.&nbsp;</td></tr><tr><td>광학 현미경</td><td>NIKON eclipse 90i</td><td></td><td></td></tr><tr><td>파라포름알데히드(PFA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>158127</td><td>+4 &deg에서 보관; C는 인산염 완충액에 한 번 희석 (4 %)됩니다.</td></tr><tr><td>백일해 독소 (PT)</td><td>듀오테크&nbsp;</td><td>PT.181</td><td>-80°C에서 보관; C 희석 (농도 5 &micro; g/mL)를 생리학적 용액에 넣는다.</td></tr><tr><td>생리적 용액 (염화나트륨 0.9 % 용액)</td> <td>B. Eurospital</td><td>A 032182038</td><td>+4 °C에서 저장; C가 열리면 됩니다.</td></tr><tr><td>식염수 인산염 완충액(PBS)</td><td>Thermo Scientific</td><td>J61196. </td> 이미지 획득을 위한 AP <td></td></tr><tr><td>소프트웨어</td><td>&nbsp; NIS-Element AR 2.10</td><td></td><td></td></tr><tr><td>주사기 U-100 0.5mL(30G x 5/16") (0.30 x 8mm) 고정 바늘&</td><td>nbsp; Nipro</td><td>SYMS-0.5U100-3008B-EC</td><td></td></tr><tr><td>주사기 U-100 1 mL, 26G x &frac12; &rdquo; (0.45 x 12.7 mm) 바늘 PIC</td><td></td><td>20,71,26,03,00,354</td><td></td></tr><tr><td>눈을 위한 수의사 연고</td><td>Lacrilube, Lacrigel Europhta</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Xylazine</td><td>Rompun</td><td></td><td>이 약물의 혼합물은 주사 가능한 마취제 및 진정제로 사용됩니다.&nbsp;</td></tr><tr><td>졸라제팜과 틸레타민</td><td>졸레틸&nbsp; 100</td><td></td><td>이 약은 주사 가능한 마취제, 진정제, 근육 이완제 및 진통제로 사용됩니다</td></tr></tbody></table>.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: mog35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

다발성 경화증(MS)은 중추신경계(CNS)에 영향을 미치는 만성 자가면역 염증성 질환입니다. 성별에 따라 유병률이 다르고 남성보다 여성에게 더 많은 영향을 미치며 여성보다 남성에서 더 공격적인 형태를 보이는 다른 결과가 특징입니다. 또한 다발성경화증은 임상적 측면, 방사선학적 및 병리학적 특징 측면에서 매우 이질적입니다. 따라서 병리학의 가능한 한 많은 측면을 조사할 수 있는 실험 동물 모델을 활용할 필요가 있습니다. 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 생쥐에서 가장 많이 사용되는 다발성경화증 모델 중 하나로, 면역 체계 활성화에서 중추신경계 손상에 이르기까지 다양한 질병 특징을 모델링합니다. 여기서 우리는 만성 형태의 질병 발병으로 이어지는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드 35-55(MOG35-55) 면역을 사용하여 수컷 및 암컷 C57BL/6J 마우스 모두에서 EAE 유도를 위한 프로토콜을 설명합니다. 또한 예방 접종 후 28일(28dpi) 동안 이 마우스의 일일 임상 점수 및 운동 성능 평가를 보고합니다. 마지막으로, 질병으로 인한 손상의 주요 부위인 척수에 초점을 맞춘 중추신경계 수준의 몇 가지 기본적인 조직학적 분석을 설명합니다.

예방 접종 후 EAE 후속 조치 이것은 아래에 설명된 대로 평가되었습니다.
체중 및 음식 섭취량 이원 분산 분석(ANOVA)(독립 변수로서의 성별 및 시간)은 특히 유도 후 2주 이내에 남녀 모두의 EAE 동물의 BW가 감소했음을 보여줍니다(F(1,57) = 4.952, p &lt; 0.001; 그림 2A). 그러나 BW의 성적 이형성은 항상 유지됩니다(그림 2A). BW의 백분율로 환산하면 (F(1,57) = 23.935, p &lt; 0.001; 그림 2B), 남성과 여성 모두 초기 BW에 비해 12dpi에서 17dpi 사이의 큰 손실(p...

실험적 자가면역 뇌척수염은 다발성 경화증에서 가장 널리 사용되는 쥐 모델 중 하나입니다. 현재 프로토콜에서는 남녀 모두의 C57BL/6J 마우스에 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질 펩타이드를 면역하여 주로 꼬리와 팔다리의 상행 마비를 초래합니다. 여기서는 EAE 유도 및 평가 프로토콜에 대해 논의합니다.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

Multiple Sclerosis (MS) is a chronic autoimmune inflammatory disease affecting the central nervous system (CNS). It is characterized by different ...

우리의 연구는 말초 면역 매개 메커니즘에 대한 이해를 크게 발표하고 신경 염증 및 부분 설명 과정을 평가할 수 있는 실험적 자가면역 뇌척수염 또는 EAE 모델에 중점을 둡니다. 이 모델은 또한 광범위한 치료 약물을 개발하고 테스트하는 데 널리 사용되었습니다. 다발성 경화증의 원인을 알 수 없고 복잡하기 때문에 현재 인간에게 나타나는 모든 임상 및 방사선학적 특징을 재현하는 동물 모델은 없습니다.따라서 연구자들이 특정 실험 질문에 가장 적합한 동물 모델을 선택하는 것은 매우 어렵습니다. EAE는 널리 사용되는 다발성 경화증 모델입니다. 그러나 몇 가지 문제를 해결하기 위해 이 모델을 수행한 일부 연구에서만 남녀 모두를 고려했습니다.우리의 프로토콜을 통해 우리는 이 모델에서 수행된 연구에 남녀 모두를 포함할 수 있는 가벼운 가능성을 원합니다. 구체적으로, 본 프로토콜은 임상 점수 평가와 회전근 검사의 두 가지 방법을 기반으로 한 임상 평가를 제안했으며, 이를 통해 질병 경과에 대한 보다 정량적이고 덜 주관적이며 더 정확한 임상 평가를 이끌 수 있습니다. 이 모델은 다발성 경화증의 성적 이형성을 완전히 재현하지는 않지만 잠재적인 이점이 있습니다.유도와 다른 가능한 위험 요인, 특히 환경적 요인의 조합은 그러한 요인의 특정 효과를 이해하고 질병의 일부 성적 이형 측면에서 특정 역할을 식별하는 것으로 끝날 수 있습니다.

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DA 쥐에서 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 encephalomyelitis :이 비디오는 여러 경화증의 동물 모델의 유도 및 임상 채점을 보여줍니다. 전체 쥐의 척수하고 완전한 프로 인드의 도움이되는가 포함된 유제와 immunizing 쥐가 유도된 질병은, 인간의 질병을 닮은 임상 징후를 보여줍니다.

유도 및 만성 - 원래대로 돌아가는 실험 면역 Encephalomyelitis 임상 채점

이 비디오는 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질과 불활성화된 결핵균의 조합을 주입하여 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염을 유도하는 방법을 보여줍니다. 이 모델을 통해 연구원들은 질병 메커니즘을 연구하고 치료 개입을 테스트할 수 있습니다.

마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염 유도

이 비디오에서는 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)을 사용하여 다발성 경화증의 마우스 모델을 구축합니다. 마우스에 뉴런 펩타이드와 보조제가 포함된 에멀젼을 주입하여 자가반응성 T세포를 활성화하는 면역 반응을 유발합니다. 그 다음에는 백일해 독소(PTX)를 주입하여 혈액뇌장벽 투과성을 높여 자가반응성 T세포가 뇌에 침투할 수 있도록 합니다. 이 침투는 궁극적으로 수초성 손상을 초래하는 신호 폭포를 시작하여 다발성 경화증의 탈수초성 상태를 모방합니다.

실험자가 면역 뇌척수염 (EAE)는 다발성 경화증의 설립 동물 모델입니다. C57BL / 6 마우스는 중추 신경계 자기 반응성 면역 세포에 의해 야기 오름차순 이완성 마비를 초래 미엘린 희소 돌기 아교 세포의 당 단백질 (MOG) 펩티드 35-55 (MOG 35-55)로 면역화된다. 질병 유도 및 모니터링을위한 프로토콜이 논의 될 것이다.

수초 희소 돌기 아교 세포 당 단백질 (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) C57BL / 6 쥐에 실험자가 면역 뇌척수염 (EAE) 유도

이 원고는 다양한 질병 단계에서 각각 유세포 분석 및 정량적 PCR을 사용하여 림프절, 비장, 혈액 및 척수의 면역 세포 분포 및 mRNA 사이토카인 수치를 평가하는 방법과 함께 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 모델의 유도 및 채점 방법을 설명합니다.

다양한 조직에서 면역 세포의 질병에 의존하는 유통의 마우스 및 평가에 실험자가 면역 뇌척수염의 유도

우리는 기본 실험실 장비만을 사용하여 마우스 Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein을 포함하는 대량의 융합 단백질을 생성하고 정제하는 간단한 프로토콜을 설명합니다. 이 단백질은 T 세포와 B 세포 모두에 의해 유발되는 실험적인 자가면역 뇌척수염을 유도하는 데 사용할 수 있습니다.

실험자가 면역 뇌척수염 연구 간단하고 효율적인 생산 및 마우스 미엘린 희소 돌기 아교 세포 당 단백질의 정제

화살 비행기에서 운동학 걸음 걸이 분석 운동 실행 하는 방법에 대 한 매우 정확한 정보를 생성 합니다. 우리는 중재 면역 demyelination 대상이 쥐에 대 한 걸음 걸이 적자를 식별 하기 위해 이러한 기술의 응용 프로그램을 설명 합니다. 이러한 방법은 다른 마우스 모델을 갖춘 장애인된 운동에 대 한 걸음 걸이 적자 하 사용할 수 있습니다.

MOG35-55를 받게 하는 C57BL/6 쥐에 화살 평면 운동학 걸음 걸이 분석 실험적인 자기 면역 뇌 유발

여기, 선물이 vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 혈관 단위의 장애를 조사 하는 프로토콜. 우리는 특별히 명과 limitans에서 혈액-뇌 장벽 침투성 및 백혈구 마이그레이션에 관련 된 gelatinase 활동을 확인 하는 방법 주소.

Vivo에서 실험적인 자기 면역 뇌 중 Neurovascular 단위의 내 피와 폐해 장벽의 장애 시각화

본 프로토콜은 미엘린 희소돌기아교세포 당단백질을 사용하는 마우스 모델에서 실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 임상 스코어링 시스템을 사용하여 질환 과정을 모니터링하는 것을 설명한다. 실험적 자가면역 뇌척수염 관련 증상은 마우스 대퇴골 마이크로 컴퓨터 단층 촬영 분석 및 오픈 필드 테스트를 사용하여 분석되어 질병 과정을 종합적으로 평가합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염의 유도 및 다양한 평가 지표

현재까지 동일한 마우스에서 모든 주요 중추 신경계 상주 세포 유형을 동시에 분리하기 위한 프로토콜은 충족되지 않은 수요입니다. 이 프로토콜은 신경 염증 중에 복잡한 세포 네트워크를 조사하고 동시에 필요한 마우스 수를 줄이기 위해 순진하고 실험적인 자가면역 뇌척수염 마우스에 적용할 수 있는 절차를 보여줍니다.

성인 자가면역 뇌척수염 마우스에서 주요 중추 신경계 상주 세포 유형의 동시 분리

실험적 자가면역 뇌척수염(EAE)은 다발성 경화증의 동물 모델 역할을 합니다. 이 기사에서는 EAE에서 척수 염증, 탈수초화 및 축삭 손상을 채점하는 접근 방식을 설명합니다. 또한, 생쥐 혈청에서 용해성 신경 필라멘트 광 수준을 정량화하는 방법이 제시되어 살아있는 생쥐의 축삭 손상 평가를 용이하게 합니다.

실험적 자가면역 뇌척수염에서 중추신경계 염증, 탈수초화 및 축삭 손상 채점

배우세요 실험적 자가면역 뇌척수염(EAE) 유도 프로토콜을 통해 수컷과 암컷 C57BL/6J 마우스에서 다발성 경화증 모델링 방법을 익히세요. 임상 점수 평가와 로타로드 테스트를 활용하여 신경염증 및 탈수초 과정을 정량적으로 분석하는 기법을 습득하세요.

두 성별의 다발성 경화증 모델링: MOG_35-55-유도 실험적 자가면역 뇌척수염

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