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췌장 β세포에서 미토파지 플럭스를 조사하기 위한 보완적 접근법
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JoVE Journal Biology
Complementary Approaches to Interrogate Mitophagy Flux in Pancreatic β-Cells

췌장 β세포에서 미토파지 플럭스를 조사하기 위한 보완적 접근법

Full Text
1,801 Views
07:04 min
September 15, 2023

DOI: 10.3791/65789-v

Elena Levi-D’Ancona1,2, Vaibhav Sidarala1, Scott A. Soleimanpour1,3,4

1Department of Internal Medicine, Division of Metabolism, Endocrinology and Diabetes,University of Michigan, Ann Arbor, 2Graduate Program in Immunology,University of Michigan Medical School, 3Department of Molecular and Integrative Physiology,University of Michigan, Ann Arbor, 4VA Ann Arbor Healthcare System

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Summary

이 프로토콜은 췌장 β 세포에서 미토파지의 정량적 분석을 위한 두 가지 방법을 설명합니다: 첫 번째는 세포 투과성 미토콘드리아 특이적 염료의 조합이고, 두 번째는 유전적으로 인코딩된 미토파지 리포터입니다. 이 두 기술은 상호 보완적이며 특정 요구 사항에 따라 배포할 수 있으므로 미토콘드리아 품질 관리를 정량적으로 처리하는 데 유연성과 정밀도를 제공합니다.

Transcript

당사의 프로토콜은 유세포 분석을 통해 단일 세포 분해능에서 베타 세포 미토파지 플럭스를 연구하기 위한 두 가지 보완 방법을 설명합니다. mt-Keima 프로토콜은 유전자 미토파지 리포터를 사용하는 반면, MtPhagy 프로토콜은 3가지 형광 염료를 결합하여 인간 샘플에서 transfection이 어려운 세포로 쉽게 외삽할 수 있습니다. 전통적인 생화학적 접근법과 이미징 접근법을 사용한 미토파지 평가는 시간이 많이 걸리고 까다롭습니다.

따라서 베타 세포의 미토파지 플럭스를 연구하기 위한 새롭고 강력하며 효과적인 방법을 개발하는 것이 중요합니다. mt-Keima 및 MtPhagy 방법은 모두 췌장 베타 세포의 미토파지 플럭스를 연구하는 데 효율적인 정량적 평가입니다. 따라서 Soleimanpour 실험실은 췌장 베타 세포 부전과 당뇨병을 유발하는 다양한 메커니즘에 초점을 맞춥니다.

그리고 우리는 특히 미토콘드리아 기능의 결함이 어떻게 당뇨병의 발병을 유발하는지 이해하기 위해 미토파지를 포함한 미토콘드리아 수명 주기의 다양한 측면에 초점을 맞춥니다.

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Mitophagy Flux 췌장 β-세포 Complementary Approaches Genetic Reporters Mt-Keima 마우스 모델 Mitophagy 정량화 유세포 분석 PH 민감성 이중 여기 비율 측정 프로브 산성-중성 mt-keima 파장 방출 유전적 유사 분열 리포터 복잡한 유전자 마우스 모델 transfection이 어려운 세포 1차 인간 섬 염료 기반 방법 MtPhagy 세포 투과성 염료 미토파지 중 리소좀 플루오진-3-AM Zn2+ 지시약 테트라메틸로다민 에틸 에스테르(TMRE) 미토콘드리아 막 전위

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